病例讨论在病理生理学教学中的应用

病例讨论式教学法是理论联系实际的有效教学方法,可以激发学生的学习兴趣、培养学生的创造性思维;也有利于提高教师的综合素质。本文探讨了病例讨论式教学法在病理生理学教学中的具体应用及体会。

C57BL/6小鼠ZFP580 C端编码基因的克隆及序列分析

【目的】克隆C57BL/6小鼠ZFP580 C端编码基因cDNA序列,并进行序列测定和分析。【方法】参照GENBANK公布的C57BL/6小鼠ZFP580 cDNA序列(注册号为AK005257),根据ZFP580 C端编码基因cDNA序列设计1对引物,采用RT-PCR技术,从C57BL/6小鼠的肾脏组织中扩增ZFP580 C端编码基因cDNA序列,回收纯化后与T载体连接,构建重组子pMD18-T-ZFP580,转化大肠杆菌DH5α。阳性克隆以限制性酶切分析与PCR法鉴定后,测定序列并分析。【结果】自C57BL/6小鼠肾脏组织获得总RNA,扩增出255 bp的基因片段,成功构建阳性克隆重组子pMD-T-ZFP580,经双酶切和PCR鉴定与预期结果一致。所测定的C57BL/6小鼠ZFP580 C端基因cDNA序列与日本RIKEN基因组中心于GENBANK注册(注册号为AK005257)的完全一致,与人ZNF580 C端编码基因cDNA序列比较,核苷酸序列同源性为90%;该cDNA序列所编码的氨基酸序列与人ZNF580基因C端比较,同源性为100%,均编码有3个串联重复的C2H2型锌指蛋白主构域。其氨基酸序列与大鼠、犬、牛比较,同源性分别为100%、100%、98%。【结论】成功克隆C57BL/6小鼠ZFP580 C端编码基因,该基因在不同种属间高度保守。

Hsa-miR-486-5p的肿瘤及细胞骨架相关靶基因的预测分析

microRNAs的功能研究离不开其靶基因的预测。本文利用TargetScan预测软件预测分析hsa-miR-486-5p的肿瘤及细胞骨架相关靶基因。通过分析这些靶基因在肿瘤中的主要功能,为hsa-miR-486-5p的功能研究奠定基础,同时对其他microRNAs的功能研究提供有力的参考。

雌激素对去势高脂血症C57BL/6模型小鼠ZFP580 mRNA表达的影响

目的探讨雌激素对C57BL/6小鼠主动脉中ZFP580基因表达的影响。方法建立假手术组、去势对照组(卵巢切除)、去势实验组(卵巢切除并腹腔内注射苯甲酸雌二醇)C57BL/6小鼠高脂血症模型并鉴定;提取C57BL/6小鼠主动脉总RNA,设计并合成ZFP580及β-actin基因的引物,利用半定量RT-PCR方法分析ZFP580的mRNA水平。结果成功构建去势C57BL/6小鼠高脂血症模型;去势对照组小鼠ZFP580基因表达水平与假手术组和实验组相比均下降(P<0.05),而后两者表达水平比较无显著差异(P>0.05)。结论小鼠在摘除卵巢失去雌激素的调控后,ZFP580基因表达下调,小鼠在去势后定期给予雌激素,ZFP580基因表达回复至假手术组水平,说明雌激素能够上调ZFP580基因表达。

PBL教学法在临床病理生理学选修课的初探

临床病理生理学是一门沟通基础医学与临床医学的"桥梁"学科,其一般作为选修课在医学院校讲授。为了激发学员自我学习的兴趣,提高其利用信息能力、自我表达能力、综合分析能力,培养学员团队协作精神,我们采用了以问题为基础,学员为中心,教员为引导的小组讨论和学员自学的教学方式,取得了较好效果。

节能低碳政策对企业技术创新和污染减排的影响

本文通过构建环境规制影响企业创新选择的理论模型,揭示严格的命令-控制型环境规制能够同时产生创新补偿效应、遵循成本效应的理论机制。基于中国工业企业数据库、中国创新企业数据库以及中国工业企业污染排放数据库,以“十二五”期间政府实施“万家企业节能低碳行动”为准实验,构建双重差分模型对上述理论进行验证。研究发现,“万家企业节能低碳行动”这一节能低碳政策能够产生较为明显的“波特效应”,在降低企业污染排放的同时倒逼企业技术创新。机制检验表明,创新补偿效应大于遵循成本效应,是节能低碳政策推动企业技术创新的重要机制。异质性分析显示,与高融资约束企业和非资源型城市相比,节能低碳政策在低融资约束企业和资源型城市中更容易产生“波特效应”。拓展分析发现,伴随节能低碳政策强度由低到高,企业技术创新呈“先降—后升—再降”的倒S型特征,即存在一个“最优政策强度”区间。本文为完善节能低碳政策体系提供了来自发展中国家的理论依据与微观证据。

ZNF580-EGFP融合蛋白的亚细胞定位研究

目的:构建增强型绿色荧光报告蛋白(EGFP)与人ZNF580融合蛋白的真核表达载体,转染MGC803细胞进行表达,研究ZNF580-EGFP融合蛋白在MGC803细胞的亚细胞定位。方法:利用PCR技术扩增ZNF580基因cDNA开放阅读框架全编码区、N端编码区、C端编码区,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1,BglⅡ及HindⅢ双酶切电泳筛选、鉴定并测序。荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在MGC803细胞中的表达及亚细胞定位。结果:酶切pEGFP-ZNF580(1-172)、pEGFP-ZNF580(1-93)、pEGFP-ZNF580(94-172),电泳分析插入片段长度分别为:526bp、289bp、247bp,经连接点两端进行测序证实连接正确。pEGFP-ZNF580(1-172)、pEGFP-ZNF580(94-172)表达的ZNF580-EGFP融合蛋白定位在MGC803细胞核。结论:成功构建真核表达载体并在MGC803细胞中得到表达,分析其核定位信号可能位于ZNF580蛋白的C端C2H2型锌指主构域94-172位氨基酸区间。

间充质干细胞促血管新生的研究进展

间充质干细胞(MSC)具有重要的组织修复和再生的生物学特性,其具有促进血管新生的能力,已被广泛应用于缺血性疾病等的治疗。MSC促进血管新生的机制与促血管生长因子分泌及外泌体的生成有关。在低氧环境下,MSC促血管能力更强,其中,miRNA起到了重要的介导调控作用。本文综述了MSC治疗缺血性疾病的概况及促血管新生机制的研究新进展,重点探讨了低氧和miRNA对MSC促血管新生能力的调控。

ZNF580在1-磷酸鞘氨醇诱导内皮细胞迁移和增殖中的作用

目的:研究人锌指蛋白ZNF580在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)诱导内皮细胞迁移和增殖中的作用,为探讨ZNF580功能提供科学依据。方法:RT-PCR检测S1P受体在EA.hy926细胞的表达情况;不同浓度(0～10μmol/L)S1P刺激EA.hy926细胞不同时间(0～12 h)后,RT-PCR和Western blotting检测S1P对ZNF580表达的影响;利用p38 MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580研究S1P是否通过此信号通路影响ZNF580的表达;脂质体转染法获得瞬时过表达和瞬时低表达ZNF580的EA.hy926细胞;Transwell实验及MTT比色法分析ZNF580对内皮细胞迁移和增殖活性的影响。结果:EA.hy926细胞表达S1P1、S1P3和S1P5三种受体,其cDNA的特异性扩增产物分别为352 bp、701 bp和236 bp;S1P刺激EA.hy926细胞后,ZNF580的表达呈现剂量和时间依赖性增高;SB203580能够抑制S1P诱导的ZNF580的上调作用;ZNF580过表达(低表达)后内皮细胞迁移和增殖活性明显增强(减弱)。结论:S1P通过p38 MAPK信号通路影响ZNF580的表达;ZNF580在内皮细胞迁移和增殖过程中起着重要的调控作用。

基于问题的学习在病理生理学教学中的初步实践及评价

根据病理生理学学科的特点,尝试引入基于问题学习(Problem-based learning,PBL)教学法并加以实施,继而对实施的效果进行评价分析。结果表明,此种教学方法与传统教学方法相比,能够激发学生的学习兴趣、提高学生的自学能力和整体思维能力,能够提高医学基础课程的教学质量。

SPK调节低氧诱导白血病细胞增殖及糖代谢的实验研究

目的:应用人红白血病TF-1细胞系模型,研究SPK信号通路在细胞增殖和糖代谢中的作用。方法:应用慢病毒介导的shRNA干涉策略,干涉TF-1细胞中SPK的表达。通过RT-q PCR和蛋白印迹技术检测SPK在TF-1细胞中干涉效率。应用CCK-8测定细胞增殖活力,通过流式细胞仪检测Annexin V染色确定细胞凋亡情况。结果:低氧能够诱导TF-1细胞中HIF-1α、HIF-2α和SPK的上调,证明SPK是低氧诱导表达的重要分子。SPK-shRNA转染能够明显抑制TF-1细胞的增殖并且诱导TF-1细胞的凋亡。SPK敲减明显减低细胞葡萄糖的利用和消耗。结论:SPK是参与调节低氧诱导细胞增殖和葡萄糖代谢的关键信号分子,在低氧诱导细胞反应中发挥重要作用。

ZNF580与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在HEK293细胞的表达和定位

[目的]构建人ZNF580与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白真核表达载体,转染细胞进行瞬时表达,分析ZNF580-EGFP融合蛋白在人胚肾HEK293细胞中的表达和亚细胞定位。[方法]利用PCR技术扩增ZNF580基因cDNA开放阅读框架全编码区（编码1-172位氨基酸）、N端编码区（编码1-93位氨基酸）、C端编码区（编码94-172位氨基酸）,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1,BglΠ及HindШ双酶切筛选鉴定并测序。荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在HEK293细胞中的表达及亚细胞定位。[结果]pEGFP-ZNF580（1-172）、pEGFP-ZNF580（94-172）表达的ZNF580-EGFP融合蛋白聚集于HEK293细胞核。[结论]ZNF580蛋白的核定位信号位于其C端C2H2型锌指主构域（94-172位氨基酸区间）。

锌指基因ZFP580在大鼠心肌缺血损伤中的表达

【目的】观察大鼠ZFP580基因在急性心肌缺血的不同时期的表达变化,以初步探讨锌指基因ZFP580在心肌缺血损伤中的作用。【方法】腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)建立大鼠急性心肌缺血模型,分别于ISO注射后1h、24h取材,对照组腹腔注射等量生理盐水。观察心肌形态学改变,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)的含量,半定量RT-PCR及免疫组化方法分析ZFP580 mRNA及蛋白水平的表达变化。【结果】ISO处理组大鼠心肌组织广泛缺血损伤,血清LDH、CK含量明显升高(P<0.05),心室肌ZFP580mRNA表达下调(P<0.05),免疫组化染色阳性细胞百分率明显降低,以ISO注射1h后变化更为明显。【结论】ZFP580是心肌缺血损伤的早期调控基因之一,其表达下调可能参与了心肌缺血损伤的形成。

Aurora激酶抑制剂VX-680对慢性髓系白血病细胞增殖及凋亡的影响

本研究探讨Aurora激酶抑制剂VX-680在体外对白血病细胞系K562、KCL22和慢性髓系白血病(CML)患者骨髓CD34+细胞的增殖和凋亡的影响。利用CCK-8法观察VX-680对K562和KCL22细胞的增殖作用,细胞计数方法测定VX-680对CML的CD34+细胞增殖影响,Annexin V-PI凋亡检测试剂盒、流式细胞术分析VX-680对K562、KCL22细胞凋亡效应,集落形成试验检测VX-680对CML及正常供者(donor)的骨髓CD34+细胞集落形成能力影响。结果表明,Aurora激酶抑制剂VX-680(20-100 nmol/L)在处理细胞第3天时能明显抑制K562和KCL22细胞增殖(P<0.01),并能抑制CML患者骨髓CD34+细胞增殖,而且随着剂量增加,抑制作用增强;VX-680(20nmol/L)作用K562和KCL22细胞3天时可诱导细胞凋亡(P<0.01);集落形成试验表明,CML患者骨髓CD34+细胞在VX-680的体外处理下集落形成能力较正常骨髓CD34+细胞明显下降(P<0.01)。结论:Aurora激酶抑制剂VX-680在体外对慢性髓系白血病细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用。

ZNF580基因对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响

【目的】研究人C2H2型锌指蛋白基因ZNF580在人脐静脉内皮细胞增殖和迁移中的作用。【方法】利用细胞转染技术获得瞬时过表达ZNF580的EA.hy926内皮细胞,并用半定量RT-PCR、Western blotting法检测ZNF580的表达情况;采用MTT比色法和细胞迁移实验检测ZNF580对内皮细胞功能的影响。【结果】获得瞬时过表达ZNF580的内皮细胞(转染效率为60%),且ZNF580基因过表达内皮细胞增殖和迁移能力分别增强3倍和2.5倍。【结论】ZNF580能够促进内皮细胞增殖和迁移。

靶向型辅助腺病毒的构建及其功能研究

目的构建一种新型辅助腺病毒,并用于靶向型第三代腺病毒载体的制备,提高其对造血细胞的感染效率。方法采用重叠PCR的方法合成含有不完全包装信号序列A1-A4和loxP序列的DNA片段SynES,替换穿梭质粒pShuttle中原有的包装信号序列,得到穿梭质粒pShuttle-SynES;将所得穿梭质粒与骨架质粒Ad5/F11p在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得重组腺病毒质粒载体pAd5/F11p-HV,将其转染293细胞包装重组腺病毒Ad5/F11p-HV。参照第三代腺病毒包装策略,利用Ad5/F11p-HV包装获得携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的第三代腺病毒HD-Ad5/F11p-GFP;将其以不同的感染强度感染人白血病细胞系K562、U937、Jurkat和人脐带血CD34+细胞后,采用荧光显微镜和流式细胞术检测GFP的表达。结果采用DAN片段SynES替换穿梭质粒pShuttle上的包装信号,获得新的穿梭质粒pShuttle-SynES;进一步构建获得重组腺病毒质粒pAd5/F11p-HV,并制备了辅助腺病毒Ad5/F11p-HV。采用该辅助腺病毒包装pC4HSU-GFP,获得了第三代腺病毒HD-Ad5/F11p-GFP;CsCl密度梯度离心分离HD-Ad5/F11p-GFP和Ad5/F11p-HV,获得了高质量的HD-Ad5/F11p-GFP。与对照病毒HD-H14-GFP相比,HD-Ad5/F11p-GFP可明显提高对人白血病细胞U937、Jurkat和人脐带来源CD34+细胞的感染效率。结论设计并构建了一种靶向性辅助腺病毒,并以此为基础成功制备了对造血细胞高效感染的第三代重组腺病毒。

四种家兔实验性呼吸衰竭模型的比较研究

【目的】比较四种家兔实验性呼吸衰竭模型,寻找适合于临床医学本科生实验教学且效果好、易重复的建造模型的方法。【方法】将30只家兔随机分为对照组、不全窒息组、气胸组、油酸性肺水肿组和肾上腺素性肺水肿组。通过检测各组动物呼吸、血压、血气的变化,比较不同方法建造的呼吸衰竭模型的特点。【结果】家兔在不全窒息后呼吸频率、血压出现先升高后抑制的表现,PaO2下降,而PaCO2升高(P<0.05);气胸组家兔呼吸频率也出现先升高后抑制的表现,但血压变化不明显,PaO2下降,而PaCO2升高(P<0.05);油酸或肾上腺素静脉注射使家兔形成肺水肿后,呼吸改变以抑制为主,PaO2下降(P<0.05),而PaCO2变化不明显(P>0.05)。【结论】在不全窒息所诱导的呼吸衰竭模型上,可检测到呼吸、血压、血气的典型变化,且操作简单,是适宜于呼吸衰竭实验教学的造模方法。

siRNA沉默ZNF580基因对内皮细胞MMP-2的表达及侵袭能力的影响

【目的】观察ZNF580基因沉默后内皮细胞MMP-2的表达及迁移和侵袭能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】针对ZNF580基因不同部位设计并化学合成3对不同靶向小干扰RNA(siRNA),脂质体介导瞬时转染EA.hy926内皮细胞;应用半定量RT-PCR、Western blotting及明胶酶谱检测转染前后内皮细胞ZNF580和MMP-2 mRNA、蛋白的表达及活性变化;运用划痕愈合实验和Transwell小室模型检测转染前后内皮细胞迁移和侵袭能力的改变。【结果】筛选出最佳干扰序列siRNA序列3;下调ZNF580基因表达后,MMP-2 mRNA的表达及明胶酶的活性均下调(P<0.05),且内皮细胞体外迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01)。【结论】ZNF580在内皮细胞运动转移过程中具有重要作用,可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。