小鼠乳鼠心肌细胞的原代培养

目的：观察原代培养的小鼠乳鼠心肌细胞的形态特征。方法：Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶消化心脏组织，差速贴壁分离法。结果：12h心肌细胞基本贴壁，第2天可长成单层，第3～4天细胞伸出伪足相互接触交织成网，逐渐形成细胞簇或细胞单层，搏动呈同步性，收缩明显有力，搏动频率为30～120次／min。结论：用Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶分离培养小鼠乳鼠心肌细胞可获得形态、活力良好的心肌细胞。

动作电位记录技术的历史与多电极阵列记录技术及临床应用

动作电位(AP)记录技术经过了一个不断发展和完善的过程:单电极记录AP可获得细胞外单相AP(MAP)且易受远电极部位电活动的干预;双电极记录技术能确切记录MAP,但无法记录细胞群的AP;多电极阵列是一种60个位点非侵入性同步记录组织AP的方法,可用于记录神经、视网膜及心肌等组织细胞群的AP。

心电图ST段下移形态学与冠状动脉造影对比研究

目的：探讨心电图ST段下移形态学改变与冠状动脉病变的关系。方法：对新疆医科大学第一附属医院2006年6月～2007年7月行冠状动脉造影的363例患者心电图及冠状动脉造影临床资料进行回顾性分析。男性266例（73．3％），女性97例（26．7％），平均年龄（57．3±10．98）岁，汉族263例（72．5％），维吾尔族76例（20．9％），其它少数民族24例（6．6％）。冠心病组235例，对照组128例。结果：冠状动脉狭窄单支病变者100例，双支病变56例，多支病变79例。冠心病组心电图ST段下移与对照组比较差异有统计学意义，用ST段下移预测冠状动脉狭窄的敏感度为63．0％，特异度为67．2％，假阳性率为32．8％，假阴性率为37．0％；冠脉狭窄单支病变与双支病变、多支病变心电图ST段下移分布结果差异有统计学意义，单支病变组ST段预测冠脉狭窄敏感度为73．0％，双支病变为55．4％，多支病变为55．7％。心电图ST段形态学下移型组内上斜型、下斜型、水平型与ST段正常组比较，差异均有统计学意义。汉族和维吾尔族冠心病组ST段下移型预测冠状动脉狭窄差异无统计学意义。结论：心电图ST段下移形态学改变提示冠状动脉狭窄的存在，该标准对单支病变预测的敏感度较高。ST段下移形态3种分型预测冠状动脉狭窄效果相同。ST段下移形态学标准预测冠状动脉狭窄价值在汉族和维吾尔族中一致。

微电极阵芯片技术在心肌电生理研究中应用的可行性

目的探讨60极微电极阵芯片(MEA)技术在整体心脏、心肌组织片和培养心肌等电生理研究中的应用。方法①80只豚鼠,开胸取心脏并以2.5ml/min速度Langendorff灌流心脏20min,信号稳定后采样;②60只SD大鼠,开胸取心,剪取5mm×5mm大小的心脏组织片,置于MEA盘,台氏液间歇灌流5min,用5μV×1ms的刺激脉冲连续刺激,刺激间隔为1s,比较心房和心室组织片场电位(FPs)形态和传导时间;③20窝出生后3天以内的昆明小白鼠,消化分离心肌细胞,培养于MEA盘内,进行组织信号采样。结果①大鼠整体心脏灌流30～90min内能够记录到稳定的自主节律下的FPs信号,心室肌场电位时程(FPdur)210±78ms;心房肌FPdur164±58ms;房室传导时间320±150ms;并能记录到FPs激动顺序图。②心肌组织靶点取样,台氏液间歇灌流和电刺激下,组织的兴奋性可以稳定保持2h。心室肌组织片FPdur115.80±11.61ms,心房组织片FPdur83.71±6.48ms,刺激信号在心房组织片的传导时间66.46±6.73ms,心室组织片传导时间47.40±5.62ms;③小鼠乳鼠心脏原代培养心肌24h时后开始有散在、不同步的细胞克隆搏动和点状FPs信号,72h后细胞融合,开始记录到基本同步的群动和多位点FPs信号,培养心肌自发搏动频率150±100次/分。结论 MEA技术可以稳定记录小动物整体灌流心脏,心脏定点取样组织片,培养心肌细胞60极场电位和电传导特性。

自主神经对左上肺静脉电生理特征的影响

目的研究迷走神经刺激和心脏自主神经阻断对左上肺静脉(LSPV)电生理特征影响。方法用7只成年杂种犬自身对照,观察基础状态、左侧迷走神经干刺激、阻断迷走神经和阻断自主神经等不同状态下犬的心房和LSPV远端(LSPV-D)、中端(LSPV-M)、近端(LSPV-P)有效不应期(ERP)的变化,以及起搏肺静脉时心房颤动(简称房颤)诱发率的变化。结果①迷走神经刺激时LSPV的ERP均较基础状态下缩短,房颤的诱发率最高(71.4%)。②单用阿托品阻断迷走神经时LSPV-M的ERP较基础状态下延长(125.8±9.1msvs112.9±13.8ms,P<0.05),LSPV-P和LSPV-D无变化,但房颤诱发率较基础状态下和迷走神经刺激时下降(17.1%vs24.8%,71.4%,P<0.05)。③联合应用阿托品和普奈洛尔阻断自主神经时LSPV-D、LSPV-M和LSPV-P的ERP均显著延长,房颤的诱发率最低(7.6%)。④基础状态下LSPV-D的ERP长于LSPV-P(118.6±17.5msvs106.4±10.7ms,P<0.05),阻断自主神经时LSPV-D的ERP短于LSPV-P(135.0±8.2msvs151.4±12.1ms,P<0.05)。结论LSPV的电生理特征存在“异质性”,对阻断自主神经的药物反应性也不同,对房颤的发生和维持有重要作用。而自主神经张力的变化可以改变LSPV的电生理特性,其中交感神经也是主要原因之一。

海葵素对大鼠和豚鼠心室肌细胞钾电流的影响

目的:研究海葵素-Q(AP-Q)对心室肌细胞钾电流的作用。方法:采用酶解法制备豚鼠和大鼠单个心室肌单细胞,应用全细胞膜片钳记录方法记录心室肌细胞钾电流(Ito、IK和IK1)。结果:AP-Q3-100nmol/L浓度依赖性地阻滞Ito,EC50分别为10.5nmol/L,去极化至+50mV时,AP-Q10nmol/L使Ito从给药前的(13.3+-3.4)pA/pF升至(19.46+-4.3)pA/pF。AP-Q0.1-100nmol/L浓度依赖性地增大IK和尾电流(IK tail),EC50分别为4.7nmol/L和5.0nmol/L。AP-Q1pmol/L-100nmol/L浓度依赖性地增大IK1,EC50值为0.2nmol/L。结论:AP-Q增大IK,Ito和IK1的作用可能是其缩短心室肌动作电位时程(APD),增大静息电位(RP)的原因。

炙甘草汤含药血清对大鼠离体心脏场电位影响的研究

目的:研究炙甘草汤含药血清对大鼠离体心室肌场电位的影响。方法:随机将50只SD大鼠分为空白、炙甘草汤不同浓度含药血清(5%、10%、20%)组与胺碘酮组。应用MEA技术监测fAPD及心率的变化。结果:与空白组对照,胺碘酮组fAPD显著延长,心率减慢;10%与20%浓度炙甘草汤含药血清组大鼠心室肌fAPD均延长,心率均减慢,二者比较则fAPD与心率均无统计学差异(P>0.05);二者分别与对照组比较,则P<0.05;5%浓度炙甘草汤含药血清组对心室肌fAPD及心率无明显影响。10%、20%浓度的炙甘草汤含药血清组与胺碘酮组心室肌fAPD相比较,P<0.05,但心率无统计学差异。结论:10%与20%浓度的炙甘草汤含药血清均能延长心室肌fAPD,心率均减慢,具有抗室性心律失常效应。

窦房结脂肪垫对犬右上肺静脉电生理特性影响的研究

目的研究不同水平刺激窦房结脂肪垫(SANFP)对右房(RA)及右上肺静脉(RSPV)的有效不应期(ERP)及心房颤动(简称房颤)诱发率的影响,探讨SANFP对房颤发生维持的作用。方法6只犬麻醉后经右侧开胸暴露RSPV及SANFP,以0.6～2,5,8mV三种不同电压强度水平、60ms频率刺激SANFP,同时以S1S2刺激观察三种水平下RA游离壁远、中、近端及RSPV远、中、近端ERP的变化;同样方法刺激SANFP以S1S1和S1S2程序刺激诱发房颤,测定房颤的诱发率。结果以5mV电压刺激窦房结脂肪垫RSPV近端ERP较基础时明显缩短(90±24msvs109±16ms,P<0.05),其房颤诱发率50%;以5,8mV电压刺激SANFP时RA游离壁近端、中端ERP变化较基础时明显缩短(96±20msvs117±14ms,65±20msvs117±14ms,P均<0.05),其房颤诱发率100%。结论窦房结脂肪垫可能在肺静脉起源的房颤的诱发和维持中起了重要作用。

迷走神经干刺激对左上肺静脉电传导特性及心房颤动诱发的影响

目的：研究迷走神经干刺激对左上肺静脉和左心房间的电传导以及心房颤动的影响。方法：35只新疆家养犬，苯巴比妥,30mg／kg诱导麻醉和50～100mg维持麻醉。以S1S160ms（1000bpm），1～8V电压，刺激迷走神经千，以舒张期域值的2倍刺激电雎，程序S1S1 100ms（600bpm）30s和60s和S1S2300／200mS起步，5ms步长递减扫描刺激左心耳、左心房-肺静脉结合部、左上肺静脉远中近端，比较迷走神经刺激下各刺激部位的有效不应期（ERP）和心房颤动（AF）的诱发。结果：左上肺静脉的电生理传导特性为双向传导、双向频率依赖性递减传导、逆向传导减慢和局部延迟传导。迷走神经刺激达到最大效应（基础心率降低50％）的背景下左心耳、左心房-肺静脉结合部、左上肺静脉远中、近端的ERP由（106±18）、（111±15）、（113±17）和（112±17）ms缩短到（88±17）、（94±14）、（101±12）和（1]2±20）ms,各部位ERP的离散度由11．2％增加到21．3％；迷走神经干刺激最大效应下AF的诱发率由49．9％增加到70．6％，左心耳、左心房-肺静脉结合部、左上肺静脉远、中近端的AF诱发率在S1S1100ms（600bpm）刺激下分别为62．9％、97．9％、68．5％和69．2％，在S1S2刺激下分别为20．1％、43．3％、9．3％和9．7％。心房-肺静脉结合部为AF诱发率最高部位97．9％（S1S1100ms刺激）和63．4％（S1S1刺激）。结论：新疆家犬左心房和左上肺静脉有其独到的电生理传导特性和房颤的诱发率，迷走神经干刺激能够显著改变这些电生理传导特性和增加AF的诱发率。

微电极阵芯片技术在整体心脏、心肌组织片和培养心肌中的应用研究

目的探讨微电极阵芯片技术（microelectrode arrays，MEA）在整体心脏、心肌组织片和培养心肌电活动的应用。方法用MEA技术记录豚鼠整体心脏、SD大鼠心脏组织片和小鼠乳鼠心脏培养心肌的组织场电位变化规律。结果（1）豚鼠整体心脏灌流30～90min，记录到稳定的自主节律（120±90）次／min；心室和心房肌的场电位时程为（210±78）ms和（164±58）ms，房室传导时间为（320±150）ms。（2）SD大鼠心脏组织片兴奋性可以保持2h，心室和心房组织的场电位时程为（115．80±11．61）ms和（83．71±6．48）ms。（3）小鼠乳鼠心脏原代培养自发搏动频率为（150±100）次／min，培养2—72h，记录到同步的多位点场电位，并能随刺激频率同步显示场电位变化。结论MEA技术是一个敏感、低噪音和长时间稳定的记录整体动物心脏、心脏靶点取样组织和培养心肌细胞的场电位、细胞间电活动传导和激动起源规律的研究工具。

微电极阵列记录技术在豚鼠整体心脏心室肌电生理特性研究中的应用

动作电位（action potential，AP）记录技术有单电极记录、双电极记录和多电极记录，微电极阵列记录技术是惟一一种细胞外无创性60个位点同步、长时间记录心脏、神经等组织电活动的技术。微电极阵列记录技术可作为检测抗心律失常药物组织水平疗效的理想工具。多非利特（dofetilide）是一种新型Ⅲ类抗心律失常药物，为纯K^＋离子通道阻滞剂。

海葵素对大鼠和豚鼠心室肌细胞钾电流的影响

目的研究海葵素-Q（AP-Q）对心室肌细胞钾电流的作用。方法采用酶解法制备豚鼠和大鼠单个心室肌单细胞,应用全细胞膜片钳记录方法记录心室肌细胞钾电流（Ito,IK和IK1）。结果AP-Q3~100nmolL-1浓度依赖性地阻滞Ito,EC50分别为10.5nmolL-1,去极化至＋50mV时,AP-Q10nmolL-1使Ito从给药前的（13.3±3.4）pApF-1升至（19.46±4.3）pApF-1。AP-Q0.1~100nmolL-1浓度依赖性地增大IK和尾电流（IKtail）,EC50分别为4.7和5.0nmolL-1。AP-Q1pmolL-1~100nmolL-1浓度依赖性地增大IK1,EC50值为0.2nmolL-1。结论AP-Q增大IK,Ito和IK1的作用可能是其缩短APD,增大RP的原因。

犬冠状静脉窦肌袖细胞及其缝隙连接蛋白43和缝隙连接蛋白45的分布研究

目的研究冠状静脉窦肌袖细胞形态走行、分布及其缝隙连接蛋白(Cx)的分布特点,进一步探讨冠状静脉窦肌袖在心律失常中的作用。方法选用新疆成年杂种犬9条,以其冠状静脉窦(CS)为研究标本,分别做Cx43、Cx45免疫组化及HE染色。结果CS的长度为(5．20±0．68)cm,在CS 2．5～3 cm内普遍存在肌袖细胞,CS肌袖纤维以内环外纵的基本模式分布,随着CS窦口向远处延伸,肌袖层分布逐渐减少。在同一横断层或不同层面,肌袖细胞的分布存在呈不均一性。免疫组化证实Cx43在CS表达稀少,Cx45在CS肌袖细胞细胞膜表达丰富,而且随着CS的延伸Cx45表达减少。结论犬CS的肌袖细胞分布存在不均一性,Cx45为其主要缝隙连接蛋白,这似乎可以证明CS具备心脏传导系统缝隙连接蛋白的特点,揭示了CS在更大程度上是一条电传导通道。