野油菜黄单胞菌hpa2基因的突变和功能分析

利用自杀质粒pK18mob诱变野油菜黄单胞菌Xcc8004的hpa2基因,获得整合突变体PK3001。致病性和过敏反应检测发现,hpa2突变体PK3001过敏反应完全丧失,但致病性无明显变化。利用gus报告基因和RT-PCR检测hpa2基因的表达调控,结果表明,hpa2基因在基本培养基上高表达,且受hrpG、hrpX正向调控。

一个可用于鉴定野油菜黄单胞菌正向调控hrpX基因的报告质粒的构建

过敏性反应与致病性基因(hrp)所编码的Ⅲ型分泌系统(T3SS)是植物病原细菌的决定性致病因子。在黄单胞菌属中,HrpG是目前已知的hrp基因表达的最高层面的调节蛋白,至今尚未鉴定到野油菜黄单胞菌调控hrpG表达的基因。本研究利用hrpX启动子和蔗糖敏感型sacB基因构建了hrpX表达报告质粒。实验结果表明该报告质粒可用于筛选鉴定正向调控野油菜黄单胞菌hrpX表达的基因。该报告质粒的构建,为研究hrp基因表达调控机制,揭示植物病原细菌的致病机制提供了有效的材料。

三峡电站排沙孔工作门区及通气管道空化特性研究

针对三峡电站排沙孔工作门区及通气管道设计体型,通过减压模型试验研究了通气孔分流对高流速有压泄水段空化特性的影响。成果表明:在通气孔节制阀全开时,通气孔底部出口区会产生强烈的蒸汽型空化,而节制阀区无蒸汽型空化发生;在通气孔节制阀半开或全关时,上述两部位的空化强度大大降低,基本上无空蚀破坏的危险性。为保证高流速有压泄水建筑物安全可靠的运行,工程上要避免该部位出现分流设计。

酵母耐铜基因CUP1改良荧光假单胞菌耐铜性研究初报

利用根际促生菌(PGPR)荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)等微生物的生物修复作用可治理土壤重金属污染。酿酒酵母耐铜基因CUP1编码铜金属硫蛋白(Cu-MT),对铜有很高的亲和性,可拮抗重金属铜毒性。为提高荧光假单胞菌的生物修复能力,将酿酒酵母耐铜基因CUP1克隆至荧光假单胞菌。通过引物设计,将SD序列添加至酵母耐铜基因CUP1编码序列前端,PCR扩增得到约200bp的CUP1片段,克隆至测序载体pUC19,经测序证明正确后,胶回收CUP1片段连接到具有广泛宿主范围的柯斯质粒pLAFR3上,经三亲接合转移至荧光假单胞菌AS1.1381,得到重组菌株AS1.1381/pL3CUP1。铜实验表明,重组菌株AS1.1381/pL3CUP1的抗铜能力(6mM Cu2+)显著高于AS1.1381/pLAFR3(4.5mMCu2+),重组菌株抗铜性得到提高。

一个用于体外鉴定野油菜黄单胞菌Ⅳ型效应物的报告质粒的构建

许多革兰氏阴性植物病原细菌通过型分泌系统(T3SS),将效应物蛋白分泌并转运进入植物体内,从而引起植物发病或过敏反应。效应物是病原细菌和植物分子互作的关键物质。全基因组筛选鉴定型效应物蛋白并研究其功能,对于解明病原菌的致病机理、寄主范围和进化具有重要意义。利用avrBs1作为报告基因,将其过敏反应诱导结构域(AvrBs159-444)克隆到不含启动子的穿梭质粒pLAFR6上,构建一个用于型效应物转运体外鉴定的报告质粒pLJB,并以已经鉴定为效应物基因的XC-1553的启动子验证该报告质粒,证明pLJB工作正常。该报告质粒为进一步进行全基因组筛选鉴定野油菜黄单胞菌型效应物提供材料。

含有增强型绿色荧光蛋白报告子的载体系统的构建

将增强型绿色荧光蛋白基因编码序列克隆到不含启动子的载体pLAFR6上,构建报告质粒pLZY。将野油菜黄单胞菌的已知效应物基因xopXccN启动子和分泌转运信号区序列克隆到pLZY,重组质粒导入野油菜黄单胞菌,阳性克隆细胞在荧光显微镜下呈现绿色荧光。阳性克隆接种萝卜叶片,在共聚焦激光扫描显微镜下检测观察到在植物细胞内发荧光,而含有pLZY的野油菜黄单胞菌对照菌株菌体和植物细胞内都检测不到绿色荧光,证明报告质粒pLZY工作正常。该报告质粒为研究目的基因在不同宿主中的表达和研究植物病原细菌Ⅲ型效应物蛋白的植物亚细胞定位提供了材料。

银盘水电站引航道水力学设计与试验研究

银盘水电站坝址地形条件十分复杂,通过比较不同的隔流堤长度、枢纽调度方式下的引航道口门区通航水流条件以及船模试验验证,分析探讨了不同泄洪方式及隔流堤长短对下游引航道口门区通航水流的影响。提出了合适的隔流堤长度及枢纽运行方式。模型试验成果表明:在最大通航流量下,短堤方案口门区通航水流条件要好于长堤方案,船模试验也证明,船舶上、下航行指标能满足船队进出口门航行条件的要求。

温州地区民营企业家健康状况与体育锻炼行为

对温州地区87名28—59岁的民营企业家的健康情况、生活方式、体育锻炼行为等进行调查分析。结果表明：温州地区民营企业家健康状况不容乐观，所患疾病前6位的是高血脂、高血压、糖尿病、泌尿系统疾病、脂肪肝和慢性肝炎（人均患病率迭3．13次）。体质测试总体合格率为67．82％，低于全国合格率（71．40％）和浙江省的平均水平（79．70％）。大多数民营企业家生活方式不科学，参加体育锻炼少。建议民营企业家要改正不良生活习惯，重视身体健康及卫生知识方面的教育，积极地参加体育锻炼。

温州市部分学生中考体育态度的调查

采用专访、座谈、问卷、调查 ,对温州市部分初中毕业学生及家长的中考体育的心态 ,认识和意见加以了解和阐明 ,其目的是更好地开展和推动中考体育工作 .

足球运动中单纯性膝关节后十字韧带断裂损伤非手术性康复疗效的跟踪分析

目的:报道1例足球训练比赛中发生单纯性膝关节后十字韧带断裂损伤病例非手术性康复过程和效果。方法:患者2001-08-27在一次足球训练比赛中进行倒地铲球动作时左膝胫骨结节部受到来自前方的撞击,撞击后膝关节变形,经X射线片,MRI检查及临床病理试验诊断为单纯性膝关节后十字韧带断裂损伤。运用负荷逐步增加非手术性5阶段康复方案进行治疗:①第1阶段(伤后1～5d):伤者连续5d使用拐杖和膝关节固定装置,膝关节不负重。在此期间使用冰敷,局部压迫,下肢抬高,休息。②第2阶段(伤后6～19d):交替冷热敷,被动无痛全范围活动,直腿上抬,旁腱牵伸,蹲推练习,股四头肌练习,在不影响愈合的情况下西贝斯奥托托隆KT2(美国产)上进行的力量训练。③第3阶段(伤后20～25d):着重功能活动,活动以半速进行,包括蹲推练习,旁腱牵伸,股四头肌练习,无负荷游泳动作和滑雪动作练习,奥托托隆上进行耐力训练等。④第4阶段(伤后26～29d):继续加强股四头肌和旁腱的训练,增加功能训练。⑤第5阶段:从患者伤后第4周开始,允许患者参加球队训练,但要逐渐增加活动量,专注其体力维持。伤后38,77d进行两次随访西贝斯奥托托隆KT2测试,测试其左右腿股四头肌的应力水平。结果:患者重新参加足球运动训练的时候(伤后38d),他的损伤腿股四头肌力量已经增加到另一侧的102%,第1次测验(伤后11d)损伤膝关节和对侧膝力量的比率为0.51,两周之后比率增加到0.95。患者回队后参加训练比赛,取得了满意的效果,至今没有显著的膝关节症状。结论:用负荷逐步增加的非手术性康复治疗方案治疗单纯性膝关节后十字韧带断裂损伤,膝关节功能恢复满意,没有显著的膝关节症状。

区域经济发展与体育场地设施建设的调研

采用文献资料、网络搜查、实地调查及访谈等方法,对温州区域体育场地现状进行分析与研究。结果表明,温州地区与浙江省各兄弟地区相比较,GDP为全省第3位、而人均公共体育场地面积则排在第7位,位置偏后,温州区域社会经济发展与体育文化设施建设不相称,其主要原因是政府有关部门对体育文化的重视程度不够,应引起重视。

民营企业家体育锻炼与生活方式及健康现状的调查分析

对浙江沿海3城市(温州市、宁波市、台州市)208名(25岁～59岁)民营企业家的身体健康状况、体育锻炼情况与生活方式等进行调查,结果表明:浙江沿海3城市民营企业家身体健康状况不容乐观.体质测试总体合格率为65.86%,低于全国的合格率(71.40%)和浙江省的平均水平(79.70%).大多数民营企业家日常生活方式差,参加体育锻炼的人数少.建议民营企业家要养成良好的生活习惯,重视卫生保健知识的自我教育,积极参加体育锻炼.

浙江省沿海城乡中学生体育消费意向及影响因素的研究

运用社会学调查方法,对浙江省沿海5城市城乡的1 981名中学生的体育消费意向与影响因素的调查进行了逻辑与实证分析,发现浙江沿海5市城乡中学生的体育消费存在着一定差距,且消费欠合理性。课题的研究为改善浙江沿海5市城乡中学生的体育消费与生活方式及影响因素提供科学依据。

温州地区民办高中学校体育现状的分析与研究

采用问卷调查法和访谈法,对温州地区民办高中学校的师资来源、师资水平、教师职称、工资收入、体育经费 投入、场馆设施、体育教学等方面进行分析与研究。结果表明:温州地区民办高中学校师资来源多样,教师专业技 术水平全面,教师工资收入较高,教师职称、教师科研水平偏低,体育场馆设施状况不均衡。

浙南沿海地区民营企业家健康及体育行为的调研

通过对浙江南部沿海地区218名民营企业家的问卷调查和跟踪访谈,对民营企业家的健康体检、体育健身活动项目、活动场所、活动时间、活动形式、活动程度、健身活动动机及健身活动的要求、体育消费等结果做系统性的分析,寻找出民营企业家这一人群身体健康与健身活动存在的问题,并提出有益性的建议。

三峡导流底孔超标准运用下空化特性试验

三峡水利枢纽泄洪坝段共设22个导流底孔,采用长有压管与明流段出口相结合的形式。经模型试验表明,在库水位140～165 m范围,底孔有压段存在初生态空化,明流段存在初生阶段及其以下强度的空化。根据类似工程经验,这些部位不会发生空蚀破坏,抬高水头运用不会危及建筑物安全。但考虑到三峡工程的重要性,可在运用前对相应底孔挑流鼻坎作局部抗蚀处理。

民营企业家参与健身俱乐部活动的调查分析与研究

企业家的健康问题已成为我国各理论界的热门话题,而民营经济模式下的民营企业家的体育开展方面的研究尚处在起步阶段,因而探讨典型的民营经济模式下的民企业家们的参与体育健身俱乐部活动的调查极具意义[1]。本文通过调查问卷、访谈对民营企业家参与体育健康俱乐部的调查分析,结果显示:民营企业家对新兴产业体育健康俱乐部的认识程度较高,达90%以上;喜欢运动设施专业性不强,服务项目一应俱全的休闲式体育健身俱乐部、运动型综合性俱乐部和星级酒店VIP健身房场所;理由是条件要好和方便的场所,参与体育健身俱乐部的每周次数低于全国体育人口。

运用等维灰数递补模型对亚洲、中国自由泳实现跟踪战略的预测研究

运用等维灰数递补模型方法 ,建立了亚洲、中国自由泳运动成绩的发展模型 ,运用该模型对亚洲。

大型超高水头船闸输水系统型式研究与展望

高水头船闸输水水流携带巨大能量,可能对船闸输水系统运行安全及闸室内船舶停泊安全产生危害,选择合理的输水系统型式对保障工程安全至关重要。随着大型超高水头单级船闸——大藤峡船闸的开工建设,研究发现目前已成功运行的输水系统型式不能满足该工程需要,亟需消能效果更好的输水系统。结合大藤峡船闸工程相关研究,参考国内外已建高水头船闸输水系统布置的成功经验,总结了高水头船闸不同输水系统型式与船闸运行水头和闸室尺度规模的匹配关系,介绍了适应大藤峡船闸工程特点的自分流全闸室出水4区段等惯性输水系统型式,提出了消能效果更好的带内消能工的输水系统新体型,可供类似超高水头大型船闸的设计和研究借鉴。

野油菜黄单胞菌8004菌株hrp基因簇侧翼序列大片段缺失突变体的构建及表型分析

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(X anthom onas camp estris pv.camp estris,简称X cc),是一类能在全球范围引起十字花科植物黑腐病的γ-变形菌纲细菌。该菌有一个长41.7 kb的H rp致病岛,包含41个开放阅读框(ORF)。H rp致病岛5′端边界为IS1479插入元件,3′端边界为IS1595插入元件。G+C含量为62.3%,明显低于全基因组64.9%的G+C含量。根据基因类型,将该致病岛分为三个区段:位于致病岛中心区的hrp基因簇、及其左侧翼的假定基因区段(HGR)和右侧翼的降解酶类基因区段(EGR)。HGR长7.4 kb,注释蛋白编码基因6个,全部为功能未知的假定基因。EGR长9.3 kb,注释蛋白编码基因8个,其中6个为降解酶类基因。为了鉴定hrp基因簇侧翼序列的功能,采用标记置换的突变方法,将X cc 8004的hrp基因簇右侧翼EGR片段缺失。该突变体8004ΔR对寄主植物的致病力比野生型菌株显著降低,而在非寄主植物辣椒ECW-10R上仍能引起过敏反应。该突变体其它的致病相关生化因子,如胞外多糖产量和胞外酶的活力均未受明显影响。实验结果表明EGR区段的缺失不影响三型分泌系统的正常功能,也不影响该菌在基本培养基上的生长,但使X cc的致病力明显降低,提示X cc 8004菌株hrp基因簇右侧翼序列中存在与致病相关的基因。