MGIT960法和绝对浓度法对耐多药结核杆菌药敏检测比对分析

目的评价MGIT960法和绝对浓度法(L-J法)在耐多药结核杆菌药敏试验中的临床应用价值,确定一种快速准确的药敏检测方法。方法收集痰培养阳性,经菌种鉴定和异烟肼、利福平药敏试验确定为耐多药的结核杆菌菌株,采用MGIT960法和L-J法对一线抗结核药物链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)和二线抗结核药物卷曲霉素(CPM)、卡那霉素(KM)、氧氟沙星(OFX)和乙硫异烟胺(ETH)进行药物敏感性检测,比较两种检测方法的一致性。结果 212例阳性标本中分离出耐药菌株118例,经一线药敏试验确定为耐多药的菌株80例,占总耐药率的67.8%。MGIT960法和L-J法进行药物敏感性检测,符合率除ETH以外均在80%以上,以L-J法为金标准,MGIT960法的敏感度和特异度分别是SM 100%和93%,EMB 86%和81%,OFX 93%和88%,KM 92%和94%,ETH 100%和56%,CPM 88%和87%。结论 MGIT960法与L-J法对耐多药结核杆菌药敏检测结果除了ETH以外均具有很好的一致性,为耐多药患者一、二线药敏检测提供快速有效的诊断方法。

基因芯片技术检测结核杆菌耐药的临床研究

目的评价基因芯片技术在结核病防治工作中对结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药性的检测效果。方法利用基因芯片技术对38例涂阳肺结核患者的痰标本进行异烟肼和利福平耐药检测,以传统罗氏药敏试验为金标准,对基因芯片技术的检测效果进行评价。结果在38例菌株中,用基因芯片法进行异烟肼耐药基因检测,与罗氏药敏的符合率为84.2%,对38例进行利福平耐药基因检测,符合率为89.5%。结论基因芯片检测异烟肼和利福平的耐药性与罗氏药敏方法具有很好的一致性,具有简便快速,灵敏度高,特异性好的优点,对临床及时准确进行抗结核治疗具有重要意义。

探针熔解曲线技术检测结核杆菌耐药的研究

目的评价探针熔解曲线技术检测结核杆菌耐药效果。方法利用探针熔解曲线技术对46例涂阳肺结核患者的痰标本进行异烟肼和利福平耐药检测,以传统罗氏药敏试验为金标准,对探针熔解曲线技术的检测效果进行评价。结果在46例菌株中,用探针熔解曲线进行异烟肼耐药基因检测,与罗氏药敏的符合率为91.3%,进行利福平耐药基因检测,符合率为84.8%。结论探针熔解曲线检测异烟肼和利福平的耐药性与罗氏药敏方法具有很好的一致性,具有简便快速,灵敏度高,特异性好的优点,对临床及时准确进行抗结核治疗具有重要意义。

结核病临床诊治进展年度报告(2011年)(第二部分 结核病临床治疗)

一、抗结核新药的研究进入21世纪以来,抗结核药物的研究取得了较大进展,遴选出了20余种化合物,其中10余种已进入了临床前及临床研究阶段。（一）硝基咪唑类药物硝基咪唑类药物是对Mtb有较高活性的一类新的化合物。其中,PA-824和OPC-67683已在进行治疗结核病的Ⅱ期临床试验中。

环介导等温扩增法对痰标本中结核分枝杆菌检测效果的评估

目的评价环介导等温扩增法（loop-mediated isothermal amplification，Lamp）对结核分枝杆菌快速检测效果的临床验证与应用，评估该方法在结核病临床诊断中的效能。方法选取本院临床诊断结核病患者的痰标本483份，分别采用直接涂片法、固体培养法、液体培养法及Lamp法检测痰标本，并应用χ^2检验对不同方法的检测结果进行统计分析，P〈0.05为差异有统计学意义。结果在483例结核病患者痰标本中，以传统检测方法（涂片＋培养）为标准进行比较，Lamp检测的敏感度为84．67％[232／（232＋42）]，特异度为87．08％[182／（27＋182）]，阳性预测值为89．58％[232／（232＋27）]，阴性预测值为81．25％[182／（42＋182）]，一致性为85．71％[（232＋182）／483]。在干酪样痰标本中，Lamp和传统检测方法的阳性检出率分别为77．96％（145／186）和77．42％（144／186），均高于黏液痰的阳性率[38．46％（110／286）和42．66％（122／286）]（χ^2=70．78和χ^2=53．05，P值均〈0．01）。结论与传统检测方法比较，Lamp对结核分枝杆菌的检出，具有良好的敏感度、特异度和一致性。Lamp对于酪样痰标本的检出阳性率高于传统检测方法，而对于同一性状的标本检测，两种方法之间并无显著差异。

GeneXpert MTB／RIF检测内科胸腔镜活检组织研磨悬液诊断结核性胸膜炎的价值

目的 评价内科胸腔镜胸膜活检组织标本研磨悬液行结核分枝杆菌GeneXpert MTB/RIF（简称“Xpert”）检测对结核性胸膜炎的诊断价值。方法 选择2017年1月1日至12月31日在沈阳市胸科医院胸膜炎病房住院,行内科胸腔镜检查的不明原因胸腔积液患者51例,均未经过抗结核药物治疗。所有患者胸膜活检组织标本一部分行常规病理检查,另一部分研磨处理后制成悬液,行BACTEC MGIT 960分枝杆菌液体培养（简称“MGIT 960培养”）及Xpert 检测。以MGIT 960培养阳性并菌种鉴定为结核分枝杆菌和胸膜组织活检病理肉芽肿性病变并抗酸染色阳性作为确诊标准,评价活检组织研磨悬液行Xpert检测在结核性胸膜炎诊断中的价值。结果 51例患者中有34例确诊为结核性胸膜炎,其中通过MGIT 960培养阳性并菌种鉴定为结核分枝杆菌而确诊者20例（39.2%,20/51）,通过胸膜组织活检病理阳性而确诊者17例（33.3%,17/51）,其中3例患者被2种检测方法同时确诊;17例（33.3%）诊断为非结核性胸腔积液。以最终诊断结果为金标准,Xpert法、MGIT 960培养法、病理检查诊断的敏感度和特异度分别为64.7%（22/34）和100.0%（17/17）、58.8%（20/34）和100.0%（17/17）、50.0%（17/34）和100.0%（17/17）;Xpert 法检测的敏感度高于MGIT 960培养法和病理诊断,但差异无统计学意义（χ^2=1.53,P=0.466）。结论 内科胸腔镜直视下取胸膜组织活检标本,通过研磨后使其液化,再行结核分枝杆菌Xpert检测,敏感度及特异度均较高,对结核性胸膜炎的确诊具有一定的临床意义。

2008～2012年沈阳地区非结核分枝杆菌感染及耐药情况分析

目的了解沈阳市非结核分枝杆菌(NTM)感染及耐药情况。方法 2008～2012年沈阳市胸科医院共培养分枝杆菌3 847株,用硝基苯甲酸(PNB)和噻吩-2-羧酸肼(TCH)方法进行菌型初步鉴定,并用DNA微阵列芯片法对分离出的NTM进一步分型;采用绝对浓度法用12种抗结核药物对分离出来的NTM进行药物敏感性试验。结果分枝杆菌感染标本中分离出NTM 72株。2008～2012年分枝杆菌标本中NTM分离率分别为0.93%、1.08%、1.18%、1.55%、2.43%。NTM对利福喷丁耐药率最高,为97.2%,其他依次为对氨基水杨酸(95.8%)、异烟肼(93.1%)、链霉素(93.1%)、利福平(81.9%)、氧氟沙星(68.1%)、卷曲霉素(63.9%)、左氧氟沙星(55.6%)、丁胺卡那霉素(45.9%)、乙胺丁醇(41.7%)、卡那霉素(36.1%)和丙硫异烟胺(15.3%)。72株NTM中耐多药菌株和广泛耐药菌株分别达到57、36株。结论 2008～2012年沈阳市NTM感染率较高,并呈逐年上升趋势,其对利福喷丁、对氨基水杨酸、异烟肼高度耐药。

环介导核酸等温扩增技术对疑似结核病患者的筛查效果

目的评价环介导核酸等温扩增（100p-mediated isothermal amplification，LAMP）技术对疑似结核病患者的筛查效果。方法选取沈阳市第十人民医院2015年5月至2016年6月收治的疑似结核病患者604例，收集标本604份，其中痰标本503份，胸腔积液抽取液98份，支气管肺泡灌洗液3份，分别行涂片抗酸染色镜检（简称“涂片镜检”）、改良罗氏固体培养（简称“固体培养”）、MGIT960液体培养（简称“液体培养”）和LAMP检测，以临床诊断结果为标准，评价4种检测技术对结核病患者的检测效能，采用x^2检验比较结核分枝杆菌的阳性检出率，以P（0．05为差异有统计学意义。结果以临床诊断结果为参照，LAMP检测、涂片镜检、液体培养、固体培养的敏感度分别为72．78％（262／360）、51．67％（186／360）、66．67％（240／360）和59．17％（213／360）；特异度分别为88．11％（215／244）、99．59％（243／244）、99．59％（243／244）和99．59％（243／244），并且具有良好的一致性（Kappa值依次为0．58、0．46、0．61和0．54）。LAMP检测对病程〈1年患者的阳性检出率[45．76％（189／413）]明显高于涂片镜检E27．12％（112／413）1、液体培养[-37．05％（153／413）]和固体培养[-31．48％（130／413）（x^2=62．41、16．62、40．95，P值均=0．000）。当患者出现的临床症状45个时，LAMP的阳性检出率（44．37％，268／604）明显高于涂片镜检（28．15％，170／604）、液体培养法（36．75％，222／604）和固体培养法（32．12％，194／604）（x^值分别为76．22、21．59和47．21，P值均=0．000）。LAMP检测对涂片镜检阴性，液体培养及固体培养阴性标本具有较高的阳性检出率[分别为28．78％（120／417），（21．49％（78／363）和25．90％（101／390）]。结论LAMP技术检测结核分枝杆菌较涂片镜检、液体培养和固体培养检测效能高，适用于病程短、临床症状较轻（1～5个症状）、涂阴和培阴的疑似结核病患者的筛查。

1873例结核感染T细胞斑点试验检测阳性患者的临床分析

目的探讨结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT．TB）检测结果与结核病患者临床表现的相关性。方法选取临床确诊结核病且T-SPOT．TB检测阳性患者1873例，并从患者的基本情况、细菌学、影像学及常规检查等4个方面对T-SPOT．TB检测结果[SFCs（个）／10^6 PBMCs]与结核病患者临床表现的相关性进行比较分析。结果初治患者外周血单核细胞（PBMCs）中斑点形成细胞（SFCs）数[A孔中位数17个，B孔中位数13个]明显高于复治患者[-A孔中位数9个，B孔中位数9个]（A孔U--364391．5，P％0．01；B孔u=364259．0，P〈0．01）；中青年患者SFCs数EA孔中位数17个，B孔中位数12个]明显高于老年患者[A孔中位数9个，B孔中位数9个]（A孔U=304368．5，P％0．01；B孔U=302802．0，P〈0．01）；菌阳患者的SFCs数[A孔中位数27个，B孔中位数20个]明显高于菌阴患者[A孔中位数10个，B孔中位数10个]（A孔u=298504．0，P％0．01；B孔u=279815．5，P〈0．01）；肺部有空洞的患者SFCs数[A孔中位数32个，B孔中位数25个]明显高于肺部无空洞的患者[A孔中位数10个，B孔中位数9个]（A孔u=208015．5，P〈0.01；B孔u=216424．5，P〈0．01）；外周血单核细胞升高的患者SFCs数[A孔中位数21个，B孔中位数20个]明显高于外周血单核细胞正常的患者EA孔中位数10个，B孔中位数9个]（A孔U=308522．0，P〈0．01；B孔U=307748．0，P〈0．01）。结论T-SPOT．TB的SFCs计数虽然并不能完全与结核病活动程度呈正相关，但仍然存在着结核病活动程度越高SFCs数越多的趋势。

RNA恒温扩增实时检测技术在肺结核诊断中的价值

目的:探讨RNA恒温扩增实时检测法(SAT)在肺结核临床诊断中的应用价值。方法:对2012年12月至2013年1月沈阳市胸科医院48例肺部疾病患者痰标本采用金胺O痰涂片法将其分为阳性组19例,阴性对照组29例,应用SAT法、BD960快速培养法、TB抗体检测法同时对上述痰标本进行检测。结果:单一法SAT法的灵敏度最高,为68.40%;特异度最高的为BD960法(87.2%)。SAT+BD960联合法的灵敏度为73.70%。结论:SAT法比较灵敏度,联合检测法优于单一的SAT法和BD960法;SAT法的阳性率高于BD960法且检测周期短,所以SAT法及其联合BD960检测法可作为临床诊断结核病的有效途径。

两种基因诊断技术对结核分枝杆菌耐药性检测效果比较

目的:评价探针熔解曲线技术和基因芯片技术在结核病防治工作中对结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药性的检测效果。方法:利用基因芯片技术和探针熔解曲线技术同时对46例涂阳肺结核患者的痰标本进行异烟肼和利福平耐药检测,以传统罗氏药敏试验为金标准,对基因芯片技术和探针熔解曲线技术的检测效果进行评价。结果:在46例菌株中,分别用探针熔解曲线和基因芯片法进行异烟肼耐药基因检测,与罗氏药敏试验的符合率为91.3%和80.43%;对38例进行利福平耐药基因检测,符合率为84%和89.4%。探针熔解曲线技术和基因芯片检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:探针熔解曲线和基因芯片检测异烟肼和利福平的耐药性与罗氏药敏试验具有很好的一致性,且两种方法具有简便快速、灵敏度高、特异性好等优点,对临床及时准确进行抗结核治疗具有重要意义。

对比研究ELISPOT与QFT-GIT对于结核病诊断的应用价值

目的比较ELISPOT和Quanti-FERON-TB Gold In-Tube(QFT-GIT)试剂盒,探讨ELISPOT方法在活动性肺结核诊断中的意义。方法应用ELISPOT和Quanti-FERON-TB Gold In-Tube(QFT-GIT)对105份活动性结核患者(A组)和60份非结核呼吸系统疾病对照组(B组)进行检测。结果 ELISPOT与QFT-GIT方法的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为85.71%、86.67%、91.84%及77.61%和83.81%、76.67%、86.27%及73.02%,且两种方法差异无统计学意义(均P>0.05)。结论应于ESAT-6/CFP-10融合蛋白技术的ELISPOT检测方法能够诊断活动性肺结核,并对结核感染诊断提供一定的依据。

DNA微阵列芯片技术检测培阳肺结核患者痰样本中结核分枝杆菌耐药性的价值

目的评价DNA微阵列芯片法(以下称芯片法)检测培养阳性患者痰样本的利福平和异烟肼相关耐药基因的效能。方法收集并检测389例疑似肺结核患者痰样,以BACTEC MGIT 960液体药敏(以下称MGIT 960药敏)为参考标准,评价芯片法检测样本利福平(RIF)、异烟肼(INH)耐药性和MDR-TB的灵敏度、特异度及一致性。应用线性探针耐药技术(GenoType MTBDRplus VER 2,0)对不一致的结果进行分析。结果将334例(334/389)MGIT 960培阳结果对应的痰处理液进行芯片法耐药检测,其中2例为非结核分枝杆菌,9例为阴性。与参考标准对比,芯片法对利福平耐药检测的灵敏度为92.4%,特异度为97.7%,Kappa值为0.90;异烟肼为82.6%,特异度为99.2%,Kappa值为0.86。在MDR-TB的病人中,芯片法与MGIT 960药敏法有较好的一致性;且在初治患者中Kappa值为0.95,灵敏度为95.5%,明显优于复治患者。结论线性探针耐药技术对22份不一致结果进行分析,认为检测限及耐药机制的差异、异质性耐药和多重感染等原因是导致基因型和表型或是两种分子法结果不一致的主要原因。应用芯片法检测培阳患者痰样本的利福平和异烟肼的相关耐药基因,与MGIT 960药敏法相比较具有较好的灵敏度、特异度和一致性,可快速检测出患者耐药情况和MDR-TB患者,为临床患者尤其是初治患者提供了快速有效的化疗参考方案。

T-SPOT对青少年结核病诊断价值的研究

目的 探讨结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT）在青少年结核病诊断中的价值。方法 回顾性分析本院2012年1月~2015年2月临床确诊为结核病并进行T-SPOT检测的162名青少年患者,并与结核抗体检测结果进行对比。结果 T-SPOT对全体患者、肺结核患者和肺外结核患者检测的阳性率分别为63.58%、58.89%和69.44%,明显高于结核抗体检测的20.99%、23.33%和18.06%。结论 T-SPOT诊断青少年结核病具有快速、准确、阳性率高的特点,对青少年人结核病具有极高的诊断价值。

TLR9和VDR基因多态性与结核病易感性的相关性分析

目的探讨TLR9（rs352139）和VDR基因（rs731236和rs2228570）单核苷酸多态性（SNP）与结核病易感性之间的相关性。方法选取2013年1月-2015年6月期间我院确诊为初治活动性肺结核患者300例（结核组）和300例健康体检者（健康对照组）,采用聚合酶链反应结合高分辨率熔解曲线对rs352139、rs731236和rs2228570位点的SNP进行检测。结果 TLR9（rs352139）的AA和GG基因型比AG基因型人群患结核病的风险增加,OR值分别为1.061（0.76-1.49）和1.472（0.95-2.27）;Taq（rs731236）的TT和CC基因型对比TC基因型人群患结核病的风险增加,OR值分别为1.049（0.68-1.61）和1.204（0.36-3.99）;Fok（rs2228570）的CC和TT基因型对比TC基因型人群患结核病的风险增加,OR值分别为1.164（0.83-1.64）和1.048（0.69-1.61）,但两组间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论在中国沈阳地区,TLR9（rs352139）和VDR基因（rs731236和rs2228570）SNP可能与结核病易感性关联不大。

PCR-荧光探针法检测分枝杆菌的临床应用价值

目的比较PCR-荧光探针法和改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的一致性,探讨两种方法在临床上的应用价值。方法应用PCR-荧光探针法检测69例改良罗氏培养阳性的分枝杆菌核酸,比较两种方法检测结果的一致率;两种方法检测结果不一致样本进行测序验证,以测序结果作为金标准,分析两种方法检测结果的正确率及不一致的可能原因。结果两种方法检测总一致率为89.9%,结核分枝杆菌检测一致率为87.5%,非结核分枝杆菌检测一致率为90.6%。PCR-荧光探针法和改良罗氏培养法共有7例检测结果不一致,与测序结果比对后,改良罗氏培养法检测的正确率为94.2%,PCR-荧光探针法检测的正确率为92.8%。结论操作简单、快速,灵敏的PCR-荧光探针法与作为传统金标准的改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的一致性良好、正确率高,可作为临床分枝杆菌感染诊断的重要检测手段。

Xpert MTB/RIF检测技术和MGIT960培养在肺外结核诊断中的比较分析

目的评价结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)和BACTEC MGIT960液体培养技术(MGIT960培养)在肺外结核诊断中的临床应用价值。方法收集沈阳市第十人民医院2017年1月至2017年12月住院的高度疑似肺外结核患者标本309例,分别进行Xpert MTB/RIF检测和MGIT960培养,以临床综合诊断为参考标准,对两种方法在各类肺外结核标本中的阳性检出率以及敏感性和特异性进行比较分析,对MGIT960培养阳性的菌株进行药敏试验,并与XpertMTB/RIF法结果进行比较。结果309例患者中,临床确诊肺外结核238例,非结核71例。Xpert MTB/RIF对于肺外结核中不同标本的阳性检出率均高于MGIT960培养法,尤其对脓液的检出具有明显优势。以临床综合诊断为标准,两种方法的总体敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值以及约登指数分别为65.5%和43.7%、100.0%和93.0%、100.0%和95.4%、46.4%和33.3%、0.66和0.36。两种检测方法比较差异有统计学意义(x^2=22.9,P<0.05)。238例临床确诊肺外结核标本中,MGIT 960培养阳性104例,耐药标本13例,以MGIT960药敏试验为标准,XpertMTB/RIF检测利福平的敏感度和特异度分别为92.3%和100.0%,两种检测方法进行一致性检验k=0.95,两者具有很好的一致性。结论Xpert MTB/RIF对肺外结核病的诊断优于MGIT960培养法,该技术操作简便、阳性检出率较高,对快速诊断肺外结核以及判定利福平耐药情况具有较高的临床应用价值。

103例未成年结核病患者T-SPOT结果分析

目的：探讨结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT）检测孔斑点数与未成年结核患者临床表现之间存在的联系。方法选取2012年1月~2015年2月我院临床确诊为结核病且T-SPOT检测阳性的未成年患者病例，并对T-SPOT结果与结核患者临床表现进行比较分析。结果肺部有空洞病变的患者A和B孔斑点数均明显高于肺部无空洞的患者，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 T-SPOT检测孔斑点数量可能与肺部空洞病变有关，肺部空洞病变越严重，斑点数越多。

512例老年结核病患者T-SPOT.TB结果回顾性分析

目的探讨酶联免疫斑点试验（T-SPOT.TB）检测结果与老年结核患者临床表现的相关性。方法选取本院2012年1月~2015年2月临床确诊结核病且T-SPOT.TB检测阳性老年患者病例,分析T-SPOT.TB结果与结核患者临床表现的相关性。结果菌阳患者的斑点数明显高于菌阴患者的斑点数（P〈0.01）,肺部有空洞的患者斑点数明显高于肺部无空洞的患者（P〈0.01）。结论 T-SPOT.TB的斑点数虽并不精确地与结核活动程度成正相关,但仍然存在结核活动程度越高,斑点数越多的趋势。

小鼠受精卵早期发育过程中Plk1表达和活性变化及其与MPF关系的研究

目的研究在小鼠受精卵早期发育过程中,哺乳动物Polo-like激酶(Plk1)的表达和活性变化及其与有丝分裂促进因子(MPF)活性变化的关系。方法以一细胞期小鼠受精卵为材料,用Western Blotting方法检测Plk1蛋白含量;用液闪计数分析仪分别测定Plk1和MPF的cpm值来表示各自激酶活性。结果小鼠受精卵第一次有丝分裂过程中Plk1的含量没有显著变化,而Plk1活性在M期达到最高峰,在M期退出时迅速下降。加入MPF抑制剂后MPF和Plk1活性均未在M期出现峰值。结论Plk1的活性是随着细胞周期的进程而变化的;Plk1在小鼠受精卵早期发育过程中可能参与了MPF的自我催化活化环。