盐酸艾司洛尔残留溶剂测定方法优化

目的:优化盐酸艾司洛尔残留溶剂检测方法,以便于内部质量控制。方法:使用气相色谱顶空进样方式,选择合适的顶空平衡温度和时间,降低样品对仪器的污染,优化溶剂比例,降低基质效应,调整了载气流速和分流比,采用极性毛细管柱程序升温的方法,延长了高温段保持时间等,并进行方法学验证。结果:乙醚、乙酸乙酯、甲醇、甲苯均能得到有效分离,精密度良好,峰面积和质量浓度均呈很好的线性关系,分别考察样品加标50%、100%、150%3个浓度的准确度,平均回收率均能在94.8%~105.6%。结论:该方法准确,灵敏度高,克服了《中国药典》方法的缺陷,可用于盐酸艾司洛尔残留溶剂检测。

乌丹丸对寒凝血瘀子宫内膜异位大鼠PI3K/Akt/mTOR自噬信号轴及相关分子表达的影响

目的探讨乌丹丸对寒凝血瘀型子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)大鼠自噬信号轴磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB又称Akt)/雷帕霉素靶分子(mammalian target of rapamycin,mTOR)及相关分子表达的影响。方法随机将49只雌性SD大鼠分为假手术组、模型组、乌丹丸高、中、低剂量组、散结镇痛胶囊组、地诺孕素组,每组7只,采用冰水浴联合自体子宫内膜移植法建立寒凝血瘀EMs大鼠模型。假手术组及模型组每天给予10 mL/kg生理盐水灌胃,乌丹丸高、中、低剂量组分别给予2.4 g/kg、1.2 g/kg、0.6 g/kg灌胃,散结镇痛胶囊组每天给予0.48 g/kg灌胃,地诺孕素组每天给予0.2 mg/kg灌胃,各组持续用药28日。应用蛋白免疫印迹法和免疫组化法检测异位内膜组织自噬信号轴PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白以及相关自噬分子LC3、Beclin-1蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠异位内膜组织PI3K/Akt/mTOR蛋白表达上调,Beclin-1、LC3蛋白表达下调(P<0.01)。中药干预后,乌丹丸高、中剂量组、散结镇痛胶囊组和地诺孕素组异位内膜上PI3K/Akt/mTOR蛋白表达降低,而Beclin-1、LC3蛋白表达升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论PI3K/Akt/mTOR信号通路参与子宫内膜异位症发生,乌丹丸可能通过下调PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达,激活自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达,促进细胞自噬,治疗子宫内膜异位症。

加味鳖甲煎丸对白蛋白所致免疫性肝纤维化大鼠病理模型的影响

目的对加味鳖甲煎丸对白蛋白所致免疫性肝纤维化大鼠的病理和病变程度进行定量分析。方法采用人血清白蛋白(8 g/L)对大鼠进行皮下免疫,在大鼠产生抗体后分组[将造模大鼠随机分为6组,即加味鳖甲煎丸大(13g/kg)、中(6.5g/kg)、小(3.25g/kg)剂量组(简称为鳖甲大、中、小剂量组),模型组,阳性药秋水仙碱(1.0 mg/kg)对照组(简称秋水仙组),阳性药肝脾康(22.23 mg/kg)对照组(简称为肝脾康组)]给药,给药后40 min再由尾静脉注射人血清白蛋白,即可得到肝纤维化实验动物模型,实验结束后处死大鼠,病理切片,HE和Masson染色,对肝组织病理变化、胶原纤维含量进行分析。结果与模型组比较,鳖甲大、中、小剂量组能显著改善肝纤维化大鼠病变程度(总分降低率分别为62.50%、40.75%、8.33%);胶原纤维含量亦明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论加味鳖甲煎丸对白蛋白所致免疫性肝纤维化大鼠病变程度有明显防治作用。

鼻舒滴丸抗过敏作用及机理分析

目的 :研究中药鼻舒滴丸 (BSDW)对 2 .4 二异氰酸甲苯酯 (TDI)和组织胺造型豚鼠的影响及其作用机理。方法 :采用 10 %TDI橄榄油溶液为致敏剂造成豚鼠变应性鼻炎模型 ,观察BSDW对豚鼠变应性鼻炎模型鼻部症状、病理组织学及对血和鼻粘膜中组织胺含量及血清IgE含量的影响。采用组织胺造成豚鼠休克模型 ,观察BSDW对组织胺造型豚鼠的症状影响。结果 :BSDW可显著减轻变应性鼻炎模型豚鼠鼻粘膜病理改变 ,与造型对照组相比可使鼻粘膜柱状上皮和固有层腺体增生显著减轻 ,固有层嗜酸性细胞、嗜中性白细胞、单核细胞浸润明显减少 ,纤毛明显修复。还可明显降低变应性鼻炎模型豚鼠血清IgE的水平 ,减少血清及鼻粘膜中组胺的含量 ,可显著延长变应性鼻炎模型和组织胺造型豚鼠喘息和惊厥出现的时间 ,明显减少豚鼠哮喘的次数及延长组织胺造型豚鼠休克死亡时间。结论 :鼻舒滴丸有明显的抗过敏作用 ,其抗过敏作用的机理可能与其能降低血清IgE的含量、抑制全血和鼻粘膜中组织胺的释放密切相关。

幽门弹簧插入配合高盐热糊灌胃复制大鼠慢性萎缩性胃炎癌前病变模型形态学观察及早期细胞凋亡分析

目的:研究幽门弹簧插入配合高盐热糊灌胃法复制慢性萎缩性胃炎(CAG)癌前病变大鼠模型形态学及早期细胞凋亡特征。方法:采用幽门弹簧插入配合高盐热糊灌胃法复制CAG癌前病变模型,用双标记流式细胞术分析CAG癌前病变大鼠细胞凋亡的特征。结果:光镜观察表明CAG癌前病变模型复制成功,CAG癌前病变模型组大鼠早期凋亡率明显高于正常组(P<0.01)。结论:幽门弹簧插入配合高盐热糊灌胃法成功复制CAG癌前病变大鼠模型,细胞凋亡增强可能是CAG癌前病变的发病机制之一。

姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠Aβ生成和降解的影响

目的观察姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠β淀粉样蛋白(βamyloid,Aβ)生成酶早老素2(presenilin2,PS2)和Aβ降解酶胰岛素降解酶(insulin degrading enzyme,IDE)表达的影响,探讨姜黄素在AD防治中的机制。方法将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组[罗格列酮组,0.92mg/(kg·d)]、姜黄素大[400mg/(kg·d)]、中[200mg/(kg·d)]、小[100mg/(kg·d)]剂量组,每组10只;并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常对照组10只。每天灌胃给药1次,模型组和正常对照组用等体积0.5%羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose,CMC)灌胃。灌胃3个月后,应用Morris水迷宫、免疫组织化学等方法,检测动物的学习记忆能力、海马Aβ生成酶PS2和降解酶IDE表达变化。结果行为学检测,模型组小鼠的游泳轨迹多为边缘型,而正常对照组、阳性对照组、姜黄素各组小鼠的游泳轨迹多为趋向型和直线型。Aβ生成酶PS2和降解酶IDE的免疫组织化学染色结果,模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞较正常对照组明显增加(P<0.01),与模型组相比,姜黄素各组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞减少(P<0.01)。模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞平均灰度值较正常对照组降低(P<0.05),姜黄素小剂量组阳性细胞平均灰度值同模型组相比明显增加(P<0.01)。模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞较正常对照组明显减少(P<0.01),与模型组相比,姜黄素中剂量组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞明显增加(P<0.05)。模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值较正常对照组明显增加(P<0.01),姜黄素各组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值同模型组相比均明显降低(P<0.01)。结论姜黄素能通过减少Aβ生成酶和增加Aβ降解酶的表达,降低Aβ蛋白的表达进而改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的学习记忆能力。

柴胡疏肝散对肝郁证模型大鼠脑海马磷酸二酯酶-4及其亚型表达的影响

目的:研究柴胡疏肝散对肝郁证模型大鼠脑海马磷酸二酯酶-4及其亚型表达的影响。方法:将大鼠分为空白对照组、肝郁模型组、柴胡疏肝散组,运用模具束缚结合孤养的方法制备肝气郁结证候动物模型,采用qRT-PCR法检测大鼠脑海马PDE4A、PDE4B及PDE4D表达的影响。结果:模型组大鼠脑海马PDE4A、PDE4B及PDE4D的mRNA表达较正常组降低(P<0.05),柴胡疏肝散组大鼠脑海马PDE4A、PDE4B及PDE4D的mRNA表达较模型组升高(P<0.05)。结论:柴胡疏肝散抗肝郁作用的机制可能与通过上调肝郁大鼠脑海马PDE4及其亚型的mRNA表达而起到保护受损神经元,改善大脑功能,缓解肝郁症状的作用。

姜黄素对阿尔茨海默病小鼠海马InR和IGF1R表达的影响

目的观察姜黄素对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型APP/PS1双转基因小鼠胰岛素受体(insulin receptor,InR)和胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)表达的影响。方法将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性罗格列酮对照组(每日10 mg/kg)、姜黄素大(每日400 mg/kg)、中(每日200 mg/kg)、小剂量组(100 mg/kg),正常组为相同背景非转基因小鼠。灌胃3个月后,应用免疫组织化学和Western blot方法进行检测。结果 InR和IGF1R免疫组化染色,模型组小鼠大脑海马CA1区较正常对照组InR阳性细胞明显增加(P<0.01),姜黄素干预组有所恢复;而模型组小鼠大脑海马CA1区较正常对照组IGF1R阳性细胞明显减少(P<0.01),姜黄素干预组有所恢复。Western blot检测海马InR和IGF1R的蛋白表达结果与免疫组织化学检测结果一致。结论姜黄素可以使APP/PS1双转基因小鼠海马增加的InR和减少的IGF1R得以恢复,改善APP/PS1双转基因小鼠胰岛素信号转导。

加味鳖甲煎丸对四氯化碳所致肝纤维化大鼠肝组织的保护作用

目的:观察加味鳖甲煎丸对四氯化碳(CCl4)所致肝纤维化大鼠肝组织的保护作用。方法:由皮下注射40%CCl4溶液首次5 mL/kg,以后每周2次,每次3 mL/kg,连续注射6周,在病理检查证明造模大鼠肝组织出现肝纤维化后,分组给药,连续给药8周后处死大鼠,病理切片,HE和Masson染色,观察加味鳖甲煎丸对CCl4所致肝纤维化大鼠肝组织病变程度的影响,并对脂质空泡和胶原含量进行定量分析。结果:加味鳖甲煎丸大、中剂量组大鼠肝组织炎性细胞浸润程度、脂质空泡和胶原含量、肝假小叶形成的数量均较模型组大鼠明显减少,肝纤维化病变程度明显减轻。结论:加味鳖甲煎丸对CCl4所致肝纤维化大鼠肝组织有较好的保护作用,可明显减轻其病变程度。

MicroPET观察姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑葡萄糖代谢的影响

目的利用18氟-脱氧葡萄糖microPET(18F-FDG microPET)影像学技术观察正常对照组小鼠,模型组和姜黄素治疗组APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的脑葡萄糖代谢情况。方法随机挑选6月龄正常对照组C57BL/6J小鼠3只,模型组和姜黄素治疗组APPswe/PS1dE9双转基因小鼠各3只,通过2%异氟烷吸入麻醉后,从尾静脉弹丸式注射放射性示踪剂18F-FDG每例约14.8～16.5 MBq,摄取45 min后进行10 min microPET图像采集。计算并比较各组小鼠每克脑组织(除小脑)18F-FDG的摄取率。结果姜黄素治疗组小鼠每克脑组织18F-FDG的摄取率高于正常对照组和模型组。结论姜黄素能明显提高APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑18 F-FDG的摄取及每克脑组织的摄取率,并可能通过影响脑葡萄糖代谢而发挥神经保护作用。

源于冷刺激的血液与血管病理变化研究

目的观察反复冰水冷冻法建立的寒凝血瘀证模型大鼠血液与血管相关指标的变化,探讨寒冷诱导心脑血管疾病发生发展的病理生理学基础。方法以反复冰水冷冻法制备模型,取造模后不同时间点检测血液流变学和血浆血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素-F1α(6-Keto-PGF1α)、血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)含量,以免疫组织化学染色法观察白细胞介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达,电镜观察海马微血管形态。对比冰水冷冻、肾上腺素、右旋糖酐3种血瘀证模型在血液流变学和血浆TXB2/6-Keto-PGF1α差别。结果冰水冷冻模型大鼠的血液流变学和TXB2/6-Keto-PGF1α比值的改变接近或优于肾上腺素、右旋糖酐注射法制备的模型,且更符合中医寒凝血瘀证的形成机理。冰水冷冻模型大鼠的全血黏度和还原黏度各项指标、TXB2、GMP-140含量高于正常组大鼠(P<0.05),6-Keto-PGF1α含量低于正常大鼠(P<0.05)。冰水冷冻模型持续约1周,造模后第3天时各项指标变化最明显。冰水冷冻模型组大鼠的海马毛细血管外周星形细胞轴突轻微肿胀,血管受压,提示存在炎症和血管增生。IL-1β、ICAM-1在冰水冷冻模型组大鼠的整个脑区(包括海马、皮质)都有表达,ICAM-1分光密度值与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论反复寒冷刺激可诱导机体形成血瘀证,机体存在血液与血管的病理变化,这种血瘀证及其病理变化可能是心脑血管疾病发生发展的病理基础之一。

大分子葡萄糖酐所致血瘀模型小鼠中偶氮蓝渗出量与血瘀程度的相关性

目的探讨大分子葡萄糖酐血瘀模型小鼠偶氮蓝渗出量和血瘀程度的相关性。方法用0.5%偶氮蓝将大分子葡萄糖酐配制成10%、5%、2.5%的浓度,尾静脉注射,0.1mL/10g,分别在注入后0.5、1、2h对造模小鼠耳、舌的颜色进行观察,并用丙酮无水硫酸钠溶液将耳组织中的偶氮蓝提出,在590μm测定各实验组小鼠耳廓偶氮蓝含量。结果实验结果表明,不同浓度的大分子葡萄糖酐所致血瘀模型的血瘀程度明显不同,同单用偶氮蓝组小鼠相比,大分子葡萄糖酐10%、5%、2.5%的浓度造模小鼠的耳、舌的颜色明显呈现蓝色,随着剂量的增加偶氮蓝渗出量明显增加(P<0.05或0.01),在尾静脉注射后0.5h,造模小鼠耳、舌的颜色呈现点状或片状蓝色,在尾静脉注射后1h,造模小鼠耳、舌的颜色明显呈现蓝色,在尾静脉注射后2h,造模小鼠耳、舌的颜色明显消退。结论表明大分子葡萄糖酐所致血瘀模型的血瘀程度和偶氮蓝渗出量明显相关,呈现明显的量效和时效关系。

动态观察姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠尿液AD7C-NTP浓度的影响

目的通过动态检测小鼠尿液中AD7C-NTP的浓度变化,了解姜黄素在阿尔茨海默病治疗方面的作用。方法 3月龄APP/PS1双转基因小鼠35只,随机分为5组,每组7只,分别为模型组,阳性对照组(罗格列酮组),姜黄素大、中、小剂量组;另选用同月龄同背景的C57BL/6J小鼠7只作为正常对照组。以上6组连续灌胃3个月,分别于灌胃前、灌胃30d、灌胃60d和灌胃90d收集小鼠尿液,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测尿AD7C-NTP浓度的变化。结果不同时间点各组小鼠尿AD7C-NTP浓度的动态存在波动,各治疗组治疗2个月与治疗1个月相比,AD7C-NTP浓度均有所下降(P<0.05,P<0.01);同一时间点小鼠尿AD7C-NTP浓度组间比较:治疗2个月后,西药组,姜黄素大、小剂量组与模型组相比AD7C-NTP浓度有所下降(P<0.05,P<0.01)。结论姜黄素可降低AD模型小鼠尿液内AD7C-NTP浓度,延缓AD的进展。

MicroPET观察姜黄素对9月龄AD小鼠脑葡萄糖代谢的影响

目的通过氟18-脱氧葡萄糖MicroPET(18F-FDG microPET)影像技术观察姜黄素对9月龄AD小鼠的脑葡萄糖代谢影响。方法随机挑选9月龄(3月龄小鼠,干预6个月)模型组、西药组和姜黄素大、中、小剂量组AD小鼠各3只,以及同月龄C57BL/6J正常对照组小鼠3只,通过吸入2%异氟烷麻醉后,每例弹丸式从尾静脉注射放射性示踪剂18F-FDG约14.8～16.5 MBq,摄取1 h后采集10 min MicroPET图像。计算每组小鼠每克脑组织(除小脑)18F-FDG的摄取率并比较分析其差异。结果姜黄素中剂量组小鼠和西药组小鼠每克脑组织18F-FDG的摄取率高于正常对照组和模型组。结论姜黄素治疗后,9月龄AD模型小鼠脑18F-FDG的摄取有所改善,提示AD模型脑糖代谢所反映的脑功能得到改善,姜黄素发挥了神经保护作用。

姜黄素对9月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠行为学的影响

目的应用Morris水迷宫,测试AD模型APPswe/PS1dE9双转基因小鼠定位航行及空间搜索等学习记忆和记忆保持能力,评价姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠认知功能的影响。方法将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组(10 mg/kg.d)、姜黄素高(400 mg/kg.d)、中(200 mg/kg.d)、低剂量组(100 mg/kg.d),每组6只;并以同月龄遗传背景相同的C57/BL6J小鼠作为对照组。每天灌胃给药1次,连续灌胃6个月。应用Morris水迷宫进行行为学检测。结果姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠空间学习记忆能力障碍有改善作用,尤以姜黄素大剂量和中剂量组效果比较明显。结论姜黄素能改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的认知功能。

达维胶囊对精神分裂症阴性症状小鼠的治疗作用及机理研究

目的:研究达维胶囊(达维)对精神分裂症阴性症状模型小鼠的治疗作用及相关机理。方法:注射低于麻醉剂量的氯胺酮(30mg/kg),制作精神分裂症阴性症状动物模型,用强迫游泳法测定各组小鼠在游泳时保持不动时间,评价达维胶囊对精神分裂症阴性症状小鼠的治疗效果。并用荧光分光光度法测定小鼠全脑内及血清中神经递质(DA,NA,5-HT)含量,探讨其作用机制。结果:与模型组相比,达维大、中剂量组及氯氮平组能使小鼠强迫游泳保持不动时间明显缩短,脑内及血中5-HT含量明显降低,血中NE水平明显升高。结论:达维胶囊对精神分裂症的阴性症状小鼠有一定的治疗作用,其作用机理可能与其能调节脑内5-HT和NE能神经系统功能有关。

子宫内膜癌前病变及内膜癌的中医证型与VEGF关系的分析——基于络病理论对47例内膜癌及癌前病变病例的分析

目的:通过检测子宫内膜癌前病变及内膜癌患者病理切片的血管上皮生长因子(VEGF),结合患者的中医证型,分析两者的关系。方法:根据10例子宫内膜癌前病变及37例内膜癌患者的临床资料进行中医辨证分型;用免疫组化法检测患者病理切片的VEGF。结果:癌前病变患者气虚证最多见,内膜癌患者血瘀证最多见。内膜癌患者病理的VEGF的OD值明显高于癌前病变患者,差异显著。内膜癌患者中,血热证VEGF的OD值最低,湿毒瘀结证最高。结论:内膜癌血瘀证居多,组织中VEGF高于癌前病变组织,提示血瘀证VEGF升高,内膜癌患者存在胞络阻滞。气虚证的VEGF含量高于血热证,明显低于血瘀证和湿毒瘀结证。提示瘀血阻滞胞络时VEGF含量高,气虚证存在潜在血瘀可能,其含量高于血热证。

苦丹颗粒对平阳霉素所致肺纤维化大鼠防治作用的实验研究

目的:探讨苦丹颗粒对平阳霉素所致肺纤维化大鼠的防治作用。方法:在无菌条件下,将大鼠用3.5%水合氯醛麻醉,在气管分叉处上方进针,推注5mg·kg-1的平阳霉素生理盐水溶液,观察苦丹颗粒大、小剂量对平阳霉素所致肺纤维化大鼠的防治作用。结果:模型组大鼠在造模后第7,14,28,56天,肺泡腔和肺间质可见大量炎性细胞浸润,肺泡壁明显增厚、基质明显增多,肺间隔明显增宽,肺泡壁塌陷,肺泡腔消失;Masson染色,肺间质可见大量胶原纤维,肺实变形成。苦丹大剂量组与模型组相比,肺泡腔和肺间质仍可见较多炎性细胞浸润,肺间质水肿和点状坏死,肺泡壁增厚,肺间隔增宽,肺间质胶原纤维增多,但未见大片肺实变。苦丹小剂量组疗效不如苦丹大剂量组,但明显优于模型组,在肺间质仍可见大片肺实变形成,受累范围大于50%。结论:苦丹颗粒大剂量对平阳霉素所致肺纤维化大鼠具有一定的预防治疗作用。