环胞菌素A对建立EB病毒转化的B淋巴母细胞系的促进作用

建立有效的Ｂ淋巴母细胞系ＥＢ病毒转化法。利用免疫抑制剂环胞菌素Ａ选择性地抑制Ｔ细胞并阻止Ｂ细胞退化的作用，提高ＥＢ病毒转化人类淋巴细胞系效率，结果：建立了３０余株人类类淋巴母细胞系总成功率达９５％，比非ＣｙＡ法提高了５０％。结论：环胞菌素Ａ的应用可有效地建立淋巴细胞系，从而为保存特殊个体（如遗传病）的基因组并开展相应的研究奠定了基础。

用环胞菌素A建立EB病毒转化的人类若干遗传病的淋巴母细胞系

免疫抑制剂环胞菌素Ａ（ＣｙＡ），是一种真菌代谢物，能够选择性地抑制ＴＬＣ，防止ＢＬＣ的退化，将其引进ＥＢＶ转化的淋巴母细胞的建系过程，能够很大地提高建系的成功率，也是方法学上的一大突破。本研究采用ＣｙＡ，建立了ＥＢＶ转化的人类若干遗传病（共济失调４例、Ｗｉｌｓｏｎ氏病３例、Ｙｑ－综合征２例）、正常群体２０余株的淋巴母细胞系，为人类的医学遗传研究提供了一个库存基地。

培养的皮肤成纤维细胞在神经遗传病研究中的应用

以体外培养的、具有其来源个体全套基因组的皮肤成纤维细胞为材料,研究了以神经系统为主要病变的肝豆状核变性,Huntington舞蹈病等神经系统遗传病,结果表明,皮肤成纤维细胞不仅可以替代神经组织作为研究肝豆状核变性、Huntington舞蹈病的细胞模型,而且具有取材简便,利于动态观察等优点。

葡萄糖调节蛋白75的表达特性

目的 研究不同条件下葡萄糖调节蛋白 75基因的表达情况。方法 用多组织尼龙膜 (multipletissuenylon ,MTN)Northern杂交显示 grp75在组织中的表达情况 ,用Northern杂交方法研究其在缺糖、氧化磷酸化阻滞剂叠氮钠、Ca2 + 增强剂A2 3187处理后的表达情况。结果 grp75在多组织中都有表达 ,且表达量大致相同 ,在缺糖培养的情况下 ,细胞的 grp75基因明显呈上调表达。高浓度的叠氮钠能够使grp75基因表达大幅度上调 ,A2 3187使grp75的表达量增加。 结论 grp75基因在细胞中有构成性表达 ,能够在多种组织的细胞中发挥作用 ,grp75基因的表达量和细胞自身的能量代谢有关 ,为 grp75基因对细胞缺糖保护提供了证据 ;在grp75表达与调控过程中 ,Ca2 +

小鼠结肠癌肝转移模型的建立及其活化肝星状细胞的表达

目的建立小鼠结肠癌肝转移模型,并研究肝星状细胞(hepatic stellete cell,HSC)与结肠癌肝转移的相关性。方法采用囊袋法瘤块盲肠原位移植建立15只小鼠结肠癌肝转移模型,免疫组化法观察活化的HSC在转移灶、癌旁组织及未转移肝组织内的表达情况。结果建模后3周结肠癌肝转移率为40%,4周转移率为60%。转移灶中活化HSC的表达显著高于癌旁组织和未转移肝组织。结论囊袋法瘤块盲肠原位移植是较理想的结肠癌肝转移模型的制作方法;肝脏局部免疫微环境中活化HSC的表达可能参与结肠癌肝转移过程中的免疫调控。

中国人Huntington舞蹈病发病情况的初步研究

中国人Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ舞蹈病发病情况的初步研究左伋，夏蓓莉，陈秀珍，李采娟Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ舞蹈病（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎｄｒｉｅａｓｅ，ＨＤ）是一种典型的常染色体显性遗传病．临床上主要表现为中年期开始出现的舞蹈样动作、智力减退和精神障碍等，随着...

用Bayes定理多指标筛查Wilson病家系

利用临床诊断Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）的常用生化指标：血浆铜蓝蛋白、血清铜和尿铜，结合酯酶Ｄ多态性、ＷＤ发病风险与年龄分布的关系，应用微机化的Ｂａｙｅｓ定理对８个家系的１２例先证者同胞进行了三种状态──症状前患者、杂合子和正常个体的综合判别分析。家系１、家系６和家系８的筛查结果与已经完成的ＤＮＡ诊断结果相吻合。本研究可用于临床诊断、治疗ＷＤ以及遗传咨询。

肝豆状核变性(Wilson病)的发病曲线及其在遗传咨询中的应用

本文在分析了２６５例Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）患者的初始发病年龄后，运用函数统计学中的曲线模拟方法，首次获得了中国人群ＷＤ的发病年龄与发病风险的相关曲线，再把发病年龄这一遗传咨询中的重要因素代入到ＷＤ的遗传咨询中，并探讨了年龄因素在应用Ｂａｙｅｓ定理对ＷＤ家系再发风险进行计算机综合判别分析中的意义。分析结果显示，年龄因素对再发风险的评估有着很重要的影响，可大大提高ＷＤ遗传咨询的准确性。本研究不仅填补了我国ＷＤ发病年龄的分布规律方面的资料。

缺血性细胞损伤体外培养模型的建立

为了建立简便有效的缺血性损伤实验模型，利用无（ 低） 葡萄糖培养基培养ＳＫＮＳＨ 细胞系，再用包括细胞活率测定、光学显微镜观察、电镜检测、荧光染色、流式细胞仪检测等多种细胞生物学方法，分析和研究包括凋亡等在内的动物缺血性模型及患者缺血组织中常见的细胞形态及功能的改变，建立了简便的有利进一步研究缺血性损伤的细胞体外培养模型。

医学细胞生物学整合式实验课的课程改革

针对八年制学生开设独立的"医学细胞生物学实验课",强调课程的整体性和系统性。该课程已经开展五年,本文就课程设计及带教过程中的体会与大家共同探讨,以期为医学细胞生物学实验课程改革提供一定的思路。

脐血内皮祖细胞的分离和培养

目的:研究从脐带血中分离内皮祖细胞的分离、培养及向内皮细胞方向诱导分化方法和条件。方法:从新鲜脐血中用密度梯度离心方法分离出单核细胞,在添加VEGF的M199培养液中培养,每隔3-4 d换一次液。培养16 d后,消化贴壁细胞,用DiI-ac-LDL及FITC-UEA-1对其进行免疫荧光及流式细胞仪分析。结果:培养3-4 d单核细胞开始贴壁,14 d左右开始出现索条状结构,免疫荧光鉴定显示贴壁细胞呈双荧光染色阳性,流式细胞仪分析显示70%贴壁细胞表达FITC-UEA-1, 85%贴壁细胞表达DiI-ac-LDL。结论:脐血中富含内皮祖细胞,在一定的培养条件下,可分化为内皮样细胞。

中国人群Huntington舞蹈病——群体细胞和分子

Huntington舞蹈病(HD)是常染色体显性遗传的神经系统疾病,其病变机制尚不完全清楚。HD是西方国家中最常见的神经遗传病之一,在我国则被认为是一种罕见病,1986年以前偶见报道。

D4S10区DNA多态性与Huntington舞蹈病的连锁分析

Huntington舞蹈病(HD)是一种常染色体显性遗传性神经疾病,其临床诊断并不困难,但要做到症状前诊断或产前诊断进而阻止致病基因在世代间的传递则颇为不易。Gusella等应用分子遗传学方法分离到一个称为G_8的DNA标记(D4S10)与HD基因呈紧密连锁.从而为该病的早期诊断带来了希望;但同一疾病在不同的种族可能存在着不同的遗传基础,只有排除中国人HD发生上的遗传异质性,才能使这一诊断技术用于中国人HD的研究中。本文应用位于D4S10区的DNA标记:pTV20探针,分析它与中国人HD基因间的连锁情况,进而为在国内开展HD的症状前诊断和产前诊断提供理论依据。

中国人群遗传性共济失调症中脊髓小脑共济失调1亚型的基因分型与诊断

研究中国人群遗传性共济失调症中脊髓小脑共济失调1亚型（SCA1）的基因分型与诊断。在D65274与D6S89之间设计一对引物扩增CAG三核苷酸重复序列。结果：在收集的来自8个家系的9例遗传性共济失调患者中发现1个家系中的2例患者在此SCA1基因位点表现为杂合子，其中的一个等位基因均存在扩展现象，表现为SCA1亚型；而其他患者及健康人表现为纯合子。结论：中国人群SCA1亚型在常染色体显性遗传性共济失调症中所占比例为14％，SCA1亚型的遗传结构与白种人相似。

白癜风患者皮肤成纤维细胞铜含量的变化

对2例白癜风患者皮损区、周围区的皮肤成纤维细胞进行培养,以阳极溶出伏安法进行铜含量测定。皮损区的细胞铜含量低于周围区,与对照组比较铜含量低于或在均值范围内。白癜风并非铜的缺少而引起,因此用铜治疗无效。皮肤成纤维细胞中铜含量的变化可能与控制铜代谢的基因异常有关。

肝豆状核变性家系中症状前患者、杂合子和正常个体三种状态的多指标综合判别分析

利用血浆铜蓝蛋白(cp)、血清铜和尿铜等三个生化指标在肝豆状核变性(HLD)患者、杂合子和正常个体三种状态群体分布规律的不同,根据Bayes定理对3个HLD家系中先证者同胞的三种可能性(症状前患者、杂合子和正常个体)进行了综合判别分析。结果表明,Bayes定理的应用大大提高了HLD患者同胞三种状态判断的正确性。因此,认为这是一种有价值的HLD杂合子及症状前患者的检测方法。

Wnt-3 a对Connexin43及相关基因的表达调控

目的探讨信号分子Wnt3a蛋白对缝隙连接蛋白43(connexin43)的表达调控作用,以期揭示Wnt3a与connexin43在心脏发育过程中的特定联系与作用。方法以本室自行构建pCD- NA3．1/wnt-3a真核表达载体转染大鼠心肌细胞系H9c2,在细胞水平通过RT-PCR及Western-blot实验方法研究Wnt-3a对其中Cx43表达及心脏发育相关基因的影响。结果经转染wnt-3a后,H9c2细胞系中connexin43的表达明显上调,同时与心脏发育相关的GATA4,Nkx2．5基因表达也明显上调。结论Wnt3a信号通路对connexin43表达存在影响；并可能对心脏发育存在调控作用。

应用Bayes定理分析检测肝豆状核变性家系

利用CP、血清铜和尿铜三个常用生化指标,结合EsD多态性,应用Bayes定理对HLD2例家系中的先证者同胞的三种可能状态——症状前患者、杂合子和正常个体进行了综合判别分析。结果表明,本法提高了检测准确性,有助于HLD的治疗和遗传咨询。

正义和反义表达grp75基因的哺乳动物细胞克隆的建立

为了进一步研究葡萄糖调节蛋白(grp75)基因及其产物的生理功能和它在疾病发生发展过程中的作用,以 peDNA3为载体构建了正义(向)和反义(向)的 grp75 cDNA 真核细胞表达载体系统,并对转染哺乳动物(PC12)细胞系后所筛选得到的阳性克隆进行免疫印迹分析;结果表明转染了正向grp75 cDNA 表达系统的细胞克隆在原有 GRP75表达的基础上表达量显著增加;而转染了反向 grp75cDNA 表达乐统的细胞克隆中 GRP75的表达水平明显下降,说明所构建的正向及反向 grp 75cDNA 表达系统在哺乳动物细胞系中得到了有效的表达,显示所构建的表达载体及阳性细胞系将可用于 grp75基因的生理和病理研究中。

中国人群D4S10区DNA多态性研究及其在Huntington舞蹈病遗传咨询中的意义

本文应用pTV20探针研究了人类基因组D_4S10区的DNA片段长度多态性在中国人群中的分布及其在Huntington舞蹈病(HC)遗传咨询中的意义。结果表明:在中国人群中存在着2.3kb(a)和3.5K(b)两个DNA多志性片段,其中a占36.54％,b占63.46％;a/a型个体占11.54％、b/b型个体占38.46％,a/b杂合子占50％。两个HC家系的分析结果表明,该DNA多志性标记与HC基因呈连锁状态,在某些家系中可进行HC的症状前诊断。