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进口奶牛牛传染性鼻气管炎病毒的分离与鉴定 被引量:9
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作者 孔繁德 徐淑菲 +6 位作者 周斌华 陈信忠 谢明星 龚艳清 王景明 郑征 陆承平 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第4期29-30,共2页
关键词 传染性鼻气管炎病毒 进口奶牛 牛传染性鼻气管炎 鉴定 分离 病毒性传染病 典型症状 病毒感染 临床症状 牛疱疹病毒
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斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究 被引量:21
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作者 孔繁德 黄印尧 +2 位作者 赖清金 洪于准 陆承平 《中国动物检疫》 CAS 2003年第11期27-29,共3页
以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记SPA,建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色,阳性者出现红色斑点,结果易于判断。整个试验过程仅需5min,操作简单,与猪兰耳... 以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记SPA,建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色,阳性者出现红色斑点,结果易于判断。整个试验过程仅需5min,操作简单,与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot-ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较,符合率达98.4%和98.9%。说明该法微量、特异、敏感可靠,检测时间短,效果直观,非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。 展开更多
关键词 斑点免疫金渗滤法 检测技术 猪瘟抗体 抗原 待检血清 阳性血清 阴性血清 胶体金 DIGFA法
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沙门菌PCR快速检测试剂盒的研制与应用 被引量:8
3
作者 孔繁德 徐淑菲 +2 位作者 陈琼 彭海滨 陆承平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期103-107,共5页
为建立一种简单、快速、灵敏、准确的沙门菌检测方法,根据沙门菌fimY保守基因序列设计合成了1对引物,建立了快速检测沙门菌的PCR方法,并对反应条件进行优化,组装成快速检测试剂盒。结果显示,所有沙门菌均扩增出526 bp的特异性条带,而非... 为建立一种简单、快速、灵敏、准确的沙门菌检测方法,根据沙门菌fimY保守基因序列设计合成了1对引物,建立了快速检测沙门菌的PCR方法,并对反应条件进行优化,组装成快速检测试剂盒。结果显示,所有沙门菌均扩增出526 bp的特异性条带,而非沙门菌均未扩增出任何条带。检测灵敏度达93 CFU,还可检出含3 CFU的样品用BP预增菌的菌液或用MM增菌后的菌液,而且稳定性良好,冷冻至少能保存12个月。采用直接菌体加入法、热裂解法、反复冻融法、CTAB碱裂解法和柱式试剂盒提取法分别提取核酸模板,结果CTAB法效果最好,但操作烦琐,而直接菌体加入法和热裂解法可以达到和柱式试剂盒提取法相同的效果,且操作简便、快速、经济、效果好。通过对临床样品的检测,证实该试剂盒具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性高等优点,值得推广应用。 展开更多
关键词 沙门菌 聚合酶链式反应 检测
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福建家养淡水鱼暴发传染病的细菌分离鉴定与防治 被引量:7
4
作者 孔繁德 陈琼 +3 位作者 王生育 黄印尧 陈信忠 龚艳清 《福建农业学报》 CAS 2004年第4期213-218,共6页
2003年下半年福建省龙海市许多养鱼场发生一起以出血为主的家养鱼暴发性传染病,对其进行了病原分离鉴定。通过常规细菌学鉴定和应用 ATB 全自动鉴定系统,从濒死的鲢鱼和罗非鱼的实质性脏器中各分离出1株迟缓爱德华氏菌(Edwardstella t... 2003年下半年福建省龙海市许多养鱼场发生一起以出血为主的家养鱼暴发性传染病,对其进行了病原分离鉴定。通过常规细菌学鉴定和应用 ATB 全自动鉴定系统,从濒死的鲢鱼和罗非鱼的实质性脏器中各分离出1株迟缓爱德华氏菌(Edwardstella tarda),同时还从鲢鱼中分离出1株弗氏枸掾酸杆菌(Citrobacter freandn)。用这些菌人工感染小鼠和健康鱼,表明这些菌对小鼠有极强的毒力,对鱼表现出与自然发病鱼类似的病症,并回收到与接种菌一致的细菌。选择敏感性高的丙沙星、氟哌酸、菌必治交叉使用.同时搞好周围环境卫生,有效地控制了病情。 展开更多
关键词 迟缓爱德华氏菌 弗氏枸掾酸杆菌 分离鉴定 防治
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多重RT-PCR一步法技术同时检测猪瘟病毒和蓝耳病病毒方法的建立以及初步应用 被引量:11
5
作者 孔繁德 王荣 +2 位作者 陈琼 吴德峰 徐淑菲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期112-116,共5页
猪瘟病毒和蓝耳病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大。根据猪瘟病毒(CSFV)和猪蓝耳病(PRRS)的基因保守序列设计了2对针对这2种病毒的特异引物,并建立了多重RT-PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表... 猪瘟病毒和蓝耳病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大。根据猪瘟病毒(CSFV)和猪蓝耳病(PRRS)的基因保守序列设计了2对针对这2种病毒的特异引物,并建立了多重RT-PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明能同时扩增得到2条与试验设计相符的167bp(CSFV)和320bp(PRRS)特异性条带,同时具有较好的特异性;敏感性检测结果表明,临床阳性的样品提取的核酸稀释1000倍后仍能检测出CSFV和PRRSV。本方法的建立对于这2种病毒病的早期快速检测具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 蓝耳病 多重PCR
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沙门菌实时荧光定量PCR检测试剂盒的研制与应用 被引量:3
6
作者 孔繁德 彭海滨 +2 位作者 徐淑菲 陈琼 陆承平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期625-629,共5页
根据沙门菌保守的fimY基因序列设计合成了引物和TaqMan探针,建立了快速检测沙门茵的实时荧光定量方法,并对反应条件进行了优化,组装成快速检测试剂盒。通过对临床样品的检测,该试剂盒的检测灵敏度达4.5 CFU(25μL反应体系),比常规PCR高... 根据沙门菌保守的fimY基因序列设计合成了引物和TaqMan探针,建立了快速检测沙门茵的实时荧光定量方法,并对反应条件进行了优化,组装成快速检测试剂盒。通过对临床样品的检测,该试剂盒的检测灵敏度达4.5 CFU(25μL反应体系),比常规PCR高100倍,而且稳定性良好,至少可以冷冻保存9个月。结果表明,所建立的沙门菌实时荧光定量PCR检测试剂盒具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性强等优点,适于大量样品的检测。 展开更多
关键词 沙门菌 TAQMAN探针 实时荧光定量PCR 检测
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斑点免疫金渗滤法检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究 被引量:12
7
作者 孔繁德 黄印尧 +3 位作者 王生育 张春安 林开正 陆承平 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第1期36-40,共5页
应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色,阳性者出现红色斑点,整个试验过程仅需5... 应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色,阳性者出现红色斑点,整个试验过程仅需5min即可判断结果;与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病阳性血清不发生交叉反应;纯化PRRSV抗原的最低检测量为0.0553mg mL,即55.3ng 点。对200份猪血清用该法与ELISA同时进行PRRS抗体检测,两种方法的符合率达98%。 展开更多
关键词 斑点免疫金渗滤法 猪生殖与呼吸综合征 抗体 检测
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多重PCR技术检测沙门菌两种四环素耐药基因 被引量:3
8
作者 孔繁德 陆承平 +2 位作者 彭海滨 徐淑菲 陈琼 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期620-623,共4页
应用两对特异性引物同时检测四环素耐药基因tetB和tetC。通过对35株沙门菌分离株的四环素耐药性检测,表明所有沙门菌分离株均含tetC基因,与药敏试验结果阳性符合率65.7%,8株同时含有tetB基因,与药敏试验结果阳性符合率100%,tetB基因和t... 应用两对特异性引物同时检测四环素耐药基因tetB和tetC。通过对35株沙门菌分离株的四环素耐药性检测,表明所有沙门菌分离株均含tetC基因,与药敏试验结果阳性符合率65.7%,8株同时含有tetB基因,与药敏试验结果阳性符合率100%,tetB基因和tetC基因双阳性的菌株与药敏试验结果阳性符合率也为100%。取其中部分菌株扩增出tetB和tetC基因片段进行序列分析,5株菌的tetB基因扩增产物序列完全相同,与质粒pRT11相应序列同源性达99.7%;14株菌的tetC基因扩增产物与质粒pBR322中的相应序列同源性为100%。证实沙门菌耐药基因普遍存在,且同时含有tetB和tetC基因的菌株表现耐药。多重PCR技术同时检测两种四环素耐药基因,适合大量样本的检测,对开展沙门菌四环素多种耐药基因的分子流行病学监测提供了有效途径。 展开更多
关键词 沙门菌 四环素耐药基因 多重PCR
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城市生物多样性问题及保护对策探讨 被引量:5
9
作者 孔繁德 张建辉 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 1995年第5期33-35,共3页
结合秦皇岛市的实际,对城市生物多样性现状和特点、生物多样性保护存在的问题进行了讨论,并提出了城市生物多样性保护的对策。
关键词 生物多样性 协调发展 自然保护区 城市生物
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《中国现代化报告2007——生态现代化研究》述评 被引量:5
10
作者 孔繁德 王连龙 +1 位作者 谭海霞 赵忠宝 《中国环境管理干部学院学报》 CAS 2007年第3期1-5,共5页
《中国现代化报告2007——生态现代化研究》回顾了世界生态现代化的历程,总结了经验,介绍了世界生态现代化的基本原理,分析并评价世界各国生态现代化的水平,进而提出中国生态现代化的战略思考。这个研究报告指出了人类社会发展的方向—... 《中国现代化报告2007——生态现代化研究》回顾了世界生态现代化的历程,总结了经验,介绍了世界生态现代化的基本原理,分析并评价世界各国生态现代化的水平,进而提出中国生态现代化的战略思考。这个研究报告指出了人类社会发展的方向——生态现代化,为此我国必须进一步落实科学发展观,加快实施可持续发展战略,充分发挥后发优势,努力实现跨越式发展,走综合生态现代化的道路。 展开更多
关键词 生态现代化 科学发展观 可持续发展战略 新型工业化 后发优势
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多重PCR技术同时检测牛传染性鼻气管炎和赤羽病方法的建立和应用 被引量:2
11
作者 孔繁德 陈圣军 +2 位作者 徐淑菲 张吉红 唐泰山 《经济动物学报》 CAS 2013年第2期90-95,共6页
为满足同时对IBRV和AKAV进行快速诊断的需要,根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列和赤羽病病毒(AKAV)的S基因序列,设计了2对针对这2种病毒的特异引物,并建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:... 为满足同时对IBRV和AKAV进行快速诊断的需要,根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列和赤羽病病毒(AKAV)的S基因序列,设计了2对针对这2种病毒的特异引物,并建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:该方法能同时扩增得到2条与试验设计相符的311 bp(IBRV)和392 bp(AKAV)特异性条带;IBRV的灵敏度为0.13 pg/25μL,AKAV的灵敏度为1.04 pg/25μL。本试验方法的建立对于加强进出口牛IBRV和AKAV的检验检疫具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 多重PCR 牛传染性鼻气管炎病毒 赤羽病毒
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进境斑嘴环企鹅检出新城疫 被引量:4
12
作者 孔繁德 龚艳清 陈信忠 《中国动物检疫》 CAS 2001年第3期37-37,共1页
关键词 斑嘴环企鹅 新城疫 进境检疫 HI试验 病毒分离试验
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单管顺流式供暖系统方案分析 被引量:2
13
作者 孔繁德 韩建勇 王艳春 《煤炭技术》 CAS 2002年第3期66-67,共2页
根据单管顺流式供暖的使用状况 ,对几种方案的使用进行了分析 ,并分别指出了优缺点和使用建议。
关键词 建筑物 供暖原理 交叉重叠式 跨越锁闭阀 单管顺流式供暖系统
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生态保护是建设生态文明的重要基础 被引量:4
14
作者 孔繁德 王连龙 +1 位作者 谭海霞 赵忠宝 《中国环境管理干部学院学报》 CAS 2008年第1期5-6,21,共3页
十七大提出建设生态文明的奋斗目标,具有极其重大的意义。生态保护在建设生态文明中具有保护生存条件、保障生态安全、保护自然资源及生产力、保障可持续发展、促进生态文明观念在全社会牢固树立等重要作用。因此,生态保护是建设生态文... 十七大提出建设生态文明的奋斗目标,具有极其重大的意义。生态保护在建设生态文明中具有保护生存条件、保障生态安全、保护自然资源及生产力、保障可持续发展、促进生态文明观念在全社会牢固树立等重要作用。因此,生态保护是建设生态文明的物质基础、实现生态现代化的前提、建设生态道德的重要载体。 展开更多
关键词 生态文明 生态保护 生态现代化 生态安全 生态道德
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猪圆环病毒2型厦门株-1的ORF2基因序列分析 被引量:1
15
作者 孔繁德 徐淑菲 +2 位作者 陈琼 黄印尧 陆承平 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第2期177-181,共5页
根据猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列,设计合成1对引物,对PCV2厦门株-1(XM-1)的ORF2基因进行PCR扩增.扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析,可清晰看见1条与设计相符的大小为729 bp的特异条带.提取该片段进行测序,并与国内外24株PCV2毒株的ORF2进... 根据猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列,设计合成1对引物,对PCV2厦门株-1(XM-1)的ORF2基因进行PCR扩增.扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析,可清晰看见1条与设计相符的大小为729 bp的特异条带.提取该片段进行测序,并与国内外24株PCV2毒株的ORF2进行比较,发现得到的PCV2 XM-1的ORF2与广西PCV2分离株(AY556475)核苷酸和氨基酸序列同源性均达到100%,与其它PCV2毒株ORF2的同源性分别为91.6%-99.9%和88.9%-100%,表明厦门地区生猪已感染PCV2,PCV2的ORF2基因与其它毒株有所不同. 展开更多
关键词 猪圆环病毒 ORF2基因 序列分析
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中国长城沿线生态破坏的特点及保护对策 被引量:7
16
作者 孔繁德 《水土保持研究》 CSCD 北大核心 2006年第2期42-43,共2页
中国长城沿线位于暖温带与温带的过渡地区,自东向西分别为半湿润气候、半干旱气候、干旱气候;地形地貌又多变化;因此生态脆弱。由于各种原因,中国长城沿线生态破坏严重,其中东段以水土流失为主,生态破坏的比较严重;中段则水土流失和风... 中国长城沿线位于暖温带与温带的过渡地区,自东向西分别为半湿润气候、半干旱气候、干旱气候;地形地貌又多变化;因此生态脆弱。由于各种原因,中国长城沿线生态破坏严重,其中东段以水土流失为主,生态破坏的比较严重;中段则水土流失和风沙并重;生态破坏严重,西段以风沙侵蚀为主;生态破坏很严重。中国长城沿线生态保护应以科学发展观为指导,因地制宜,保持水土及防沙治沙,宜林则林,宜草则草,工程措施与生物措施相结合,人工治理与自然恢复相结合。 展开更多
关键词 生态脆弱 生态破坏 因地制宜 自然恢复 生态保护
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牛病毒性腹泻-粘膜病的最新研究进展 被引量:56
17
作者 孔繁德 陆承平 《福建畜牧兽医》 2005年第3期9-13,共5页
关键词 研究进展 牛病毒性腹泻病 接触性传染病 粘膜病病毒 临床类型 持续感染 免疫耐受 免疫抑制 怀孕母牛 主要特征 BVD 白细胞 先天性 溃疡 咳嗽 流产 畸形 死胎
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从进境大火烈鸟中检出衣原体病 被引量:1
18
作者 孔繁德 陈信忠 +3 位作者 龚艳清 周斌华 王景明 郑征 《中国动物检疫》 CAS 2001年第11期39-39,共1页
关键词 大火烈鸟 进境检疫 衣原体病
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秦皇岛市气候变化对可持续发展的影响及对策 被引量:6
19
作者 孔繁德 李宝香 《中国环境管理干部学院学报》 CAS 2002年第4期1-4,共4页
秦皇岛市46年来气候变暖变干,年平均气温提高1.8℃,≥10℃年积温增加11.4%,无霜期延长22天,但年平均降水量却减少11.5%。这对农业和工业的影响弊大于利,对旅游业的影响则有利有弊。为此应趋利避害,加强水资源的开源节流,发展节水经济... 秦皇岛市46年来气候变暖变干,年平均气温提高1.8℃,≥10℃年积温增加11.4%,无霜期延长22天,但年平均降水量却减少11.5%。这对农业和工业的影响弊大于利,对旅游业的影响则有利有弊。为此应趋利避害,加强水资源的开源节流,发展节水经济和循环经济,发展休闲度假旅游,延长旺季。 展开更多
关键词 气候变化 可持续发展 节水经济 休闲度假旅游 循环经济
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秦皇岛北部山区水土流失的特点及形成因素与防治对策 被引量:5
20
作者 孔繁德 《水土保持研究》 CSCD 2003年第2期52-54,共3页
秦皇岛北部山区水土流失较严重 ,且滑坡、泥石流较多 ,多发生在洪水期 ,主要分布在阳坡 ,其形成原因有地形、岩性、气候和人为因素等 ;为保持水土应划定重要生态功能区进行抢救性保护 ,采取封山育林、退耕还林。
关键词 秦皇岛 水土流失 封山育林 退耕还林 特点 成因 防治 生态功能区
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