鼻咽癌研究的回顾与展望（纪念湖南医科大学80周年校庆）

鼻咽癌研究的回顾与展望（纪念湖南医科大学８０周年校庆）湖南医科大学肿瘤研究所姚开泰关键词鼻咽肿瘤；癌；研究；发展趋势１实验动物模型时期（１９７２～１９８０）１．１选题根据鼻咽癌（ＮＰＣ）是我国南方和东南亚国家相对高发的恶性肿瘤，尤以广东最为突出，是世...

人胚鼻咽上皮细胞培养、化学转化及鼻咽癌恶性转化基因的克隆

鼻咽癌是我国南方和东南亚国家相当高发的恶性肿瘤。湖南省鼻咽癌的死亡率在全国列第四位,严重危害人民的生命健康。有效地防治鼻咽癌已提到十分突出的位置。但迄今为止,鼻咽癌的病因发病机理尚不清楚。人们试图从流行病学、病理学、分子生物学等方面进行探讨,也取得了一些有意义的研究结果,但未能系统、

瘤基因和抑瘤基因表达和破坏在哺乳类发育和肿瘤形成中的作用

瘤基因和抑瘤基因表达和破坏在哺乳类发育和肿瘤形成中的作用湖南医科大学肿瘤研究所（４１００７８）姚开泰哺乳动物体内肿瘤形成以细胞增殖失控和分化异常为特征。在哺乳动物发育过程中的细胞繁殖和分化是由于自受精卵开始不断地发生的程序性细胞基因表达和阻遏；而有序...

从基因组和肿瘤研究的进展瞻望中西医结合

本刊在上期做了中西医结合发展与现代科技交叉专题,主要讨论了中西医结合发展的方向、意义及思路。本期将继续上期的专题,介绍中西医结合与现代科技交叉的部分主要内容。希望可以将中西医结合发展与现代科技交叉从理论到实践两方面完整的呈现给读者。为本刊撰文的几位作者就中西医结合的发展及其与现代科技多学科交叉等问题取得了许多共识,并在此基础上提出了以下几点建议:1.当前中西医结合要以解决世界医学难题,减轻人民医疗费用负担,实现人人享有卫生医疗保健的权利为目的。2.中西医结合医学是我国独有的医学,是独立于中医学和西医学之外的学科。中西医结合工作包括中西医工作者的团结合作、临床实践的优势互补和理论体系的有机结合。中西医结合的模式应该是多元并存。开展中西医结合医学学科建设将大力促进中西医结合医学的学术进步。国家应在加强人才培养的基础上,投入资金开展中西医结合医学的学科建设。3.光子中医学将为中西医结合提供理论和技术平台,并将成为中医现代化的一个重要方向。国家应关注该领域的发展和加大投入,尽快建设相应重点科研基地,促进各学科的交流与合作,以利于现代光子学技术与传统中医学方法的结合,一体化、全方位地共同解决中医学专用的诊疗、养生保健等重大问题。4.中医药学要不断吸纳现代科技成果为我所用、与己结合,发展壮大自己。现代科技多学科应在中医理论和临床特色中找准切入点,开展工作。要加强对某些重大疑难疾病(如艾滋病等)的攻关治疗,让国际社会广泛认识中医学理、法、方、药的理论和实践特色与优势,以利于中医药的深入研究发展和造福于人民。5.充分利用现代科学技术,与包括理科、工科在内的学科交叉将促进中西医结合医学的发展。为创立新的医学理论,解决单独中医和单独西医所未能解决的问题。6.强化重大疾病诊疗规范,建立中医特有的诊断和疗效评价标准已十分迫切。多学科交叉将有助于中医诊断和疗效评估的客观化(如望、闻、切、诊),如光子中医学的发展将发挥重要作用。7.加强人才培养是中西医结合发展的关键。中医教育必须深化改革,培养出一大批在临床上过得硬的中医师,这是振兴中医的基础。中西医结合应以研究为主,但不可脱离用中医药为主的临床工作。西医学院的高等教育,应增加中医学时,以利参与中西医结合工作。国家应制定相关政策,鼓励和吸引西医学和其他非医学学科的科技工作者加入中西医结合研究队伍,促进学科交叉。

瘤基因研究的某些进展

1989年诺贝尔医学和生理学奖金授与美国加州大学的Bishop和Varmus,以表彰他们七十年代发现了劳氏鸡肉瘤病毒瘤基因(v-src)的细胞内同源物(c-src),开辟了瘤基因研究的广阔道路。近年来人们认识到所谓瘤基因实质上是控制细胞分裂和分化的基因。

诱导性多潜能干细胞(iPS cells)——现状及前景展望

主要从iPS细胞发展历程、获得iPS细胞的几个关键步骤(如基因导入方式、诱导iPS细胞所需因子组合与小分子化合物运用和体细胞种类选择等)、病人或疾病特异性iPS细胞、iPS细胞体内外诱导分化与其衍生物的临床应用和制备无遗传修饰的(genetic modification-free)iPS细胞的可行性与前景等方面对iPS细胞最新研究进展做评述.日本和美国研究小组先后用4种基因将小鼠(2006年8月)和人(2007年11～12月)的体细胞在体外重编程为诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells),此后在短短两年多时间内,iPS细胞的研究和关注度呈爆炸式增长.体细胞重编程、去分化和多潜能干细胞来源等一系列热点问题再次成为干细胞和发育生物学等研究的热点和焦点.与胚胎干细胞(embryonic stem cells,EScells)一样,iPS细胞在体内可分化为3个胚层来源的所有细胞,进而参与形成机体所有组织和器官.迄今,在体外已由iPS细胞定向诱导分化出功能性的多种成熟细胞.因此,iPS细胞研究不仅具有重要理论意义,而且在再生医学、组织工程和药物发现与评价等方面极具应用价值.

加强推进力度,促进转化医学发展

介绍了转化医学的概念和国内外发展状况。根据2010年"香山会议(S13)"精神,对照政府提出的"十二五"期间防治重大疾病、控制健康危险因素的目标,结合目前国内转化医学发展现状,提出应该从推广转化医学理念、搭建平台、建设专业人才队伍和运行机制、促进研究成果向卫生政策转化、注重"创新"理念的贯穿和原创性中医药理论和药物的研究等方面加强推进力度,以促进转化医学在国内的发展。

利用报道基因检测鼻咽癌细胞的RNA干扰作用

背景与目的:RNA干扰(RNAinterference,RNAi)具有高效特异阻断基因表达的特点,在基因功能研究、信号转导通路的研究以及基因治疗中得到很广泛的应用。本实验通过体外转录合成siRNA和构建表达shRNA的质粒载体两种方法,检测鼻咽癌细胞系的RNAi作用,建立一个较完善的RNAi技术平台。方法:体外转录合成或通过pSUPER.retro构建表达针对GFP和荧光素酶的siRNAs或shRNAs,将它们和报道基因一起瞬时转染HeLa、CNE1、CNE2和5-8F细胞,用荧光显微镜和Westernblot检测GFP表达情况;用荧光素酶检测系统分析荧光素酶的活性。结果:3'末端带UU突出的siGFP2和psGFP能特异性地抑制细胞中GFP的表达,而单链反义RNA和3'末端不带UU突出的siGFP1无此作用。定量荧光素酶活性分析发现,siLuc能抑制HeLa、CNE1、CNE2和5-8F细胞中荧光素酶的表达,其抑制率分别达到91.43%,78.01%,90.30%和62.85%。HeLa细胞瞬时转染psLuc后,荧光素酶的表达抑制率可达到78.22%。结论:体外转录合成的siRNA和表达shRNA的质粒均能诱发RNAi效应。3'UU突出末端在siRNA诱发的RNAi中起作用。鼻咽癌细胞与HeLa细胞一样存在RNAi效应。

CXCR4／SDF-1对鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响

目的观察鼻咽癌不同恶性程度的细胞中趋化因子受体CXCR4的表达,检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的增殖作用,SDF-1对CXCR4阳性肿瘤细胞的趋化作用,探讨CXCR4/SDF-1生物学轴对人鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响。方法以鼻咽癌成瘤高转移细胞株5-8F及成瘤不转移细胞株6-10B为研究对象,采用Westernblot免疫印迹法检测鼻咽癌细胞株CXCR4蛋白的表达情况,SDF-1及CXCR4阻断剂AMD3100作用于两种细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力,体外迁徙实验检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的趋化作用。结果5-8F细胞株CXCR4蛋白的表达明显高于6-10B细胞株;SDF-1能明显增强5-8F细胞增殖与迁移能力,CXCR4阻断剂AMD3100作用后,5-8F细胞增殖与迁移能力明显降低;SDF-1对6-10B细胞的迁移及增殖能力无明显影响。结论CXCR4/SDF-1生物学轴与鼻咽癌细胞株的增殖与迁移有一定的关系,AMD3100可明显抑制鼻咽癌细胞的增殖与迁移能力。

慢病毒介导的外源基因体外投递系统的建立

目的针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系,以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染)、超速离心浓缩和保存等,随后用病毒上清或浓缩后的病毒感染293FT细胞,24～48h后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产;将携带EGFP基因的病毒上清或浓缩后的病毒分别加入内含293FT细胞、小鼠ES细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)或小鼠睾丸生殖细胞的培养板孔内,感染6～12h后,用相应培养基替换感染液,数天后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功感染不同哺乳类细胞。结果按标准程序生产的携带EGFP基因慢病毒(病毒上清或浓缩后的病毒)成功高效率感染293FT细胞、MEFs或小鼠睾丸生殖细胞;用浓缩后的病毒(携带EGFP基因)感染小鼠ES细胞,亦可获得EGFP阳性的ES细胞克隆。结论熟练掌握了慢病毒包装、浓缩及鉴定等技术,同时针对不同哺乳类细胞建立了相应的慢病毒介导的外源基因体外传递系统,这些为相关后续研究打下了良好的基础。

慢病毒介导的siRNA靶向干扰EIF4G1鼻咽癌稳定细胞株的建立

目的检测人真核翻译起始因子4G1(EIF4G1)基因在8株鼻咽癌细胞中的差异表达,寻找最高表达的细胞株。构建EIF4G1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,建立稳定干扰EIF4G1表达的鼻咽癌细胞株,测定干扰效率。方法应用荧光定量PCR检测EIF4G1mRNA在鼻咽癌细胞株5-8F、6-10B、C666-1、CNE1、CNE2、HNE1、HONE1、SUNE1表达水平。构建重组靶向EIF4G1shRNA慢病毒表达质粒pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA。用293FT细胞包装后产生的成熟慢病毒颗粒感染5-8F细胞,经杀稻瘟菌素筛选后,建立稳定表达siRNA的5-8F鼻咽癌细胞株。最后荧光定量PCR检测干扰效率。结果在8个鼻咽癌细胞株中,EIF4G1显示在5-8F细胞株中表达最高。PCR和测序验证pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA重组质粒构建成功;经293FT细胞病毒包装,感染5-8F细胞后,与阴性对照组和未干扰组相比可明显抑制EIF4G1mRNA水平EIF4G1表达。结论成功构建了pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA慢病毒重组质粒,建立了稳定靶向干扰EIF4G1表达的siRNA5-8F鼻咽癌细胞株。

人鼻咽与鼻咽癌及肺癌基因表达谱差异的研究

研究鼻咽癌、肺癌与正常鼻咽组织基因表达谱差异及筛选鼻咽癌相关基因， 采用α３２Ｐ逆转录标记组织总ＲＮＡ， 将ｃＤＮＡ 探针与有５ １８４ 个基因或表达序列标签ＥＳＴ （ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔａｇ） 的高密度ｃＤＮＡ 微阵列ＧＦ２００ 杂交， 软件分析表达谱差异． 结果发现三者均呈低表达为主的表达谱， 密度值在２００ 以上的基因及ＥＳＴ在鼻咽癌有１１０ 个， 肺癌１３４ 个而鼻咽组织有１５８ 个； ５ 个ＥＳＴ在鼻咽高表达但鼻咽癌低表达，３ 个ＥＳＴ在鼻咽癌高表达但正常鼻咽低表达． 结果表明鼻咽癌与正常鼻咽及肺癌组织存在差异表达基因， 可能还有新基因在鼻咽癌发生中起作用；

鼻咽癌组织中GNAT1基因的表达、杂合性丢失及甲基化分析

背景与目的:在鼻咽癌中,染色体3p21.3为高频缺失区,杂合性丢失(lossofheterozygosity,LOH)分析和功能学研究都表明3p21.3区存在与鼻咽癌相关的抑瘤基因。GNAT1基因也定位于3p21.3,但在鼻咽癌中未见关于GNAT1基因的研究报道。本研究旨在探讨GNAT1基因在鼻咽癌组织中的表达、LOH及甲基化情况。方法:应用逆转录-聚合酶链式反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)方法检测了33例鼻咽癌组织和15例慢性鼻咽炎组织中GNAT1基因的表达,并通过微卫星分析技术和甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specificpolymerasechainreaction,MSP)分析GNAT1基因LOH和启动子区甲基化情况。结果:GNAT1基因在慢性鼻咽炎组织中均稳定表达,而在72.7%(24/33)的鼻咽癌组织中表达下调或缺失,显著低于慢性鼻咽炎组织(100%,15/15)(P=0.022);LOH分析显示鼻咽癌组织中GNAT1基因的杂合性丢失率为15%(3/20),且LOH与基因表达存在相关性(P=0.016);甲基化分析发现在100%的鼻咽癌组织和80%慢性鼻咽炎组织中存在GNAT1基因启动子区高甲基化。结论:GNAT1基因在鼻咽癌组织中表达下调或缺失,这一现象与GNAT1基因的LOH存在相关性,而与3p21.3区基因启动子区CpG岛的甲基化可能无关。GNAT1基因的甲基化可能不是鼻咽癌的发病机制。

组织芯片技术检测人鼻咽癌组织及细胞株KIAA1173基因的表达

背景与目的:鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)致病的分子机制至今仍不清楚,已有研究表明,染色体3p21～22区域存在与鼻咽癌发生密切相关的抑癌基因。KIAA1173基因是定位于3p22.1的一个新的肿瘤相关基因,其与NPC发病的关系尚未见报道。本研究采用KIAA1173基因特异性原位杂交探针,检测其在NPC组织及细胞株中的表达,探讨KIAA1173基因与NPC发病的关系。方法:克隆KIAA1173基因片段(354bp),并制备cDNA探针;采用组织芯片技术,通过原位杂交检测73例鼻咽部不同组织标本(41例NPC、18例鼻咽非典型增生上皮、14例正常鼻咽粘膜上皮)和6种NPC细胞株(CNE1、CNE2、HNE1、HNE2、6-10B、5-8F)中KIAA1173基因mRNA的表达情况。结果:KIAA1173基因在NPC细胞、非典型增生上皮和正常鼻咽粘膜上皮的阳性率分别为21.9%(9/41)、83.3%(15/18)、92.8%(13/14),而6种NPC细胞株均未见表达;在正常鼻咽粘膜上皮和非典型增生上皮中强阳性率分别是64.3%(9/14)和38.9%(7/18),而NPC中无强阳性,在鼻咽部不同上皮组织中的表达差异有显著性(P<0.001);在38例伴有淋巴细胞浸润的NPC组织中,癌细胞与浸润淋巴细胞之间KIAA1173基因表达有显著性差异(P=0.026),并且呈明显负相关(κ=-0.337,P=0.020)。结论:KIAA1173基因在鼻咽部不同组织中表达不同,正常鼻咽上皮强表达,而NPC细胞中低表达甚至不表达,提示该基因可能参与NPC演变的过程。

鼻咽癌相关基因NAP1的克隆及鉴定

从UniGene库中选取编号为BG2 31197,来自人鼻咽组织的EST序列 .利用Blast检索GenBank的nr数据库和EST数据库 ,构建EST重叠群 .利用人类基因组草图搜索法从成人正常鼻咽组织中PCR扩增获得该基因全长cDNA ,命名为NAP1,GenBank登录号为AY190 32 6 .NAP1基因cDNA序列全长为 5 73bp ,编码由 85个氨基酸组成 ,相对分子质量为 970 0的多肽 .用α 3 2 P dCTP标记NAP1基因片段 ,与含 15种正常成人组织的多组织RNA印迹膜杂交 ,结果表明NAP1基因在淋巴结和气管中高表达 ,转录本大小约为 0 6kb ,在其他组织中不表达 .NAP1蛋白质与滤泡树突状细胞 (folliculardendriticcell,FDC)的一种分泌肽前体 (FDC SP) (AF4 35 0 80 )同源 ,与其他已知蛋白质无明显同源性 .NAP1基因定位在染色体 4q13,基因组跨越 9179bp ,含 5个外显子和 4个内含子 .采用差异RT PCR检测了 4 0例经病理诊断为低分化鳞状上皮癌的鼻咽活检组织及其对侧相应部位的正常鼻咽组织中该基因的表达差异 .在 4 0例鼻咽癌中 ,NAP1基因表达下调的有 17例 (4 2 5 % ) ,表达上调的有 6例 (15 % ) ,无明显表达差异的有 17例 (4 2 5 % ) .原位杂交和免疫组化结果显示该基因在正常鼻咽和鼻咽癌组织间质中的树突状细胞中表达 。

用文献轮廓挖掘大肠癌转移芯片表达谱

目的寻找新的大肠癌转移相关基因。方法根据大肠癌转移芯片的表达谱,采用基于文献轮廓的数据挖掘方法,从Medline文献数据库中提取基因的相关文献并分析词的频率,再基于重复发生和共发生的过滤标准提取功能相关的词,最后基于词的发生频率对基因进行功能聚类,进一步结合文献及已有的分子生物学检测结果进行分析。结果发现两个新的可能与大肠癌转移相关的基因TIAM1和NM23H1。