重组葡萄球菌B型肠毒素超抗原的制备及抗肿瘤活性分析

目的 采用基因工程技术制备葡萄球菌B型肠毒素 (SEB) ,并对其体内外抗肿瘤活性进行分析。方法 对SEB在大肠杆菌中进行高效表达和分离纯化 ,并对其超抗原活性和免疫学活性与天然SEB进行比较研究。观察重组SEB对人肝癌细胞的体外抑制作用 ,以及对小鼠肝癌和肉瘤的体内抑瘤效果。结果 SEB获得高效表达 ,并一步将其纯化至均质。与天然毒素相比较 ,重组SEB的免疫学活性与超抗原活性基本相似。首次证明 ,即使SEB的浓度为 10ng/L ,仍然对人肝癌细胞有显著地抑制作用 ,其对小鼠体内的肝癌和肉瘤有一定的抑制作用。结论 重组SEB在体内外均有一定肿瘤抑制作用 。

葡萄球菌中毒性休克毒素的分离纯化及其体外抗肝癌活性分析

采用固体膜进行TSST 1的产毒培养,然后从金葡菌产毒产物中经CM纤维素离子交换层析、SephadexG 75、SephacrylS 200三步纯化,成功地获得了纯度为95.3%的毒素,SDS PAGE呈现单一条带,与其对应抗血清有免疫学特异反应,不含核酸、糖和其它肠毒素等物质.与同类方法相比,该方法步骤少、快速、简便.对其体外抗肝癌活性进行了分析,首次证明即使TSST 1的浓度为10-8g L仍然对人肝癌细胞有显著抑制作用.

经颞骨岩部乙状窦前入路相关定位标志的应用解剖

岩斜区由蝶骨、颞骨和枕骨组成，该部位特殊，位置深在，周围毗邻椎基底动脉、脑干、海绵窦、Ⅲ～Ⅻ对颅神经、颈静脉孔等重要结构，是颅内肿瘤的好发部位。随着显微神经外科技术和神经放射学的发展，该区手术得以逐渐开展。经过多年有益的探索和改进，认为经颞骨岩部乙状窦前入路（TPA）是比较成功和相对成熟的手术入路。

乙状窦后入路桥小脑角神经血管显微解剖研究

目的模拟乙状窦后入路的手术操作,观察桥小脑角与听神经瘤相关血管的走行,为手术提供相关依据。方法对16例(32侧)的完整成人尸头通过显微镜模拟手术入路、逐层解剖,观察小脑前下动脉(AICA)及小脑后下动脉(PICA)。结果 32侧均有AICA及PICA。30支AICA起源于基底动脉(BA),占93.75%。25支PICA起自椎动脉上端平橄榄中下1/3平面,占78.75%。结论小脑桥脑角区神经血管差异较大,熟悉其解剖结构,对手术中提高面神经、位听神经的功能保存,降低死亡率有重要意义。

葡萄球菌A型肠毒素的高效表达和分离纯化

根据已知葡萄球菌A型肠毒素 (SEA)的基因序列 ,用PCR从产毒标准株S .aureusFRI 10 0中扩增得到约70 0的SEA基因片段 ,并将该片段克隆至表达载体 pBV2 2 0中 ,实现了高效表达。表达产物以可溶性形式存在 ,表达的毒素用CM SephroseFF离子交换层析进行纯化 ,获得了高纯度的重组SEA ,SDS PAGE显示单一条带。ELISA试验证明所获重组SEA具有与天然SEA相似的免疫学性质。

葡萄球菌B型肠毒素突变体的分子设计、高效表达与活性初步研究

葡萄球菌B型肠毒素(SEB)是重要的超抗原,依据SEB分子的晶体结构并结合表面分析,模拟设计了与MHCⅡ类分子和TCRVβ区亲合力降低的三位点突变体mSEB(Y89A,C93S,Y94A)。通过PCR重叠延伸法获得突变体基因,导入PBV220载体中,于E.coliDH5α中获得高效表达,纯化的突变毒素T细胞激活活性仅为野生型毒素的1/5左右。

超抗原与肿瘤生物治疗

超抗原是潜在、高效的 T细胞激活剂,与常规抗原相比具极高的 T细胞激活频率。国外已将超抗原用于抗肿瘤免疫治疗,并初见成效。本文就超抗原家族及其抗癌机制、抗肿瘤应用现状、存在问题和发展前景作一简介。

产单核细胞李氏菌毒力因子的分子遗传学研究进展

产单核细胞李氏菌(LM)是重要的食品卫生污染菌,其毒力由多基因决定。本文就其已发现的产毒基因位点、基因克隆、重组和表达、毒力基因的调控以及基因产物的功能作一简介。

神经外科术后并发脑室炎的诊断及治疗

目的:探讨神经外科手术后并发脑室炎的易发因素、诊断及治疗措施。方法:回顾性分析神经外科手术后脑室炎20例临床资料。结果:本组病例明确诊断后,经全身用药加用双侧脑室置管抗生素脑室内灌洗持续引流治疗,治愈13例,死亡6例,放弃者1例。结论:严格无菌操作是减少手术后脑室感染的基础,及时明确诊断、全身大剂量合理使用抗生素是治疗的关键,脑室抗生素双管持续引流是治疗的有效措施。

葡萄球菌中毒性休克毒素的分离纯化与性质分析

葡萄球菌中毒性休克毒素（ＴＳＳＴ－１）是引起毒性休克症（ＴＳＳ）的主要病原，同时又是超抗原家族的重要成员之一，对于肿瘤的免疫治疗有着潜在的药用价值。获得纯度高、活性好ＴＳＳＴ－１是开展该项研究工作的关键。产毒培养后经ＣＭ离子纤维素层析、ＳｅｐｈｄｅｘＧ－７５和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶过滤简便有效的三步程序，成功地获得了高纯度的中毒性休克毒素。对其理化和免疫学性质分析的实验证明，纯化毒素纯度大于９５％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈现单一条带，与其对应型抗血清有免疫学特异反应，不含核酸、糖和其它各型肠毒素等物质。提纯毒素对其致病机理和体内外免疫学调节作用的研究有重要意义。

超抗原与超抗原疫苗

超抗原多为某些细菌和逆转录病毒的抗原性代谢产物，对机体的免疫系统有着重要的影响，与人类许多疾病有着极其密切的关系。据超抗原的作用机制，国外最近提出超抗原疫苗的思路，用于防治超抗原引起和介导的疾病，并呈现出较好的苗头。

大型垂体腺瘤手术治疗的临床分析

垂体腺瘤是一种常见的颅内肿瘤,同时也是一种内分泌常见病,约占颅内肿瘤总数的10%,仅次于胶质细胞瘤和脑膜瘤[1].Hardy根据影像学检查结果将垂体腺瘤分为微腺瘤(<10mm),大型腺瘤(11～40mm),巨大型腺瘤(>40mm).手术治疗是首选方法.由于垂体腺瘤位于颅底中央区,下邻蝶窦,位置深,故手术入路较多[2].现将山西医科大学第一附属医院及包头市中心医院2003年1月至2004年1月期间收治的大型垂体腺瘤40例的手术方法及疗效作临床分析.

乙状窦后入路小脑桥脑角相关血管的显微解剖

目的:通过显微镜下模拟乙状窦后入路的手术操作,研究CPA的解剖结构及其内结构间的关系,观察CPA区血管走行及测量手术相关数据,为手术提供显微解剖学基础。方法:应用10%甲醛充分固定的成人尸头标本16例(32侧)。模拟手术入路,逐层解剖,对小脑桥脑角涉及的小脑前下动脉及其分支、小脑后下动脉的起源和走行方向进行观察和测量。结果:(1)CPA包括三个脑池:桥脑前池、小脑桥脑池,小脑延髓池。(2)血管结构:小脑前下动脉绝大多数发自基底动脉,共30例(93.75%)。内听动脉多起始于小脑前下动脉(共23例占72.5%)。小脑后下动脉(PICA)多数由椎动脉上端发出共25例(78.75%),行于Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ神经根上方或中间。结论:小脑桥脑角区血管差异较大,上述的解剖结果为外科手术提供了显微解剖学基础,对于术中面神经,位听神经定位,降低手术死亡率,提高面神经,位听神经的解剖及功能保存率有重要的意义。

乙状窦后入路小脑桥脑角相关神经的显微解剖

目的:熟悉小脑桥脑角区的神经显微解剖,提高肿瘤的全切率,避免手术并发症方法:16例(32 侧)成人尸头标本,通过模拟乙状窦后入路在显微镜下解剖。结果:①小脑桥脑角区由三个脑池组成;②小脑桥脑角区内有面神经、蜗神经,前庭上、下神经和中间神经经过,三叉神经位于上述神经的头端,后组颅神经位于尾端,外展神经位于内侧。结论:通过乙状窦后入路解剖小脑桥脑角区的神经结构有重要意义。各神经结构的测量值对临床手术有极其重要的指导价值。

肝素结合蛋白的特性及在临床诊断中的应用

感染性疾病是一类对健康威胁比较严重的疾病,脓毒症和一些严重的感染性疾病已然成为导致发病和死亡的主要原因。测定感染严重程度的指标很多,最常用的指标有:降钙素原、C-反应蛋白、白细胞计数、中性粒细胞比、血沉、体温等,但上述指标都不同程度的存在滞后、敏感度低及特异性不高的缺陷。在感染性疾病的预防和治疗中,如何及早地采取合理的应对措施是成功的关键。因此,目前看来不管是在临床还是实验室研究,都需要一种可以在病人感染早期就能进行鉴定的方法。近几年来HBP被证实可以作为这样一种早期诊断标志。本文简述了肝素结合蛋白(HBP)作为一种感染早期指标的应用。

富勒烯C_(60)掺杂的共轭高聚物混合薄膜的光谱性质

测量了不同富勒烯C60 掺杂浓度的聚对亚苯基亚乙烯衍生物 (MEH PPV)混合薄膜的紫外 可见吸收光谱、稳态荧光和时间分辨荧光光谱。观察到MEH PPV吸收峰受到明显的抑制以及荧光峰的猝灭。证明混合薄膜内 ,由于π π共轭体系的强相互作用在基态发生MEH PPV向C60 的电子转移 ,形成电荷转移络合物。在光激发下会发生MEH PPV向C60 的激发传递进一步抑制了发光跃迁过程 ,导致了MEH

二硫键稳定单链抗体融合PE38免疫毒素的构建及活性分析

目的构建二硫键稳定单链抗体(B3dsscFv)融合PE38原核表达载体,实现其高效表达,并对初步纯化后的复性产物的稳定性、对肿瘤细胞的结合和杀伤活性进行测定。方法重叠PCR连接B3抗体的VH和VL片段,并将PCR产物克隆至pET22b表达载体(B3dsscFv-pET22b)。测序正确的PE38基因片段经酶切连接至B3dsscFv-pET22b,构建B3dsscFv-PE38-pET22b表达载体。IPTG诱导转化菌,将表达的包涵体进行变性、复性后用阳离子柱Q-Sepharose进行了初步纯化,ELISA测定此融合蛋白中单链抗体的结合活性及其在37℃的稳定性,并采用MTT法检测其对B3抗原表面阳性细胞HT-29的杀伤作用。结果双酶切鉴定表明成功地构建了B3dsscFv-PE38-pET表达载体,表达产物以包涵体形式存在,占总蛋白量的45%左右。复性后的B3dsscFv-PE38保持单链抗体的结合活性,并且对结肠癌HT-29细胞具有一定的杀伤作用,最大杀伤率可达96%。该蛋白在37℃孵育16h后,仍能保持大部分活性。结论所获B3dsscFv-PE38免疫毒素具备导向和杀伤肿瘤细胞的双重功能和良好的稳定性,为其研制有效的肿瘤免疫治疗靶向药物提供一定的基础。

四川省资阳市爆发的猪链球菌感染疫情中病原菌的分离和鉴定

对四川资阳地区病猪标本、尸检肝标本和血清标本进行病原菌分离,得到10株分离菌。经菌落形态和菌体形态观察、生化鉴定,证明其中3株为猪链球菌2型(SS2)。通过对3株SS2胞外因子基因、溶菌酶释放蛋白基因、荚膜多糖基因和16S rRNA基因进行PCR扩增,结果分别在626bp8、85bp4、87bp和297bp处出现目的条带。为进一步了解分离的SS2菌株的特性,使用VITEK GPS-107药敏卡进行药敏试验,结果表明分离菌对青霉素-G、红霉素、万古霉素等多种抗生素敏感。分离菌感染Balb/c小鼠可引起动物死亡,并出现胃肠肿胀、嘴部青紫以及皮下紫斑等症状,与患者症状相似,小鼠脏器压片经革兰氏染色镜下观察可见阳性球菌。

用PCR与ELISA、RPLA对照检测乳腺炎金黄色葡萄球菌肠毒素和毒素休克综合征毒素-1

用PCR方法对14个奶牛场分离得到的临床型乳腺炎金黄色葡萄球菌(金葡菌)124株,隐性乳腺炎金葡菌213株,山羊临床型乳腺炎金葡菌12株进行超抗原毒素sea,seb,sec,sed.see和tst基因的分子调查,结果表明:奶牛标本肠毒素基因和tst基因的阳性率为27.42%,隐性乳腺炎为1.41%,山羊标本为33.3%。奶牛标本产生毒素的类型以SEA,TSST-1和SEC为主,山羊标本产生肠毒素的类型以SEC为主。对于肠毒素基因和tst基因PCR阳性的金葡菌同时用ELISA和RPLA检测,3种方法检测结果基本一致。

巯基自组装的压电DNA传感器技术研究

采用先将寡核苷酸分子标记上巯基基团 ,通过自组装技术将巯基修饰的寡核苷酸固定于金电极上 ,研制成的压电 DNA传感器一致性、特异性都较好 ,每次检测杂交后 ,经过电极的再生 ,传感器可以重复使用 3次 .用该传感器检测和传统的斑点杂交方法相比较 ,具有快速、灵敏、简便等优越性 .