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基于加速康复外科理念的多学科合作管理对二次剖宫产产妇术后恢复及早期转归的影响
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作者 孔德华 朱朋 孔宪刚 《济宁医学院学报》 2024年第5期402-405,共4页
目的探讨基于加速康复外科(ERAS)理念的多学科合作管理对二次剖宫产产妇术后恢复及早期转归的影响。方法选择2022年12月至2024年3月于济宁市第一人民医院行二次剖宫产手术的产妇60例,采用随机数字表法分为常规组和ERAS组,各30例。常规... 目的探讨基于加速康复外科(ERAS)理念的多学科合作管理对二次剖宫产产妇术后恢复及早期转归的影响。方法选择2022年12月至2024年3月于济宁市第一人民医院行二次剖宫产手术的产妇60例,采用随机数字表法分为常规组和ERAS组,各30例。常规组给予传统管理方案,ERAS组给予基于ERAS理念的多学科合作管理方案。比较两组产妇术后恢复情况、术后镇痛情况及术后并发症发生情况。结果ERAS组产妇术后24h 11项产科恢复质量(ObsQoR-11)评分为(92.90±7.16)分高于常规组(85.20±11.86)分,术后首次排气时间为(25.17±4.91)h、初始泌乳时间为(21.20±1.67)h分别短于常规组(29.80±5.11)h和(25.67±3.04)h,子宫复旧程度为(2.26±0.71)cm大于常规组(1.67±0.42)cm,术后48h舒芬太尼用量为[50.00(48.00,52.00)]μg少于常规组[52.00(48.00,56.00)]μg,差异有统计学意义(t=3.044、-3.583、-7.048、3.908,Z=-2.354,均P<0.05)。ERAS组术后静息及咳嗽时中重度疼痛发生率、镇痛补救率、术后并发症总发生率分别为6.67%、10.00%、6.67%、26.67%,均明显低于常规组的26.67%、33.33%、30.00%、73.33%,差异有统计学意义(χ^(2)=4.320、4.812、5.455、13.067,均P<0.05)。结论基于ERAS理念的多学科合作管理有利于促进二次剖宫产产妇术后恢复,降低并发症,改善术后早期转归。 展开更多
关键词 多学科合作 加速康复外科 二次剖宫产 术后恢复 术后转归
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前锯肌平面阻滞与胸椎旁神经阻滞在非插管胸腔镜手术中的应用效果比较 被引量:2
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作者 孔宪刚 魏育涛 +1 位作者 刘曼曼 宋成伟 《中国医刊》 CAS 2023年第12期1365-1369,共5页
目的比较前锯肌平面阻滞(serratus anterior plan block,SAPB)与胸椎旁神经阻滞(thoracic paravertebral nerve block,TPVB)在非插管胸腔镜手术(non-intubated video-assisted thoracoscopic surgery,NIVATS)中的应用效果。方法选取2022... 目的比较前锯肌平面阻滞(serratus anterior plan block,SAPB)与胸椎旁神经阻滞(thoracic paravertebral nerve block,TPVB)在非插管胸腔镜手术(non-intubated video-assisted thoracoscopic surgery,NIVATS)中的应用效果。方法选取2022年1—10月山东省济宁市第一人民医院收治的60例行NIVATS的患者为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组30例。麻醉诱导前,观察组给予SAPB,对照组给予TPVB。比较分析两组患者的手术相关指标,麻醉前(T_(0))、开胸后15min(T_(1))、开胸后30min(T_(2))、术毕(T_(3))、拔除喉罩后15min(T_(4))的血流动力学指标[平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)、心率(heartrate,HR)],T_(0)、T_(2)、T_(4)时刻的血气分析指标[动脉血氧分压(partial pressure of arterial oxygen,PaO_(2))、二氧化碳分压(partial pressure of arterial carbon dioxide,PaCO_(2))],术后恢复指标,术后镇痛情况,以及术后不良反应发生情况。结果两组患者的术中视野暴露评分以及呛咳、低氧血症发生率比较差异均无显著性(P>0.05);观察组患者的阻滞操作时间显著短于对照组(P<0.05),低血压发生率显著低于对照组(P<0.05)。与T_(0)时刻比较,两组患者T_(1)、T_(2)、T_(3)时刻的MAP均明显降低,对照组患者T_(1)、T_(2)时刻的HR均明显降低,观察组患者T_(1)、T_(2)、T_(3)时刻的HR均明显降低,差异均有显著性(P<0.05)。T_(0)、T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)时刻,两组患者的HR比较差异均无显著性(P>0.05);T_(1)、T_(2)、T_(3)时刻,观察组患者的MAP均显著高于对照组(P<0.05)。与T_(0)时刻比较,两组患者T_(2)、T_(4)时刻的PaO_(2)、PaCO_(2)均显著升高(P<0.05)。T_(0)、T_(2)、T_(4)时刻,两组患者的PaO_(2)、PaCO_(2)比较差异均无显著性(P>0.05)。两组患者的术后麻醉恢复时间、首次下床时间、胸腔引流管留置时间、术后住院时间、术后24h的15项恢复质量量表评分、静息以及咳嗽时的中重度疼痛发生率、镇痛泵有效按压次数、镇痛补救率以及术后不良反应总发生率比较差异均无显著性(P>0.05)。结论SAPB与TPVB均可安全、有效地用于NIVATS中,且SAPB操作相对简单,可维持患者的术中血流动力学水平稳定,是一种较为理想的区域阻滞技术。 展开更多
关键词 前锯肌平面阻滞 胸椎旁神经阻滞 血流动力学 非插管胸腔镜手术
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保留自主呼吸喉罩全麻在胸腔镜手术患者中的应用效果 被引量:2
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作者 孔宪刚 魏育涛 +1 位作者 刘曼曼 宋成伟 《中国医药导报》 CAS 2023年第25期115-119,共5页
目的探讨保留自主呼吸喉罩全麻在胸腔镜手术患者中的应用效果。方法选取2022年1月至6月山东省济宁市第一人民医院行胸腔镜手术患者60例,按照随机数字表法将其分为观察组和对照组,各30例。观察组行保留自主呼吸喉罩全麻,对照组行双腔气... 目的探讨保留自主呼吸喉罩全麻在胸腔镜手术患者中的应用效果。方法选取2022年1月至6月山东省济宁市第一人民医院行胸腔镜手术患者60例,按照随机数字表法将其分为观察组和对照组,各30例。观察组行保留自主呼吸喉罩全麻,对照组行双腔气管插管全麻。比较两组手术时间、插管前后平均动脉压差值、插管前后心率差值、术中全麻药用量、最低脉搏血氧饱和度(SpO_(2))、最高呼气末二氧化碳分压(PetCO_(2))、术野暴露评分、纵隔摆动及呛咳发生率;比较两组麻醉前(T_(0))、开胸后30 min(T_(1))、关胸后30 min(T_(2))动脉血氧分压(PaO_(2))及动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2));比较两组术后拔管时间、麻醉恢复室停留时间、首次下床时间、胸管留置时间、术后住院时间;比较两组术后麻醉相关并发症及肺部并发症发生情况。结果两组未见纵隔摆动发生。观察组插管前后平均动脉压差值、心率差值低于对照组,术中瑞芬太尼、舒芬太尼用量少于对照组,最高PetCO_(2)、呛咳发生率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组手术时间、最低脉搏血氧饱和度、术野暴露评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组不同时间点PaO_(2)两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。T_(1)~T_(2)时,对照组PaCO_(2)高于T_(0)时,差异有统计学意义(P<0.05);观察组不同时间点PaCO_(2)两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。T_(1)时,观察组PaCO_(2)高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组术后拔管时间、麻醉恢复室停留时间、首次下床时间、胸管留置时间、术后住院时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组术后麻醉相关并发症及肺部并发症总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论保留自主呼吸喉罩全麻用于胸腔镜手术可减轻诱导期插管反应,减少术中全麻药用量,降低术后并发症,促进快速康复。 展开更多
关键词 喉罩 全麻 自主呼吸 胸腔镜手术
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超声引导下收肌管阻滞在全膝关节置换术后多模式联合镇痛中的作用 被引量:26
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作者 孔宪刚 李海鸥 +2 位作者 宋成军 王昆 李成文 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第21期58-61,共4页
目的评价超声引导下收肌管阻滞(ACB)在全膝关节置换术后多模式联合镇痛中的作用。方法选择择期行初次单侧膝关节置换术的患者60例,随机分为A、B组各30例。术中均采用喉罩全凭静脉全麻,A组在麻醉诱导前行超声引导下ACB,阻滞成功后注射0.5... 目的评价超声引导下收肌管阻滞(ACB)在全膝关节置换术后多模式联合镇痛中的作用。方法选择择期行初次单侧膝关节置换术的患者60例,随机分为A、B组各30例。术中均采用喉罩全凭静脉全麻,A组在麻醉诱导前行超声引导下ACB,阻滞成功后注射0.5%罗哌卡因20 m L;B组不行神经阻滞。记录术后静态和动态视觉模拟评分法(VAS)、术后48 h内镇痛泵有效按压次数、吗啡补救镇痛用量及手术前后患肢股四头肌肌力Lovett评分、运动阻滞改良Bromage评分;记录术后24、48、72 h、出院时患肢膝关节最大主动活动,术后第1次下床活动时间和第1次主动直腿抬高时间;统计镇痛相关不良反应发生率。结果 A组术后静态和动态VAS、术后48 h内镇痛泵按压次数,吗啡补救镇痛用量,术后24、48、72 h、出院时膝关节最大主动活动度,术后第1次下床活动时间和第1次主动直腿抬高时间,恶心呕吐、皮肤瘙痒、头晕发生率与B组比较,P均<0.05。结论在全膝关节置换采用ACB为主的多模式联合镇痛方案,术后镇痛效果佳,运动阻滞轻微,不良反应发生率低。 展开更多
关键词 膝关节置换术 收肌管阻滞 多模式镇痛 麻醉方法
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鹅细小病毒分离株HG5/82的分子特征分析 被引量:20
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作者 孔宪刚 李桂霞 +1 位作者 刘胜旺 冉多良 《中国病毒学》 CAS CSCD 2005年第1期28-32,共5页
本研究应用PCR技术扩增得到GPV中国分离株HG5/82的非结构基因与结构基因,片段大小分别约为1.9kb、2.2kb的片段。将该片段分别进行克隆及序列测定,并与 GPV 国内外部分已发表的毒株及番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)的对应... 本研究应用PCR技术扩增得到GPV中国分离株HG5/82的非结构基因与结构基因,片段大小分别约为1.9kb、2.2kb的片段。将该片段分别进行克隆及序列测定,并与 GPV 国内外部分已发表的毒株及番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)的对应序列比较。结果表明:HG5/82 株非结构蛋白(Non structure, NS)基因长为1884bp,编码627个氨基酸。HG5/82株结构蛋白基因长为2199bp,编码732个氨基酸。序列分析结果表明,我国地方分离株与国内外鹅细小病毒相比,ns基因、vp基因均表现出较高的同源性,并且具有共同的分子特征。为进一步研究GPV的基因功能、遗传变化规律及病毒分子致病机理提供了一定的分子基础。结构基因 VP3 间变异较小,这是目前GPV只有一个血清型的分子基础,为基因工程苗的研制提供了可行性。HG5/82 与番鸭细小病毒相应序列比较发现,与细小病毒其它成员相比两者具有较近的亲源关系,但这种同源性明显低于鹅细小病毒之间的同源性。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 NS基因 VP基因 分子特征
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超声引导下股神经联合侧入路腘窝坐骨神经阻滞用于膝关节镜手术麻醉效果观察 被引量:38
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作者 孔宪刚 李成文 侯代亮 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第48期55-57,共3页
目的探讨超声引导下股神经联合侧入路腘窝坐骨神经阻滞用于膝关节镜手术的麻醉效果。方法将90例拟行单侧膝关节镜手术者随机分为三组,各30例。麻醉方法:股-坐骨神经组行超声引导下股神经联合侧入路腘窝坐骨神经阻滞,腰丛-坐骨神经组行... 目的探讨超声引导下股神经联合侧入路腘窝坐骨神经阻滞用于膝关节镜手术的麻醉效果。方法将90例拟行单侧膝关节镜手术者随机分为三组,各30例。麻醉方法:股-坐骨神经组行超声引导下股神经联合侧入路腘窝坐骨神经阻滞,腰丛-坐骨神经组行超声引导下腰丛联合经典入路坐骨神经阻滞,硬膜外组行连续硬膜外麻醉。记录三组麻醉操作时间,感觉及运动神经阻滞起效时间、完善时间及持续时间,麻醉前及麻醉后15、30、60 min MAP、HR。评价麻醉效果,记录不良反应。结果腰丛-坐骨神经组麻醉操作时间长于股-坐骨神经组、硬膜外组,P均<0.01。硬膜外组感觉神经阻滞起效、持续时间均短于股-坐骨神经组、腰丛-坐骨神经组,运动神经阻滞起效、持续时间均长于股-坐骨神经组、腰丛-坐骨神经组,P均<0.05。麻醉后15、30、60 min,硬膜外组MAP均低于麻醉前及股-坐骨神经组、腰丛-坐骨神经组,P均<0.01;股-坐骨神经组、腰丛-坐骨神经组麻醉后MAP均无明显变化,P均>0.05。三组麻醉后HR及麻醉效果比较,P均>0.05。硬膜外组恶心呕吐、尿潴留等不良反应发生率均高于股-坐骨神经组、腰丛-坐骨神经组,P均<0.05。结论膝关节镜手术中应用超声引导下股神经联合侧入路腘窝坐骨神经阻滞的麻醉效果好,操作简单,不良反应少。 展开更多
关键词 腰丛-坐骨神经阻滞 超声引导 股神经阻滞 硬膜外麻醉 膝关节镜手术
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应用单克隆抗体对马传贫弱毒疫苗接种马血清中相应抗原的检测 被引量:1
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作者 孔宪刚 刘滨东 卢景良 《中国畜禽传染病》 CSCD 1992年第3期30-32,共3页
应用马传贫驴白细胞弱毒株系特异单克隆抗体酶结合物的免疫斑点试验检测证明,自28份马传贫弱毒疫苗免疫马血清中均检出与单抗呈阳性反应的相应抗原,持续期达51个月以上;自19份人工感染传贫马、自然感染传贫马、弱毒疫苗免疫后攻毒马及4... 应用马传贫驴白细胞弱毒株系特异单克隆抗体酶结合物的免疫斑点试验检测证明,自28份马传贫弱毒疫苗免疫马血清中均检出与单抗呈阳性反应的相应抗原,持续期达51个月以上;自19份人工感染传贫马、自然感染传贫马、弱毒疫苗免疫后攻毒马及42盼健康马血清中均未捡出单抗相应抗原。病理学检查表明,弱毒疫苗免疫马无马传贫病理学改变。以弱毒免疫马肝、脾、骨髓材料进行生物学试验表明,弱毒免疫马体内不存在致病性病毒。这为阐明该弱毒疫苗的免疫本质提出一个非常值得今后深入加以探讨的课题。 展开更多
关键词 马传贫 单克隆抗体 疫苗 抗原
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超声引导腰部竖脊肌平面阻滞在老年患者髋关节置换术中的应用效果 被引量:1
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作者 孔宪刚 宋成军 +1 位作者 王昆 宋成伟 《中国医药科学》 2022年第1期140-143,148,共5页
目的探讨超声引导腰部竖脊肌平面阻滞(L-ESPB)在老年患者髋关节置换术中的应用效果。方法选择2020年8月至2021年3月于济宁市第一人民医院60例行单侧髋关节置换术的老年患者,根据随机数字表法分为A组(n=30)和B组(n=30)。两组均行喉罩全... 目的探讨超声引导腰部竖脊肌平面阻滞(L-ESPB)在老年患者髋关节置换术中的应用效果。方法选择2020年8月至2021年3月于济宁市第一人民医院60例行单侧髋关节置换术的老年患者,根据随机数字表法分为A组(n=30)和B组(n=30)。两组均行喉罩全麻,A组全麻前行L-ESPB。比较两组平均动脉压(MAP)、心率(HR)、全麻药用量、全麻苏醒指标、术后VAS评分、镇痛效果及不良反应发生率和术后康复指标。结果A组T_(2)~T_(6)时MAP、HR低于B组,B组T_(2)~T_(6)时MAP、HR高于T_(1),差异有统计学意义(P<0.05);A组T_(2)~T_(6)时MAP、HR与T_(1)比较差异无统计学意义(P>0.05)。与B组比较,A全麻药用量减少,术后拔喉罩时间、苏醒期躁动发生率、术后VAS评分、镇痛泵有效按压次数、镇痛补救率及恶心呕吐发生率降低,术后首次下床活动时间缩短,髋关节最大屈曲度和外展度增加,差异有统计学意义(P<0.05)。两组头晕、尿潴留发生率及术后肌力评分差异无统计学意义(P>0.05)。结论超声引导L-ESPB用于老年患者髋关节置换术,可维持术中血流动力学平稳,减少全麻药用量,提供完善镇痛效果,降低术后并发症发生率,提高苏醒质量,有利于早期康复。 展开更多
关键词 竖脊肌平面阻滞 髋关节置换术 超声引导 老年患者
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编码EIAV核输出因子蛋白Rev的cDNA克隆和序列测定
9
作者 孔宪刚 张宝山 +4 位作者 周家喜 刘永刚 刘胜旺 刘相东 孙成群 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期241-243,共3页
EIAV在繁殖过程中涉及到多种转录因子的调节 ,其中Rev蛋白是病毒编码的转录后调节因子 ,决定了病毒复制由早期到晚期的过渡。Rev是非结构蛋白 ,由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用EIAV疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物 ,在... EIAV在繁殖过程中涉及到多种转录因子的调节 ,其中Rev蛋白是病毒编码的转录后调节因子 ,决定了病毒复制由早期到晚期的过渡。Rev是非结构蛋白 ,由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用EIAV疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物 ,在病毒增殖早期提取总RNA ,反转录后使用EIAV特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆后经过核苷酸序列分析 ,通过与基因组全序列的比较 。 展开更多
关键词 马传贫病毒 Rev蛋白 拼接 CDNA克隆 序列分析 核输出因子
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重组马传染性贫血病病毒核心蛋白抗原在 A GID 和ELISA中应用的评价
10
作者 孔宪刚 陶伟英 +3 位作者 刘永刚 张宝山 刘胜旺 卢景良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第4期281-283,共3页
用昆虫杆状病毒表达系统获得的马传染性贫血病病毒( E I A V) 核心蛋白( Gag) 和 P26 蛋白, 作为免疫琼脂双扩散( A G I D) 和酶联免疫吸附试验( E L I S A) 抗原。对76 份已知马传贫非特异性血清进行检... 用昆虫杆状病毒表达系统获得的马传染性贫血病病毒( E I A V) 核心蛋白( Gag) 和 P26 蛋白, 作为免疫琼脂双扩散( A G I D) 和酶联免疫吸附试验( E L I S A) 抗原。对76 份已知马传贫非特异性血清进行检查, 同时与市售 A G I D 和 E L I S A 试剂盒作比较。证明, 用表达蛋白作抗原的 A G I D 和 E L I S A 检测结果均为阴性反应, 而用市售 A G I D 试剂盒检查有54 份马血清出现非特异性反应, 市售 E L I S A 试剂盒检查也出现了非特异性反应, O D 值比表达抗原 E L I S A 高35 倍。初步证明在 A G I D 和 E L I S A 法中, 表达抗原优于常规马传贫病毒抗原。 展开更多
关键词 EIAV 传染性贫血病 杆状病毒 ELISA 核心蛋白
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马传染性贫血病病毒核心蛋白基因的克隆和表达
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作者 孔宪刚 孙荣芳 +3 位作者 刘永刚 张宝山 刘胜旺 卢景良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第6期419-422,共4页
根据美国马传染性贫血病病毒(EIAV)Wyoming株基因序列,设计扩增EIAVgag和p26基因的引物,用PCR法能忠实的分别扩增出全长gag和p26基因。经用杆状病毒表达系统对所获gag和p26基因进行克隆和重组,获得了高效稳定表达Gag和p26蛋白的重... 根据美国马传染性贫血病病毒(EIAV)Wyoming株基因序列,设计扩增EIAVgag和p26基因的引物,用PCR法能忠实的分别扩增出全长gag和p26基因。经用杆状病毒表达系统对所获gag和p26基因进行克隆和重组,获得了高效稳定表达Gag和p26蛋白的重组杆状病毒(rBVs)。含有gag和p26基因的重组杆状病毒感染昆虫Sf21细胞,经无血清昆虫细胞培养基增殖和纯化,每升培养物能获得2mgCag或12mgp26蛋白。 展开更多
关键词 传染性贫血病 病毒 重组杆状病毒 核心蛋白
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单纯全麻与全麻复合硬膜外阻滞用于开胸手术的比较
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作者 孔宪刚 宋成军 宋国红 《济宁医学院学报》 2009年第3期166-166,共1页
关键词 全身麻醉 硬膜外麻醉
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在DNA芯片平台上探测AIV不同亚型cDNA 被引量:33
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作者 王秀荣 邓国华 +5 位作者 于康震 石锐 刘丽玲 乔传玲 陈化兰 孔宪刚 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期394-398,共5页
对以基因芯片技术为基础的检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒的快速诊断技术进行了研究。试验中所使用的病毒为A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)、A/African starling/983/79(H7N1)和 A/Turkey/Wisconsin/1/66(H9N2)。通过RT-PCR获得大约500... 对以基因芯片技术为基础的检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒的快速诊断技术进行了研究。试验中所使用的病毒为A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)、A/African starling/983/79(H7N1)和 A/Turkey/Wisconsin/1/66(H9N2)。通过RT-PCR获得大约500 bp的禽流感病毒基因cDNAs片段,克隆,从重组质粒扩增DNA片段,并点到玻璃载体上,制成芯片。在病毒RNA反转录过程中,用Cy5标记样品 cDNAs。样品 cDNAs是一个包括禽流感病毒HA和M基因的混合物。依据M基因鉴别型,依据HA基因鉴别亚型。扫描芯片上探针结合位点,杂交信号与预期设想基本一致。结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV诊断方法。 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 鉴别 M基因 DNA芯片 快速诊断技术 基因芯片技术 HA基因 AIV 禽流感病毒 H5N1
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鸡新城疫病毒F基因和鸡IL-2重组DNA疫苗的构建 被引量:53
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作者 姜永厚 陈奖励 +3 位作者 宋秀龙 童光志 孔宪刚 刘忠贵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期81-84,共4页
利用已克隆到的新城疫D2 6株F基因和鸡IL_2基因 ,经过载体改建 ,将他们共同克隆于真核表达质粒pCDNA3上 ,经酶切分析、PCR鉴定证实成功构建了共表达鸡新城疫病毒F基因和鸡IL_2的重组质粒 。
关键词 新城疫 F基因 鸡IL-2 重组DNA疫苗
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我国鸡传染性支气管炎病毒地方分离株生物学特性的研究 被引量:28
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作者 贺秀媛 刘胜旺 +3 位作者 王玮 刘丽玲 孔宪刚 王建华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期349-353,共5页
从我国新疆维吾尔自治区某鸡场发病症状及病理变化疑似鸡传染性支气管炎的病鸡有出血点病变的腺胃组织中分离病毒 ,在 9~ 11日龄SPF鸡胚上连续传代 9次 ,通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒在电镜下的形态观察、病毒在鸡胚中的增殖动态变... 从我国新疆维吾尔自治区某鸡场发病症状及病理变化疑似鸡传染性支气管炎的病鸡有出血点病变的腺胃组织中分离病毒 ,在 9~ 11日龄SPF鸡胚上连续传代 9次 ,通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒在电镜下的形态观察、病毒在鸡胚中的增殖动态变化、病毒在CEF中的增殖特性、凝集鸡红细胞的特性以及动物回归试验等来研究我国鸡传染性支气管炎病毒地方流行株的生物学特性。结果表明 ,该毒株的第一代尿囊液对鸡胚无肉眼可见的致病作用 ,当继代到第 5代后 ,胚体严重病变 ;电镜观察该病毒为典型的冠状病毒 ;病毒在鸡胚中随着接种病毒时间的延长 ,其效价增高 ,96小时可达到 48小时的 1倍 ,该毒株可在CEF上生长 ,但不能形成明显的蚀斑 ;并且经 1%胰酶处理后可凝集鸡红细胞 ;鸡胚的第 4代尿囊液病毒回归动物体 ,可致鸡病变病死鸡肾脏病变尤为明显 ,呈典型的花斑肾 ,腺胃则未见肉眼可见的病变 ,接种鸡、同居鸡和对照鸡之间NDV疫苗免疫后其HI抗体水平无明显差异 ,但从发病症状来看 。 展开更多
关键词 传染性 支气管炎 病毒 地方分离株 生物学特性
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鸡传染性支气管炎病毒中国分离株LX4纤突蛋白基因分子特征 被引量:20
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作者 刘胜旺 王玮 +2 位作者 刘玉芬 孔宪刚 童光志 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期67-72,共6页
应用RT PCR方法分别扩增了中国地方分离株IBVLX4S1和S2基因并进行了基因的克隆和序列测定。结果发现 ,LX4S基因由 3495个核苷酸组成 ,编码一条 1 1 6 4个氨基酸残基组成的多肽。S基因编码产物裂解后形成的S1和S2亚单位分别由 5 39和 6 ... 应用RT PCR方法分别扩增了中国地方分离株IBVLX4S1和S2基因并进行了基因的克隆和序列测定。结果发现 ,LX4S基因由 3495个核苷酸组成 ,编码一条 1 1 6 4个氨基酸残基组成的多肽。S基因编码产物裂解后形成的S1和S2亚单位分别由 5 39和 6 2 5个氨基酸残基组成。LX4S基因推导氨基酸切割识别位点序列为HRRRR ,与A2、SD/ 97/ 0 2和Z株相同 ,而与其它国内外参考毒株不同。与国内外 1 0株已报道的具有全S基因序列的IBV参考毒株比较 ,LX4与国内分离毒株SD/ 97/ 0 2的核苷酸和氨基酸同源性最高。与 32株国内外参考毒株的S1基因进化树分析比较表明 ,LX4与A2、SD/ 97/ 0 2、Z、TJ/ 96 / 0 2、JX/ 99/ 0 1和SAIBWJ等 7个国内分离株在同一亚群内。在该亚群内 ,LX4与A2和SD/ 97/ 0 2亲缘关系更近 ,且三者在高变区和抗原表位均具有高度的同源性 ,而与本亚群内其它参考毒株对应的高变区和抗原表位同源性差异较大。LX4与H1 2 0S1基因编码氨基酸的同源性虽然高于其它国外参考毒株 ,但同源性仍然较低 ,为 75 %。与参考毒株比较 ,LX4S2基因的点突变造成其推导的氨基酸序列有 1 1个位点发生改变 ,这些突变可能影响S2与S1蛋白之间的相互作用 。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 中国 分离株 纤突蛋白 基因
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新城疫病毒F48E9株及东北地区流行株F基因遗传变异分析 被引量:21
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作者 曹殿军 苑纯秀 +3 位作者 郭鑫 闵平 孔宪刚 卢景良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期117-120,共4页
采用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿抽提一步法 ,提取新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株及 2个东北地区分离株 DB3、DB5基因组 RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因 c DNA第 1链 ,再利用 PCR技术分段扩增出 F基因的c DNA。F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的 ... 采用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿抽提一步法 ,提取新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株及 2个东北地区分离株 DB3、DB5基因组 RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因 c DNA第 1链 ,再利用 PCR技术分段扩增出 F基因的c DNA。F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的 c DNA经酶切修饰后 ,插入 p UC1 9的多克隆位点中 ,转化感受态 E.coli DH5α。经相对分子质量比较、酶切分析及 PCR等鉴定方法筛选出 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的阳性克隆。然后采用 Sanger′s双脱氧末端终止法对阳性重组子进行核苷酸序列测定 ,证实分别获得了 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的全长 c DNA。利用 DNASIS及 MEGA分析软件 ,将上述 3个毒株的 F基因序列与基他 1 1株有代表性的 NDV的相应序列进行比较分析 ,并绘制了 1 4株 NDV F基因的系统发育进化树。结果表明 ,F4 8E9和 DB3株在核苷酸序列上相对独立于 Toyoda等所分的 A、B、C组 ,单独成为一组 ;DB5株与B1 Hitchner株同属 B组 ,说明它们具有较高的同源性。同时也证明我国有不同基因型的毒株在流行。从进化的角度来看 ,NDV各毒株间确实存在遗传变异 ,但 展开更多
关键词 NDV F基因 克隆 序列分析 系统发育进化树
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编码鸡IL-18成熟蛋白基因的分子克隆与序列测定 被引量:23
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作者 潘蔚绮 刘胜旺 +2 位作者 孔宪刚 李广兴 夏春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期114-117,共4页
白细胞介素 18(IL_18)是一种能诱导IFN_γ产生的新型细胞因子 ,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。本研究根据已发表的鸡白介素 18(IL_18)cDNA基因序列设计引物 ,用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术从有丝分裂原ConA刺激 4 8小时... 白细胞介素 18(IL_18)是一种能诱导IFN_γ产生的新型细胞因子 ,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。本研究根据已发表的鸡白介素 18(IL_18)cDNA基因序列设计引物 ,用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术从有丝分裂原ConA刺激 4 8小时活化的白来航鸡脾细胞中扩增出编码鸡IL_18成熟蛋白质的基因 ,并进行序列测定 ,并与结果进行了比较 ,发现本研究克隆到的鸡IL_18成熟蛋白编码基因序列在 4 82位为C ,而Schnieder等报道的序列为T ,这一核苷酸序列的变化导致了推导的对应氨基酸残基由苯丙氨酸变为丝氨酸。该处碱基变化的原因究竟是鸡IL_18本身存在多态性 ,还是反转录或PCR过程中的碱基错配所致 ,该处碱基的变化对于鸡IL_18蛋白的表达及其生物活性究竟有无影响等问题正在研究中。该基因为国内首次报道经序列测定证实的鸡IL_18基因 。 展开更多
关键词 鸡IL-18成熟蛋白基因 克隆 序列测定 白细胞介素8
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鸡传染性支气管炎病毒中国地方分离株M基因的分子特征 被引量:19
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作者 刘胜旺 贺秀瑗 +2 位作者 孔宪刚 王玮 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期404-407,共4页
本实验根据已经发表的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)M蛋白基因序列设计并合成一对引物 ,利用RT_PCR扩增得到了IBV新疆分离株LX4株 (HA价为 2 7)M基因 678bp的片段 ,将该片段克隆到PUC18载体上 ,通过对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴... 本实验根据已经发表的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)M蛋白基因序列设计并合成一对引物 ,利用RT_PCR扩增得到了IBV新疆分离株LX4株 (HA价为 2 7)M基因 678bp的片段 ,将该片段克隆到PUC18载体上 ,通过对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定 ,证明得到了含有目的基因片段的阳性重组质粒。采用Sanger’s双脱氧末端终止法对插入片段进行核苷酸序列测定 ,获得了IBV_LX4株M基因的核苷酸序列 ,利用DNASIS分析软件 ,将它与GENBANK中发表的 15株国外参考毒株相比较 ,发现核苷酸的同源性 (除D14 66和DE0 72外 )为 85 % ~92 % ,氨基酸的同源性为 83 % ~92 % ,与国内参考株 (H5 2_GD)相比分别为 90 %和 92 % ,确证我们得到的克隆片段为IBV -LX4株的M基因。且含有两个糖基化位点 ,9个高度保守的半胱氨酸 ,三个跨膜区域 。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 M基因 分子特征 鸡病毒
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鸡γ-干扰素基因的分子克隆与序列测定 被引量:18
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作者 刘胜旺 陈洪岩 +4 位作者 孔宪刚 张宝山 马云燕 童光志 卢景良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期228-230,共3页
应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ... 应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ,该基因阅读开放框架由 4 92个核苷酸组成 ,与马和人γ-干扰素基因序列的同源性分别为 3 5%和 3 2 %,与鸡 型干扰素基因的同源性仅为 1 5%,与国外报道的鸡 γ-干扰素基因序列完全一致。表明鸡脾淋巴细胞受到有丝分裂原刺激后 ,其 γ-干扰素基因 m RNA发生了表达 ,试验成功地克隆得到了鸡 展开更多
关键词 Γ-干扰素 淋巴细胞 基因克隆 序列分析
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