甜茶树苷H对高糖致小鼠肾足细胞损伤的作用研究

[目的]探究甜茶树苷H抑制NLRP3/ASC/Caspase1通路从而改善高糖导致的小鼠肾足细胞(MPC-5)的损伤作用。[方法]试验采用不同浓度(0、3.25、7.5、15、30、60、120μmol/L)甜茶树苷H分别孵育MPC-5细胞,通过CCK-8法检测细胞活力,判定安全给药浓度。将MPC-5细胞分为空白对照组(CON)、D(+)-无水葡萄糖等渗对照组(MA)、高糖组(HG)以及不同浓度(3.25、7.5、15μmol/L)甜茶树苷H组(CY3.25、CY7.5和CY15组)。HG和不同浓度甜茶树苷H组分别加入30μmol/L D(+)-无水葡萄糖,MA组加入5.5 mmol/L D(+)-无水葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇,CON组加入不含FBS的DMEM培养基,孵育细胞24 h后,CY3.25、CY7.5和CY15组培养基更换为不同浓度甜茶树苷H,并再次孵育细胞24 h。收集细胞,采用CCK-8法和乳酸脱氢酶(lactate hydrogenase,LDH)法分别检测细胞活力和损伤程度;利用碘化丙啶(PI)荧光染色法检测细胞凋亡率;通过免疫荧光法观察MPC-5细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)共定位情况;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-1β前体(Pro-IL-1β)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;通过Western blotting检测NLRP3、ASC、半胱氨酸天冬酶1(Caspase1)/半胱氨酸天冬酶1前体(Pro-Caspase1)以及肾结蛋白(Desmin)、肾病蛋白(Nephrin)、线粒体裂变因子(MFF)、胶原Ⅳ(CollagenⅣ)蛋白表达量。[结果]与0μmol/L甜茶树苷H组相比,7.5和15μmol/L甜茶树苷H组细胞活力显著升高(P<0.05),30、60和120μmol/L甜茶树苷H组细胞活力显著降低(P<0.05)。因此,后续选择3.25~15μmol/L为甜茶树苷H的安全作用浓度。采用以上安全作用浓度甜茶树苷H处理细胞,结果显示,与HG组相比,CY3.25、CY7.5和CY15组细胞活力显著升高(P<0.05),细胞上清液中LDH活力显著降低(P<0.05),且呈现剂量依赖性;CY7.5和CY15组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。免疫荧光法检测结果显示,与CON组相比,HG组细胞中NLRP3、ASC荧光增强且出现红绿荧光标记重叠现象;与HG组相比,CY3.25、CY7.5组细胞中NLRP3、ASC荧光减弱,未观察到红绿荧光标记重叠现象,CY15组细胞中NLRP3、ASC无荧光阳性标记。ELISA检测结果显示,与HG组相比,CY15组细胞中IL-1β和Pro-IL-1β释放量比值显著降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与HG组相比,CY15组细胞中NLRP3、ASC、Desmin、MFF、CollagenⅣ及Caspase1/Pro-Caspase1表达量均显著降低(P<0.05),Nephrin蛋白表达量显著升高(P<0.05)。[结论]甜茶树苷H能改善高糖诱导导致的MPC-5细胞损伤,其主要通过改变NLRP3/ASC/Caspase1通路中相关蛋白的表达,从而发挥对细胞的保护作用。

草质素对巨噬细胞铁死亡效应的影响

【目的】研究草质素对RAS-选择性致死小分子3(RSL-3)诱导的RAW264.7巨噬细胞铁死亡效应的抑制作用,探究草质素对巨噬细胞铁死亡的影响。【方法】利用0、5、10、20、40、80μmol/L草质素处理RAW264.7巨噬细胞48 h后,用CCK-8法检测细胞活力。将RAW264.7巨噬细胞分为对照组(Control)、RSL-3(15μmol/L)组、草质素(20、40、80μmol/L)组、铁死亡抑制剂铁抑素-1(10μmol/L Fer-1)组,草质素组和Fer-1组分别与RSL-3共孵育48 h,通过乳酸脱氢酶(LDH)试验检测各组细胞损伤效应,利用比色法检测各组细胞裂解液中铁离子、谷胱甘肽及丙二醛(MDA)含量。利用荧光探针法检测各组细胞胞浆内Fe^(2+)荧光强度、线粒体膜电位(MMP)和脂质活性氧(ROS)水平。采用Western blotting检测各组细胞裂解液核因子红细胞系2相关因子2(Nrf-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPX-4)的表达量。【结果】与0μmol/L草质素组相比,40μmol/L草质素可显著增强巨噬细胞活力(P<0.05);与40μmol/L草质素组相比,80μmol/L草质素组细胞活力显著降低(P<0.05),故5~40μmol/L为药物安全浓度。与对照组相比,RSL-3组细胞内LDH活性、总铁离子浓度、Fe^(2+)浓度、Fe^(3+)浓度、Fe^(2+)平均荧光强度、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量、GSSG占总谷胱甘肽的百分比及MDA水平均显著升高(P<0.05);细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量、总谷胱甘肽含量、GSH占总谷胱甘肽的百分比、MMP相对百分比及脂质ROS荧光比值均显著降低(P<0.05),提示出现铁死亡效应。与RSL-3组相比,40μmol/L草质素组细胞内LDH活性、总铁离子浓度、Fe^(2+)浓度、Fe^(3+)浓度、Fe^(2+)平均荧光强度、GSSG含量、GSSG占总谷胱甘肽的百分比及MDA水平均显著降低(P<0.05);GSH含量、总谷胱甘肽含量、GSH占总谷胱甘肽的百分比、MMP相对百分比及脂质ROS荧光比值均显著升高(P<0.05)。与Fer-1组相比,40μmol/L草质素组的上述所有指标均无显著差异(P>0.05)。Western blotting结果表明,与RSL-3组相比,40μmol/L草质素显著升高了Nrf-2、HO-1和GPX-4的表达量(P<0.05);与Fer-1组相比,40μmol/L草质素组的上述指标均无显著差异(P>0.05)。【结论】草质素通过调控RSL-3诱导的RAW264.7巨噬细胞铁死亡相关分子指标,升高了GPX-4的表达水平,并激活其Nrf-2/HO-1通路发挥抑制RAW264.7巨噬细胞的铁死亡效应。本研究通过离体试验初步揭示了40μmol/L草质素可显著改善巨噬细胞铁死亡损伤效应及其机制。

成人Chiari畸形Ⅰ型后颅窝线性容积特征与小脑扁桃体下疝程度和脊髓空洞的相关性分析

目的：探讨成人Chiari畸形Ⅰ型（Chiari malformation type Ⅰ，CMⅠ）患者后颅窝线性容积特征及其与脊髓空洞和小脑扁桃体下疝程度之间的相关性。方法：收集2010年6月~2014年6月在我院接受治疗的CMⅠ患者，入选标准为：（1）年龄＞30岁；（2）经头颈部MRI确诊为CMⅠ伴或不伴脊髓空洞；所有入选患者均排除颅内占位性病变、颅骨破坏、后颅窝手术史或获得性Chiari畸形。选取年龄匹配的正常成人作为对照组，测量两组头颅正中矢状位MRI中斜坡长度、枕骨大孔横径、枕上长度、后颅窝矢状径、后颅窝高径和后颅窝斜坡倾斜角α等指标，并将两组按性别分组后比较后颅窝线性容积差异。同时根据小脑扁桃体下疝程度及是否伴发脊髓空洞进行分组，分析后颅窝线性容积特征与小脑扁桃体下疝程度及脊髓空洞的关系。结果：共纳入CMⅠ患者37例，男18例，女19例；年龄38.5±5.5岁（31～56岁）。正常对照组41例，男19例，女22例；年龄36.4±6.3岁（33～58岁），成人CMⅠ患者后颅窝斜坡长度、枕上长度、后颅窝矢状径、后颅窝高径及斜坡倾斜角分别为35.9±4.2mm、38.2±5.8mm、77.4±6.1mm、28.2±3.9mm和47.4°±6.4°，均明显小于正常对照组（43.3±2.9mm、43.5±5.6mm、82.5±4.5mm、35.4±3.4mm、58.6°±5.7°，P＜0.05）；伴脊髓空洞的成人CMⅠ组患者斜坡倾斜角（45.8°±7.6°）较单纯CMⅠ组（49.7°±5.1°）显著减小；Ⅱ度扁桃体下疝CMⅠ患者的后颅窝斜坡长度（31.4±3.6mm）及倾斜角（42.3°±5.4°）明显小于Ⅰ度扁桃体下疝CMⅠ患者（36.2±3.8mm、48.1°±5.2°；P＜0.05），余指标未见明显差异。结论：成人CMⅠ患者的后颅窝容积明显减少，但与脊髓空洞和扁桃体下疝程度之间无显著相关性；CMⅠ患者斜坡发育不良与脊髓空洞的形成以及小脑扁桃体下疝程度存在一定相关性。

RAGE与糖尿病肾病

目的探讨RAGE(Receptor for Advanced Glycation End products)受体的结构与糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)的相关配体、调节蛋白以及RAGE作为DN靶点的研究进展。方法通过文献查阅,总结归类RAGE与结合蛋白的关系。结果现代研究表明,RAGE及各类结合配体以及调节蛋白是介导DN发挥作用的关键分子。结论 RAGE和各类配体以及调节蛋白的相互作用能够作为糖尿病肾脏保护新药研发的突破口。

浅谈独立学院制药工程专业药理学理论课教与学之策略

药理学是医学与药学的桥梁学科。在独立学院制药工程药理学课程的教学实践中,笔者发现诸多问题。为了能够让教师提高课堂教学效率,学生更好地接受药理学理论知识,我们总结出一系列教与学之策略,这为激发此类院校制药工程专业学生的学习兴趣,提高教学质量提供了新的方向。

背根神经节微量注射7-硝基吲唑抑制炎症性疼痛

目的:观察完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)诱导炎症性疼痛的现象,并探究背根神经节(DRG)部位注射神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)对于炎症性疼痛是否有镇痛作用并简要探讨其镇痛机制。方法:小鼠足底注射10μl CFA诱导炎症性疼痛动物模型,使用von Frey纤维丝采用up-and-down的方法测定小鼠的50%足底回缩阈值(50%paw withdrawal threshold,50%PWT)作为痛觉行为学的评价指标。在小鼠的背根神经节部位微量注射10μg 7-NI观察50%PWT的变化情况。用免疫印迹的方法观察炎症相关的降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)在CFA诱导模型后、造模后给予7-NI和nNOS基因敲除小鼠造模后的表达情况。结果:与DMSO组相比,7-NI组造模后2～12 h 50%PWT显著升高。观察到CGRP的表达量在CFA诱导后增加,而在给予7-NI和nNOS基因敲除组内CGRP的表达增加可以被逆转。结论:小鼠DRG部位注射7-NI对炎症性疼痛具有镇痛作用,且炎症性疼痛中CGRP表达量的增加可能是一氧化氮(nitric oxide,NO)在DRG内起疼痛敏感性作用的下游机制。

镇痛药分子靶点的研究进展

慢性疼痛是由于复杂的病理生理学机制导致的疾病。通常把慢性疼痛划分为炎性疼痛和神经病理性疼痛,目前对于慢性疼痛的治疗方法缺乏有效的手段。本文主要阐述概括镇痛药的靶点研究进展,论述各种靶点介导疼痛的机制、疼痛传导信号的发现过程以及在这一领域中的应用前景。

双胞胎青少年特发性脊柱侧凸的发病特点

目的 :观察青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)双胞胎的共同发病率,比较同卵双胞胎之间的发病特点。方法:2007年1月~2016年12月期间我院收录同时患有AIS的双胞胎患者21对,其中女19对(含三胞胎1例),男2对,记录其初诊年龄、女性月经初潮年龄、BMI、Cobb角、胸椎后凸角、腰椎前凸角、Risser征等资料。通过短串联重复序列检测明确区分同卵双胞胎与异卵双胞胎,比较同卵双胞胎和异卵双胞胎的AIS共同发病率。选取同卵双胞胎中两人Cobb角差值≥10°的病例,将其中度数大者纳入侧凸较大组,度数小者纳入侧凸较小组,采用配对样本t检验比较两组之间初潮年龄、BMI、Risser征临床资料的差异。结果:21对双胞胎平均初诊年龄13.2±2.5岁,女性月经初潮年龄12.2±1.4岁,初诊时平均Cobb角29.2°±14.8°,胸椎后凸角16.8°±9.2°,腰椎前凸角45.5°±7.4°,BMI 17.0±1.6kg/m2,Risser征2.3±1.6。21对双胞胎中同卵双胞胎17对,异卵双胞胎4对。同卵双胞胎中16对(94.1%)共同患有AIS,11对(68.8%)弯型一致,4对(25.0%)Cobb角差值小于10°。异卵双胞胎中3对(75.0%)共同患有AIS,1对(33.3%)弯型一致,1对(33.3%)Cobb角差值小于10°。同卵双胞胎中Cobb角差值≥10°者12对,侧凸较大组的月经初潮年龄和BMI均小于侧凸较小组(P<0.05),Risser征两组之间无统计学差异(P>0.05)。结论 :同卵双胞胎AIS患者共同发病率较高(94.1%)且弯型一致,但同卵双胞胎两者间畸形严重程度不一,双胞胎中畸形较重者的月经初潮年龄较小、BMI较低。

退变性腰椎滑脱French分型和CARDS分型的可重复性与可信度研究

目的 :对退变性腰椎滑脱的French分型及CARDS分型进行可重复性与可信度的对比分析,探讨两种分型在退变性腰椎滑脱患者中的应用价值。方法:回顾性分析2012年1月~2016年6月期间118例腰椎退变性滑脱(L4/5 91例、L5/S1 27例)患者,其中男性26例,女性92例,平均年龄61.1±8.1岁。3名脊柱外科医师对患者术前X线片独自进行两次测量,分别使用French分型和临床与影像学分型(clinical and radiographic degenerative spondylolisthesis,CARDS分型)进行评估和分型,收集结果 ,作同一观察者间可重复性及不同观察者间可信度分析。应用Kappa值比较分析两种分型的差异性。结果:3位观察者使用French分型系统共进行708次(118例×3×2次)分型,包括1型261次,2型107次,3型83次,4型54次,5型203次,观察者内分型一致率80.5%~86.4%(Kappa值0.740~0.815),属于"基本可信";观察者间分型一致率为79.7%~82.2%(Kappa值0.728~0.758),属于"基本可信"。测量并分型单个患者平均花费时间约138s。CARDS分型系统共708次分型中,包括A型(A1)19次,B型(B1 90次,B2 59次)149次,C型(C1 291次,C2 108次)399次,D型(D1 98次,D2 43次)141次,观察者内总体一致率90.7%~93.2%(Kappa值0.878~0.911),属于"完全可信";观察者间总体一致率88.1%~94.1%(Kappa值0.844~0.921),属于"完全可信"。测量并分型单个患者平均花费时间约67s。结论 :两种分型系统具有较高的可重复性与可信度,CARDS分型可信度与可重复性优于French分型。

直驱多轿厢电梯群控系统的客流交通模式识别

在直驱多轿厢电梯运行中,乘客客流交通模式是影响电梯系统运行性能的一个重要因素。为了提高系统的服务标准,制定合理的群控调度策略,实现系统的优化调度,设计了基于目的层预约的直驱多轿厢电梯群控系统。在乘客客流交通信息提前预知的情况下,利用模糊逻辑控制,通过建立隶属度函数、模糊规则等步骤对多轿厢电梯系统的客流交通模式进行识别。最后,通过应用实例将模糊控制与BP神经网络算法进行对比,结果表明,在试验样本有限的条件下,基于目的层预约的直驱多轿厢电梯群控系统中采用模糊逻辑控制可以更加方便、准确地识别不同的客流交通类型,这为系统进一步的优化调度奠定了基础。

基于变论域模糊PID的垂直提升系统控制研究

在永磁同步直线电机垂直提升系统中,为解决系统的永磁同步直线电机在运行过程中存在的非线性,负载干扰,参数变动等问题,使垂直提升系统更加平稳的运行。文中结合传统PID控制、模糊控制以及变论域的思想,设计出了可变论域的模糊PID控制器对垂直提升系统的永磁同步直线电机进行控制。通过Matlab/Simulink对提升系统的永磁同步直线电机进行建模及仿真。仿真结果表明,可变论域的模糊PID控制器可以更好的改善系统的控制精度及鲁棒性。

梓醇抑制Galectin-3和CD146互作改善AGEs致肝窦内皮细胞的损伤作用

【目的】探讨梓醇通过影响半乳糖凝集素-3(Galectin-3)和CD146的相互作用改善晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)导致大鼠肝窦内皮细胞(rat liver sinusoidal endothelial cells,RLSECs)的炎性损伤作用。【方法】用不同浓度(0、0.1、1、10μmol/L)梓醇分别孵育RLSECs 48 h后,采用CCK-8法观察细胞增殖情况。用10μmol/L梓醇孵育RLSECs 0、12、24、48、96 h,同上法观察细胞增殖情况。设Control(空白对照组)、AGEs(AGEs处理)、Cat1(1μmol/L梓醇)、Cat10(10μmol/L梓醇)和阳性对照GB1107组(1μmol/L GB1107),Cat1、Cat10和GB1107组加入相应含量的药物培养基孵育30 min后,除Control组外其他组均在培养基中加入终浓度为200μg/mL的AGEs刺激,观察以上各组的RLSECs形态变化,采用乳酸脱氢酶(lactate hydrogenase,LDH)法检测细胞的损伤程度,采用ELISA法观察各组单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的分泌量。将巨噬细胞RAW264.7种板,同上法分组并给药,48 h后采用Griess法观察各组一氧化氮(nitric oxide,NO)向细胞上清液的释放量。将RAW264.7细胞种于Transwell小室,RLSECs种于孔板底部,设Control、AGEs、Cat10、Cat10+LV-Galectin-3-GFP、Cat10+LV-Galectin-3-shRNA组,后两组先转染慢病毒48 h,再分别给药30 min后,除Control组外在培养基中加入终浓度为200μg/mL的AGEs刺激,48 h后用结晶紫法观察巨噬细胞的透膜细胞数量。将Control、AGEs、Cat10、GB1107组的RLSECs孵育药物48 h后,采用免疫荧光法观察Galectin-3和CD146的共定位情况。将Control、AGEs和Cat10组的蛋白样品通过Western blotting和免疫共沉淀(Co-IP)法检测Galectin-3和CD146的相互作用以及各自的表达量。【结果】与Control组相比,Cat0.1组RLSECs增殖率无显著差异(P>0.05),Cat1和Cat10组RLSECs增殖率显著升高(P<0.05);与孵育0 h组相比,10μmol/L梓醇孵育48 h组RLSECs增殖率显著上升(P<0.05)。因此,后续试验选用10μmol/L梓醇孵育48 h为最适试验条件。与AGEs组相比,Cat1和Cat10组改善AGEs导致的细胞损伤,RLSECs上清液LDH活力及MCP-1、ICAM-1的释放量显著降低(P<0.05)。与AGEs组相比,梓醇组抑制巨噬细胞RAW264.7的激活作用,细胞NO的释放量显著降低(P<0.05)。通过慢病毒载体过表达和敲低RLSECs和RAW264.7的Galectin-3,证明了梓醇通过抑制该分子表达可显著改善巨噬细胞的浸润作用(P<0.05)。与AGEs组相比,Cat10组Galectin-3与CD146的结合被显著抑制(P<0.05),且不影响两种分子的各自表达量(P>0.05)。【结论】梓醇通过促进AGEs致Galectin-3和CD146分子复合物的解偶联作用,改善AGEs致肝窦血管内皮细胞的损伤以及促炎因子的释放,降低巨噬细胞的激活和NO的分泌,发挥肝窦血管内皮的保护作用,通过离体试验初步证明了其发挥改善糖尿病AGEs沉积造成的肝损伤的作用机制。

基于模糊随机PWM技术的永磁直线电机性能分析

针对恒定开关频率的变频器产生的窄带高频谐波问题,提出了一种基于模糊随机脉冲位置调制(FRPPM)的方法来降低输出电压频谱中的集中谐波簇,FRPPM方法是在较宽的频率范围内扩展原始的窄带谐波使电压频谱均匀地分散在频带上,从而降低了电机气隙磁场产生的电机震动噪声。通过MATLAB/SIMULINK对永磁直线电机控制系统进行建模仿真,并与传统切换模式进行对比分析。结果表明:变频器输出电压的集中高频谐波在开关频率处将有效降低,且使电压频谱分布更加均匀,进而改善了电机气隙磁场的波形。

一种大推力凸极永磁直线同步电机特性分析

针对现有永磁直线同步电机(PMLSM)推力密度较低的问题,提出了一种凸极Halbach永磁直线同步电机(SH-PMLSM)的设计方案。首先,提出了凸极Halbach永磁直线电机的拓扑结构,基于有限元分析了该型电机的次级磁场分布,确定了电机初级绕组方案,在旋转电机尺寸关系基础上,确定了该电机的主要尺寸;其次,建立了SH-PMLSM的16极15槽单元电机的模型,分析了该型电机的电磁特性;最后,在等永磁体用量、相同的初级和气隙条件下,将其与隐极式永磁直线电机(S-PMLSM)进行了对比,并分析了凸铁高度和宽度以及永磁体磁化方向对SH-PMLSM性能的影响。研究结果表明:SH-PMLSM单元电机具有更大的推力密度,输出推力比隐极PMLSM提高了10. 61%;借助Halbach阵列具有的磁屏蔽性,SH-PMLSM改善了常规凸极永磁直线电机存在的漏磁较大、推力不足的问题。

鹅骨骼肌卫星细胞的分离培养与鉴定

旨在建立鹅骨骼肌卫星细胞体外分离、培养、纯化及鉴定的方法。本研究选取健康10周龄溆浦鹅仔鹅为试验材料,采用分散酶Dispase II和胶原酶II共同作用肌肉组织分离得到卫星细胞,利用差速贴壁法纯化卫星细胞,在体外培养过程中,含有20%FBS并添加bFGF的DMEM/F12生长完全培养基能较好维持卫星细胞的分化潜能,培养过程中涉及的培养皿需经基质胶特别包被处理;诱导分化出成熟肌管后,采用免疫荧光法和Western blotting检测肌球蛋白重链MyHC的表达,采用qRT-PCR检测Pax7、MyoD1、MyoG基因在诱导分化前(growth medium,GM)和分化后(differentiation medium,DM)的相对表达量,分化前后每组均3个重复。结果表明,新分离得到的卫星细胞体积较小,折光性强,贴壁后呈中间彭起两端针状的梭形结构,经免疫荧光鉴定呈Pax7阳性;诱导分化后可形成成熟多核肌管,免疫荧光检测成肌特异性标志MyHC呈阳性,统计分化指数高达78%(P<0.01);qRT-PCR检测标志性基因Pax7、MyoD1、MyoG呈阳性,并且分化前Pax7基因相对表达量是分化后的2.22倍(P<0.01),而分化后标志性基因MyoD1、MyoG的相对表达量分别是分化前的1.90(P<0.01)和44.22倍(P<0.01);Western blotting结果显示分化后MyHC蛋白表达水平明显升高。综上所述,本研究建立了一种基于胶原酶Ⅱ和分散酶Dispase II的混合酶分离鹅骨骼肌卫星细胞的方法,提供的培养体系能够使细胞在体外培养过程中维持巨大的分化潜能,为鹅肌肉组织生长发育分子调控机制的研究提供了良好的细胞模型。

芒果苷抗DHAV-1致鸭胚肝细胞炎性损伤的研究

【目的】探究芒果苷(mangiferin,Man)对鸭甲型肝炎病毒1型(Duck hepatitis A virus-1,DHAV-1)致鸭胚肝细胞(DEHCs)炎性损伤的影响。【方法】从14日龄SPF级麻鸭鸭胚肝脏组织分离原代DEHCs,用含不同浓度芒果苷(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)的培养液培养48 h后,通过CCK-8法检测其安全浓度范围;用安全浓度的芒果苷培养DEHCs 12、24和48 h后,检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)的活力,判定芒果苷对DEHCs的毒性作用。将DEHCs分为对照组(Mock)、模型组(Model)、芒果苷组(Man10、Man20和Man40)和利巴韦林组(Rib),每组3个重复,所有组细胞血清饥饿培养12 h后,Mock组加入含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基,Model、Man10、Man20、Man40和Rib组用DHAV-1(MOI=1.0)攻毒2 h后,Model组更换为含10%FBS的DMEM培养基,Man10、Man20、Man40培养基中分别添加10、20和40μmol/L芒果苷,Rib组添加1μmol/L利巴韦林。48 h后收集各组细胞,用比色法检测丙二醛(MDA)含量及过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、总一氧化氮合酶(T-NOS)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;免疫荧光(IF)法检测DHAV-1在各组DEHCs中的分布情况;Western blotting法检测NLRP3/Pro-Caspase1/IL-1β通路蛋白的表达情况。提取2日龄SPF麻鸭的新鲜全血,分离鸭外周血单个核细胞(duPBMCs),duPBMCs分组及处理同DEHCs,ELISA法检测各组duPBMCs上清液中白介素8(IL-8)和IL-1β的含量。【结果】与0μmol/L芒果苷组相比,80和160μmol/L芒果苷组细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),因此5~40μmol/L芒果苷为处理DEHCs的安全给药浓度。20和40μmol/L芒果苷处理48 h细胞上清液中LDH活力显著低于处理12和24 h(P<0.05),20和40μmol/L芒果苷处理12和24 h细胞上清液中LDH活力显著高于5和10μmol/L芒果苷处理(P<0.05),各浓度芒果苷处理48 h细胞上清液中LDH活力均差异不显著(P>0.05),故48 h为最适处理时间。与Mock组相比,Model组DEHCs中CAT、T-AOC、SOD和GSH-Px活性均显著降低(P<0.05),DEHCs中MDA含量、T-NOS活性、DHAV-1拷贝数、DHAV-1阳性率、NLRP3表达量及duPBMCs中IL-8、IL-1β分泌量均显著升高(P<0.05)。与Model组相比,Man10、Man20和Man40组DEHCs中CAT、T-AOC、SOD和GSH-Px活性均显著提高(P<0.05),DEHCs中MDA含量、T-NOS活性、DHAV-1拷贝数、DHAV-1阳性率、NLRP3表达量及duPBMCs中IL-8、IL-1β分泌量均显著降低(P<0.05)。【结论】芒果苷可通过增加抗氧化能力、降低DHAV-1的复制水平、抑制NLRP3通路的激活、降低促炎细胞因子的释放抗DHAV-1感染DEHCs造成的炎性损伤。

高职院校中药药理和药理基础课程一体化融通教学方法探讨

中药药理和药理基础是高职院校中药制药技术专业学生的必修课,中药药理课程的知识体系是在药理基础的知识框架内以实验研究为依据逐步构建而成的,二者联系紧密,虽有各自特点,但不可分割。此文以课程一体化融通教学方法为课程改革核心,探讨了课程的理论及实验教与学的具体实施方法,为提高高职院校药理授课教师的教学质量和学生的学习效率找寻路径。

基于滑模控制的永磁同步电机直接转矩控制研究

针对永磁同步电机直接转矩控制(DTC)存在较大的电磁转矩脉动、磁链脉动、低速性能不理想等问题,文中引入滑模控制策略对永磁同步电机进行直接转矩控制。通过建立PMSM的矢量数学模型,设计基于滑模控制的直接转矩控制器,利用MATLAB/Simulink进行建模仿真分析。结果表明,与传统DTC相比,基于滑模控制策略的永磁同步电机直接转矩控制系统中电磁转矩脉动幅值更低,且具有更好的动态性能和抗扰动能力,可以更加有效地改善系统特性,满足实际电机控制的需要。

肝组织中Fas/FasL的表达与慢性乙型肝炎的关系

目的 :探讨肝组织中Fas/FasL表达与慢性乙型肝炎的关系。方法 :30例慢性乙型肝炎患者肝穿刺肝组织病理检查及免疫组化SP法检测肝组织中的Fas/FasL、HbcAg。结果 :肝组织中Fas、FasL表达强度与HBcAg在肝组织表达呈正相关 (P <0 0 0 1) ,与慢性肝炎病理损伤的程度即炎症活动度呈正相关 (P <0 0 0 1) ,与肝纤维化程度呈正相关 (P <0 0 0 1)。结论 :HBV持续感染及复制可诱导肝细胞表达Fas/FasL ,其表达程度随着慢性肝炎病理损伤的程度即炎症活动度及肝纤维化程度加重而增强。Fas -FasL系统介导的细胞凋亡 ,确实参与了慢性乙型肝炎的发病机制 ,且在慢性乙型肝炎的发生发展中起重要作用。