基于量子点的非洲猪瘟病毒抗体荧光免疫层析试纸研制

为了研发灵敏、准确的非洲猪瘟快速诊断试纸产品,本研究基于免疫层析技术原理,以非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白三聚体为检测抗原,量子点(QDs)为标记材料,金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)为检测线,p72单克隆抗体为质控线,建立了非洲猪瘟病毒抗体荧光免疫层析试纸,并对试纸的检测性能进行鉴定。结果:荧光免疫层析试纸检测ASFV标准阳性血清的效价为1∶102400,与猪瘟病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒及猪圆环病毒2型阳性血清抗体无交叉反应,在临床样本检测中与商业化ASFV抗体检测试剂盒的符合率为92.92%。综上,该试纸具有良好的灵敏度、特异性、准确性及稳定性,可用于临床样品中ASFV抗体的快速筛查。

减蛋综合征病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用

为建立快速检测减蛋综合征病毒(EDSV)抗体的方法,基于EDSV的Fiber蛋白,制备快速检测EDSV抗体的免疫层析试纸条,为养禽业提供针对病原微生物的感染预警及免疫评估。利用胶体金标记EDSV Fiber蛋白抗原为探针,将羊抗鸡IgG和抗Fiber蛋白的抗体包被到硝酸纤维膜上,分别作为质控线和检测线,对家禽EDSV抗体水平进行监测。结果表明,制备的EDSV免疫层析试纸条具有高度特异性,与其他家禽病毒抗体无交叉反应,仅与EDSV抗体反应,在试纸条上产生可见的检测线;并且制备的试纸条具有高度稳定性,在室温条件下可至少保存6个月。应用制备的检测EDSV抗体的免疫层析试纸条对从河南、安徽、山东等地养鸡场采集的576份鸡血清样本检测,与血凝抑制试验(HI)结果进行平行比较,二者的Kappa值为0.878,具有良好一致性。综上,制备的检测ESDV抗体的免疫层析试纸条具有高度的特异性、敏感性、稳定性和易操作性,对EDSV抗体的临床检测具有实际应用价值。

基于化学发光酶免疫分析法检测花生过敏原Ara h 2

Ara h 2是花生主要过敏原之一,为开发食物中Ara h 2过敏原成分的快速检测方法,减少因误食导致花生过敏事件的发生,该研究采用鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度,建立了一种检测花生过敏原Ara h 2的间接双抗夹心化学发光酶免疫分析法,并对该方法的灵敏度、准确度、精密度和特异性进行评价。该方法的检出限为1.085 ng/mL,线性范围为3.12~200 ng/mL,添加回收率为78.30%~94.39%,批内和批间变异系数均小于10%,且特异性良好,与其他常见食物过敏原无交叉反应。该方法与相同抗体所建立的间接双抗夹心酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法相比,在灵敏度上表现出一定优势。该研究开发的化学发光酶免疫分析法可对花生食品生产过程中和消费前的Ara h 2过敏原成分检测提供可靠的技术支持。

量子点免疫层析技术在兽药残留快速检测中的应用

近年来,免疫层析技术在动物源食品的现场快速检测中发挥了重要作用,对开展兽药残留高效监管提供了有力保障。量子点作为新型荧光材料,用作免疫层析检测中的标记材料,能够有效提高检测性能,在快速检测技术研究领域具有广阔的应用前景。文章总结了量子点的分类、合成及免疫探针的制备,综述了量子点免疫层析技术在动物源食品兽药残留快速检测中的应用进展,并对量子点免疫层析检测技术在量子点合成、兽药人工抗原及抗体制备方面的研究进行了展望。

一种通用型半抗原免疫层析试纸的制备及在双咪苯脲上的应用

为了提高单克隆抗体筛选效率,降低免疫层析检测方法建立门槛,利用生物素标记人工抗原为探针,以亲和素固定于硝酸纤维素膜上为检测线,建立了通用型半抗原免疫层析试纸,并将其应用于双咪苯脲(IM)单克隆抗体的筛选及残留检测。结果表明,利用碳二亚胺法成功制备了IM人工抗原及生物素探针;通过免疫小鼠及杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体;应用试纸筛选,成功获得IM单克隆抗体细胞株1株,其效价为1∶32000,灵敏度为6.25 ng/mL。基于该单抗及通用型半抗原免疫层析试纸建立了IM免疫层析检测试纸,检测牛奶中IM的灵敏度为7 ng/mL。该试纸及其探针制备方法可以通用于半抗原抗体筛选,为抗体筛选提供了一种更高效的方法;无需免疫层析试纸研发平台即可建立半抗原免疫层析检测方法,为免疫层析试纸的研发提供了新的技术手段。

免疫层析技术在食物过敏原快速检测中的应用进展

食物过敏是重要的公共卫生问题之一,严重威胁着过敏人群的健康,为保障过敏人群食品安全,针对食物过敏原开展检测方法研究尤为必要。近年来,针对食物过敏原的快速检测技术发展迅速,其中,免疫层析技术因其具有检测效率高、成本低、特异性强等优点,在快速检测中得到广泛应用。该文简述了主要食物过敏原及免疫层析技术的检测原理,对食物中植物源性食物过敏原(花生、大豆、小麦和树生坚果过敏原)和动物源性食物过敏原(牛奶、鸡蛋、甲壳类和鱼类过敏原)的免疫层析检测方法进行系统总结,并对其发展方向进行展望。

抗球虫药的人工抗原合成及免疫分析方法研究进展

抗球虫药在畜禽业应用广泛,但不合理使用会导致其在动物性食品中残留超标,对人类健康造成威胁。近年来,食品安全监督抽检中抗球虫药残留超标时有发生,因此,实现动物性食品中抗球虫药残留的高效快速检测,有利于兽药残留的有效监管。在众多残留检测方法中,免疫分析方法具有灵敏度高、特异性强,操作简单等优点,适用于大批量样品的现场快速检测。该文综述了抗球虫药人工抗原的合成方法,并对其免疫分析方法进行归纳总结,以期为开发更高效的抗球虫药残留分析方法提供参考。

基于p72蛋白的非洲猪瘟病毒抗体检测试纸研制

为了研制灵敏、准确、特异及稳定的非洲猪瘟抗体快速检测试纸产品,以非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白为检测抗原,以金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)为拦截线,对比重组蛋白p72的不同状态对试纸检测性能影响,优化标记条件、喷膜浓度、样品垫缓冲体系及成分、显色时间等因素,确定ASFV抗体检测试纸产品化的具体参数,并对试纸的特异性、均一性、准确性及稳定性进行鉴定。结果显示,试纸的检测敏感性为1∶51200,优于商业化ASFV检测试剂盒,与其他猪源病毒阳性血清无交叉反应,变异系数小于10%,在临床样本检测中未见假阴性及假阳性结果,具有良好的敏感性、特异性、均一性及准确性;经加速稳定试验验证,可以室温保存1 a以上;与进口商品化试剂盒的总符合率为91.6%。综上,成功研制了ASFV抗体检测试纸,且试纸的检测性能良好,可以用于ASFV抗体的快速筛查。

基于量子点技术的猪伪狂犬病病毒gB抗体免疫层析试纸研究

【目的】建立一种基于量子点(quantum dots,QDs)技术的猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gB抗体免疫层析试纸,为PRV疫苗免疫效果评估提供一种快速、简便的检测技术。【方法】选用昆虫细胞表达系统表达的gB蛋白,采用羧基修饰的水溶性QDs,在偶联剂1-乙基-3[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)的作用下制备gB-QDs荧光标记物。将金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcus aureus protein A,SPA)和抗gB蛋白的单克隆抗体分别固定在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,将样品垫、标记垫、吸水垫、支撑底板按生产工艺组装成基于QDs的荧光免疫层析试纸。检测该试纸的特异性、敏感性及与商品化ELISA试剂盒的符合率。【结果】敏感性试验结果显示,该试纸的敏感性为1∶6400。特异性试验结果显示,该试纸与猪瘟病毒(CSFV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清均无交叉反应,特异性为100%。通过检测田间猪血清样品,对比商品化ELISA检测试剂盒,结果显示,113份田间猪血清样品中,两种方法检测结果不一致的血清有11份,结果一致的血清有102份,该试纸与商品化ELISA试剂盒的符合率为90.3%。【结论】本研究制备的试纸检测线紫外灯下显色清晰可见,辨识度高,具有较高的特异性和敏感性,可用于PRV gB抗体的检测。

常态社会下大学生健康信息在线获取感知价值影响因素模型研究

[目的/意义]本文旨在促进在线健康社区发展,提升大学生健康信息在线获取价值感知。[方法/过程]采用半结构化访谈法收集原始数据,运用扎根理论,借助Nvivo 12对数据进行编码分析,构建大学生健康信息在线获取感知价值影响因素模型。[结果/结论]模型包括个人因素、环境因素、信息因素、平台因素及感知价值,全面梳理了影响大学生健康信息感知价值组态影响相关变量的范畴,未来将通过实证研究进一步验证模型的有效性。

真菌毒素性质及免疫原制备方法的研究进展

真菌毒素是一些真菌在生长过程中所产生的毒性很强的次级代谢产物,通过食品或饲料危害动物和人类的健康及安全。能充分认识真菌毒素性质,准确快速的检测真菌毒素是控制其危害的最有效手段,现阶段酶联免疫(ELISA)检测方法已经成为真菌毒素快速检测的主要趋势,本文对一些主要真菌毒素的性质、种类、危害以及真菌毒素的ELISA检测方法中重要环节——免疫原制备方法的研究做一综述。

抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及免疫学鉴定

通过碳化二亚胺法(EDC法)制备免疫原OTA-BSA,并免疫小鼠,经杂交瘤技术建立产抗赭曲霉毒素A(OTA)单克隆抗体的杂交瘤细胞株1株。通过体内诱生腹水法制备腹水,纯化后对其亚型、效价、灵敏性、亲和性、特异性等免疫学特性进行鉴定;单抗亚类为IgG1型,间接ELISA效价1:6.4×105,IC50为112.8pg/mL,亲和常数为9.74×1011L/mol,与赭曲霉毒素B交叉反应率为5.6%,与其他常见真菌产物交叉小于0.003%;本实验制备的抗OTA单克隆抗体具有高效、敏感、特异等特点,适合OTA的免疫学快速检测。

赭曲霉毒素A人工抗原的合成与鉴定

采用N-羟琥珀酰亚胺酯(N-hydroxysuccinimide NHS)法将赭曲霉毒素A(OTA)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备了免疫抗原OTA-BSA,采用1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)法将赭曲霉毒素A(OTA)与卵清白蛋白(OVA)偶联制备了包被抗原OTA-OVA。紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳结果初步表明偶联成功。用OTA-BSA分10μg/只和50μg/只两个剂量分别免疫BALB/C小鼠,获得了高效价的特异性多克隆抗血清,效价可达1∶104,抑制效价达14.7ng,证明偶联成功,并显示低剂量免疫可以提高小鼠pAb的敏感性。本研究为OTA单抗的制备及其免疫学分析方法的建立奠定了基础。

腓骨长肌肌腱重建踝关节外侧副韧带

踝关节扭伤是最常见的肌肉骨骼损伤,特别是在经常活动的人群中,占所有运动相关损伤的20%。踝关节扭伤后会使患者踝关节肿胀、疼痛,根据最初治疗方法及所涉及韧带的数目,有高达40%的患者由于外侧副韧带损伤最终逐渐成为慢性踝关节不稳,严重影响患者的生活质量。其中腓骨短肌肌腱重建外侧副韧带治疗踝关节不稳为常用的手术方法,但术后并发症较多。

电梯控制系统组态设计

介绍了基于三菱FXIN-60MR可编程控制器和MCGS组态软件的电梯控制系统。阐述了电梯控制系统的组成及PLC和MCGS的程序设计方法。PLC执行可靠有效地分散控制及采集现场数据,MCGS组态软件制作人机对话界面,进行系统的监控和管理。实践证明,PLC和MCGS组态软件结合有利于PLC控制系统的设计、检测、监控、维护。

北京市16所养老机构老年人对护理安全问题认知状况的调查分析及对策

目的:了解目前北京市各级养老机构老年人对护理安全问题的认知状况及相关影响因素,为强化安全管理,改进管理措施提供参考。方法:采用问卷调查法,对北京市16所不同级别的养老机构的1025位老年人进行了抽样调查。结果:有98.5%的老年人认为安全问题非常重要;认为入住养老机构后容易发生如跌倒(占21.1%)、皮肤压伤、走失等不安全问题;认为影响护理安全的相关因素主要与预防安全知识的宣传和护理安全防护措施的落实有关;同时调查还了解到只有26.4%的老年人或照顾者了解如何预防护理安全问题的知识;有38.1%的被调查者否认获得过预防安全知识的宣传指导。结论:各级养老机构应从老年人及其家属对安全方面的认知特点入手,充分了解影响医疗护理安全的相关因素,采取相应对策,满足老年人对预防安全问题的服务需求,从而保障老年人的生命健康和生活质量。

高灵敏度磁荧光免疫层析试纸模式构建及在呕吐毒素检测中的应用

构建基于磁荧光纳米材料的免疫层析试纸模式,弥补现在免疫层析技术的不足,为更灵敏的免疫学快速检测提供技术支撑。以呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)为靶标,采用溶剂热法制备羧基修饰的超顺磁颗粒,碳二亚胺法将磁颗粒、绿色荧光蛋白及DON单克隆抗体进行偶联,一步法制备磁荧光抗体探针,以DON人工抗原(DON-BSA)为检测线建立磁荧光免疫层析试纸。同时用胶体金标记DON单克隆抗体,以DON-BSA为检测线建立胶体金免疫层析试纸;制备的磁荧光抗体探针具有很好的磁性、荧光特性及抗体反应性,基于该探针成功制备了DON磁荧光免疫层析试纸,该试纸回归方程为y=-0.562x+0.921,R^(2)=0.990,IC_(50)为5.611 ng/mL,检出限为1.089 ng/mL;制备了DON胶体金免疫层析试纸,该试纸裸眼检测灵敏度为500 ng/mL;定量检测回归方程为y=-0.543x+1.485,R^(2)=0.991,IC_(50)为65.16 ng/mL,检出限为11.94 ng/mL。DON磁荧光免疫层析试纸的灵敏度是胶体金免疫层析试纸的10.96倍。本实验建立的磁荧光免疫层析试纸模式可以同时实现样品的富集及荧光信号检测,提高检测灵敏度,并成功用于DON的检测,为磁荧光纳米颗粒广泛应用于免疫层析领域提供参考。

血清Ⅰ型前胶原羧基端肽和Ⅲ型前胶原氨基端肽预测充血性心力衰竭药物疗效的临床价值

目的探讨充血性心力衰竭(CHF)患者应用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)/血管紧张素受体抑制剂(ARB)和(或)β受体阻滞剂等药物治疗后,血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)的变化及其临床意义。方法86例CHF患者根据治疗药物的不同分三组:ACEI/ARB组,29例,倍他乐克组,24例;ACEI/ARB+倍它乐克组,33例;47例体检健康者为对照组。采用放射免疫法测定对照组、CHF患者入院时及规范治疗6w后血清PⅠCP和PⅢNP浓度。应用多普勒超声测算:左室射血分数(LVEF)、E峰和A峰及两者比值(VE/VA)、左室内径(LVID)。结果各组CHF患者及对照组之间基本临床资料(性别、年龄等)差异不显著。各组CHF患者NYHA分级和LVEF也无显著差异。CHF患者血清PⅠCP和PⅢNP均明显高于对照组(P<0.01)。3组CHF患者治疗6w后,NYHA分级和LVEF较治疗前均明显改善(P<0.01,P<0.05),血清PⅠCP和PⅢNP较治疗前也均明显降低(P<0.01)。相关分析显示,PⅠCP和PⅢNP水平与LVID呈正相关,与LVEF、VE/VA呈负相关。结论血清PⅠCP和PⅢNP水平可预测CHF患者药物治疗反应效果。

展筋活血散治疗足踝部急性软组织损伤临床分析

目的:探讨展筋活血散对足踝部急性损伤治疗作用。方法:选取2016年6月至2017年2月来我院足踝外科门诊及病房就诊的60例足踝部急性损伤患者,随机分为治疗组和对照组,每组30人。治疗组患者使用展筋活血散治疗,对照组患者使用布洛芬缓释胶囊治疗。2周后,观察两组患者的临床疗效,治疗前后的疼痛评分、肿胀评分、压痛评分和功能障碍评分,以及肿胀消退影像学指标T2。结果:治疗2周后,治疗组的临床总有效率达到90.0%,而对照组的总有效率仅为53.3%,两组差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组的疼痛评分、肿胀评分、压痛评分和功能障碍评分均显著降低(P<0.05),但两组间比较,除肿胀评分和压痛评分外,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组治疗前后磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging,MRI)检查T2值比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且治疗组变化幅度更大,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:展筋活血散能显著改善足踝部急性软组织损伤的临床症状,且对肿胀消退影像学指标也有显著改善,可在临床推广。

ST段抬高型急性心肌梗死直接PCI时机与预后的关系

将160例ST段抬高急性心肌梗死(STEMI)患者根据胸痛发作到开始介入治疗的时间分为三组:A组(<4h)40例,B组(4～6h)53例,C组(>6～12h)67例。比较三组术后心肌梗死溶栓试验(TIMI)血流3级率、ST段无回落率、出院前左室射血分数和住院期间主要不良心脏事件发生率。结果A组术后TIMI血流3级率和出院前左室射血分数显著高于B组和C组,ST段无回落率和住院期间主要不良心脏事件发生率均显著低于B组和C组。B组和C组比较,以上四项指标均无显著差异。认为STEMI4h内介入治疗开始可显著提高术后TIMI血流3级率,改善心肌组织再灌注、心功能和近期预后;4h后介入治疗则无明显的时间依赖性。