一种新型荧光纳米材料的化学合成与临床效果分析

针对用于血清中尿酸含量检测的荧光纳米材料存在成本高和毒性大的问题,提出一种新型荧光纳米材料的制备。探讨了该荧光纳米材料用于血清中尿酸检测的可行性,对尿酸检测条件进行优化,并对荧光纳米材料检测尿酸的准确度和实际应用效果进行研究。结果表明:在反应温度为15℃、pH值为7.0的醋酸-醋酸钠缓冲液中反应2 min,尿酸对荧光纳米材料荧光强度猝灭率超过90%,其余金属阳离子和小分子对荧光纳米材料的猝灭率均小于5%。在浓度0.1~50μmol/L时,尿酸浓度与荧光纳米材料荧光强度猝灭率相关系数(R^(2))为0.99,检测限(LOD)为28nmol/L;与其他同类检测方法进行对比,荧光纳米材料检测尿酸的检测限较低,表现出较好的选择性和检测性能。用于实际血清样品分析,加标浓度为5、10和30μmol/L时,样品平均加标回收率为98.2%~101.1%,相对标准偏差(RSD)均未超过3%,表现出良好加标回收效果。

制药工程专业课程体系探讨

制药工程师化学、药学和工程学相互交叉的工科专业,以培养从事药品制药工程技术人才为教学目标。文章对制药工程专业课程体系的设置进行了探讨。提出进一步改进制药工程本科专业课程设置的设想。

原位杂交检测HPV-16E6,-18E6在喉癌组织中的表达

目的检测HPV L1和16/18DNA在喉癌组织中的表达,探讨HPV在喉癌发生中的作用。方法用原位杂交(ISH)检测123例喉癌组织及123例"正常人"的喉粘膜上皮组织中HPV-16/18 mRNA。结果在123例喉癌标本中,ISH检出HPV-16E6的阳性率为46.34%,HPV-18E6的阳性率为35.77%。123例"正常人"的喉粘膜ISH结果表明:低危型HPV的阳性率与喉癌相近;高危型HPV的阳性率虽远远低于喉癌,但随着组织病变程度加重阳性率逐渐升高。对上述结果用SPSS 10.0软件进行case-controlχ2分析,HPV-16感染会增加喉上皮病变的风险(OR=14.58),感染HPV-18时,喉上皮病变的风险(OR=10.77)。结论HPV-16感染是重庆地区喉癌的重要发病因素;HPV-16感染后E6片段的保留并持续表达与喉组织的癌变进程密切相关;HPV-16感染会增强喉上皮病变的风险,而HPV-18有协同作用。

HPV16E7基因的原核克隆及表达

目的:探讨从喉癌组织中HPV16E7蛋白的原核克隆及表达。方法:采用PCR方法扩增HPV16E7基因,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后插入相同酶切pET28a(+)载体,转化JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选。经IPTG对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测目标蛋白表达情况。结果:成功构建了原核表达质粒pET28/E7、HPV16E7融合蛋白在BL21(DE3)菌株中高效表达。结论:HPV16E7融合蛋白的表达为进一步深入研究HPV16E7蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用机制奠定了基础。

抗3-硝基酪氨酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析

目的制备抗3-硝基酪氨酸(3-NT)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性。方法用化学合成方法将3-NT与OVA用戊二醛偶联合成的人工抗原3硝基酪氨酸-戊二醛-鸡卵白蛋白(3NT-G-OVA)作为免疫原,皮下注射免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,扩大培养并对抗体进行免疫学鉴定与分析。结果获得1株稳定分泌抗3-硝基酪氨酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗亚型为Ig G2a;纯化后的抗体效价为1∶(6.14×106);单抗亲和力常数为7.81×107(L·mol-1);Western blot检测证明该单抗与含有3-硝基酪氨酸的蛋白能特异地结合。结论制备了1株具有较高免疫学活性和特异性的抗3-NT单克隆抗体,并可用于Western blot检测病人样本中的蛋白硝基化水平。

感冒康注射液的制备及其质量控制

采用超滤法制备感冒康注射液,通过对质量进行控制来探究超滤法制备注射液的可行性,并对其制剂的澄明度、有效成分含量测定、pH值、杂质检查、无菌检查、安全试验进行检查.结果表明,所有试验均符合中国药典(2005年版)规定,所建立的超滤法可用于感冒康注射液的制备,且方法简便、快速.

阿司匹林栓剂制备工艺

用热熔法制备阿司匹林栓剂,并通过改变制备过程中冷凝方式、灌模温度等条件对该制剂稳定性进行考察.结果显示冷凝方式、灌模温度等条件对栓剂成形有直接影响,该制备工艺是合理、可行的.

HPV18E6基因的原核克隆及表达

目的:构建pET32a(+)HPV18E6原核表达质粒并优化其表达条件,探讨喉癌组织中HPV18E6蛋白的表达及意义。方法:应用基因重组技术,构建pET32a(+)与HPV18E6的原核表达重组质粒,采用PCR方法扩增HPV18E6基因,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后插入相同酶切pET32a(+)载体,转化JM109感受态细胞并进行阳性克隆筛选,用限制性内切酶酶切和核酸序列检测方法鉴定重组质粒DNA,将其转入宿主菌E.coli BL21(DE3),用IPTG对重组质粒进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blot方法鉴定表达蛋白的分子质量及特异性。结果:成功构建了原核表达质粒Pet32/HPV18E6,限制性内切酶酶切和核酸序列检测证实重组质粒中插入的是目的基因,其DNA大小、方向、插入位点和阅读框架均正确;HPV18E6蛋白得到高效原核表达,表达HPV18E6的工程菌BL21(DE3)的最佳诱导温度是37℃,诱导剂IPTG的浓度为1mmol/L。结论:HPV18E6融合蛋白的表达为进一步深入研究HPV18E6蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用机制奠定了基础。

人乳头瘤病毒与喉癌关系的研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)感染作为喉癌高危因素一直受到关注和重视。该文对HPV的性质、结构和功能及与肿瘤的关系进行了介绍,并着重对喉癌与HPV的关系作一综述。

用于人患布鲁菌病PCR诊断方法的研究进展

布鲁菌病是由胞内寄生菌布鲁杆菌侵染人体后产生的一种传染一变态反应性疾病。家畜是首要宿主，并可通过生殖黏膜，呼吸、消化道黏膜，蚊虫叮咬等传播。家畜患布鲁菌病后会有不孕不育、流产、胎盘滞留、产奶量下降等临床症状。而当人摄入布鲁菌污染的鲜奶，处理患畜生鲜肉，为患畜接生，处理流产胎仔时，被感染的风险会很大。

不同麻醉方式应用于腹腔镜手术治疗老年直肠癌患者的效果研究

目的比较不同麻醉方式应用于腹腔镜手术治疗老年直肠癌患者的效果,观察其不良反应和并发症的发生率。方法将108例老年直肠癌腹腔镜手术患者随机分为全身麻醉组、硬膜外麻醉组、全身麻醉加硬膜外麻醉组,对3组患者手术过程中气腹后10min和气腹后60min的舒张压、收缩压、心率数据进行收集,对术后发生恶性、呕吐、肌肉松弛、躁动的不良反应进行记录。结果气腹后10min及60min,全身麻醉组、硬膜外麻醉组患者的收缩压和舒张压明显高于麻醉前(P<0.05)。3组之间进行比较,气腹后10min及60min,全身麻醉组和硬膜外麻醉组患者的血压高于全身麻醉加硬膜外麻醉组(P<0.05),硬膜外麻醉组肌肉松弛和躁动的术中并发症发生率高于全身麻醉组和全身麻醉加硬膜外麻醉组,全身麻醉组恶心、呕吐的术后不良反应发生率高于硬膜外麻醉组和全身麻醉加硬膜外麻醉组。结论全身麻醉复合硬膜外阻滞麻醉可以说是一种安全而且科学可行的麻醉方式,在老年直肠癌患者的腹腔镜手术中可以应用此麻醉方法。

吡虫啉的酶联免疫吸附分析方法研究

通过碳二亚胺法将吡虫啉交联于牛血清蛋白(BSA)作为免疫抗原,混合酸酐法将吡虫啉交联于卵清蛋白(OVA)作为包被抗原,免疫Balb/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、筛选、克隆,得到抗吡虫啉单克隆抗体,抗体亚类为IgG1,制备的单克隆抗体效价达1×107,确定了吡虫啉酶联免疫吸附分析方法(ELISA)的最佳工作条件,建立了定量测定吡虫啉的间接竞争ELISA方法。本方法的IC50为(15.12±1.28)μg/L,检出限为(1.76±0.02)μg/L。与其它吡虫啉结构类似物无交叉反应。批内相对标准偏差为4.5%;批间相对标准偏差5.1%,饮用水、重庆理工大学地下水和重庆市花溪河地表水平均添加回收率分别为102%,97%和85%。本研究建立了一种快速检测环境水中吡虫啉残留的方法。

一种新型优化的肺组织羟脯氨酸水平测定方法的建立

目的建立大鼠肺组织羟脯氨酸（HYP）水平测定方法，以评价大鼠肺组织纤维化程度。方法比较不同酸水解时间、氧化时间、显色时间等对大鼠肺组织HYP水平测定结果的影响，据此建立大鼠肺组织HYP水平测定方法，并初步应用于博莱霉素诱导大鼠肺纤维化HYP水平的测定。结果通过优化得出HYP水平测定最佳条件为110℃7．50mol盐酸（HCL）水解16h，常温氧化10min，60℃显色25min。本方法灵敏度为0．067／μg／mL，回收率为88．85％～110．88％，平均CV为4．70％～6．60％。该法应用于博莱霉素诱导大鼠肺纤维化研究中，模型组HYP水平明显高于对照组。结论该法灵敏度与回收率均较高、重现性较好，可用作临床对肺纤维化程度判定的定量方法。

生物技术制药的教学实践

生物制药技术是一门新兴交叉应用学科,要求学生应该具备坚实宽厚的理论基础和解决生产实际问题的能力。文章对生物技术制药课程在教学内容和教学方法上的改进进行了总结;不断更新教学内容,让学生经常接触到学科的前沿知识和融会相关学科内容;充分利用现代化信息技术和教学工具,开展合作研讨性教学活动。

生物制药工艺学教学改革探讨

生物制药工艺学是制药工程(生物制药方向)专业的主干必修课程。文章对生物技术制药工艺学在教学内容和教学方法上进行了改革;不断更新教学内容,让学生经常接触到学科的前沿知识和融会相关学科内容;开展启发式教学,引导学生进行科学思维,充分利用现代化信息技术和教学工具,开展合作研讨性教学活动,结合最新科研成果,运用实例引导学生进行创新药物开发。

HPV 16L1基因的原核表达及表达条件的优化

目的:构建HPV16L1基因的原核表达质粒,并优化其表达条件。方法:根据GeneBank中的HPV序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有HPV全长基因片段重组质粒为模板,经PCR扩增出1 500 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆。其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-HPV16L1已构建成功。提取pGEX-KG-HPV16L1质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体,进行SDS-PAGE,Western Blot鉴定。结果:在大肠杆菌中获得HPV16L1基因融合表达,融合蛋白的相对分子量为83kDa;表达的蛋白能与抗HPV16L1抗体发生特异性反应。结论:HPV16L1基因在大肠杆菌中获得高效表达,为HPV16L1疫苗的研制奠定了基础。

发光细菌冷冻干燥条件优化研究与应用

发光细菌用于水质毒性快速检测时,使用冷冻干燥制剂复苏发光细菌非常必要。配制冷冻干燥保护剂时,采用较低浓度脱脂牛奶(质量分数分别为4%、6%、8%、10%、12%)以及NaCl溶液(质量分数分别为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%)进行双因素多梯度的实验,确定发光细菌的最佳冷冻干燥保护剂配方为12%脱脂牛奶以及2.0%NaCl溶液。采用复苏后的发光细菌,检测实际水样的毒性,结果与工业废水毒性评价结果相符。

基于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立

目的本文建立一种基于样品检测的特异性好、灵敏性高的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法。方法以哺乳动物beta-actin基因和外源重组质粒为内参,针对布鲁氏菌属特异性基因IS711,建立用于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及稳定性,绘制标准曲线。将该方法用于哺乳动物样品检测,并与细菌分离培养检测结果比较。结果荧光定量PCR方法对布鲁氏菌检测有良好的特异性,3对引物对阴性对照菌均无非特异性扩增;该方法用于样品检测的最低检测限为17拷贝;内外源内参同时存在条件下,布鲁氏菌荧光定量PCR的标准曲线相关系数为R2=0.997(Y=-3.12X+40.9)。将该方法直接用于181份动物样本的检测,并与分离培养结果相比,荧光定量PCR检测阳性率为11.4%,细菌分离培养检测阳性率为9.9%,且细菌分离培养阳性样品与荧光定量PCR阳性样品中编号基本一致。结论本文建立的荧光定量PCR检测方法灵敏性高、特异性及稳定性好,可直接应用于样品的检测,检测结果受内参基因质控。

重庆市老年人口腔健康现状及影响因素分析

目的 了解重庆市老年人口腔健康现状及其影响因素,分析口腔健康现状对老年人生活的影响.方法 抽取重庆市部分区（县）432名65～74岁的老年人,应用老年口腔健康评价指数、口腔健康调查表和自制的口腔健康行为调查表进行调查.结果 收回有效问卷共428份,根龋209例,牙龈出血297例,牙周袋大于或等于4 mm共178例,人均存留牙数（20.69士3.02）颗.良好行为组和不良行为组根龋、牙龈出血和牙周袋大于或等于4 mm的发病率和人均存留牙数差异均有统计学意义（P＜0.05）.有根龋的老年人的生理功能和疼痛与不适评分明显下降,与未患根龋的老年人比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;牙周袋大于或等于4 mm的老年人的生理功能、心理社会功能和疼痛与不适评分明显下降,与无牙周袋或牙周袋小于4 mm的老年人比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 良好的口腔健康行为可保障老年人的口腔健康,应促进老年人的良好口腔健康行为的形成.

喉癌中HPV不同亚型的检测及测序

目的:检测人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)各型DNA在喉癌组织中的表达,探讨HPV在喉癌发生中的作用。方法:用PCR检测123例喉癌组织及123例喉粘膜上皮组织中HPV各型DNA。同时进行DNA测序,结果:在123例喉癌标本中,HPV-L1,-16E6/E7,-18E6/E7阳性率都明显高于其他各型。123例喉粘膜PCR结果表明:低危型HPV的阳性率与喉癌相近;高危型HPV的阳性率虽远远低于喉癌,但随着组织病变程度加重阳性率逐渐升高;HPV-L1的阳性率高于HPV-16E6、E7,随着组织病变程度加重,HPV-L1的检出率逐渐增高。结论:HPV-16感染会增强喉上皮病变的风险,而HPV-18有协同作用;L1片段适合用于检测HPV感染。