Si-SETDB1通过SPG20甲基化对肺腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的:检测肺腺癌中SETDB1和SPG20甲基化水平,探究下调SETDB1对SPG20甲基化及A549细胞迁移和侵袭的影响。方法:选取60例肺腺癌组织和正常肺组织,qRT-PCR检测mR NA相对表达量;免疫组织化学法和Western blot检测蛋白表达量;基因甲基化水平应用焦磷酸测序法检测;构建并合成SETDB1的小干扰RNA,脂质体介导法转染细胞,qRT-PCR检测mR NA相对表达量、Wesrern blot检测蛋白表达、焦磷酸测序法检测基因甲基化、MTT检测细胞增殖活性、划痕愈合检测细胞迁移、Transwell小室实验检测细胞侵袭。结果:qRT-PCR结果显示肺腺癌组织中SPG20表达下调(P<0.05),而SETDB1表达上调(P<0.05);Western blot结果显示肺腺癌组织中SETDB1蛋白表达量显著高于正常肺组织,而SPG20蛋白在癌组织中呈低表达,低于正常肺组织。在癌组织中SPG20基因甲基化率显著高于正常肺组织,差异有统计学意义。SPG20甲基化水平与SETDB1表达呈正相关性;肺腺癌细胞中SETDB1呈高表达,而SPG20呈低表达;正常支气管上皮细胞中SETDB1呈低表达,SPG20则呈高表达。RNA干扰SETDB1可使A549细胞内SETDB1 mR NA和蛋白表达量显著降低,SPG20基因甲基化率明显下降,抑制了细胞的增殖活性、迁移和侵袭能力。结论:在肺腺癌中甲基转移酶SETDB1和SPG20甲基化存在相关性,SETDB1可能是SPG20发生甲基化的催化酶。

miR-145-5p调控Survivin通过凋亡通路对食管癌生物学行为的影响

目的:探讨miR-145-5p靶向调控Survivin及凋亡信号通路对食管癌凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测食管癌组织和细胞系中miR-145-5p、Survivin mRNA相对表达量。双荧光素酶报告基因分析验证miR-145-5p和Survivin的靶向调控关系。通过RT-qPCR法测定细胞转染后miR-145-5p和Survivin mRNA的相对表达量。Western blot检测凋亡通路中BCL2、MDM2和Caspase-3蛋白的表达。通过MTT、流式细胞术、划痕愈合实验及Transwell小室实验检测TE-1细胞存活能力、凋亡率、迁移率及侵袭能力。结果:与癌旁组织相比,miR-145-5p在癌组织中表达低,而Survivin表达高(P<0.05)。与正常食管黏膜上皮HEEC细胞相比,食管癌TE-1细胞中miR-145-5p低表达,Survivin高表达(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-145-5p和Survivin间存在靶向调控关系。与未转染和转染miR-145-5p对照物的TE-1细胞相比,转染miR-145-5p模拟物后可显著增加miR-145-5p的表达,抑制Survivin mRNA的表达,同时BCL2和MDM2蛋白的表达下降,Caspase-3表达上升,促进细胞凋亡,抑制了细胞活性、侵袭和迁移能力(P<0.05)。结论:通过miR-145-5p的负向调控,Survivin表达被抑制,凋亡通路被激活,从而促进细胞凋亡,抑制食管癌细胞存活,侵袭和迁移能力。

肺腺癌组织转化生长因子β_(1)、鼠双微体2表达变化及其与患者临床病理特征的关系

目的 分析转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))和鼠双微体2(MDM2)在肺腺癌组织中的表达变化及其与患者临床病理特征的关系,探讨二者在肺腺癌发生发展中的作用。方法 选择手术切除且经术后病理确诊的肺腺癌患者60例,术中收集其肺腺癌组织和癌旁正常肺组织各60例份。采用免疫荧光法观察TGF-β_(1)、MDM2蛋白定位情况,采用免疫组化法检测TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达情况,并比较不同病理特征的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率,分析肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白表达的关系。结果 与癌旁正常肺组织比较,肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白均呈过表达状态,TGF-β_(1)大量表达于细胞质、少量表达于细胞核,MDM2绝大多数表达于细胞质。肺腺癌组织TGF-β_(1)蛋白阳性表达42例份(70.00%)、MDM2蛋白阳性表达47例份(78.33%),癌旁正常肺组织分别为24例份(40.00%)、24例份(40.00%);肺腺癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均高于癌旁正常肺组织(P均<0.05)。不同性别、年龄、吸烟情况的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期及低分化的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期及高中分化者(P均<0.05)。肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白表达呈正相关关系(r=0.539,P<0.05)。结论 肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均升高,且淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期及低分化的肺腺癌组织升高更明显,二者可能共同参与了肺腺癌的发生发展。

组蛋白乙酰转移酶Tip60降表达的肺腺癌细胞侵袭迁移能力变化及其机制

目的观察组蛋白乙酰转移酶Tip60降表达的肺腺癌细胞侵袭迁移能力变化并探讨其机制。方法肺腺癌细胞系A549分为Tip60降表达组、降表达阴性对照组及对照组,Tip60降表达组、降表达阴性对照组分别转染Tip60干扰siRNA及阴性对照siRNA,对照组不进行转染。采用Western blotting法检测细胞SETDB1蛋白,实时荧光定量PCR法检测细胞SETDB1 mRNA。采用CCK-8法观察细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞侵袭能力,划痕修复实验观察细胞迁移能力。使用Cistrome DB数据库的UCSC Browser功能搜索发现肺腺癌细胞A549中SETDB1启动子区H3组蛋白第9位赖氨酸(H3K9)和第27位赖氨酸(H3K27)残基存在明显富集峰,采用染色质免疫沉淀检测细胞SETDB1基因启动子区H3组蛋白H3K9、H3K27的乙酰化水平。结果Tip60降表达组SETDB1蛋白及mRNA表达均小于对照组、降表达阴性对照组(P均<0.05)。培养24、48、72 h时,Tip60降表达组细胞增殖能力均小于对照组、降表达阴性对照组;Tip60降表达组侵袭细胞数少于对照组、降表达阴性对照组;培养24、48 h时Tip60降表达组划痕愈合率均小于对照组、降表达阴性对照组(P均<0.05)。Tip60降表达组SETDB1启动子区组蛋白H3K9及H3K27乙酰化水平均小于对照组、降表达阴性对照组(P均<0.05)。结论Tip60降表达可抑制肺腺癌细胞的侵袭迁移能力,其机制可能与调控SETDB1启动子区H3组蛋白乙酰化水平有关。

GRIM-19、MDM2在肺腺癌组织中的表达变化及其意义

目的观察干扰素/维甲酸诱导凋亡相关基因(GRIM-19)、小鼠双微体2(MDM2)在肺腺癌组织中的表达变化,并探讨其与患者临床特征的关系。方法选择行手术治疗的肺腺癌患者60例,术中收集其肺腺癌组织和癌旁正常肺组织各60例份,采用免疫组化法检测GRIM-19、MDM2蛋白阳性表达情况。比较不同临床特征的肺腺癌患者癌组织GRIM-19、MDM2阳性表达率,分析肺腺癌组织GRIM-19、MDM2表达的相关性。结果肺腺癌组织和癌旁正常肺组织GRIM-19阳性表达率分别为55%(35/60)、78%(47/60),MDM2阳性表达率分别为43%(26/60)、23%(14/60),两者比较P均<0.05。有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期和低分化的肺腺癌患者癌组织GRIM-19阳性表达率分别低于无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ期及Ⅱ期和高分化者,MDM2阳性表达率分别高于无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ期及Ⅱ期和高分化者(P均<0.05)。肺腺癌组织GRIM-19与MDM2的表达呈负相关关系(r=-0.530,P<0.05)。结论肺腺癌组织中GRIM-19表达降低而MDM2表达升高,两者可能共同参与了肺腺癌的发生发展。

甲基化转移酶抑制剂SGI-1027对肺腺癌细胞迁移侵袭抑制及SPG20基因甲基化调节作用观察

目的分析甲基化转移酶抑制剂SGI-1027对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力的抑制作用及痉挛性截瘫-20(SPG20)基因甲基化水平的调节作用,以探讨甲基化转移酶抑制剂对肺腺癌细胞迁移、侵袭的影响及机制。方法以不同浓度甲基化转移酶抑制剂SGI-1027作用于肺腺癌A549细胞,MTT法测算细胞增殖活力,筛选得到SGI-1027最佳作用浓度为7.5μmol/L,作为后续实验的作用浓度。将A549细胞分为SGI-1027组和二甲基亚砜(DMSO)组,SGI-1027组培养基中加入SGI-1027培养,对照组培养基中加入DMSO培养。两组培养48 h时,采用划痕愈合实验观察细胞迁移能力,Transwell小室实验观察细胞侵袭能力;采用qRT-PCR法检测细胞DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)、SPG20 mRNA,焦磷酸测序法检测细胞SPG20基因甲基化水平,Western blotting法检测细胞DNMT3b、SPG20蛋白。结果培养48 h时,与DMSO组比较,SGI-1027组细胞迁移距离小、穿膜细胞数少(P均<0.05)。与DMSO组比较,SGI-1027组DNMT3b mRNA及蛋白相对表达量下降,SPG20 mRNA及蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。SGI-1027组SPG20基因甲基化率较DMSO组降低(P<0.05)。结论甲基化转移酶抑制剂SGI-1027可抑制肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力,降低细胞SPG20基因甲基化水平;SGI-1027可能通过下调细胞内SPG20基因甲基化水平进而抑制肺腺癌细胞的迁移、侵袭能力。

miR-9-5p对肺腺癌细胞增殖和侵袭迁移能力的调控作用及其机制

目的观察微小RNA(miR)-9-5p对肺腺癌细胞增殖和侵袭迁移能力的调控作用,并基于痉挛性截瘫20(SPG20)基因及Notch信号通路探讨相关机制。方法培养肺腺癌细胞株A549并分为抑制物组、阴性对照组和未转染组,抑制物组和阴性对照组分别转染miR-9-5p抑制物和阴性对照,未转染组不进行转染;采用MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Western blotting法检测Notch信号通路相关蛋白[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Notch1、Snail和基质金属蛋白酶2(MMP-2)]。采用TargetScan(http://www.targetscan.org/vert_80/)预测miR-9-5p与SPG20基因结合位点,并用双荧光素酶报告基因分析进行验证;检测肺腺癌组织和细胞中的miR-9-5p、SPG20 mRNA和蛋白;将A549细胞分为抑制物组、阴性对照组和未转染组,采用RT-PCR法检测各组细胞中的SPG20 mRNA。结果培养12、24、36、48 h时miR-9-5p抑制物组细胞增殖能力低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。抑制物组穿模细胞数和细胞迁移距离低于阴性对照组和为转染组(P均<0.05)。抑制物组Notch1、Snail、MMP-2蛋白表达低于阴性对照组和未转染组,E-cadherin蛋白表达高于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。SPG20基因存在连续的可以与miR-9-5p互补的核苷酸序列;共转染SPG20-WT和miR-9-5p质粒的A549细胞相对荧光素酶活性低于其他细胞(P均<0.05)。肺腺癌组织和细胞中miR-9-5p高表达、SPG20mRNA和蛋白低表达(P均<0.05),肺腺癌组织中miR-9-5p与SPG20 mRNA表达呈负相关(r=-0.914,P<0.05)。抑制物组SPG20 mRNA表达高于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。结论miR-9-5p能够抑制肺腺癌细胞的增殖能力及侵袭、迁移能力,作用机制可能与负性调节SPG20基因表达及调控Notch信号通路有关。

miR-203a-3p对食管癌细胞侵袭迁移能力的影响及其与Survivin的靶向调控关系

目的观察微小RNA(miR)-203a-3p对食管癌细胞侵袭、迁移能力的影响并分析其与Survivin的靶向调控关系。方法收集对数生长期的食管癌细胞TE-1及正常食管黏膜上皮细胞HEEC,RT-qPCR法检测细胞miR-203a-3p、Survivin mRNA。双荧光素酶报告基因检测法分析miR-203a-3p与Survivin的靶向调控关系。将TE-1细胞分为对照组、miR-203a-3p模拟组、miR-203a-3p抑制组及阴性对照组。miR-203a-3p模拟组转染miR-203a-3p mimic,miR-203a-3p抑制组转染miR-203a-3p inhibitor,阴性对照组转染miR-203a-3p NC,对照组不进行转染,RT-qPCR法验证转染效率。采用MTT法检测转染后2、12、24、36、48 h的细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果食管癌细胞中miR-203a-3p mRNA表达低于正常食管黏膜上皮细胞,Survivin mRNA表达高于正常食管黏膜上皮细胞(P均<0.05)。TargetScan数据库分析显示,Survivin基因在3′UTR端存在7个连续的可以与miR-203a-3p互补的核苷酸序列;双荧光素酶报告基因实验结果显示,共转染Survivin-WT和miR-203a-3p mimic质粒的TE-1细胞荧光素酶活性低于其他细胞(P<0.05)。培养12、24、36、48 h时细胞活力miR-203a-3p抑制组>对照组、阴性对照组>miR-203a-3p模拟组(P均<0.05);细胞迁移距离及侵袭细胞数miR-203a-3p抑制组>对照组、阴性对照组>miR-203a-3p模拟组(P均<0.05)。结论miR-203a-3p高表达可抑制食管癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与靶向负调控Survivin有关。

乙酰基转移酶KAT2A和Survivin蛋白乙酰化在食管癌中的相关性研究

目的 探讨食管癌组织中乙酰基转移酶2A(KAT2A)表达与Survivin蛋白乙酰化水平,分析二者在食管癌发生过程中的相关性。方法 选取70例食管鳞癌组织及其癌旁正常食管黏膜组织。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Survivin和KAT2A mRNA的表达,免疫组化及Western blotting检测Survivin和KAT2A的蛋白表达,免疫荧光验证Survivin和KAT2A在癌组织中的定位及表达;免疫共沉淀检测Survivin乙酰化。分析Survivin蛋白乙酰化与KAT2A的相关性及其二者与食管癌临床病理特征的关系。构建KAT2A RNA干扰序列,脂质体介导法转染至食管癌EC109细胞。应用qRT-PCR和Western blotting检测转染siRNA-KAT2A的食管癌EC109细胞中KAT2A mRNA和蛋白表达水平,免疫共沉淀检测EC109细胞中Survivin蛋白乙酰化水平。结果 食管癌组织中Survivin和KAT2A mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05);食管癌组织中Survivin和KAT2A蛋白呈高表达,而癌旁组织则呈低表达。免疫荧光证实Survivin和KAT2A蛋白在癌组织中同时呈现高表达状态,二者主要表达于细胞质中,部分表达于细胞核中。食管癌组织中Survivin蛋白发生了乙酰化,且食管癌组织中的乙酰化率显著高于癌旁组织(P<0.05);在食管癌组织中Survivin乙酰化和KAT2A表达呈正相关(r=0.517,P<0.05);Survivin乙酰化和KAT2A表达与食管癌的TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。体外实验显示,RNA干扰下调KAT2A对食管癌细胞Survivin mRNA和蛋白表达量均无影响(P>0.05),但Survivin蛋白的乙酰化水平显著降低(P<0.05)。结论 在食管病变过程中KAT2A参与了Survivin乙酰化修饰,其高表达可能是Survivin乙酰化修饰重要的前期分子事件,在食管癌的诊治中具有潜在应用价值。

C646靶向KAT3b通过Survivin乙酰化调控食管癌侵袭和迁移

目的探讨乙酰基转移酶抑制剂C646靶向KAT3b通过Survivin蛋白乙酰化影响食管癌细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)、迁移和侵袭的机制。方法体外培养食管癌TE-1细胞,MTT法筛选C646最佳给药浓度;C646处理TE-1细胞为实验组(C646组),DMSO处理TE-1细胞为对照组(DMSO组);实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测KAT3b mRN表达量;免疫共沉淀法检测Survivin蛋白乙酰化;Western blot法检测KAT3b及EMT相关蛋白表达;MTT法检测细胞存活能力,细胞划痕实验观察迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力。结果C646组中KAT3b mRNA和蛋白表达量下降,且Survivin蛋白乙酰化水平下降;C646组中E-cadherin蛋白表达上调,而N-cadherin、Snail和Slug蛋白表达下降。C646组中食管癌TE-1细胞存活、迁移和侵袭能力显著下降。结论C646可能通过下调KAT3b的表达降低Survivin蛋白乙酰化水平,进而抑制食管癌细胞EMT、存活及迁移侵袭能力。

Survivin通过Wnt/β-catenin信号通路调控食管癌的侵袭和迁移的机制研究

目的:探讨Survivin在食管癌中的表达及对食管癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路、侵袭和迁移的影响。方法:检测人食管癌组织和EC109细胞中Survivin蛋白的表达,并分析其与临床病例特征的相关性。脂质体介导法将Survivin小干扰RNA转染食管癌EC109细胞。基因mRNA相对表达量应用RT-qPCR检测。蛋白的表达应用免疫蛋白印迹(Western blot)检测。细胞存活率、迁移和侵袭能力应用MTT、划痕愈合和Transwell小室实验检测。结果:食管癌组织和EC109细胞中Survivin表达增高。食管癌组织的TNM分期、分化程度和淋巴结转移与Survivin阳性表达相关;RNA干扰下调Survivin后可显著抑制食管癌细胞内Survivin mRNA和蛋白的表达。下调Survivin后,食管癌细胞内wnt3α、β-catenin、cyclinD1和c-myc表达量下降,Wnt/β-catenin信号通路受到抑制,且食管癌细胞的存活、迁移和侵袭能力受到抑制。结论:下调Survivin基因可以通过影响Wnt/β-catenin信号通路而抑制食管癌细胞的存活、迁移和侵袭能力。

板蓝根多糖促进NKG2D配体表达增强NK细胞对食管癌细胞的杀伤作用及机制研究

目的:研究板蓝根多糖(RIP)影响NK细胞对食管癌细胞杀伤作用的分子机制。方法:MTT法检测细胞增殖率,Western blot检测增殖相关蛋白CyclinD1、p21和p27的表达,ELISA法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的表达,流式细胞术检测NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1和ULBP2的表达,钙黄绿素释放法(CARE-LASS)检测NK细胞对食管癌细胞的杀伤率。结果:RIP可促进NK-92细胞增殖,抑制食管癌Eca-109细胞增殖,且具有显著剂量依赖性。食管癌可促进NK细胞中TNF-α和IFN-γ的表达。RIP可促进食管癌细胞Eca-109中NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1和ULBP2的表达,促进与食管癌细胞联合作用后NK细胞中TNF-α和IFN-γ表达,提高NK-92细胞对食管癌Eca-109细胞的杀伤活性。结论:RIP通过提高食管癌Eca-109细胞中NKG2D配体表达,促进NK-92细胞中TNF-α和IFN-γ表达,增强NK-92细胞对食管癌细胞的杀伤作用。

煤焦油沥青烟气诱导SD大鼠肺癌动物模型的实验研究

目的采用煤焦油沥青(CTP)烟气吸入法诱导SD大鼠肺癌疾病模型,评价该法造模的优缺点以及对其效果进行观察。方法将50只SD大鼠放入染毒柜内,每日给予相同浓度的CTP烟气熏蒸,每天持续3 h。每周观察并记录小鼠的生长、活动、饮食和健康状况,并称量体重。32周后处死全部存活大鼠,取肺组织检查肿瘤发生情况,并对标本常规石蜡制片,HE染色,病理学方法检查大鼠肺癌发生情况。结果个别实验鼠在实验早期偶尔有刺激性咳嗽表现,大部分大鼠精神状态较好,饮食、活动以及体重增长基本正常。但在实验后期大鼠体重均有所下降,精神萎靡、消瘦。实验结束时存活大鼠46只,4只死亡。存活大鼠中36只罹患不同类型肺癌,肺癌发病率为69.57%。结论选用CTP烟气吸入法可以诱导大鼠肺癌疾病模型,且此方法实验鼠肺癌发病率高,实验成本低,简单易行,是实验室获取肺癌动物模型的较理想选择。

食醋干预下大鼠血清对食管癌EC109细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的研究长期高醋饮食SD大鼠血清诱导食管癌EC109细胞凋亡及其对Survivin蛋白表达的影响。方法采用普通SD大鼠血清和长期高醋饮食条件下SD大鼠血清培养食管癌EC109细胞。I组:以含20%灭活普通SD大鼠血清培养液培养食管癌EC109细胞;II组:以含20%灭活长期高醋饮食干预条件下SD大鼠血清培养液培养食管癌EC109细胞;应用流式细胞仪分别采用Annexin V-EGFP/PI双染法和亚倍体峰法检测两组食管癌细胞早期和中晚期凋亡率;应用Western blot方法检测Survivin蛋白的表达水平。结果 II组细胞凋亡率明显高于I组,有统计学差异(P<0.05);II组细胞中Survivin蛋白的表达水平明显低于I组,差异有统计学显著意义(P<0.05)。结论长期高醋饮食SD大鼠血清能促进食管癌EC109细胞的凋亡并抑制Survivin蛋白的表达。

调亡抑制基因Survivin和乙酰基转移酶p300在食管癌组织中的表达以及临床意义

目的探讨调亡抑制基因Survivin和乙酰基转移酶p300在食管癌(EC)组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法用免疫组化法检测2016年2月~2018年2月我院胸外科90例EC组织和40例癌旁组织Survivin和p300的蛋白表达水平;分析Survivin和p300蛋白与临床病例特征的关系及两者的相关性。结果①癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);②癌组织中p300的阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);③Survivin的表达与ECTNM分期、肿瘤分化程度和淋巴转移有相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。p300的阳性表达率与肿瘤分化程度和淋巴结转移有相关性,差异有统计学意义(P<0.05);④Survivin和p300在EC中的表达成正相关(r=0.657,P<0.05)。结论Survivin和p300的表达水平与EC的分化程度及转移有相关性,且两者可能在EC的发生、发展和转移等方面发挥协同作用。

三磷酸腺苷结合盒转运子E1与P300/CBP相关因子在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨三磷酸腺苷结合盒转运子E1(ABCE1)和P300/CBP相关因子(PCAF)在食管鳞癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化法检测60例食管鳞癌患者癌组织及癌旁正常组织中ABCE1和PCAF的表达水平,分析其与患者临床病理特征的关系,以及两者在食管鳞癌组织中表达的相关性。结果:食管鳞癌组织中ABCE1表达的阳性率高于癌旁正常组织,而PCAF阴性率高于癌旁正常组织(P<0.05)。ABCE1表达与TNM分期、肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度和淋巴有无转移存在相关性,而PCAF表达与肿瘤分化程度存在相关性(P<0.05)。ABCE1和PCAF在食管鳞癌组织中的表达呈负相关。结论:ABCE1和PCAF可能在食管鳞癌的发生、发展、转移和预后等方面发挥协同作用。

Survivin和PCAF在食管癌组织中的表达以及临床意义

目的:探讨Survivin和PCAF在食管癌中的表达及与临床病理特征之间的关系。方法:采用免疫组织化学染色法检测90例食管癌组织和40例正常组织中Survivin和PCAF的蛋白表达水平,分析其与患者临床病理特征的关系及Survivin和PCAF在食管癌中表达的相关性。结果:Survivin阳性表达在癌组织中为73.33%,明显高于正常组织的5.00%(P<0.05)。PCAF阴性表达在癌组织中为65.56%,高于在正常组织中的7.50%(P<0.05)。Survivin蛋白高表达与患者性别、年龄和肿瘤大小均无关(P>0.05),与TNM分期、肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度和淋巴是否转移均有关(P<0.05)。PCAF的阴性表达或低表达与患者性别、年龄、TNM分期、肿瘤浸润深度、肿瘤大小以及淋巴是否转移均无关(P>0.05),与肿瘤的分化程度有关(P<0.05)。Survivin和PCAF在食管癌中的表达呈负相关(r=0.113,P<0.05)。结论:Survivin表达水平与肿瘤的分期、分化程度、浸润深度及淋巴转移均呈正相关,PCAF表达水平与肿瘤分化程度呈负相关。Survivin和PCAF在食管癌中的表达具有明显相关性,联合两者可能在食管癌的发生、发展、转移和预后等方面发挥协同作用。

食醋对二甲基亚硝胺诱导的大鼠食管癌的抑制作用

目的应用食醋对二甲基亚硝胺(NDMA)诱发大鼠食管癌动物模型进行干预,观察大鼠食管癌患病率,研究食醋对食管癌的抑制作用。方法随机将80只SD大鼠平均分成两组。Ⅰ组:普通饲料、普通饮水饲养,每周一次NDMA皮下注射,10 mg/kg;Ⅱ组:含醋饲料、含醋饮水饲养,每周一次NDMA皮下注射,10 mg/kg。24周后,解剖各组存活大鼠,取食管组织,常规染色切片后行病理组织学观察,记录两组实验鼠食管癌发病数据。以各组实验鼠食管癌发病率数据为对比参数,对数据进行统计学分析。结果Ⅰ组存活34只大鼠中有32只罹患食管癌,患病率为94.12%。Ⅱ组存活38只实验鼠中有28只患食管癌,患病率为73.68%。Ⅱ组大鼠食管癌患病率明显低于Ⅰ组,差异有显著性(P<0.05)。结论食醋对NDMA诱导的SD大鼠食管癌有一定的抑制作用。

犬肋骨肋间肌肌瓣环再造气管的形态及病理学观察

目的:对犬自体肋骨肋间肌肌瓣环再造气管的形态及病理学变化进行观察。方法:将犬的第3肋骨修整卷曲成五边形,用此肋骨肋间肌肌瓣环再造气管替代胸内部分气管,观察术后再造气管的形态及病理学变化。结果:术后再造气管稳定性好,血液供应较好,内径、截面积较大,基本能够维持气管的通气功能。镜下观察可见:术后早期,再造气管内膜可见大量新生毛细血管形成的炎性肉芽组织;术后中晚期肋骨卷曲折角处可见新生骨组织,正常气管与肋间肌吻合口交界区出现移行的柱状上皮。结论:犬肋骨肋间肌肌瓣环再造气管的形态达到气管的管道形态,再造的气管组织能够存活。

乙酰基转移酶KAT3b与ABCE1乙酰化在食管癌中的相关性研究

背景与目的:食管癌是中国癌症死亡的主要原因之一,其发病率和死亡率居高不下。表观遗传学上的乙酰化修饰参与并调控多种肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,乙酰基转移酶参与的肿瘤蛋白的乙酰化修饰可能是食管癌发生的重要机制之一。本研究探讨食管癌中乙酰基转移酶3b(acetyltransferase 3b,KAT3b)的表达及ATP结合盒转运子E1(ATP-combined box transporter E1,ABCE1)蛋白乙酰化水平,分析两者之间的相关性,在食管癌发病过程中的作用及其机制。方法:选取2020年1月—2021年5月承德医学院附属医院胸外科手术切除食管癌标本及癌旁组织各55例。采用免疫组织化学SP法及蛋白质印迹法(Western blot)检测ABCE1和KAT3b蛋白表达,采用免疫共沉淀(coimmunoprecipitation,Co-IP)检测KAT3b蛋白表达和ABCE1蛋白乙酰化水平,采用生物信息学预测KAT3b以ABCE1为底物发生乙酰化的情况,采用荧光免疫组织化学(fluorescence immunohistochemistry,IF)验证ABCE1和KAT3b在癌组织中的定位及表达,分析ABCE1乙酰化与KAT3b的相关性及两者与临床病理学特征的相关性。构建下调KAT3b si-RNA,采用脂质体介导法转染食管癌EC109细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和Western blot检测KAT3b mRNA表达和蛋白水平,采用Co-IP实验检测细胞内KAT3b表达和ABCE1蛋白乙酰化水平。结果:食管癌组织中ABCE1和KAT3b蛋白表达率显著高于正常食管黏膜(P<0.05);ABCE1蛋白在食管癌组织中发生了乙酰化,且ABCE1蛋白乙酰化率显著高于正常黏膜组织(P<0.05);生物信息学预测乙酰基转移酶KAT3b可以催化ABCE1为底物发生乙酰化,且IF证实ABCE1和KAT3b蛋白在癌组织中同时呈现高表达状态;食管癌组织中ABCE1乙酰化和KAT3b表达具有相关性,两者呈正相关;ABCE1乙酰化及KAT3b与食管癌分期、组织分化及淋巴结转移密切相关,而与性别及年龄无关。体外实验显示,在食管癌细胞内RNA干扰KAT3b后,可抑制KAT3b mRNA和蛋白的表达,同时ABCE1蛋白乙酰化水平也显著下降。结论:在食管癌病变过程中KAT3b与ABCE1乙酰化具有相关性,KAT3b高表达可能是催化ABCE1发生乙酰化的重要上游分子,在食管癌诊治中具有重要的潜在价值。