泰山赤灵芝液体培养条件优化及多糖含量测定

本文探讨了泰山赤灵芝(Ganodermalucidum)液体培养中碳源、氮源、pH对灵芝多糖积累的影响。结果表明,培养基最适碳源、氮源、pH值分别为蔗糖、蛋白胨、5.0,其配方组成(质量分数,%)为:KH2PO40.1,MgSO4·7H2O0.05,(NH4)2SO40.2,蛋白胨0.3,蔗糖5,pH5.0,灵芝多糖含量可达11.77%,分别是子实体和孢子粉的2.5和2.2倍。

玉米秸秆低温快速腐熟菌的筛选、鉴定及效果试验

本试验模拟腐烂秸秆的环境,以玉米秸秆的浸出汁为培养基,在5℃低温条件下,用双层平板和穿刺法结合筛选到4株快速腐熟秸秆的兼性厌氧菌。依据形态、生理生化特征以及16S rDNA序列分析结果,将YO-1、YO-2鉴定为赫氏埃希菌(Escherichia hermannii),YO-B鉴定为霍氏肠杆菌(Enterobacter hormae-chei),YO-H鉴定为节杆菌(Arthrobacter arilaiti)。进一步通过发酵试验,验证了4株菌对玉米秸秆的降解效果,其中YO-1、YO-H对玉米秸秆降解能力好于YO-2和YO-B。

花生根瘤菌接种与微量元素肥料配施对其生物量及氮素利用的影响

采用盆栽试验 ,主要研究了在施用同一基础化肥的情况下 ,接种根瘤菌及配施微量元素肥料对花生生物量及氮素利用的影响。试验结果表明 ,按种根瘤菌比未接种的生物量增加2 0 .6 % ;配施微量元素肥料的可使花生干重增加 37% ,在开花等农艺性状方面 ,均有不同程度的改善 ,氮素利用有不同程度的增加。

滑菇Pholiota nameko SW-01菌株产漆酶营养条件及部分酶学性质研究

[目的]探索滑菇Pholiota nameko SW-01菌株产漆酶的最佳营养条件及其酶学性质。[方法]首先选取不同的碳源、氮源、pH、金属离子进行单因素试验,得到最佳培养基成分,进行四因素三水平的响应面分析。在酶学性质试验中,设置不同温度及pH,测定漆酶的最适反应温度、pH及热稳定性、pH稳定性。[结果]最适的碳源和氮源分别为葡萄糖和蛋白胨,最适pH为5,Cu2+能显著提高漆酶的产量。响应面分析结果表明,最佳的产漆酶条件为葡萄糖42.50 g/L,蛋白胨2.10 g/L,pH 5.47,Cu2+浓度1.67 mmol/L,在此条件下漆酶活性为943.27 U。在酶学性质试验中,漆酶的最适反应温度为30℃,最适反应pH为4.8。[结论]条件优化能显著提高滑菇漆酶产量。稳定性试验表明,漆酶对温度较敏感,对pH反应不敏感,在弱酸环境中能发挥较高的活性。

工程菌及其固定化细胞对有机磷农药的降解

用抗性库蚊酯酶基因,引入原核表达载体pRL439,转化大肠杆菌HB101细胞,获得表达.通过酶切、Southern杂交鉴定重组质粒.研究了重组菌酯酶的活性,重组质粒pRL-B1表达的酯酶具有高酶活并能高效降解酯酶的特异性底物a-乙酸萘酯(a-NA)和β-乙酸萘酯(β-NA);经对重组菌进行细胞固定化后降解有机磷农药对硫磷(1605),反应时间短,降解效率高.

烟草根际铁载体产生菌G-229-21T的筛选、鉴定及拮抗机理

【目的】从烟草根际筛选烟草疫霉[Phytophthora parasitica var.nicotianae(Breda de Hann)Tucker]拮抗菌,探索其拮抗机理。【方法】限铁(2.0μmol/LFeCl3)蔗糖-天冬酰胺平板对峙法筛选烟草疫霉拮抗菌;刃天青(CAS)法检测其铁载体的产生及其对铁离子的亲和能力。结合形态、生理生化、16SrRNA序列同源性和系统发育分析及种特异性分子法对其进行鉴定。XAD-2吸附层析法提取其铁载体,分光光度法检测其铁载体类型。不同铁离子浓度下,比较其铁载体对烟草疫霉的抑制作用。【结果】我们筛选到一株限铁条件下烟草疫霉拮抗菌G-229-21T,该菌产生高亲和力铁载体,被初步鉴定为Pseudomonas mediterranea。该菌产生的羧酸型铁载体,在低铁条件下(0.16μmol/L～10μmol/LFeCl3)对烟草疫霉的抑制率达92.3%以上,而在富铁条件下(100μmol/LFeCl3)抑制率仅为2.0%。【结论】首次报道P.mediterranea G-229-21T产生高亲和力羧酸型铁载体,该铁载体在低铁条件下对烟草疫霉有显著的抑制作用。

硒在香菇体内的生物转化及硒蛋白的生物活性

采用香菇深层发酵对无机元素硒进行富集和转化 ,获得了硒含量为 2 2 5 μg/g的香菇菌丝体。硒参与蛋白质、多糖等大分子物质的合成 ,被转化为有机硒 ,有机化程度为 72 9% ,其中 68 2 %以硒蛋白的形式存在。硒对氨基酸和蛋白质的合成具有促进作用 ,其含量分别比对照提高 15 96%和 18 3 %。与无机硒相比 ,硒蛋白吸收利用率高 ,生物活性强 ,饲喂硒蛋白的大鼠体内硒水平和GSH Px活性明显较高。将硒蛋白提取出来 ,取代亚硒酸钠等无机硒作为补硒功能性食品或药品的基料 。

西瓜根际枯萎病拮抗放线菌的筛选及鉴定

从西瓜根际分离获得了32个放线菌分离物,通过离体拮抗试验,筛选出3株对西瓜枯萎病有良好拮抗效果的放线菌,编号为XF9、XF18和XF22。通过对其进行形态学观察、生理生化测定以及16S rDNA序列分析,初步确定XF9为灰色链霉菌(Streptomyces griseus),XF18为淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae),XF22为脱叶链霉菌(Streptomyces exfoliates)。XF9、XF18和XF2216S rDNA序列的GenBank登录号分别为EU723881、EU723880和EU723879。

种植年限对牡丹根际土壤微生物群落结构的影响

为了探究牡丹连作对土壤微生物种群结构的影响,从菏泽牡丹园采集种植年限分别为3、5、8、12、20年的牡丹根际土壤样品,采用末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)技术与变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法研究了样品中细菌和真菌的种群结构变化。结果表明,牡丹根际土壤细菌多样性变化不显著,而真菌多样性水平随种植年限的增加而降低,菌群结构趋于简单,种类大量减少。通过戴斯系数法对牡丹根际土壤的细菌与真菌DGGE图谱分析表明,各样品间细菌种群结构相似度均在76.9%以上,而牡丹根际土壤样品真菌种群结构相似度最低仅为58.3%,说明随着种植年限增加牡丹根际细菌种群结构未发生显著变化,而根际真菌种群结构变化显著。牡丹连作后真菌种群结构的变化可能是引发牡丹连作障碍的主要原因。

微生物肥料对棉田土壤生态与棉花生长的影响

试验研究微生物肥料对棉田土壤生态与棉花生长的影响结果表明,单一施用微生物肥料或与有机肥混施均可改善土壤生态,提高土壤肥力,降低土壤容重,提高阳离子代换量,增加土壤速效磷、碱解氮和速效钾含量,棉花产量分别比对照提高19.2%和31.6%,且微生物肥料与有机肥混施效果优于单一使用。

富硒灵芝功能性奶粉的研制

采用灵芝深层发酵对无机元素硒进行富集和转化,获得了硒含量2936μg/g的灵芝菌丝体。富硒灵芝菌丝体不但强化了硒营养,将无机硒转化为吸收和利用率较高的有机硒。而且,各种氨基酸含量大幅度提高,强化了营养价值。以富硒灵芝菌丝体作基料配制的功能性奶粉,除含有普通奶粉的营养成分外,还含有丰富的灵芝多糖和有机硒,具有特殊的保健功能,是一种理想的功能性食品。

富硒香菇功能性奶粉的研制

采用香菇深层发酵对无机元素硒进行富集和转化,获得了硒含量225μg/g的香菇菌丝体。富硒香菇菌丝体不但强化了硒营养,将无机硒转化为吸收和利用率较高的有机硒,而且,各种氨基酸含量大幅度提高,强化了营养价值。以富硒香菇菌丝体作基料配制的功能性奶粉除含有普通奶粉的营养成分外,还含有丰富的香菇多糖和有机硒,具有特殊的保健功能,是一种理想的功能性食品。

两株棉花立枯病拮抗菌MH1和MH25的筛选与鉴定

从棉花根际分离了1277个细菌分离物,以棉花立枯病病原真菌立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kuhn)为靶标菌,通过平板对峙法获得25个具有拮抗性能的分离物,其中MH1和MH25具有较强的拮抗性能,且拮抗性能稳定,具有较好的生防潜力。经过形态观察、生理生化特征分析及16SrDNA序列分析,MH1为短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis),MH25为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。MH1和MH25的16SrDNA序列在GenBank中注册号分别为:EF488102,EF488103。

富锌冬虫夏草菌丝体有机化程度及氨基酸含量分析

对冬虫夏草进行液体富锌培养 ,结果表明 ,培养基中适宜添加锌浓度为 1 5 0 μg/mL ,此时菌丝体生物量达到 1 0 7g/L ,菌丝体含锌量为 4875 1 μg/g ,富锌率为 3 4 0 5 % ,有机化程度达到76 3 3 %。分析氨基酸含量 ,富锌冬虫夏草菌丝体中氨基酸含量比对照明显增加 ,说明锌能促进其氨基酸生物合成。

一株棉花根际铁载体产生菌E19的分离鉴定

目的:从棉花根际细菌中筛选出铁载体产生能力较强的菌株并对其进行鉴定。方法:用梯度稀释法从棉花根际中分离出细菌,再通过在CAS检测平板上显色圈的大小从中筛选出铁载体产生能力较强的菌株,并对其进行生理生化鉴定和16S rDNA序列分析。结果:筛选出一株铁载体产生能力较强的菌株E19,13项生理生化指标除甲基红试验呈阳性外,其它均与恶臭假单胞菌相同。其16S rDNA与恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的同源性为100%。

R-工程菌表达产物酯酶B1的纯化及其特性

为将酯酶B1应用于果蔬农药残留的降解,对其进行分离纯化,并对其酶学特性进行研究。R-工程菌在LB液体培养基中37℃震荡培养14 h,细胞经石英砂冰浴研磨破壁,粗提酶液经硫酸铵分级盐析、Sephadex G-50分子筛柱层析脱盐、DEAE-Sepharose FastFlow离子交换层析、Sephadex G-75分子筛柱层析得到凝胶电泳均一的酯酶B1。SDS-PAGE结果表明,该酶分子量为67 kDa。酯酶B1的纯化倍数为43.4,收率为2.94％。该酶的最佳作用条件是37℃、pH=7.O,常温(25℃)下,酯酶B1的半衰期为62 h,42℃时该酶仍然十分稳定。酶促反应动力学曲线采用双倒数法,37℃时最大酶促反应速度Vm=0.73 mg/(mL·min),米氏常数Km=3.89 mg/mL。酯酶B1活力强、在常温下反应速度快、稳定高,说明其用于果蔬农残降解在技术上是可行的。本文将酯酶B1纯化至电泳纯,因而工艺复杂、收率较低,但在实际应用中,只需进行粗分离,工艺简单,收率高达70％,因此,该酶的开发应用在经济上也是可行的。

Pseudomonas mosselii E1铁载体合成相关基因cysI的克隆与功能初步分析

从棉花根际分离的铁载体产生菌E1,其16SrDNA与Pseudomonas mosselii ATCCBAA-99的同源性为100%。采用三亲本杂交方法将携带转座子Tn5-1063的质粒pRL1063a导入E1中进行转座子插入诱变。利用CAS法,从1000个突变株中,筛选到一株铁载体合成缺失突变株E1-185。利用TAIL-PCR方法,扩增位于Tn5-1063两端的侧翼序列。测序结果表明,转座子插入到E1的cysI基因内。该基因与Pseudomonas entomophila L48的cysI同源性为96%,其CysI氨基酸序列相似性为97%。该基因与半胱氨酸的合成密切相关,而在加有半胱氨酸的CAS平板上,突变株恢复了铁载体产生能力,证明cysI在E1铁载体合成过程中具有重要作用。据推测,cysI可能与铁载体合成途径中关键蛋白acyl-S-PCPs的形成有关。

辣椒根腐病拮抗细菌的筛选及其生物学特性研究

以辣椒根腐病原菌(Fusarium solani)为指示菌,从贵州辣椒根际筛选到5株具有明显拮抗效果的细菌,编号分别为:SC2、SC2-4、SC2-4-1、SC2-4-2、SC2-4X。上述菌株抗菌谱较广,对黄瓜枯萎病原菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)、黄瓜霜霉病原菌(Pseudoperonospora cubensis)、芹菜灰霉病原菌(Botrytis cinerea Pers)以及西红柿灰霉病原菌(Botrytis cinerea)也具有良好的拮抗性能。经形态学测定、生理生化分析和16S rDNA序列分析,将SC2、SC2-4-2、SC2-4X鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),SC2-4、SC2-4-1鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。SC2菌株产生的抗菌物质可能为蛋白类或抗菌肽类物质。

牡丹根腐病拮抗菌的筛选与鉴定

从菏泽曹州牡丹园采集根际土壤样品6个,从中分离出300个分离物,以牡丹根腐病病原菌(Fusarium solani)为靶标菌,通过平板对峙法筛选出27个具有拮抗性能的菌株,其中MD1、MD4、MD7、MD8、MD64、MD68、MD70具有较强拮抗能力,且拮抗性能稳定。经过形态观察、生理生化特性分析及16S rDNA序列分析,将MD1鉴定为Bacillus amyloliquefaciens,MD4鉴定为Bacillus malacitensis,MD7鉴定为Bacillus subtilis,MD8鉴定为Pseudomonas chlororaphis;MD64鉴定为Streptomyces albireticuli;MD68鉴定为Bacillus tequilensis;MD70鉴定为Bacillus methylotrophicus。它们的16S rDNA序列在GenBank中注册号分别为JN205338、JN205339、JN205340、JN205341、JN205342、JN205343、JN205344。

几株烟草根际促生细菌的挥发性物质对拟南芥根构型的影响

为研究13株植物根际促生细菌(PGPR)产生的挥发性物质(VOCs)对拟南芥的生长促进作用,通过二分格培养法筛选出对拟南芥生长有影响的菌株,采用SPME-GC-MS对植物根际促生细菌产生的VOCs进行鉴定。结果表明,供试的13株植物根际促生细菌产生的VOCs能够不同程度的促进拟南芥的生长、改变拟南芥的根构型。P1、MD8和FGH19菌株产生的挥发性物质对拟南芥的促生作用十分显著,平均拟南芥鲜重达38.78、30.58、23.70 mg/株,分别比对照增加了5.71、4.29、3.10倍。DZQ8菌株处理的拟南芥PRL为8.03 cm,比对照处理增长了0.85倍,TZQ33和TZQ36菌株的处理对拟南芥LRN影响最为明显,LRN分别为37.50和40.50,比对照处理分别增长了1.17和1.35倍,MTQ8、MD8、TZQ33和TZQ36菌株处理的拟南芥LRD分别为6.20、7.07、7.35和7.33 cm-1,比对照处理分别增大了0.55、0.77、0.84和0.83倍。因此,植物根际促生细菌产生的一些挥发性物质可以促进植物的生长、重塑根构型。通过对挥发性物质的分析及验证,首次发现MTQ8产生的1,3-丁二醇对拟南芥植株有很明显的促生作用,且确定1,3-丁二醇可以促进拟南芥的生长、调整根构型。