自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤在H_2O_2引起的神经胶质瘤U251细胞损伤中的作用

目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)在H_2O_2诱导的神经胶质瘤U251细胞损伤过程中的作用。方法:实验分为4组:正常对照组、10mmol/L 3-MA组、1mmol/L H_2O_2组、1mmol/L H_2O_2+10mmol/L3-MA组。MTT法检测各组的U251细胞增殖率;MDC染色检测细胞自噬空泡的变化;Hoechst 33342染色检测细胞核染色质凝聚变化;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与对照组相比,单独应用3-MA对U251细胞无明显影响。H_2O_2作用组U251细胞增殖率明显降低,细胞内出现自噬空泡,细胞核染色质凝聚,细胞凋亡率增加。3-MA与H_2O_2联合作用于U251细胞时,与单独应用H_2O_2组相比,抑制了H_2O_2引起的胞内自噬空泡的积聚,但细胞凋亡率明显增加。结论:自噬抑制剂3-MA能够-定程度地抑制H_2O_2诱导的U251细胞自噬,但促进了细胞凋亡,表明自噬在H_2O_2诱导的神经胶质瘤U251细胞损伤过程中很可能起到保护性作用。

神经胶质瘤U251细胞氧化损伤中自噬和凋亡过程的时间顺序

目的:探讨过氧化氢(H2O2)诱导神经胶质瘤U251细胞损伤中自噬和凋亡发生的时间顺序。方法:实验分为4组:正常对照组、1 mmol/L H2O2作用(6 h、12 h、24 h)组。应用MTT法检测H2O2对神经胶质瘤U251细胞生存率的影响;MDC染色检测自噬空泡的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率变化。Western blot检测Beclin 1和胞浆cyt c蛋白的表达。结果:与对照组相比,1 mmol/L H2O2作用下,U251细胞存活率明显降低,并呈时间依赖性。与对照组相比,1 mmol/L H2O2作用后,6 h时U251细胞自噬空泡明显增加,自噬相关蛋白Beclin 1表达明显增加,12 h、24 h细胞自噬水平逐渐增强;而6h时未见细胞凋亡率明显变化及cyt c由线粒体向胞浆的释放,12 h、24 h时细胞凋亡率明显增加,胞浆中cyt c蛋白表达明显增强(P<0.05)。结论:氧化损伤能够诱导神经胶质瘤U251细胞发生自噬和凋亡,并且自噬发生于凋亡之前。

NPPB和尼弗灭酸对H_2O_2损伤C6胶质细胞谷氨酸半胱氨酸合成酶及CLIC4表达的影响

目的:观察氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)-苯甲酸(NPPB)、尼弗灭酸(NFA)对H2O2诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响。方法:MTT法检测NPPB、NFA、H2O2作用的C6细胞生存率;紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率以及谷胱甘肽GSH水平;RT-PCR检测谷氨酸半胱氨酸合成酶(GCL)亚单位GCLC、GCLM及线粒体氯通道(CLIC4)mRNA表达;Western blotting检测CLIC4的蛋白水平。结果:与对照组相比,H2O2组C6细胞存活率和GSH含量明显降低;LDH释放率增加;GCLC、GCLM、CLIC4 mRNA表达降低;CLIC4蛋白水平明显增强。NPPB或NFA与H2O2联合作用于C6细胞组,与单独应用H2O2组相比,细胞存活率和GSH含量未见明显变化;LDH释放率降低;GCLC、GCLM mRNA表达未见明显差异;CLIC4蛋白表达下降。结论:氯通道阻断剂NPPB或NFA能够在一定程度上减轻氧化应激引起的C6细胞损伤,可能与调节细胞膜功能和下调CLIC4蛋白表达有关。

线粒体氯通道蛋白在过氧化氢诱导C6细胞损伤中的作用

目的:利用过氧化氢(H2O2)复制神经胶质瘤C6细胞损伤模型,探讨线粒体氯通道蛋白/CLIC4的变化。方法:应用MTT法检测H2O2作用的C6细胞生存率;紫外分光光度法检测培养液上清LDH释放率;RT-PCR检测CLIC4的mRNA表达;Western blotting方法检测CLIC4的蛋白水平。结果:500μmol/L H2O2作用C6细胞存活率与对照组相比未见明显差异;LDH释放率高于对照组;CLIC4蛋白水平明显强于对照组。而1000μmol/LH2O2作用的C6细胞存活率明显低于对照组;LDH释放率明显高于对照组;CLIC4蛋白水平强于对照组。结论:CLIC4可能参与HO诱导神经胶质瘤细胞损伤的机制。

生理学实验课教学改革

将两个年级共 6 6 7名学生随机分成对照组和实验组 ,对照组沿用传统教学方法和实验教学内容 ,实验组采用改革后的教学方法和调整后的实验内容 :先行动物基本手术技能和生物信号记录设备的使用方法的学习和训练 ,然后讲授实验设计的方法和实验动物的选用、实验对照的原则和方法 ,学生自带问题 ,查阅资料、设计实验 ;实验设计由教师审定。结果平时成绩和实验理论两组间无显著差异 ;实验动手能力、实验设计、创新能力、论文水平和总评 ,实验组显著优于对照组 (P<0 .0 1)

内毒素对过氧化氢引起的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响

目的:观察内毒素(LPS)对过氧化氢(H2O2)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响,探讨其相关机制。方法:C6细胞按处理方法不同分为空白对照组、100μmol.L-1LPS组、1 000μmol.L-1H2O2组及1 000μmol.L-1H2O2与100μmol.L-1LPS联合应用组。药物作用C6细胞6 h,取培养液上清与细胞沉淀,利用LDH检测试剂盒,采用紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率;应用RT-PCR检测相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、细胞色素C(Cyt-C)及CLIC4蛋白水平。结果:与空白对照组比较,100μmol.L-1LPS组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2、Bax表达率未见明显改变(P>0.05),而Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,与空白对照组比较,Bcl-2、Bax、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平未见明显变化(P>0.05),而Caspase-3蛋白水平高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,1 000μmol.L-1H2O2组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05);在mRNA水平上Bcl-2表达率低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率高于空白对照组(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于空白对照组(P<0.05)。与H2O2组和LPS组比较,LPS与H2O2联合作用组细胞凋亡率及LDH释放率明显增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2表达率下降(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于对照组(P<0.05),而CLIC4蛋白水平变化不明显(P>0.05)。结论:单独应用LPS能够激活Caspase-3信号通路,引起C6细胞早期凋亡,同时LPS能促进H2O2引起的C6细胞损伤,其机制可能与凋亡相关的Bcl-2/Bax及Caspase-3途径过度激活有关。线粒体氯通道蛋白CLIC4在此过程中作用不明显。

低氧对顺铂损伤A549细胞的影响

目的探讨低氧条件对顺铂损伤人非小细胞肺癌A549细胞的影响。方法实验分为两大组:常氧组(正常对照组、顺铂10μmol/L组、顺铂20μmol/L组);1%低氧组(正常对照组、顺铂10μmol/L组、顺铂20μmol/L组)。应用MTT法检测顺铂在常氧和低氧条件下对A549细胞增殖率的影响;MDC染色检测细胞自噬空泡的变化;Hoechst33342染色检测细胞核变化。结果与对照组相比,顺铂能降低A549细胞增殖率,并呈剂量依赖性,细胞自噬空泡无明显积聚,但细胞核发生显著皱缩;低氧条件下细胞内出现大量自噬空泡积聚,且低氧明显降低了顺铂对A549细胞增殖率的影响,降低了顺铂对细胞的损伤作用。结论顺铂能够诱导A549细胞损伤,而低氧条件引起了细胞自噬过程,并降低了顺铂的损伤作用。推测低氧时的细胞自噬在顺铂损伤A549细胞过程中可能是一种保护作用。

构建基于提升护士职业核心能力的实践教学模式研究

通过调研明确护士必备的6种职业核心能力;构建以护士岗位任务为引领的综合实训实践教学模式;实施对照实验结果显示:除单项技能操作考试成绩无显著差异外,在职业知识、职业态度、沟通能力、评判性思维能力、自主学习能力方面,实验组均明显优于对照组,说明在实习前对护生开展综合实训有利于提升护士职业核心能力,有利于对护理高端技能型人才的培养。

山东半岛东部湿地生态系统服务评价及比较研究

以山东半岛东部的烟台市和威海市为例,利用层次分析和主成分分析方法对研究区各县市湿地服务进行评价,采用自然间断法的方式将各市县湿地生态系统服务等级进行划分。结果表明:两种方法的评价原理和结果虽有差异,但都将烟台市辖区、威海市辖区划分为高生态服务地区,将栖霞市和招远市划分为低生态服务区。上述两种方法虽然评价原理不一致,但通过互相验证,更能真实地反映研究区湿地生态系统服务状态。

门诊输液室常见静脉输液安全隐患及对策

静脉输液是医疗工作中最常见治疗方法，快速高效，但患者随机性强，流动性大，病种多种多样，用药品种繁多，新药层出不穷，给护理工作带来很大难度，从而使护理安全隐患增多，如果管理不好，操作不当，轻则造成经济浪费，重则会给患者带来痛苦，甚至生命危险。为杜绝门诊输液治疗中存在的安全隐患，笔者对2008年3-4月在门诊行静脉输液的患者进行调查，归纳输液中存在的不安全因素并对发现的问题进行分析、探讨，提出防范措施。现总结如下。

中医药治疗子宫内膜异位症所致痛经的现状与展望

中医药疗法对子宫内膜异位症(EMs)引起的痛经治疗具有其独特优势,主要以整体治疗和免疫调节为主。目前,中医各种疗法的作用机制尚未明了,且对不良反应的观察较少提及。本文就中医药治疗EMs所致痛经的现状作一综述。

消炎止痛膏外敷治疗输液外渗23例临床效果观察

目的:探讨治疗输液外渗的有效方法。方法:将52例输液外渗患者分为观察组23例和对照组29例,观察组用消炎止痛膏外敷,对照组用50%硫酸镁湿热外敷,比较两组疗效及平均显效时间。结果:观察组疗效及平均显效时间均优于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:应用消炎止痛膏外敷治疗输液过程中液体外渗疗效好、安全方便、无不良反应,值得临床推广。

基于Web服务的移动电子商务系统的设计与应用

为了整合分布式网络资源,统一数据表达格式,集成移动电子商务的应用,为客户提供最大价值,提出了基于Web服务的移动电子商务体系。文章结合Web服务技术和移动电子商务,描述了基于Web服务的移动电子商务的体系结构。基于此体系重新架构了企业可移动信息系统,提供了实现该系统的架构方法,开发流程和解决方案。另外文章还给出了将Ex-cel文件转换成XML文档的算法流程。通过Openwave模拟浏览器进行测试,表明此系统集成了企业各部门的应用,而不必考虑终端设备、操作系统、语言和标准的限制,实现了动态移动电子商务。

人参二醇组皂苷(PDS)抑制NOS和p38减轻LPS休克脑损伤

目的:探讨人参二醇组皂苷(PDS)对LPS诱导休克脑的保护机制。方法:将大鼠随机分为对照组、LPS组、LPS+地塞米松组及LPS+人参二醇皂苷组。大鼠静脉注射LPS(4mg/kg)4h后,测定大脑皮质中NOS的活性、NO的含量及磷酸化p38蛋白的表达。结果:LPS组脑皮质中NOS活性、NO含量及p38的蛋白表达水平明显高于control组,而LPS+Dex组和LPS+PDS组脑皮质中NOS活性、NO含量及p38的蛋白表达水平明显低于LPS组。结论:PDS减轻LPS脑损伤与降低脑皮质中NOS活性、NO含量有关,可能涉及p38MAPKs信号转导通路。

槲皮素对大鼠卵巢发育和卵巢寿命的影响

背景:研究发现一些植物雌激素可改变生殖系统发育,并可能最终影响生殖衰老的年龄。槲皮素是一种黄酮类物质,具有微弱的雌激素效应,但对卵巢卵泡发育和卵巢衰老进程究竟有无影响还不清楚。目的:观察槲皮素对大鼠卵巢卵泡发育和卵巢寿命的影响。方法:健康成年SD大鼠30只雌雄按2∶1合笼所生的新生雌鼠,分为3组:母鼠灌胃组,对孕10.5d母鼠槲皮素灌胃,1次/d,直至分娩,取1,2,4d新生雌鼠;腹腔注射组,对正常出生后12h内新生雌鼠槲皮素腹腔注射,1次/d,取2,4d新生雌鼠;空白对照组:不进行任何干预的1,2,4d新生雌鼠;观察新生鼠卵巢发育情况。另取12月龄雌性大鼠22只,以数字表法随机分为实验组和对照组:实验组用槲皮素灌胃4个月,1次/d;对照组灌胃给予生理盐水。对灌胃前和灌胃期间12月龄雌性大鼠行阴道涂片,观察大鼠动情周期模式;灌胃结束后,计算卵巢和子宫系数,苏木精-伊红染色观察各期卵泡发育情况和卵泡总数变化。结果与结论:用槲皮素干预1,2d龄新生大鼠未装配的卵泡均减少,而发育更晚期阶段的卵泡即原始卵泡或发育卵泡有所增加。灌胃前大部分大鼠动情周期已经不规则,用药后,随着大鼠年龄的增长,实验组与对照组显示了相似的动情周期变化:规则的动情逐渐消失,周期变得延长或不规则,灌胃结束时均以不规则动情为主。灌胃4个月后,实验组大鼠卵巢大部分由闭锁卵泡组成,另外可见少许原始卵泡、发育卵泡以及窦状卵泡和黄体,实验组窦状卵泡较对照组增加(P<0.05),两组卵巢和子宫系数及体质量增加无差异。提示槲皮素可能具有一定促进卵巢卵泡发育和成熟的作用,但不影响卵巢寿命。

慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺组织内质网应激介导的凋亡的变化

目的:探讨内质网应激介导的凋亡在低氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的变化及意义。方法:清洁级雄性SD大鼠22只随机被均分成对照组和低氧组(n=11)。采用常压低氧法复制慢性低氧高二氧化碳性肺动脉高压模型,4周后,测定肺动脉平均压(mPAP)、右心室游离壁(RV)和左心室加室间隔(LV+S)重量比、肺细小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)、管腔面积/管总面积(CA/TA)及肺细小动脉中膜厚度(PAMT)作为模型指标。Hoechst染色检测肺组织凋亡细胞核。RT-PCR检测肺组织中胱冬酶12(caspase12)和葡萄糖调节蛋白78与94(GRP78、GRP94)mR-NA的表达水平。免疫组化法检测肺组织GRP78、GRP94蛋白的表达。结果:①与对照组相比,低氧组mPAP高50.5%,RV/(LV+S)高37.3%,WA/TA高72.5%,PAMT高137%,而CA/TA低41.9%(均P<0.01)。②Hoechst染色结果显示低氧组肺泡上皮细胞及肺血管内皮细胞可见较多呈高蓝光细胞核,肺血管中膜平滑肌细胞见低蓝光细胞核。③半定量RT-PCR结果显示,与对照组相比,低氧组肺组织caspase12 mRNA高144%,GRP78 mRNA高137%,GRP94 mRNA高80.7%(均P<0.05)。④免疫组化半定量结果显示,低氧组GRP78、GRP94蛋白明显高于对照组(均P<0.01),棕黄色颗粒表达主要位于肺泡上皮细胞及肺血管内皮细胞,而中层平滑肌层表达不明显。结论:内质网应激介导的凋亡与大鼠慢性低氧性肺动脉高压、肺血管改建的病理过程有关。

以专科护士为主导的吞咽康复护理在脑卒中后吞咽障碍患者中的应用

目的:探讨以专科护士为主导的吞咽康复护理模式在脑卒中患者中的应用效果。方法:将68例脑卒中后吞咽障碍患者分为对照组和观察组各34例。对照组由责任护士实施脑卒中吞咽障碍常规护理,即吞咽障碍评估、口腔护理、营养护理及健康宣教。观察组给予以专科护士为主导的吞咽康复护理模式,包括规范脑卒中吞咽障碍患者管理流程,细化专科护理措施,如优化吞咽障碍床旁筛查表、完善口腔卫生管理、开展摄食评估与训练、指导吞咽功能训练、实施个性化健康教育等。于干预前后比较两组患者洼田饮水试验、自我效能感及住院护理满意率。结果:两组患者在干预后洼田饮水试验评分、自我效能感评分及护理满意率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:建立以专科护士为主导的吞咽康复护理方案,保证吞咽功能康复的准确性和有效性,改善吞咽功能,同时提高患者自我效能感与护理满意率。

野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织apelin及其受体的变化

目的:探讨新的小分子活性肽apelin及其受体(APJ)在野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织中的变化及意义。方法:雄性SD大鼠25只,随机分为对照组(n=10)和野百合碱组(n=15)。野百合碱组大鼠一次性腹部注射野百合碱60 mg/kg,对照组注射相同剂量的溶媒。注射野百合碱后第21天时,测定大鼠平均肺动脉压,HE染色观察肺组织病理学变化,Masson三色染色检测肺血管重建指标,放射免疫法及Western blot法测定肺组织中apelin和APJ的蛋白,RT-PCR法观察肺组织apelin和APJ的基因。结果:野百合碱组的平均肺动脉压、右心室肥大指数、肺血管重建指标、肺组织中apelin蛋白含量均明显高于对照组,而肺组织中APJ蛋白及基因表达显著低于对照组(P<0.05,P<0.01);但肺组织apelin基因表达两组间无显著统计学差别。免疫组化定位发现,野百合碱组大鼠apelin及APJ蛋白在肺组织内的炎症细胞胞膜及胞浆内呈强阳性表达。结论:内源性apelin及其受体的表达异常可能在野百合碱诱发的肺动脉高压的发生发展中起重要作用。