PRRSV非结构蛋白Nsp1α合成肽多克隆抗体的制备及应用

本研究尝试利用PRRSV Nsp1α合成肽进行多克隆抗体的制备,并对抗体的特性进行了分析。首先,利用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp1α的抗原肽序列;随后,按照此序列合成获得抗原肽,并将其与KLH载体蛋白进行偶联;接下来,将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合,通过免疫大白兔制备针对Nsp1α合成肽的多克隆抗体;最后,利用ELISA、Western blot及间接免疫荧光法对多克隆抗体的特性进行了分析。结果显示:该多克隆抗体ELISA的效价超过105;利用Western blot可以检测到特异的Nsp1α表达条带,包括瞬时转染的样品和不同毒株病毒感染的样品;利用间接免疫荧光法分析,该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。结果表明,PRRSV Nsp1α合成肽多克隆抗体可以有效地应用于PRRSV Nsp1α表达检测,为进一步研究PRRSV Nsp1α的功能提供了一个有效的工具。

绵羊清道夫受体A基因启动子克隆及序列分析

为了分析绵羊清道夫受体A(scavenger receptor A,SRA)基因的启动子序列特征,试验根据UCSC数据库和NCBI数据库预测的绵羊SRA基因启动子序列设计特异性引物,以绵羊肺组织基因组DNA为模板进行SRA基因启动子序列PCR扩增、测序,然后对序列进行生物信息学分析,包括预测启动子活性区域、转录因子结合位点、TATA box及CpG岛。结果表明:利用根据UCSC数据库预测的SRA基因启动子序列设计的引物未扩增出目的片段,利用NCBI数据库预测的SRA基因启动子序列设计的引物扩增得到了绵羊SRA基因启动子序列,大小约为1200 bp,与NCBI预测序列的相似性为99%,其中第577位碱基发生了突变(G→A);含有1个潜在活性区域(aaaaatgagctcacattcattttttttttcttaactggc);存在干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRF)1、IRF2、c-Jun、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT enhancer binding protein,C/EBP)、活化蛋白1(activator protein 1,AP-1)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)转录因子结合位点,其中IRF1和c-Jun的结合位点出现频率较高;不存在TATA box和CpG岛,只存在3个CpG位点。说明SRA基因的表达可能受IRF1和c-Jun等相关转录因子的调控,不受甲基化的影响。

一株牛源溶酪巨型球菌致病性及全基因组特征分析

目的本研究旨在研究1株牛源溶酪巨型球菌(Macrococcus caseolyticus,M.caseolyticus)的致病性和全基因组特征,挖掘该菌株的毒力和耐药相关基因。方法在新疆石河子市某牛场中采集1例病死牛肺脏,从牛肺脏灌洗液中分离鉴定了1株牛源溶酪巨型球菌,在此基础上进行了药敏试验、动物感染试验;并通过Illumina的二代测序技术对该菌株进行全基因组框架图构建,构建多个管家基因同源进化树,对编码基因、重复序列、非编码RNA等进行预测,并在GO、KEGG、COG、NR和CAZy数据库对基因组的基本功能特征进行注释,结合NR数据库的注释和PHI、CARD数据库注释,明确其基因组中毒力因子、耐药性等相关基因。结果从牛肺中成功分离到一株M.caseolyticus,通过感染兔子试验证实该菌株具有较强的致病性,病理切片结果显示兔子肺泡数量减少,大量炎性细胞渗出,肺泡囊增大,肺泡囊中充满渗出物,红细胞渗出,细支气管管壁塌陷。该菌经平均核苷酸相似度分类和系统发育树确定为溶酪巨型球菌,全基因组大小为2209314 bp,CG%含量为37.22%,平均长度为855 bp,编码2304个基因;其中tRNA有58个、rRNA有8个、sRNA有1个;含有3条CRISPRs序列。在GO数据库中有1028个基因得到注释,分别注释到分子功能、细胞组分和生物过程3大类;在KEGG数据库中共有1420个编码基因得到注释;在COG数据库中,共注释有23种功能的1961个基因;同时,在全基因组测序结果中发现51个毒力因子和对氨基糖苷类、β-内酰胺类和多肽类等抗生素的多种耐药基因,药物敏感性试验中菌株对测试的12类抗生素仅对磺胺类(复方新诺明)、林可霉素类(林可霉素)、青霉素类(氨苄西林)耐药。结论本研究从病死牛肺脏中分离得到1株牛源溶酪巨型球菌并命名为SHZXbov7,该菌具有较强的致病性,含有多种毒力因子和耐药基因,菌株SHZXbov7的基因组测序和注释将丰富溶酪巨型球菌的基因数据库,为溶酪巨型球菌相关疾病的防控提供参考。

靶向严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2的人工microRNAs设计与思考

动植物人工miRNAs(artificial miRNAs,amiRNAs)在抗病毒感染中发挥重要作用。然而,有关amiRNAs靶向抑制重症急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的相关研究未见报道。目的:本研究旨在设计靶向SARS-CoV-2的amiRNAs,进一步分析amiRNAs对不同变异株的匹配程度。方法:利用Invitrogen Block-iT RNAi Designer成功设计靶向SARS-CoV-2的amiRNAs。结果:分别命名为amiR-Cov23utr-1、2、3、4;其中amiR-Cov23utr-1、3和4在Omicron BA.5/2022中靶向区域序列十分保守;amiR-Cov23utr-2在Omicron BA.5/2022中的靶点缺失。结论:本研初步设计和分析了靶向SARS-CoV-2的amiRNAs,为后续深入研究amiRNAs抗SARS-CoV-2感染提供了重要基础资料。

金银花源miR2911靶向PEDV基因区域分析

金银花源miR2911是一种丰度较高、性质稳定的抗病毒分子,在抗流感病毒感染和SARS-CoV-2感染中发挥着关键作用。然而,有关miR2911靶向PEDV基因区域的研究却鲜有报道。因此,本研究旨在分析miR2911靶向PEDV的基因区域,进一步分析miR2911靶点在不同流行毒株中的保守性。利用miRanda软件成功预测miR2911在PEDV基因组中存在多个靶点,靶向PEDV基因区域保守性很高。为后续深入研究miR2911在抗猪源病毒感染的机理提供了数据支撑。

兽医外科手术学课程思政改革与研究

兽医外科手术学是动物医学专业必修课,也是一门实践性和应用性较强的专业课程。古语曰,‘德为才之帅,才为德之资也’,课程思政是给当代大学生一味良药,课程思政的实施也将促进教师的思想水平不断提高。在新时期不但要注重知识和操作技能的掌握,更要通过挖掘课程中的思政元素,将思政元素与课程知识有机结合,提高学生思想认识水平和道德水平。也就是说,在培养兽医专业人才技能的同时,培养学生要重视医风医德、动物福利和伦理学及兽医法规等,通过对兽医专业思想升华,培养当代大学生懂得当今幸福生活来之不易,要抓住黄金时间刻苦学习,报效祖国,热爱祖国。本文初步挖掘了课程思政元素,为建设课程思政示范课做了重要贮备。

兽医外科手术学综合实验课程改革与研究

兽医外科手术学综合实验是动物医学专业必修课,也是一门实践性和应用性较强的专业课程。过程性考核具有考核内容全面、考核方式灵活、学习效果反馈及时等特点,已经逐步得到越来越多的认可和采用。在兽医外科手术学综合实验教学过程中采用过程性考核,对学生的综合能力的评价更全面、更科学,可以使学生对知识的掌握更全面和扎实,学习效果更佳。

绵羊肺炎支原体不同分离株的致病性比较

为研究不同绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)的致病性差异,筛选出致病性强的Mo菌株。通过间接免疫荧光技术检测不同Mo分离株(XJ15、XJ13、XJ22、1412、XJN)、标准株(Y98)对山羊气管上皮细胞(goat tracheal epithelial cells,GTEC)的黏附力强弱,将不同Mo菌株以109 CCU/mL浓度,0.2 mL/只,接种到7日龄SPF鸡胚的卵黄囊中,设阴性对照组和空白对照组,检测并观察Mo感染鸡胚致死率以及死亡鸡胚病理变化,记录鸡胚死亡时间,取死亡鸡胚的尿囊液进行PCR鉴定,同时对各个感染组的卵黄囊液进行PCR检测。结果显示,6株Mo均能黏附GTEC细胞,其中XJ15黏附力最强,XJN黏附力最弱。在鸡胚感染试验中,6株Mo均能引起鸡胚死亡,且不同Mo感染组鸡胚死亡数差异显著(P<0.05)。其中,XJ15感染组致死率为90%,1412和XJN感染组致死率为20%。感染组死亡鸡胚表面有出血,充血症状,尿囊液PCR检测均为阳性。表明,筛选出XJ15为致病性较强的Mo分离株,为后期Mo人工感染模型的建立奠定基础。

金银花源miR2911基因靶向猪伪狂犬病毒基因区域分析与验证

金银花源miR2911是一种丰度较高、性质稳定的抗病毒分子,在抗流感病毒感染和SARS-CoV-2感染中发挥关键作用。然而,有关miR2911靶向猪伪狂犬病毒基因区域的研究鲜有报道。因此,本研究旨在分析miR2911靶向PRV的基因区域,进一步分析miR2911靶点在不同流行毒株中的保守性,以验证miR2911对靶向区域的结合作用。利用miRanda软件成功预测miR2911在猪伪狂犬病毒基因组中存在多个靶点,靶向猪伪狂犬病毒UL34基因区域保守性很高,利用报告基因系统证实miR2911可通过结合UL34靶向区域发挥抑制作用。这为后续深入研究miR2911在抗猪伪狂犬病的机理方面提供了重要支撑资料。

绵羊MSR1克隆及其序列分析

为了解绵羊巨噬细胞清道夫受体1(Macrophage Scavenger Receptor 1,MSR1)基因的生物学信息特征,本研究对绵羊MSR1进行了克隆鉴定,与其他物种的MSR1氨基酸序列进行比对、构建进化树,并进行生物信息分析,预测了MSR1的理化性质。结果显示:绵羊MSR1基因ORF区全长1362 bp,编码453个氨基酸,分子量约为50 kDa,构建了MSR1真核表达载体;绵羊MSR1与山羊、羚羊、马鹿、水牛、白鲸、猪、人、家兔、小鼠的同源性分别为98.90%、96.03%、93.16%、93.16%、81.28%、78.81%、74.17%、73.51%、63.77%,同属于牛科动物的序列同源性在90%以上,进化树上在同一分支;该蛋白分子式为C_(2188)H_(3473)N_(629)O_(680)S_(19),理论等电点为6.00,蛋白质性质为弱酸性,51~73号氨基酸为跨膜结构,有7个潜在的糖基化位点和多个磷酸化位点,存在2个棕榈酰化位点和5个乙酰化位点,169~180位氨基酸序列区域为优势抗原决定簇。研究结果为以后研究绵羊MSR1的功能奠定了基础。

蛋鸡饮水中添加维生素C对缓解热应激的效果分析

夏季，在产蛋鸡饮水中添加维生素Ｃ缓解热应激，并对多项血液生化指标进行了分析。结果表明添加剂量为２００μｇ／ｇ的维生素Ｃ可以起到较好的作用，提高产蛋率９．１６％；分别提高血糖、血脂、总蛋白、血钙达２２．７２％、１０６．５８％、１３．７３％、２５．９９％，使处于热应激状态的鸡的血液成份有趋向适温的显著变化。

金银花源miR2911靶向非洲猪瘟病毒基因区域分析

金银花源miR2911是一种高丰度、性质稳定的抗病毒分子,在抗流感病毒感染、SARS-CoV-2感染中具有一定效果。然而,对于miR2911靶向ASFV基因区域的研究却鲜有报道。由此,本研究旨在分析miR2911靶向ASFV的基因区域,从而进一步分析miR2911靶点在不同流行毒株中的保守性。利用miRanda软件成功预测了miR2911在ASFV基因组中存在的多个靶点,且靶向ASFV基因区域保守性很高。为后续深入研究miR2911在抗猪源病毒感染机理方面提供理论依据。

夏季水中添加维生素C对蛋鸡生产性能影响及血液生化指标变化

对夏季在产蛋鸡饮水中添加维生素Ｃ缓解热应激的效果进行了探讨，并通过对其多项血液生化指标的分析表明：按２００μｇ／ｋｇ剂量添加维生素Ｃ可以起到较好的作用，提高产蛋率９．１６％；分别提高血糖、血脂、总蛋白、血钙达２２．７２％、１０６．５８％、１３．７３％、２５．９９％。

硫酸钠饮水对蛋鸡生产性能的影响

夏季高温期间，分别给蛋鸡饮用０．２％、０．１％和０．０５％浓度的硫酸钠溶液，结果表明，０．０５％组效果最好，产蛋率比饮用普通水组的鸡高出７．２８个百分点，每只鸡每月比对照组增收０．８７元，经济效益显著。

环腺苷酸对体外培养的山羊乳腺上皮细胞增殖的影响

用环腺苷酸 (cAMP)对体外培养的山羊乳腺上皮细胞 (GMEC)进行试验 ,将细胞分为 8组。第 17组分别加入 1× 10、1× 10 2 、1× 10 3 、1× 10 4、1× 10 5、1× 10 6、1× 10 72nmol L的cAMP ;第 8组不加cAMP为对照组。结果显示 ,第 16组细胞倍增时间随cAMP浓度升高而递减 ,分别为 31.7、2 9.8、2 7.8、2 5 .6、2 3.8和 2 2 .0 2h ;当cAMP浓度达到 1× 10 72nmol L时 ,细胞倍增时间反而延长 2 6 .5 2h ,对照组细胞倍增时间为 30 .6 2h。结果表明 ,在一定浓度范围内 ,cAMP对GMEC有促进增殖作用 ,当cAMP浓度过高时则有抑制作用。cAMP对该细胞生长曲线的影响是在对数生长期。Westernblot结果证实 ,体外培养的细胞为GMEC ,cAMP诱导了该乳腺上皮细胞特异性产物酪蛋白的表达。

家禽热应激及预防措施(综述)

综述了高温的不良刺激使家禽产生热应激后，家禽体内所引起的体热平衡、内分泌、血液化学成分等非特异性应答反应。

哺乳期给母猪饲喂碘化酪蛋白对仔猪的影响

选用哺乳期杂交母猪 5 4头 ,随机分 4组 ,对照组饲喂基础饲粮 ,试验组在饲喂基础饲粮中添加 2 0 0mg/kg碘化酪蛋白 ,为期 31d ,研究哺乳期母猪饲喂碘化酪蛋白对仔猪的影响。试验结果显示 :初产、经产母猪的试验组仔猪分别与对照组相比 ,2 0日龄窝重分别提高 11.72 % (P <0 .0 5 ) ,6 .79% (P <0 .0 1) ,断奶窝重分别提高 2 .95 %和 18.84%(P <0 .0 1) ,哺乳期成活率分别提高 1.5 9%和 11.9% (P <0 .0 1)。

短期使用碘化酪蛋白对奶牛产量的影响

选择 2 0头泌乳期相近中国荷斯坦奶牛 ,随机分成 5组 ,每组 4头 ,对照组饲喂基础日粮 ,试验组在喂基础日粮的基础上添加 15 g/头·d碘化酪蛋白 ,为期 30d。结果表明 ,试验组牛产奶量比对照组平均升高 10 .73% (P <0 .0 5 ) ,牛奶密度变化不大。不论是逐渐撤去还是突然撤去饲料中的碘化酪蛋白 。

重组捻转血矛线虫半乳糖凝集素对山羊外周血单核细胞细胞因子mRNA转录的抑制作用

【目的】以体外试验观察雌雄捻转血矛线虫半乳糖凝集素重组蛋白(rHco-gal-m/f)对山羊外周血单核细胞多种细胞因子mRNA转录水平的影响及其量效关系。【方法】选用2岁健康山羊5只,分别从颈静脉无菌采血,分离外周血单核细胞(PBMCs),以ConA或LPS刺激的同时分别加入0μg·ml-1,10μg·ml-1、20μg·ml-1和40μg·ml-1的rHco-gal-m/f,进行体外培养。用RT-PCR方法,以肌动蛋白基因(β-actin)作内标,定量分析单核淋巴细胞白介素-1β(IL-1β)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA丰度。【结果】重组雄性捻转血矛线虫半乳糖凝集素(rHco-gal-m)可以抑制上述细胞因子mRNA的转录,并呈现出明显的剂量依赖性;重组雌性捻转血矛线虫半乳糖凝集素(rHco-gal-f)可抑制IL-1β、IL-4、IFN-γand TNF-α的转录,也呈现出明显的剂量依赖性。【结论】重组捻转血矛线虫半乳糖凝集素能降低多种细胞因子在体外的转录。