慢性丙型肝炎患者血清sFas和sICAM-1及IL-18水平与意义

目的 :观察可溶性 Fas(s Fas)和可溶性细胞间粘附分子 - 1(s ICAM- 1)及白细胞介素 - 18(IL- 18)在慢性丙型肝炎患者血清中的水平 ,探讨它们在丙型肝炎发病机制中的作用。方法 :采用 EL ISA法检测 30例慢性丙型肝炎患者 α-干扰素治疗前后血清 s Fas、s ICAM- 1、IL- 18的水平 ,荧光定量 PCR技术测定血清 HCV- RNA滴度。结果 :慢性丙型肝炎患者 s Fas、s ICAM- 1、IL- 18的水平均显著高于正常人 (P<0 .0 1) ,且与血清 HCV- RNA滴度密切相关(分别为 r=0 .915 ,r=0 .795 ,r=0 .75 7,P均 <0 .0 1) ;s ICAM- 1、IL- 18水平与 ALT活性显著相关 (分别为 r=0 .95 2 ,r=0 .96 9,P<0 .0 1) ,但 s Fas水平与 ALT无关 (P>0 .0 5 )。实验结果还显示 ,抗病毒治疗有效者 ,血清s Fas、s ICAM- 1、IL- 18较治疗前明显下降 ,而无反应者治疗前后改变不明显。结论 :s Fas、s ICAM- 1、IL- 18均参与慢性丙型肝炎免疫致病过程 ,且与肝脏炎症活动性。

白细胞介素18重组腺病毒对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的 :研究白细胞介素 1 8重组腺病毒 ( Adms IL -1 8)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 ,并对其机理作一探讨。方法 :重组腺病毒腹腔注射 BAL B/ C小鼠 ,每周注射 1次 ,共 2次。 2周后制备腹腔巨噬细胞 ,经 L PS刺激 ,采用 EL ISA法检测培养上清 m IL-1 8、m IL-1 β、m TNFα的水平 ;酶还原法检测 NO的含量 ;L DH释放法检测巨噬细胞的杀伤活性。结果 :Adms IL -1 8注射后 ,小鼠腹腔巨噬细胞高效表达 m IL-1 8,同时巨噬细胞分泌 m IL-1 β、m TNFα、NO水平明显增加 ,并增强巨噬细胞的杀伤活性 ,与其它对照组比较均 P<0 .0 1。结论 :小鼠腹腔注射 Adms IL-1 8,能显著增加巨噬细胞表达 m IL -1 8、m IL -1β、m TNFα、NO,增强巨噬细胞的杀伤活性。

白细胞介素-18基因修饰的胎肝细胞经脾移植对小鼠免疫功能的影响

目的 :观察表达 m IL- 18的重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞 (Adm IL- 18/ BNL.CL2 )经脾移植对正常小鼠免疫功能的影响。方法 :实验组小鼠经脾移植 Adm IL- 18/ BNL.CL2 ,同时设 Lac Z病毒对照组 (Ad- Lac Z/ BNL.CL2 ) ,BNL.CL2 细胞对照组及空白对照组。2周后处死 ,留取血清 ,制备腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞、肝组织匀浆液 ,提取肝组织总 RNA。采用 ELISA法检测各组小鼠血清、腹腔 Mφ和脾细胞培养上清、肝匀浆中细胞因子的含量 ;采用半定量 RT- PCR法 ,检测肝组织细胞因子 m RNA相对表达量 ;以 LDH释放法测定腹腔 Mφ杀伤活性和脾 NK细胞活性 ,用 MTT还原比色法测定脾淋巴细胞的增殖活性。结果 :实验组小鼠血清、细胞培养上清及肝匀浆中 ,IL- 18、IL - 2、IFN-γ、TNF-α含量均高于其它对照组 ,而 IL - 4、IL - 10水平则低于对照组 ;半定量 RT- PCR结果与EL ISA检测结果一致 ;同时 ,实验组腹腔 Mφ的杀伤活性和脾 NK细胞活性 ,及脾淋巴细胞增殖活性也明显高于对照组。结论 :Adm IL - 18能有效转染至胎肝细胞并稳定表达 m IL- 18;Adm IL - 18基因修饰的胎肝细胞经脾移植后 ,可显著提高肝脏、脾脏免疫细胞活性 ,活化腹腔 Mφ,促进 Th1类细胞因子表达 ,抑制 Th2类细胞因子的分泌。

高效抗逆转录病毒治疗对AIDS患者MCP-1和MSP水平的影响

目的:研究高效抗逆转录病毒治疗(HAART)对AIDS患者血清中MCP-1、MSP水平的影响。方法:采用ELISA法检测40例经HAART3个月的国内AIDS患者及84例经HAART3至6年的德国患者血清MCP-1、MSP的水平,荧光定量PCR测定HIV-RNA滴度,流式细胞术检测CD4+T细胞计数。结果:HIV-1感染者血清MCP-1的水平显著高于正常人群(P<0.01),MSP则显著低于正常人群(P<0.01);经短期HAART(3月)后,MCP-1水平下降(P<0.01),MSP无明显改变;长期HAART(3至6年)后MCP-1水平显著升高(P<0.01),而MSP显著下降(P<0.01),MCP-1和MSP水平的变化呈负相关(r=-0.99,P=0.029)。结论:MCP-1、MSP与AIDS病程进展有密切关系,HAART对AIDS患者MCP-1、MSP水平有显著的改变,进而改善患者病程进展。

雷公藤内酯醇抑制滑膜成纤维细胞COX-2和iNOS表达

目的 :研究雷公藤内酯醇对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 (RASF)增殖和表达环氧化酶 - 2 (COX- 2 )、诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)及合成前列腺素 E2 (PGE2 )、一氧化氮 (NO)的影响 ,并探讨其机制。方法 :分离培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 ,用 TNFα(2 0μg/ L)刺激 ,同时加或不加雷公藤内酯醇 (TP,0～ 10 0μg/ L )。分别用 3 H-Td R法、竞争酶联免疫吸附试验 (ELISA)和硝酸酶还原法、半定量逆转录 -聚合酶联反应 (RT- PCR)法、细胞酶免疫法及蛋白免疫印迹 (Western- blot)法 ,检测滑膜细胞的增殖活性、细胞培养上清液中 PGE2和 NO的水平 ,滑膜细胞 COX- 2和 i NOSm RNA表达水平及蛋白表达水平。同时提取各组细胞蛋白 ,测定其核转录因子 NF-κB活性。结果 :TP(>2 0μg/ L)能显著抑制 TNFα诱导的 RASF COX- 2和 i NOS表达 ,并明显减少 PGE2和 NO的生成 ,抑制作用与 TP浓度呈明显相关性。同时观察到 ,TP对 TNFα激活的 RASF核转录因子 NF- κB活性有明显的抑制作用(IC50 ≈ 35 μg/ L) ,TP对 RASF NF- κB活性的抑制程度与其抑制 RASF COX- 2和 i NOS表达的效应相一致。实验未观察到 TP对 RASF增殖的影响。结论 :TP可显著抑制 TNFα刺激的 RASF COX- 2和 i NOS的表达及其诱导产物PGE2和 NO的生成 ,这?

鳖甲防治肝纤维化实验研究

目的:观察鳖甲不同剂型防治大鼠肝纤维化效果并探讨其作用机制。方法:用四氯化碳(CCl4)诱导形成大鼠肝纤维化模型,采用鳖甲不同剂型进行预防和治疗,并与正常对照组、模型对照组相比较,观察各组大鼠病理组织学、肝组织胶原含量、免疫组化细胞因子的表达、血清透明质酸、肝功能、肝组织氧化指标,透射电镜观察肝组织超微结构的改变等。结果:鳖甲煎煮液组SSS计分、肝组织胶原含量、纤维化指标、促肝纤维化因子、血清酶学指标显著低于模型组与鳖甲微粉组,而抗氧化指标显著上升(P<0.05～0.01)。结论:鳖甲煎煮液能有效地预防和治疗大鼠肝纤维化,效果显著,其作用机制可能是通过抗脂质过氧化、改善肝组织病理、改善肝功能、调控细胞因子水平等而发挥抑制肝星状细胞(HSC)活化增殖及细胞外基质(ECM)合成分泌、促进ECM降解吸收等综合作用,阻断和治疗肝纤维化。鳖甲微粉药液无此作用。

脱氧核酶抑制乙型肝炎病毒基因表达的实验研究

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) s基因和 c基因特异性的脱氧核酶 (DNAzyme)对 HBV表面抗原 (HB-s Ag)和 e抗原 (HBe Ag)表达的抑制效应。方法 :设计合成针对 HBV s基因 ORF A157UG、e基因 ORF A1816UG的DNAzyme Drz BS、Drz BC,在 2 .2 .15细胞上观察其对 HBV s基因、c基因的表达抑制效应。结果 :Drz BS、Drz BC作用于 2 .2 .15细胞后 ,可显著抑制 HBV s基因、c基因的表达 ,有效浓度为 0 .1～ 2 .5μmol/ L并呈剂量依赖性 ,最高抑制率分别为 94 .2 %和 91.8% ;有效抑制持续时间可达 72 h;Drz BS、Drz BC在细胞内对 Hbs Ag、Hbe Ag表达的抑制效率 ,明显高于作为对照的反义寡核苷酸 As BS、As BC,有效浓度较后者低至少 10倍。其对 2 .2 .15细胞的 HBVDNA复制无明显影响 ,亦未见明显的细胞毒性作用。结论 :在 2 .2 .15 HBV细胞模型系统 ,Drz BS、Drz BC能高效阻断 HBV s基因、e基因的表达 ,是一种特异性的、高效的抗 HBV基因治疗剂。

B7-H4在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究共刺激分子B7-H4在前列腺癌中的表达情况及其临床意义。方法:应用免疫组织化学染色,检测B7-H4分子在前列腺癌中的表达情况,并评价其与临床病理特征的关系。结果:前列腺癌组织中B7-H4在胞浆和(或)胞膜弥漫表达,表达量显著高于正常前列腺组织(P<0.05)。B7-H4在临床肿瘤分级较高患者的前列腺癌组织中,表达显著强于临床肿瘤分级较低患者的前列腺癌组织。结论:B7-H4在前列腺癌组织中表达上调,与患者肿瘤分级密切相关。异常表达的B7-H4在肿瘤的发生、进展中起到一定作用,有望成为肿瘤新的诊断和预后判断指标,封闭肿瘤组织中的B7-H4有可能成为肿瘤免疫治疗的新策略。

鳖甲水煎液对两种肝纤维化大鼠模型的实验研究

目的：探讨鳖甲水煎液对两种不同原因引起的大鼠肝纤维化的预防治疗作用和量效关系,为鳖甲抗肝纤维化的药效物质基础研究及其活性组分抗纤维化新药研发和临床医疗提供科学依据和研究思路。方法：采用CCl4、DMN两种肝纤维化大鼠模型,对鳖甲水煎液抗肝纤维化的药理作用进行较系统研究,考察各组大鼠病理组织学、肝组织胶原含量、羟脯氨酸、免疫组化细胞因子以及TGF-β1信号通道蛋白Smads的表达、血清透明质酸、肝功能、肝组织氧化指标等。结果：鳖甲水煎液组SSS计分、肝组织胶原含量、纤维化指标、促肝纤维化因子、血清酶学指标显著低于模型组,而抗氧化指标显著上升（P〈0.05-0.01）,作用相当或优于公认有效的抗肝纤维化药物γ-干扰素、扶正化瘀胶囊,预防组及高剂量组效果尤佳。结论：鳖甲水煎液具有显著的抗肝纤维化预防和治疗综合效应,其作用机制可能是通过抗脂质过氧化、改善肝组织病理、改善肝功能、调控细胞因子水平及信号传导通路等而发挥抑制肝星状细胞（HSC）活化增殖及细胞外基质（ECM）合成分泌、促进ECM降解吸收等综合作用,阻断和治疗肝纤维化。

复方海蛇胶囊抗PC-12细胞凋亡研究

目的：研究复方海蛇胶囊对β-淀粉样蛋白（Aβ1～42）诱导的PC-12细胞凋亡的影响，探讨复方海蛇胶囊应用于痴呆的治疗机制。方法：采用四氮唑蓝比色法（MTr法）确定复方海蛇胶囊对神经生长因子（NGF）诱导培养PC-12细胞的安全剂量后，加或不加Aβ，分别用MTr法、流式细胞术（FCM术）检测不同质量浓度的复方海蛇胶囊（0．01，0．1，1，5mg·mL^-1）对PC-12细胞凋亡的影响；用蛋白免疫印迹（Western-blot）法分别检测凋亡执行酶caspase-9与caspase-3的活性。结果：复方海蛇胶囊对NGF诱导培养的PC-12细胞的安全剂量为小于10mg·mL^-1。复方海蛇胶囊各剂量组对A卢诱导的PC-12细胞的凋亡具有明显的抑制作用。各组数据（A）分别为：1．75±0．12，0．73±O．35，0．79±O．11，0．83±O．07，1．31±O．07和1．80±0．38，与空白组比较P〈0．01，流式细胞检测中凋亡细胞的百分率降低（1．93±0．41）％，（46．17±4．08）％，（35．35±4．63）％，（28．62±3．81）％，（15．13±3．15）％，（7．84±1．76）％，与空白组比较P〈0．01。另外，复方海蛇胶囊抑制了A口诱导PC-12细胞的caspase-9和caspase-3活性的增高。结论：复方海蛇胶囊可显著抑制A口诱导PC-12细胞的凋亡，其机制可能通过抑制凋亡执行酶caspase-9，caspase-3的活性实现。

γ-干扰素基因修饰肝细胞对感染日本血吸虫小鼠TGF-β_1及其受体的影响

目的： 探讨γ－干扰素 （ＩＦＮ－γ） 基因治疗对感染日本血吸虫小鼠转化生长因子－β１ （ＴＧＦ－β１） 及其受体的影响与抗肝纤维化作用的关系。方法： 将小鼠ＩＦＮ－γ基因重组腺病毒载体转染的肝细胞经脾移植到感染日本血吸虫尾蚴１６ ｗｋ 的小鼠， 采用ＥＬＩＳＡ、免疫组化和斑点杂交方法分析小鼠血清ＩＦＮ－γ与ＴＧＦ－β１ 表达的关系， 小鼠肝内ＩＦＮ－γ、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－βＲＩＩ与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的关系。结果： ＩＦＮ－γ基因修饰的肝细胞经脾移植后能有效地表达， 显著地降低ＴＧＦ－β１ 、ＴＧＦ－βＲＩＩ的表达和Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结论： ＩＦＮ－γ基因治疗能有效地发挥抗血吸虫病肝纤维化作用， 可能与降低ＴＧＦ－β１及其受体有关。

鳖甲水煎液药物血清对肝星状细胞的作用

目的:实验研究鳖甲水煎液药物血清对肝星状细胞的影响和作用机制。方法:双抗夹心ELISA法检测鳖甲水煎液药物血清对TGF-β1刺激的LX-1细胞胶原及调节因子表达的影响,MTS法检测鳖甲水煎液药物血清对TGF-β1刺激的LX-1细胞增殖的影响,Western blot检测鳖甲水煎液药物血清对TGF-β1刺激的LX-1细胞活化、胶原合成及细胞外基质等表达的影响。结果:鳖甲水煎液药物血清能明显抑制TGF-β1刺激的LX-1细胞的增殖;显著下调TGF-β1刺激的LX-1细胞Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、HA与α-SMA蛋白表达;并作用于TGF-β1下游信号通道蛋白,抑制Smad 3及P-smad3等因子表达,从而阻断TGF-β1等因子的生物学效应;能显著上调MMP 1、MMP 3蛋白表达,同时通过抑制TIMP-1蛋白表达、更有利于改善胶原酶活性,从而促进ECM的降解。在实验浓度范围内,鳖甲水煎液药物血清对肝星状细胞的作用呈现量效关系,作用显著优于目前有效的抗肝纤维化药物或细胞因子IFN-γ,与扶正化瘀胶囊作用相当。结论:鳖甲水煎液药物血清能抑制肝星状细胞活化增殖及细胞外基质合成分泌、促进细胞外基质降解吸收,调控细胞因子水平及信号传导通路,从而发挥抗肝纤维化的作用。本实验进一步验证了鳖甲抗肝纤维化药效学的有效性,为鳖甲抗肝纤维化的药效物质基础研究及其活性组分抗纤维化新药研发、保健品开发和临床医疗提供科学依据和研究思路。

血管紧张素II对巨噬细胞(THP-1细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响

目的 :研究AngII对人单核 /巨噬细胞 (THP - 1细胞 )凝集素样氧化低密度脂蛋白受体 (LOX - 1 )蛋白表达和基因转录的影响 ,从细胞蛋白、分子水平探讨AngII和巨噬细胞LOX - 1相互之间的关系 ,以进一步了解两者在动脉粥样硬化中的地位。方法 :将不同浓度AngII(1× 1 0 - 9- 1× 1 0 - 5mol/L)与经 0 1 μmol/L佛波酯 (PMA)诱导分化后的THP - 1细胞共孵育 2 4h ,以及将 1× 1 0 - 6 mol/L浓度的AngII与诱导分化后的THP - 1细胞作用不同时间0、3、6、1 2、2 4、48h后 ,用细胞酶联免疫法和半定量RT -PCR分别检测LOX - 1蛋白和mRNA表达的情况。结果 :未经诱导的THP - 1细胞不表达LOX - 1mRNA ;而经PMA诱导后 ,THP - 1细胞停止增殖 ,由单核细胞分化成为巨噬细胞 ,并表达LOX - 1mRNA。不同浓度的AngII作用诱导分化后的THP - 1细胞 2 4h,细胞LOX - 1蛋白和mRNA的表达呈浓度依赖性显著增加。同一浓度的AngII作用THP - 1细胞 ,可呈时间依赖性诱导LOX - 1蛋白和mRNA表达 ,其趋势是 3h左右开始增加 ,2 4h左右至最高峰 ,之后逐渐减低。结论 :经PMA诱导分化后的THP - 1细胞表达LOX- 1 ;AngII能明显增强分化后的THP - 1细胞表达LOX - 1蛋白和mRNA ,并呈浓度和时间依赖性。AngII这种作用可能是促进动脉粥样硬化发生、发?

抗纤方抑制TGF-β_1诱导肝细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨抗纤方对TGF β1诱导肝细胞凋亡的抑制作用。方法 :采用细胞生物学等方法 ,利用TGF β1可诱导肝细胞凋亡的特性 ,建立体外实验模型 ,观察抗纤方对TGF β1诱导肝细胞凋亡抑制作用。结果 :实验表明TGF β1以剂量依赖关系诱导肝细胞凋亡 ,当TGF β1浓度在 50 0 pg/ml时可诱导2 2 15细胞凋亡达 63% ,而HepG2细胞凋亡只有 4 2 % ;此时 ,用抗纤方 2 0mg/ml可使 2 2 15细胞凋亡率降至 33% ,HepG2细胞凋亡率降至 2 4 % ,抑制率均在 50 %左右。结论 :抗纤方体外对TGF

重组β-防御素2多肽对脓毒症大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的:观察重组β-防御素2多肽预处理对脓毒症大鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法:SPF级SD大鼠48只随机分成对照组和防御素组,采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症模型,防御素组在CLP前48h经气管插管气道滴注107PFU重组腺病毒(含有β-防御素2编码基因),而对照组则同法给予对照腺病毒(不含β-防御素2编码基因)。分别于CLP后0、12、36和72 h处死大鼠,取肺组织,采用透射电镜,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,采用电镜、苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化。结果:TUNEL检测显示,对照组大鼠CLP后12、36和72 h肺组织细胞凋亡指数显著增加(P<0.01);与对照组相比,防御素组CLP后相应时间点肺组织细胞凋亡指数显著降低(P<0.05)。HE染色可见,两组大鼠CLP后12、36和72 h肺泡及肺泡间质充血、水肿,炎症细胞渗出,肺泡腔不同程度狭窄。与对照组相比较,防御素组相应时间点肺组织内炎症细胞渗出减少,间质水肿减轻。结论:重组β-防御素2多肽预处理能抑制脓毒症肺组织的细胞凋亡,对急性肺损伤(AL I)具有保护作用。

人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库的构建及鉴定

目的构建人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库,为筛查与乙型肝炎肝硬化的发生特异相关的基因及探讨乙型肝炎肝硬化的发病机制奠定基础。方法用Trizol方法提取人乙型肝炎肝硬化组织总RNA,并用mRNA纯化试剂盒进行mRNA纯化;反转录合成单链cDNA,长距离PCR方法合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K水解、纯化后,用SfiI酶切;将酶切产物进行分级分离,回收0.4kb以上的cDNA组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;鉴定文库的滴度和重组效率后,进行文库扩增;鉴定扩增文库的滴度和重组效率;随机挑取11个噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果未扩增文库滴度为1.03×106pfu/ml,重组效率为97.24%,扩增后文库滴度为1.36×109pfu/ml,重组效率为99.02%;用载体两端的通用引物进行PCR鉴定,插入片段平均长度为1.02kb,含1kb以上的占36.36%,0.5～1kb的占63.64%。结论已成功构建一高质量的人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库,为筛查与乙型肝炎肝硬化的发生特异相关的基因及探讨乙型肝炎肝硬化的发病机制奠定了基础。

转化生长因子-β_1及其受体的表达与大鼠肝纤维化关系的研究

目的 :探讨肝纤维化形成过程转化生长因子 -β1(TGF-β1)及其受体的表达对胶原合成的影响。方法 :采用免疫组化和斑点杂交技术 ,观察实验性大鼠肝纤维化过程肝内 TGF-β1、TGF-β R 和 、 型前胶原 m RNA及其蛋白质表达的动态变化。结果 :随着肝纤维化程度的加重 ,肝内TGF-β1、TGF-β R 和 、 型前胶原 m RNA及其蛋白质表达均明显增加 ,组间比较均有显著性差异 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1 )。TGF-β1与 、 型前胶原 m RNA及其蛋白质表达之间均呈明显正相关 ;TGF-βR 与 、 型前胶原 m RNA及其蛋白质表达之间也均呈正相关。结论 :TGF-β1是肝纤维化的重要介质 ,TGF-β R 表达增加是肝纤维化发病机制中的重要环节。

NF-κBp50参与IL-4在THP-1细胞中诱导DC-SIGN的表达(英文)

树突状细胞表面特异的胞间黏附分子3捕获非整合素(DC-specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing nonintegrin,DC-SIGN)是树突状细胞表面特异的蛋白,在抗原呈递过程中起关键作用.这种特异性的表达和DC-SIGN的调节机制有关.到目前为止,DC-SIGN表达调控的机制还不是很清楚.IL-4是诱导DC-SIGN表达的最重要的细胞因子之一,而NF-κB是调控细胞信号转导的一个重要调控因子,两者都和DC-SIGN的表达调节相关.研究了IL-4和NF-κB对DC-SIGN启动子活性、对DC-SIGN表达的影响以及IL-4和NF-κB之间相互作用的关系.发现:DC-SIGN启动子中NF-κB位点缺失可以使DC-SIGN启动子活性下降大约50%,NF-κBp50可以促进DC-SIGN在THP-1细胞的表达,IL-在THP-1细胞诱导DC-SIGN表达的同时,也促进了NF-κBp50的表达.这些结果显示,在THP-1细胞中NF-κBp50参与IL-4诱导的DC-SIGN表达.

雷公藤内酯醇对结肠癌细胞COX-2和iNOS表达的抑制作用

目的研究雷公藤内酯醇(TP)抑制结肠癌SW114细胞株环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物PGE2和NO的表达,探讨TP的抗肿瘤机制。方法不同浓度的TP作用于结肠癌细胞株24h,通过RT-PCR,Western印迹杂交,ELISA检测环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物,同时提取各组细胞蛋白质,TransAM测定核转录因子NF-κB活性。结果TP对结肠癌细胞株COX-2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO的合成有抑制作用,而且也抑制SW114细胞的NF-κB活性,这些作用与剂量呈依赖关系。结论TP对SW114细胞COX-2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO的合成有抑制作用,这种作用可能通过增强TP对核转录因子NF-κB活性的抑制作用而实现,揭示了TP抗肿瘤的部分依据。

HBx-siRNA快速筛选体系的建立和应用

目的 :建立针对 HBx的小干扰 RNA(si RNA)快速筛选体系。方法 :1构建 HBx与增强型绿色荧光蛋白(EGFP) N端融合表达质粒 ;2用一步 PCR法 ,制备针对 HBx m RNA的 RNA多聚酶启动子 - si RNA表达框(SEC) ;3将 SEC转染 HBx- EGFP瞬时表达的 AD2 93细胞 ,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察分析 SEC对 HBx- EGFP荧光表达的抑制效果 ,从而确定有效 si RNA。结果 :1成功构建 HBx- EGFP融合表达质粒 p HBx- EGFP,在瞬时表达细胞中 ,HBx- EGFP绿色荧光主要呈颗粒状 ,聚集在核膜与核膜外周或细胞浆 ;2共转染 SEC能有效抑制 HBx- EGFP的瞬时表达。与 si HBx2 71相比 ,si HBx388是一高效 si RNA位点 ,并且该位点与 t RNAVal和 H1启动子搭配更有效。结论 :成功建立表达 HBx的荧光蛋白报告体系 ,结合快速制备 SEC的方法 ,可用于进行 HBx有效 si