Aβ_(1～40)诱导大鼠海马突触体素和突触数量的变化

目的研究淀粉样β蛋白(β-amyloid protein,Aβ1～40)诱导大鼠海马突触体素和突触数量的变化,以探讨其与阿尔茨海默病发病机制及病理变化的关联性。方法于雄性SD大鼠双侧海马注射Aβ1～40,模拟AD脑内Aβ对神经系统的损害。判定AD模型成功后,取脑行冻切片,采用小鼠抗人重组突触体素单克隆抗体免疫组织化学染色结合积分吸光度分析法检测突触体素免疫阳性产物表达的变化,并应用透射电镜对海马突触进行观察计数。结果假手术组突触体素免疫组化染色海马呈层状结构,突触体素免疫阳性产物密度较高。与假手术组比较,AD模型组突触体素免疫阳性产物密度明显下降,海马CA2突触体素免疫阳性产物的积分吸光度值显著降低(P<0.05)。溶酶体组突触体素免疫组化染色与假手术组相似;电镜观察,假手术组海马神经元树突、轴突较密集,突触小泡多,突触结构清晰、数量多;AD模型组海马神经元突触小泡体积变小、变少,突触结构不完整、数量明显减少(P<0.05),溶酶体组神经元和突触结构与假手术组相似。结论淀粉样β蛋白可诱导大鼠海马突触体素和突触数量表达减少,是阿尔茨海默病发病机制及病理改变之一,是引起学习记忆减退和认知障碍的途径之一。其作用机制尚需进一步探讨。

绞股蓝对海马注射Aβ_(1-40)大鼠脑内细胞周期蛋白表达和钙稳态变化的影响

目的:探讨绞股蓝对海马注射Aβ1-40大鼠脑内细胞周期蛋白异常表达和钙稳态变化的影响。方法:动物随机分为绞股蓝组、模型组、对照组。运用淀粉样β蛋白双侧海马注射,模拟阿尔茨海默病脑内Aβ对神经系统的损害。Y型迷宫测试大鼠学习记忆能力,免疫组织化学染色和积分吸光度分析检测细胞周期蛋白A、B1(cyc linA、cyc lin B1),Fura-2/AM-荧光法测定海马细胞内Ca2+含量;并对绞股蓝组大鼠给予绞股蓝皂苷灌胃,观察其对AD大鼠上述各项指标变化的影响。结果:Aβ1-40海马注射大鼠学习记忆能力明显低于对照组(P<0.05),脑内细胞周期蛋白A、B1蛋白水平明显高于对照组,海马神经元内Ca2+含量显著高于对照组;而给予绞股蓝在一定程度上能改善大鼠学习记忆能力,降低cyc lin A、cyc lin B1蛋白和Ca2+含量的水平(P<0.05)。结论:绞股蓝对Aβ引起的动物学习记忆能力减退、海马神经元内异常表达细胞周期蛋白和钙稳态失衡有一定的逆转作用。

喂饲绞股蓝皂苷对Aβ1-40注射海马后大鼠脑内COX活性和线粒体超微结构变化的影响

目的探讨β淀粉样蛋白(Aβ1～40)海马注射后大鼠脑内细胞色素氧化酶(cytochrome oxidase,COX)活性和线粒体超微结构变化及绞股蓝(GP)对其影响.方法动物随机分为GP组、模型组、对照组.运用Aβ双侧海马注射,模拟阿尔茨海默病(AD)脑内Aβ对神经系统的损害.Y型迷宫测试大鼠学习记忆能力,组织化学、原位杂交法结合图像分析检测海马CA1区线粒体COX活性及细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基(COⅡ)mRNA表达,电镜观察CA1区神经细胞线粒体超微结构.并对AD模型大鼠给予GP灌胃,观察其对AD模型大鼠上述各项指标变化的影响.结果与对照组比较,AD模型大鼠空间学习记忆能力、海马CA1区线粒体COX活性及COⅡmRNA表达明显降低,线粒体数量减少,结构不清、肿胀、空泡样变、嵴断裂;GP对上述各项指标有不同程度的改善.结论 GP具有改善AD模型大鼠学习记忆能力、海马COX活性和COⅡmRNA表达及线粒体超微结构的作用,对AD模型大鼠有一定治疗和保护作用.

嗅成鞘细胞提取液对胆碱能神经元移植治疗大鼠阿尔茨海默病的影响

目的探讨嗅成鞘细胞(OECs)提取液对胆碱能神经元移植治疗阿尔茨海默病(AD)大鼠的影响。方法SD大鼠双侧海马注射Aβ1-40,建立AD大鼠模型。实验动物32只分为4组:正常对照组、空白对照组、人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组,每组8只。运用行为学测试、NADPH-d组化、刚果红组织学染色结合积分吸光度测定等技术,观察、比较各组AD模型大鼠移植2个月后学习记忆能力、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数以及老年斑的变化。结果①行为学测试:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组大鼠达到学会标准所需训练次数(TN),错误反应次数(EN),全天总反应时间(TRT)少和潜伏期(D),短于空白对照组(P<0.05);以OECs提取液移植组更为显著(P<0.05)。②NADPH-d组化反应:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组NOS阳性神经元数较空白对照组明显增多(P<0.05),且前两组之间差异有显著性(P<0.05)。③刚果红染色:移植组及空白对照组三组间差异均有显著性(P<0.05),以OECs提取液移植组SP-IA值最小。结论嗅成鞘细胞提取液能明显提高胆碱能神经元移植治疗阿尔茨海默病大鼠的效果。

“以器官系统为中心”基础医学课程整合的研究与实践

目的探讨"以器官系统为中心(OSC)"的基础医学课程整合教学的效果与改革方法。方法选取某医药院校2012级临床医学专业本科生283人,随机分为实验班138人、对照班145人。实验班基础医学课程实施OSC的整合教学,对照班按照"以学科为中心"的课程模式教学。分析、比较两个班学生课程考试成绩、学习策略以及自主学习能力的变化。结果①形成性考核、终结性考试和课程模块总成绩(分,百分制):实验班分别为(89.38±8.57)分、(90.43±9.12)分和(89.91±8.85)分,与对照班(78.27±7.77)分、(79.46±8.09)分和(79.23±7.99)分一一比较明显提高(P<0.05)。②学习策略(%):实验班参加实验室开放、查阅文献资料、咨询问题人次百分比分别显著高于对照组(P<0.01)。③自主学习能力(分):实验班[(240.02±26.73)分]明显高于对照班[(208.47±25.42)分](P<0.05)。结论 OSC的基础医学课程整合教学可以改善和提高学生的课程成绩、学习策略和自主学习能力,但课程整合必须与教学方法创新、考核办法完善有机结合、同步进行和综合改革,才能收到较好的效果。

人体解剖学小组式自学提前干预对教学效果的影响

预习是学生在课前预先独立地或协作地学习课堂及其有关内容,诊断已弄懂或还不懂的知识点,为学生有针对性听课和教师有针对性讲课提供信息[1];它是教学的一个重要环节,大家认同其重要性.多年来,解剖学教师总是不厌其烦地要求学生课前预习,但常常因缺乏组织和指导不力,学生难以坚持,预习没有起到提高效果的作用[2].自2011年初开始,在充分提供解剖学教学资源的同时,我们尝试将小组自主学习与课前预习有机结合起来,即小组式自学提前干预,取得了较好的教学效果.

嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植对阿尔茨海默病大鼠的治疗作用

目的探讨嗅成鞘细胞(OECs)对神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠阿尔茨海默病(AD)的影响。方法 SD大鼠双侧海马注射Aβ1～40,建立AD大鼠模型。实验动物分为4组:NSCs移植组、NSCs与OECs移植组、AD模型组、正常对照组,每组30只。从SD胎鼠(孕16～18 d)取材,在体外分别培养和共培养OECs与NSCs,并将共培养的OECs与NSCs移植于AD大鼠大脑;观察各组大鼠行为学、移植细胞存活、迁移和分化以及宿主脑海马突触素表达的变化。结果①行为学测试:NSCs与OECs移植组潜伏期明显缩短、过平台次数明显增加,与NSCs移植组、AD模型组有显著性差异(P<0.05)。②根据标记跟踪,植入的NSCs与OECs大量存活,从注射部位分别向两侧海马区及其周围皮质迁移。③免疫荧光检测:植入NSCs能在AD脑内分化为神经元、神经胶质细胞以及少量胆碱能神经元,NSCs与OECs移植组分化为神经元的分化率13.97%,与NSCs移植组8.35%差异显著(P<0.05)。④海马突触素表达:NSCs与OECs移植组IA值最高,与NSCs移植组、AD模型组有显著性差异(P<0.05)。结论嗅成鞘细胞通过改善植入神经干细胞在AD脑内的存活、迁移和分化能力以及与宿主脑的联系,提高NSCs移植治疗大鼠AD的效果。

Aβ_(25～35)诱导阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元HSP70的表达

目的利用β淀粉样蛋白(Aβ25～35)毒性作用诱导大鼠阿尔茨海默病(AD)模型,研究热休克蛋白70(HSP70)在海马神经元损伤中的表达。方法将大鼠随机分为2组:AD模型组、溶媒体组,在双侧海马分别注射2μl(10μg)Aβ25～35、2μl生理盐水;于海马注射第1,7,14,21天采用免疫组织化学、积分光密度分析等手段对各组大鼠脑HSP70的表达进行观察。结果AD模型组手术第7天大鼠记忆明显减退(P<0.05),且HSP70在海马神经元内表达第1天时最高,第1～21天呈递减趋势,其中第14天锐减。结论Aβ25～35通过氧化应激和损伤海马神经元等过程使HSP70的表达明显降低,HSP70表达是AD大鼠脑内神经元存活的重要标志。

嗅成鞘细胞提取液对阿尔茨海默病脑移植的影响

目的探讨嗅成鞘细胞提取液对阿尔茨海默病(AD)脑移植的影响。方法SD大鼠双侧海马注射Aβ1-40,建立AD大鼠模型。实验动物分为四组:正常对照组、空白对照组、人工脑脊液移植组、嗅成鞘细胞OECs提取液移植组,每组10只。两移植组分别加用人工脑脊液、OECs提取液培养胆碱能神经元,并移植到AD模型大鼠。运用行为学测试、NADPH-d组化、刚果红组织学染色结合积分吸光度测定等技术,观察、比较各组AD模型大鼠移植2个月后学习记忆能力、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数以及老年斑的变化。结果①行为学测试:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组大鼠达到学会标准所需训练次数(TN)、错误反应次数(EN)、潜伏期(D)、全天总反应时间(TRT)少且短于空白对照组(P<0.05);OECs提取液移植组更为明显,与人工脑脊液移植组之间有显著差异(P<0.05)。②NADPH-d组化反应:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组NOS阳性神经元数较空白对照组明显增多(P<0.05),且前两组之间有显著性差异。③刚果红染色:SP积分吸光度测定,三组间均有显著性差异(P<0.05),OECs提取液移植组SP-IA值最小。结论OECs提取液能明显提高AD脑移植的效果。

在人体解剖学PBL教学中教师的角色行为探讨

为培养创造型、实用型医学人才，结合实践介绍了在人体解剖学教学中进行以PBL教学模式为核心教学改革的做法。指出与传统教学模式比较，PBL教学模式要求教师角色进行根本性的转变，即教师要从传统教学中为注意的中心和知识的源头，转变为学生获得知识的指导者。

学习记忆训练对阿尔茨海默病大鼠空间认知能力及脑组织的保护作用

目的:探讨学习记忆训练对阿尔茨海默病大鼠行为学变化和海马异常磷酸化tau蛋白和神经元型一氧化氮合酶阳性神经元表达的影响。方法:实验于2004-04/07在武汉大学医学院神经生物学实验室完成。选取86只大鼠运用淀粉样β蛋白双侧海马注射建立大鼠阿尔茨海默病模型,随机抽取造模成功大鼠56只分为阿尔茨海默病训练组40只、阿尔茨海默病对照组16只。未建立阿尔茨海默病模型16只大鼠为正常对照组。用Y型迷宫对阿尔茨海默病大鼠进行学习记忆训练4周,分别在训练第7,14,21,28天观察各组大鼠行为学变化和脑内异常磷酸化tau蛋白和海马神经元型一氧化氮合酶阳性神经元表达情况。结果:参加实验动物100只,模型制备成功72只进入结果分析。①训练第28天时,阿尔茨海默病训练组Y型迷宫检测达标训练次数,错误反应次数,潜伏期,全天总反应时间[15.82±2.64,4.18±1.75,(6.18±4.86)s,(1236.78±97.26)s]均接近正常对照组[16.10±3.94,3.90±1.72,(5.87±4.08)s,(1175.40±81.76)s,(P>0.05)],而与阿尔茨海默病对照组大鼠比较差异显著[48.33±5.10,8.83±2.98,(11.32±12.23)s,(2264.32±244.60)s,(P<0.05)]。②训练第28天时阿尔茨海默病训练组大鼠脑海马异常磷酸化tau蛋白和神经元型一氧化氮合酶阳性信号的积分吸光度(19.33±3.

嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植对阿尔茨海默病大鼠海马生长相关蛋白-43表达的影响

目的探讨嗅成鞘细胞(OECs)与神经干细胞(NSCs)共移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马生长相关蛋白(GAP)-43表达的影响。方法雄性SD大鼠双侧穹隆-海马伞切断,建立AD大鼠模型。实验动物分为4组:NSCs移植组、NSCs与OECs共移植组、AD模型组、正常对照组,每组30只。从SD胎鼠(孕16～18d)取材,在体外分别培养和共培养OECs与NSCs,并将共培养的OECs与NSCs移植于AD大鼠大脑侧脑室;观察各组大鼠行为学、宿主脑海马GAP-43和NOS阳性神经元表达的变化。结果①NSCs与OECs共移植组潜伏期明显缩短、通过平台次数明显增加,与NSCs移植组、AD模型组差异有统计学意义(P<0.05)。②反转录聚合酶链反应(RT-PCR)与Western Blot分析,NSCs与OECs共移植组宿主脑海马GAP-43mRNA和GAP-43蛋白的表达量高于NSCs移植组、AD模型组(P<0.05)。③NSCs与OECs共移植组NOS阳性细胞(22.2±1.7)较NSCs移植组(13.1±1.9)、AD模型组(7.1±0.9)明显增多(P<0.05)。结论嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植能促进宿主脑海马GAP-43的表达,其可能在AD大鼠中枢神经系统损伤时具有促进神经再生和修复的作用。

嗅成鞘细胞移植对AD大鼠脑内COX活性和线粒体超微结构的影响

目的探讨嗅成鞘细胞(OECs)移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠脑内COX活性和线粒体超微结构的影响。方法SD大鼠双侧海马注射Aβ1～40,建立AD大鼠模型。实验动物分为四组:正常对照组、AD模型组、OECs移植组、人工脑脊液(MCSF)注射组,每组12只。体外原代培养OECs并将其移植至AD大鼠双侧海马。运用行为学测试、组织化学、原位杂交结合图像分析以及电镜等技术和工具,观察、比较各组大鼠学习记忆能力、海马CA1区线粒体细胞色素氧化酶(COX)活性、细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基(COⅡ)mRNA表达,以及CA1区神经元线粒体超微结构等指标的变化。结果与正常对照组比较,AD模型组大鼠空间学习记忆能力、海马CA1区线粒体COX活性及COⅡmRNA表达明显降低(P<0.05),线粒体数量减少,结构不清、肿胀、空泡样变、嵴断裂;OECs移植明显上调上述指标(P<0.05),并对线粒体超微结构有明显的保护作用。结论OECs移植通过改善AD大鼠学习记忆能力、提高海马COX活性和COⅡmRNA表达以及保护线粒体等作用,对大鼠AD具有明显的治疗效果。

NGF对Aβ_(1-40)诱导海马神经元周期素A、B_1异常表达的影响

目的研究NGF对Aβ1-40诱导海马神经元周期素(Cyclin)A、B1异常表达的影响。方法原代培养新生大鼠海马神经元7d后,分别在Aβ1-40作用前后加入神经生长因子(NGF),采用免疫组化法、免疫荧光法检测胆碱乙酰化转移酶(ChAT)活性和周期蛋白表达变化。结果①CyclinA、B1免疫荧光检测:Aβ1-40组、NGF1组、NGF2组海马神经元内均出现蓝色颗粒(CyclinA)和红色颗粒(CyclinB1),但Aβ1-40组最多,NGF2组较NGF1组明显;对照组未出现上述颗粒。CyclinA、B1免疫荧光阳性信号IA值:Aβ1-40组较对照组显著增高(P<0.01),NGF1组较Aβ1-40组明显降低(P<0.05),NGF2组与Aβ1-40组比较无明显降低。②ChAT免疫组化染色:Aβ1-40组仅见少量海马神经元内有棕褐色颗粒,而NGF1组、NGF2组及对照组可见较多含棕褐色颗粒的ChAT免疫阳性细胞,但对照组较NGF1组明显,NGF1组较NGF2组明显。ChAT免疫阳性信号IA值:Aβ1-40组较对照组显著降低(P<0.01),NGF1组较Aβ1-40组明显增高(P<0.05);NGF2组与Aβ1-40组比较无明显增高。结论NGF能有效阻止Aβ1-40诱导海马神经元损伤,对Aβ引起大鼠海马神经元内异常表达细胞周期蛋白有一定的逆转作用,为阿尔茨海默病(AD)的防治提供了一定的实验依据。

体外神经元培养中Aβ_(1-40)诱导cyclin A的异常表达

阿尔茨海默病(AD)是一种进行性神经退行性疾病,以严重记忆减退和认知障碍为主要临床表现.AD主要病理表现是细胞外的老年斑形成,细胞内的神经纤维缠结的出现,以及神经细胞和突触数量的减少[1,2].近年来在探索AD发病机制和病理改变的过程中,发现AD病人脑内的神经元中出现细胞周期相关蛋白(cyclin A、cyclin B1等)的异常表达,且异常表达的细胞周期相关蛋白可能与AD神经元的病理改变有关联[3～5].为此,我们在体外培养神经细胞时,加入Aβ1～40多肽片段,进行细胞周期相关蛋白和神经细胞损伤的分析[6].

在解剖学教学中实施研究性学习对学生的影响

目的:探讨在解剖学教学中实施研究性学习对学生的影响。方法:随机选取2009级临床医学专业学生分为实验班(112人)和对照班(168人),实验班采用研究性学习+传统教学法,对照班采用传统教学法,分析、比较两个班学生考试成绩与问卷调查情况。结果:实验班解剖学考试成绩明显高于对照班(P<0.05);问卷调查反映研究性学习既能让学生亲身体验"用解剖学知识分析和解决临床问题"的过程,又能培养他们多种实践能力。结论:研究性学习能够培养大学生"主动探究"品质和创新精神。

在人体解剖学教学中培养学生的“自主学习”能力

人体解剖学是医学第一课,在人体解剖学教学中培养学生的"自主学习"能力至关重要。本文根据前人对自主学习的研究成果以及自己、同行在人体解剖学教学中的体会,就如何培养医学生人体解剖学自主学习能力,提出了几点粗浅的看法,以期对人体解剖学教学有所启示。

局部解剖学教学中PBL教学模式的实践与思考

为培养创造型、实用型医学人才，近2年来，我们在局部解剖学教学中进行了以PBL为核心的教学改革，并获得了较好的效果。与传统教学模式比较，PBL教学模式能明显优化学生的学习态度，能明显提高学生“自主学习、分析问题、解决问题”的能力，能明显提高学生的专业学习成绩。

海马注射Aβ_(1～40)诱导大鼠记忆减退及其脑内细胞周期蛋白A的异常表达

目的 :探讨 β -淀粉样蛋白 (β -amyloid ,Aβ1～ 40 )毒性作用能否导致成年大鼠脑内神经元表达细胞周期相关蛋白 ,以及细胞周期相关蛋白表达与神经损伤及记忆减退之间的关系。方法 :运用行为学测试、免疫组化、积分光密度分析等手段对Aβ1～ 40 多肽片段双侧海马注射的大鼠脑进行研究。结果 :Aβ1～ 40 注射 7d后大鼠记忆明显减退 (P <0 .0 5 ) ,且大鼠脑内细胞周期蛋白A(cyclinA)在神经元异常表达 ,但术后 2 1d时cyclinA的表达有所降低。结论 :Aβ1～ 40 可导致成年大鼠脑神经元表达细胞周期相关蛋白 ,大鼠脑内神经元细胞周期相关蛋白的异常表达与阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease,AD)