失巢凋亡相关miRNAs预测肝细胞癌预后的分析

目的:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库筛选肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中与失巢凋亡相关的miRNAs(anoikis-related miRNAs,armiRNAs),基于筛选出来的miRNAs构建HCC预后列线图模型,探讨armiRNAs与HCC预后的相关性,为HCC的治疗提供新的靶点。方法:从TCGA数据库下载RNA转录数据,筛选在HCC和癌旁组织中差异表达的armiRNAs,采用单因素Cox回归和LASSO回归分析鉴定具有预后意义的armiRNAs,通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价其可靠性,并构建预后列线图模型。利用该模型,使用京都基因和基因组百科全书(KEGG)进行基因富集分析及药物敏感性研究。通过RT-qPCR对人正常肝细胞系LO2和三种人肝癌细胞系中差异表达的armiRNAs进行验证。结果:本研究经过筛选得到7个armiRNAs,根据风险评分将肝癌样本分为高、低风险组,Kaplan-Meier生存曲线显示两组之间存在显著差异,死亡人数随着风险评分的增加而增加。预测1年、2年、3年生存率的ROC曲线的AUC值分别为0.794、0.789、0.781,表明该模型具有较高的区分度。针对不同风险组对抗肿瘤药物敏感性的研究结果表明,高危组对多种抗肿瘤药物敏感性较高。实验验证显示,与LO2细胞相比,三种人肝癌细胞系中hsa-miR-4661、hsa-miR-1180表达水平显著增高,hsa-miR-139、hsa-miR-101-2、hsa-miR-326、hsa-miR-29c表达水平显著下降,而hsa-miR-509-3-5p在HepG2细胞中表达显著降低,在SMMC-7721、MHCC97细胞中表达显著升高。结论:本研究共筛选出7个armiRNAs,基于这些基因构建的模型能够较好的预测HCC患者的生存率及患者对药物的敏感性,这些结果可为探索肝癌预后标志物和临床个体化治疗提供重要参考。

基于PK/PD模型与蒙特卡洛模拟对大肠埃希菌所致脓毒症休克患者抗感染治疗方案的优化分析

目的:基于药动学(pharmacokinetics,PK)/药效学(pharmacodynamics,PD)模型和蒙特卡洛模拟(Mote Carlo simulation,MCS),分析大肠埃希菌所致脓毒症休克患者抗感染治疗方案的优化过程,为临床感染患者构建合理有效的治疗方案提供参考。方法:一患者因不明原因发热入院,初步诊断为尿路感染和脓毒症休克。入院后第一时间完善了相关实验室检查,随后采用PK/PD模型和MCS依据微生物培养结果及其药敏试验确定最优的抗感染治疗方案。结果:入院第3天,微生物培养检出大肠埃希菌,随后的药敏试验提示其对美罗培南、亚胺培南敏感,而对头孢哌酮-舒巴坦钠中介;采用PK/PD模型和MCS对拟定的几个抗感染治疗方案进行分析,结果发现美罗培南(1 g,q8h)和亚胺培南(0.5 g,q6h)的达标概率(probability of target attainment,PTA)均为100.00%,而头孢哌酮-舒巴坦钠(3 g,q12h)的PTA为1.14%,头孢哌酮-舒巴坦钠(3 g,q8h)的PTA为7.65%;最终,临床选择了美罗培南(1 g,q8h)治疗,1周后患者的感染指征基本消失。结论:PK/PD模型和MCS两个工具可以较好地帮助临床药师预测抗感染治疗方案的可能效果,从而更好地协助医生制定和优化治疗方案,进而最大程度保证患者的治疗效果。

基于mTOR信号探究miR-183-5p对肝癌细胞血管生成及VEGF表达的影响

目的肝癌是一种高发病率和高死亡率的常见肿瘤。miR-183-5p在多种肿瘤中被证明可促进血管形成。然而,miR-183-5p在肝癌血管形成中的作用机制仍有待进一步探索。因此本文将探究miR-183-5p影响肝癌血管形成的分子调控机制。方法生信分析miR-183-5p在肝癌组织中的表达水平。qRT-PCR检测miR-183-5p在肝癌细胞系中的表达。细胞功能实验探究miR-183-5p异常表达对肝癌细胞活力、增殖、迁移、侵袭和HUVECs细胞血管形成的影响。Western blot检测VEGFA、mTOR的表达。ELISA检测肝癌细胞分泌的VEGFA表达。mTOR通路激活剂MHY1485处理进一步探究miR-183-5p介导mTOR信号通路对肝癌细胞血管形成的影响。结果本研究发现miR-183-5p在肝癌组织和细胞中高表达,沉默miR-183-5p可明显抑制进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭以及HUVECs细胞血管形成。同时,沉默miR-183-5p可以抑制mTOR信号通路的活性。mTOR通路激活剂MHY1485处理可以逆转沉默miR-29c-3p对HUVECs血管形成的抑制作用。结论本研究证实了miR-183-5p通过激活mTOR信号通路促进了肝癌细胞血管形成的分子机制,本研究进一步完善了我们对肝癌细胞血管形成的认识,以及为开发新型肝癌治疗策略提供了新思路。

雷帕霉素减缓转基因小鼠肝细胞癌进展

目的探究雷帕霉素(rapamycin)对H-ras 12V转基因小鼠肝细胞癌(HCC)进展的影响。方法miRNA高通量测序检测转基因小鼠肝癌及癌旁组织中miRNA表达水平,采用雷帕霉素对转基因小鼠进行治疗干预,形态学检测小鼠肿瘤的变化,RT-qPCR检测miR-183 mRNA表达水平,Western blot检测mTOR、ERK蛋白及miR-183靶基因PDCD4蛋白表达水平。结果肝癌组织中miR-183表达水平较癌旁组织显著升高(P<0.01),PDCD4蛋白水平较癌旁组织显著降低(P<0.05)。雷帕霉素干预后,与对照组相比,雷帕霉素组肝肿瘤整体总数显著下降(P<0.05),肝系数显著降低(P<0.05),ERK磷酸化水平显著升高(P<0.05),miR-183表达水平显著下降(P<0.05),其靶基因PDCD4表达水平显著升高(P<0.05)。结论雷帕霉素可减缓H-ras 12V转基因小鼠肝癌的进展。

他汀类药物对糖尿病性骨质疏松患者骨钙素和骨密度影响的系统评价

目的系统评价他汀类药物对糖尿病性骨质疏松患者骨钙素和骨密度的影响。方法计算机检索Cochrane、pubmed、EMbase、CBM、CNKI,检索时间为从建库至2011年8月。评价质量及提取资料后,采用RevMan 5.1软件对数据进行Meta分析。结果纳入随机对照试验的文献数7篇,共453例,Meta结果显示,对骨钙素的影响[MD=0.26,95%CI(0.06,0.46)],腰椎骨密度的影响[MD=0.22,95%CI(0.05,0.40)],股骨颈骨密度的影响[MD=0.04,95%CI(-0.05,0.13)],Wards三角区骨密度的影响[MD=0.06,95%CI(0.02,0.09)],大转子骨密度的影响[MD=0.03,95%CI(-0.00,0.07)],髋骨骨密度的影响[MD=0.02,95%CI(-0.02,0.07)]。结论他汀类药物对糖尿病性骨质疏松患者的治疗还是有一定的疗效,但由于文献质量方面不太理想,尚需更多高质量的随机对照试验提供依据。

基于增强型绿色荧光蛋白研究中性粒细胞对大肠杆菌的抑制作用

目的基于增强型绿色荧光蛋白(EGFP)研究中性粒细胞(PMN)对大肠杆菌的抑制作用。方法以p EGFP-N1为模板,扩增出750 bp的EGFP基因片段,克隆到p ET-20b(+)载体上,构建p ET-20b(+)-EGFP并转入宿主BL21,PCR鉴定、IPTG诱导表达后的EGFP-E.coli与中性粒细胞共同培养后,测定指定时间的荧光强度,并线性拟合中性粒细胞抗菌的动力学方程。结果成功构建重组质粒p ET-20b(+)-EGFP和BL21表达增强型绿色荧光蛋白。中性粒细胞对大肠杆菌的作用时间与ln(F/F0)呈正相关(R2=0.823 8)。结论基于EGFP改进传统的PMN抑菌方法。

丹皮酚对大鼠急性心肌梗死后核因子-κB p65通路的影响

目的探讨丹皮酚对大鼠急性心肌梗死后(AMI)心肌组织核因子(NF)-κB p65通路的影响。方法大鼠结扎左冠状动脉前降支建立AMI模型,分为模型组和丹皮酚低、中、高剂量组4、6、8 mg·kg^(-1)·d^(-1)及卡托普利组10 mg·kg^(-1)·d^(-1);另设假手术组只穿线不结扎。连续给药4 w后处死大鼠,Masson染色法分析心肌组织胶原沉积变化;免疫组化法检测p-IκB及NF-κB p65蛋白的表达。结果 4、6、8 mg·kg^(-1)·d^(-1)丹皮酚给药4 w后,大鼠心肌组织的胶原沉积量较模型组显著减少。丹皮酚还可下调心肌组织中NF-κB p65、p-IκB的蛋白表达。结论丹皮酚对大鼠AMI后心室重构有明显的治疗和改善作用,抑制NF-κB p65的表达和活化是其作用机制之一。

基于PK/PD模型和蒙特卡罗模拟优化肺炎克雷伯菌感染时初始给药方案的研究

目的:基于PK/PD模型和蒙特卡罗模拟优化肺炎克雷伯菌感染时初始给药方案的研究。方法:收集已发表肺炎克雷伯菌和相关敏感抗菌药物的药代动力学参数和微生物学数据。采用Crystal Ball软件模拟10000例感染肺炎克雷伯菌感染的各给药方案的达标概率和累积反应分数。结果:治疗肺炎克雷伯菌5种抗菌药物18种给药方案显示,亚胺培南、阿米卡星的各给药方案CFR均能达到目标靶值,哌拉西林他巴唑只有4.5 g,q6 h的给药方案达到目标靶值,美罗培南、头孢吡肟各给药方案的CFR均达不到目标靶值。结论:治疗肺炎克雷伯菌,宜选用亚胺培南0.5 g,q8 h、阿米卡星0.2 g,qd、哌拉西林他巴唑4.5 g,q6 h的给药方案,不推荐使用美罗培南、头孢吡肟。

基于用GFP标记的大肠杆菌构建大鼠可视化细菌性前列腺感染模型

目的采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的大肠杆菌构建大鼠细菌性前列腺炎模型,观察细菌在组织中的侵袭路径和机体免疫反应,并建立感染菌在体直接定量的分析方法。方法于分组大鼠左侧前列腺背叶注入大肠杆菌K88-GFP液(1.49×109cfu.ml-1)0.05 ml,采用腺体表面荧光成像及组织切片荧光显微镜观察,研究荧光菌的感染侵袭过程以及机体的免疫反应,建立可视化细菌性前列腺炎模型。结果①通过表面拍照和病理切片得出细菌在腺体内主要侵袭途径,以及组织的病理变化过程。②测定从感染腺体内提取分离的GFP荧光强度,初步建立直接测定感染菌数量的方法。结论利用GFP标记的细菌可以构建可视化细菌性前列腺炎模型,利用荧光成像技术可以标定感染的程度并进行直接细菌计量,为进一步开展抗菌药PK/PD研究提供新思路。

复方红根草片及其组方对多重耐药菌的抗菌活性及逆转耐药性的研究

目的:复方红根草片及其组方中5种中药材对多重耐药菌的体外抗菌活性及逆转耐药性研究,为中药抗菌治疗提供依据.方法:收集住院病人痰液分离的耐药菌鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌,采用微量肉汤稀释法确定受试菌的MIC值,计算联合用药指数∑FIC以判断逆转耐药性与否.结果:体外抗菌活性试验示复方红根草片对多重耐药鲍曼不动杆菌无抑菌效果,对多重耐药肺炎克雷伯菌有抑菌效果.逆转耐药性试验示复方红根草片与亚胺培南、头孢哌酮舒巴坦及庆大霉素分别联合用药时,有协同作用,其组方中药材分别与亚胺培南、头孢哌酮舒巴坦、庆大霉素、头孢吡肟联用时,对多重耐药肺炎克雷伯菌有不同的协同作用.结论:复方红根草片及其组方5为中药材对多重耐药肺炎克雷伯菌的抗菌活性及逆转耐药性均有一定效果.

在体肠灌流法用于中药有效成分吸收的研究进展

口服给药是最常见且最方便的给药方式，对于口服药物来说，肠道是吸收的主要场所。所以研究药物的吸收情况，其肠道吸收特性为主要研究内容。肠吸收实验方法众多，目前应用较为广泛的主要有4种：药物浓度法、大鼠在体肠灌流法、外翻肠囊法以及Caco-2细胞模型法。由于在体肠灌流法，优点较多，而被广泛的应用。本文对在体灌流法在中药有效成分促吸收方面的研究进展进行了总结。

槲皮素-7-硫酸酯钠体外抗氧化作用

目的探讨槲皮素-7-硫酸酯钠(SQMS)的体外抗氧化活性。方法取小鼠肝组织,匀浆,体外孵育,分光光度法检测不同浓度SQMS(0.10、0.25、0.50 mmol/L)对肝组织中丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响。结果与空白组相比,不同浓度SQMS(0.10、0.25、0.50 mmol/L)均能显著降低肝组织中MDA的含量;中、高浓度SQMS(0.25、0.50 mmol/L)能显著升高肝组织T-AOC;低、中浓度SQMS(0.10、0.25 mmol/L)对肝组织SOD活力有显著升高作用。结论 SQMS具有较强的体外抗脂质过氧化作用及抗氧化能力,其抗氧化可能与提高SOD活力有关。

基于网络药理学研究红根草化学成分的分子机制

目的:基于网络药理学研究红根草化学成分的分子机制,为其药用植物资源的开发利用提供依据。方法:以中药综合数据库为平台,挖掘红根草化学成分、潜在作用靶点和疾病,通过UniProtKB(UniProt数据库)对潜在作用靶点基因名提取后,再用STRING、KOBAS、Cytoscape软件进行蛋白质-蛋白质相互作用,用京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析和功能富集分析。结果:红根草4种化学成分包括原儿茶酸、4-羟基红根草邻醌、二氢丹参酮I和丹参酮I,201个潜在作用靶点,204种疾病,构建红根草-化学成分-潜在作用蛋白-疾病的网路关系图;在红根草-化学成分-潜在作用蛋白-KEGG通路网络关系图中有111种信号通路、109个潜在作用蛋白;而关键作用蛋白基因-KEGG通路网络关系图中有87种信号通路、12个关键作用蛋白基因,其包括CASP3、CCND1、BCL2、CDKN1A和TP53等关键基因,其中涉及的主要信号通路和疾病与肿瘤、金黄色葡萄球菌感染、乙型肝炎等有关。结论:红根草作为中药具有多成分、多靶点、协同作用的特点,但对其化学成分的药理机制研究认识缺乏深入研究。

基于药动学/药效学模型和蒙特卡罗模拟评价肝功能不全患者念珠菌感染时米卡芬净的给药方案

目的基于药动学/药效学(PK/PD)模型和蒙特卡罗模拟优化不同肝功能患者在念珠菌感染时米卡芬净的给药方案。方法根据已发表的米卡芬净PK参数和念珠菌药敏数据,应用蒙特卡罗模拟获取不同肝功能患者的达标概率及累积反应分数。结果对于不同肝功能患者,米卡芬净在给药剂量为100 mg/d时对热带念珠菌效果良好,对光滑念珠菌、克鲁斯念珠菌、近平滑念珠菌效果较差,对白念珠菌效果受患者肝功能的影响较大,在肝功能正常患者中效果较好,当患者存在中度及重度肝功能不全时治疗效果较差。结论对于不同类型的念珠菌以及不同程度肝功能不全患者,应考虑调整米卡芬净的剂量。

蓝芩口服液治疗手足口病效果的Meta分析

目的评价蓝芩口服液治疗手足口病的效果。方法计算机检索Cochrane、Pubmed、EMbase、CNKI、万方数据库,检索时间为从建库至2019年7月。评价质量及提取资料后,采用Stata 12.0软件对数据进行Meta分析。通过漏斗图、Begg法和Egger法对纳入文献进行发表偏倚检测。结果纳入随机对照试验的文献数28篇,共3295例,采用随机效应模型的Meta结果显示实验组和对照组两组总有效率差异有统计学意义[RR=1.15,95%CI(1.10,1.21)];退热时间、口腔溃疡消退时间、皮疹消退时间和住院时间两组比较差异有统计学意义[RR=-1.53,95%CI(-1.94,-1.12);RR=-1.95,95%CI(-2.63,-1.28);RR=-1.84,95%CI(-2.31,-1.37);RR=-1.91,95%CI(-2.65,-1.17)];同时纳入文献有发表偏倚。结论蓝芩口服液治疗手足口病的效果明显,优于对照组。

试论预制装配式混凝土排水沟施工方法

本文针对预制装配式混凝土排水沟施工,介绍了施工特点与原理,明确该建筑形式下排水沟的施工优势;讨论了施工流程与方案,针对各个部位的施工作业制定规范和要求;并从项目施工方法、安全施工方法和环保施工方法三个角度着手,提出加强混凝土排水沟施工质量的建议,希望有利于今后预制装配式建筑施工的深入展开。

基于双层摊铺技术的市政沥青混凝土路面施工

沥青混凝土路面施工是市政交通的重要组成部分,其施工质量关乎着城市交通的安全平稳运行,而传统的沥青混凝土路面施工过程中,常出现结构层碾压不符合标准的状况,对路面很容易造成损害,从而影响市政交通的运行。基于双层摊铺技术,对市政沥青混凝土路面施工进行分析和探究,给市政沥青混凝土路面施工提供一定的参考。

坝后注浆法在小型水库治漏中的应用

坝后注浆法在小型水库治漏中的应用葛根荣，姚银辉（长兴县水利农机局）一、治理方案的提出长兴县有水库２７９座，其中中型水库３座，小（一）型水库６座，小（二）型、小（三型）水库２７０座。这些水库的建成为本县的农业生产和防洪安全起着重大作用。但由于大部分水库...

儿科重症患者丙戊酸钠血药浓度超标的影响因素及血药浓度预测

目的分析儿科重症患者丙戊酸钠血药浓度超标的影响因素及预测血药浓度。方法回顾性收集浙江大学医学院附属儿童医院儿科重症医学数据库(PIC)中重症患儿丙戊酸钠血药浓度的监测数据,检索时限为从2010年1月1日至2018年12月31日,采用logistic回归分析,建立丙戊酸钠血药浓度超标的预测模型。采用极限梯度提升树法预测血药浓度,经Passing-Bablok回归和Bland-Altman散点图法比较预测与实测的数据。结果共收集259例儿科重症患者丙戊酸钠血药浓度数据,非超标组209例,超标组50例。获得4个潜在影响因素(年龄、体质量、白蛋白和白细胞计数),建立预测丙戊酸钠血药浓度超标的列线图模型。曲线下面积、一致性指数、校准曲线、决策曲线分析法和临床影响曲线显示该模型良好。纳入4个影响因素建立预测血药浓度模型,模拟预测的血药浓度具有和实际血药浓度一致的检测效能。结论所建立针对儿童丙戊酸血药浓度超标的列线图模型能够有效预测患者类别,极限梯度提升树法能够有效预测血药浓度,对指导临床个体化给药具有一定意义。

丹皮酚对急性心肌梗死大鼠心室重构及NF-κBp65,IL-1mRNA表达的影响

目的:观察丹皮酚(paeonol,Pae)对大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后心室重构的改善作用及心肌组织核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及白细胞介素-1(IL-1)mRNA表达的影响。方法:Wistar大鼠左冠状动脉前降支结扎建立急性心肌梗死模型,分为模型组和Pae低、中、高(4,6,8 mg·kg-1·d-1,ip 3个剂量组,及卡托普利组10 mg·kg-1·d-1剂量,ig;另设假手术组只穿线不结扎。大鼠连续给药4周后测定血流动力学指标及RT-PCR技术检测NF-κB p65和IL-1mRNA表达水平。结果:与假手术组比较,模型组左心室舒张压(LVEDP)显著升高(P<0.05)。Pae干预结果表明,对心室重构大鼠,能明显升高左心室收缩压(LVSP)、左室压最大上升与下降速率(±dp/dtmax),降低LVEDP,Pae用药组大鼠心功能显著优于模型组;Pae可明显降低大鼠心肌组织中的NF-κB p65和IL-1 mRNA的表达(P<0.05)。结论:Pae一定程度上能够改善大鼠心肌梗死后的心室重构,其机制可能与抑制NF-κB p65和IL-1 mRNA表达及阻断NF-κB通路有关。