miR-370-3p在绵羊中的表达、生物信息学分析与靶基因预测

本研究以新吉细毛羊和小尾寒羊为实验动物,用实时荧光定量PCR检测miR-370-3p在绵羊不同组织中的表达变化;利用Mega11.0对miR-370-3p进行序列分析,并构建进化树;利用miRBase对脊椎动物的miR-370-3p序列进行检索,使用Ensembl数据库对miR-370-3p进行定位;利用在线网站预测miR-370-3p的靶基因,并进行GO、KEGG分析。组织表达结果显示,miR-370-3p在2种绵羊1月份和10月份的皮肤组织中均存在显著差异;在2种绵羊同组织间均存在显著差异。miR-370-3p序列主要存在于哺乳动物,且在不同物种间高度保守;miR-370-3p共有315个靶基因;GO分析结果显示靶基因主要富集在蛋白质的自磷酸化、细胞核与细胞质的运输、神经元凋亡过程等方面;KEGG通路分析表明靶基因主要富集到MAPK信号通路、寿命调节通路和细胞内吞作用等,其中多个与毛囊生长发育相关的基因富集到相关通路之上。绵羊miR-370-3p在皮肤组织存在时空表达差异,在各组织间广泛表达,可能通过靶向MAPK信号通路及寿命调节等通路参与调控毛囊的生长发育。

动物疫病活载体疫苗研究进展

活载体疫苗是以细菌或病毒作为载体表达外源抗原和治疗因子的载体系统,具有安全性高、毒力返祖风险低、成本低,可诱导免疫机体产生高水平的体液免疫、细胞免疫或黏膜免疫等优点,是目前最具发展潜力的基因工程疫苗之一,在动物疫病防控领域应用较多。病毒载体包括DNA病毒(如腺病毒、腺相关病毒和痘病毒等)和RNA病毒(如新城疫病毒、流感病毒等);细菌载体包括减毒致病菌与非致病菌两类,主要包括乳酸菌、沙门氏菌、大肠杆菌等。活载体疫苗常用的抗原呈递策略有载体-宿主平衡致死系统、微生物表面展示系统。多种疫苗载体的开发及抗原呈递策略的选择,使得活载体疫苗的使用价值最大化。不同载体疫苗在预防疫病方面均有不同优缺点,应根据实际情况选择最优最适合的活载体疫苗。本文综述了动物疫病防控领域的病毒和细菌活载体疫苗研究进展及其抗原呈递方式,以期为活载体疫苗的进一步研究提供参考。

山东地区1株牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及遗传进化分析

【目的】了解并掌握山东地区牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)流行毒株的生物学特性和遗传变异情况,为BVDV防控提供理论依据和技术支持。【方法】采集养牛场疑似BVDV感染样品制备组织上清液,利用RT-PCR方法进行病原鉴定,接种MDBK细胞进行病毒分离培养,采用间接免疫荧光试验(IFA)和电镜观察对分离毒株进行鉴定,对分离毒株全基因组进行分段扩增、克隆和测序,并采用Lasergene等软件分别对全基因组序列、N^(pro)和E2基因进行比对和遗传演化分析。【结果】病料样品BVDV特异性引物RT-PCR扩增得到大小约504 bp的目的条带,与预期大小一致。IFA结果显示特异性绿色荧光;电镜下可见直径约50 nm的病毒粒子,表明分离到1株非致细胞病变型BVDV毒株,命名为SDNF9株。分离株基因组全长为12232 nt,与BVDV参考毒株的全基因组核苷酸相似性为79.1%~93.8%,其中,与中国分离毒株22AH-1和澳大利亚毒株Bega-like的相似性最高,为93.8%;N^(pro)和E2蛋白氨基酸存在多个位点变异;SDNF9分离毒株与BVDV2型毒株和BVDV3型毒株处于遗传演化的不同分支,而与BVDV 1型毒株处于同一分支,属于BVDV 1c基因型。【结论】本研究成功分离到1株BVDV 1c流行毒株,并进行基因组和遗传演化分析,与中国分离毒株22AH-1亲缘关系最近,为山东地区牛病毒性腹泻的防控和疫苗研制提供数据和材料支持。

绵羊血浆外泌体中miR-485-3p、miR-154-3p/5p基因簇生物信息学分析

该文以新吉细毛羊与小尾寒羊为研究对象。使用miRBase数据库、GO功能分析和KEGG通路富集分析等生物信息学方式对miR-485-3p、miR-154-3p/5p基因簇进行靶基因预测和分析。结果表明:miR-485-3p交集靶基因72个、miR-154-3p交集靶基因29个、miR-154-5p交集靶基因23个。GO功能分析与KEGG分析提示靶基因可与小蛋白偶联进行蛋白质修饰、和蛋白质泛素化以及细胞衰老、昼夜节律和NOD样受体通路相关;转录因子预测可知共同转录因子为235个;通过TF-miRNA-mRNA调控网络图可知,miR-485-3p、miR-154-3p和miR-154-5p基因簇上游转录因子和下游靶基因共同调控生物体过程;分析提示TRIM28、ZNF92和SPI1等转录因子在mRNA上游扩大miRNA基因簇强沉默功能,使oar-miR-485-3P、oar-miR-154-3p和oar-miR-154-5p通过靶基因DYRK1A参与细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡从而影响羊毛纤维机制的表达。

绵羊SMAD 4基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究

【目的】克隆绵羊SMAD同源物4(SMAD4)基因并探究其在绵羊中的生物学功能,为研究SMAD 4基因在毛囊生长发育过程中的调控作用提供依据。【方法】以小尾寒羊皮肤组织cDNA为模板,PCR扩增SMAD 4基因CDS区并克隆测序,对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR检测SMAD 4基因在小尾寒羊和新吉细毛羊心脏、肝脏、脾脏、肾脏、皮肤和肌肉中的表达量。【结果】试验成功克隆小尾寒羊SMAD 4基因CDS区,长1662 bp,编码553个氨基酸。系统进化树分析显示,绵羊SMAD 4基因核苷酸序列与山羊和牦牛的亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。生物信息学分析发现,SMAD4蛋白为不含信号肽的非跨膜蛋白,存在磷酸化和糖基化位点,属于亲水性蛋白,主要存在于细胞核中;SMAD4蛋白二级结构以无规则卷曲为主,与三级结构预测结果一致;蛋白互作分析显示,SMAD4蛋白与SMAD2、SMAD1、TGFBR1、TGFBR2、SMAD3等蛋白存在相互作用。实时荧光定量PCR结果显示,SMAD 4基因在绵羊中广泛表达;与新吉细毛羊相比,小尾寒羊心脏、脾脏和皮肤中SMAD 4基因表达量均显著上升(P<0.05),而肺脏和肌肉中SMAD 4基因表达量均显著下降(P<0.05)。【结论】试验成功克隆绵羊SMAD 4基因CDS区,该基因在绵羊各组织中均有表达,且在小尾寒羊和新吉细毛羊心脏、脾脏、皮肤、肺脏和肌肉中存在显著差异。试验结果为进一步探究绵羊SMAD 4基因调控毛囊发育提供理论依据。

GI-19型(QX型)鸡传染性支气管炎病毒的病原特性分析

为了解GI-19型(QX型)鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)的病原特性,筛选6株GI-19型IBV进行EID_(50)测定以及鸡胚致病力和雏鸡致病性试验,并应用高通量测序技术进行基因组测序,分析病毒基因组和主要结构蛋白编码基因生物特性。结果显示:IBV/Chicken/Hubei/S1402/2021分离株对鸡胚有致病性,导致鸡胚表现胚体蜷缩、矮小等典型病变特征,经SPF鸡胚传代至第5代,表现较为稳定的EID_(50)(10^(-5.33)/0.1 mL),但其对雏鸡无致病性;IBV/Chicken/Sichuan/C1452/2021分离株对鸡胚没有致病性,但将其接种1日龄雏鸡,可导致雏鸡出现33.33%(5/15)的发病率,引起的典型病变为雏鸡肾脏尿酸盐沉积。对6株GI-19型IBV分离株的基因组和主要结构蛋白编码基因进行系统进化分析和生物特性分析,发现IBV/Chicken/Hubei/S1402/2021分离株与其他分离株存在明显差异,且在1a和1b基因区域存在重组现象。结果表明:我国流行的部分IBV毒株对鸡胚和雏鸡的致病性存在差异;IBV毒株S1基因的变异可能会影响其致病力,而N基因的变异可能会影响其感染细胞的能力。本研究分析了部分GI-19型IBV毒株的病原学特征,为揭示IBV的致病机理和免疫机制奠定了基础,为制定鸡传染性支气管炎防控策略提供了依据。

禽产气荚膜梭菌研究进展

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,CP)是重要的食源性病原体之一,可对人类和动物健康造成严重威胁。CP在家禽中主要引起禽坏死性肠炎,严重影响了全球肉鸡贸易与生产。关于禽CP的研究当前主要集中于检测及分型方法、疫苗和耐药性方面。目前禽CP疫苗多处于实验室研发阶段,因此禽CP感染的防治主要依靠抗生素,而抗生素的频繁使用又导致了菌株耐药性问题,防治效果有限。因此,CP耐药性研究以及临床诊断技术完善及疫苗研发推进迫在眉睫。本文简述了CP的病原特点、致病机理及禽间的优势流行分型,梳理了禽CP不同检测方法的优点及分型方法,阐述了禽CP耐药现状以及疫苗研发方向及进展,提出了禽CP感染辅助防治措施,以期为CP感染防控提供参考。

禽传染性支气管炎概述

禽传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种禽类传染病,主要造成禽呼吸系统和泌尿生殖系统病变。IBV具有高度传染性,可引起雏鸡死亡,肉鸡增重减缓,蛋鸡产蛋下降。IBV易发生变异,血清型和基因型众多,不同基因型毒株之间存在较大的抗原差异,导致疫苗及药物研发存在较大难度,给该病防治带来一定挑战。多种血清学和分子生物学技术已用于IBV检测,如酶联免疫吸附试验、反转录聚合酶链式反应、重组酶介导扩增技术等。针对新型IBV仍需研究敏感性、特异性好的检测方法及开发安全性高、免疫效果好的新型疫苗。本文围绕IB的病原学、流行病学以及病毒分型方法、变异机制及检测方法等进行综述,以期为该病后期研究提供参考。

新吉细毛羊和小尾寒羊差异表达miRNAs筛选与调控网络分析

【目的】筛选新吉细毛羊和小尾寒羊体内差异微小RNAs(microRNAs,miRNAs),研究miRNAs和靶基因对羊毛纤维机制表达的调控模式。【方法】选取两种毛细度存在显著差异的新吉细毛羊(XFWS)和小尾寒羊(SXW),采集血浆中外泌体进行转录组测序,构建文库并鉴定miRNAs,使用edgeR包对miRNAs进行差异表达分析,使用miRanda和Targetscan软件预测miRNAs的靶基因,对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析,对差异miRNAs靶基因进行miRNAs-mRNA互作调控网络分析,使用实时荧光定量PCR对转录组数据中miRNAs进行验证。【结果】新吉细毛羊和小尾寒羊血浆外泌体中存在1019个miRNAs,其中已知miRNAs 112个,新预测miRNAs 907个,经筛选存在差异表达miRNAs 364个,其中与羊毛细度呈正相关性基因62个,呈负相关性基因302个。经多数据库比对获得靶基因的注释信息18996个,GO功能富集分析显示,17193个注释靶基因富集到6608个条目中;KEGG通路分析显示其富集在276个通路之中,经蛋白互作分析找到与羊毛纤维机制表达相关miRNAs 5个及靶基因42个。实时荧光定量PCR验证差异miRNAs结果显示,oar-miR-218a、oar-miR-370-3p、oar-miR-133、oar-miR-29a、oar-miR-27a、oar-miR-485-3p、oar-miR-22-3p、oar-miR-23a、oar-miR-148a、oar-miR-412-3p在新吉细毛羊体内表达量均显著高于小尾寒羊(P<0.05),oar-miR-26a、oar-miR-29b、oar-miR-329b-3p、oar-miR-409-3p、oar-miR-30a-3p在小尾寒羊体内表达量均显著高于新吉细毛羊(P<0.05),与转录组测序结果一致。【结论】新吉细毛羊和小尾寒羊体内存在oar-miR-218a、oar-miR-370-3p、oar-miR-133等364个差异miRNAs,其中oar-miR-133、oar-miR-150、oar-miR-127、oar-miR-23a、oar-miR-370-3p与其42个靶基因共同参与羊毛纤维机制表达,FGFR2、NOTCH1、SHH参与多通路调节,在联级调节中起重要作用。

北京奥运会观众交通需求预测

科学的奥运观众交通需求预测是奥运期间合理交通调度、提高交通运行效率的前提。介绍了奥运观众交通需求预测的重要意义,并对预测方法及内容进行了分析,为奥运期间比赛场馆专线公交车辆的配置和场馆周边临时公交场站的设置提供了参考。提出应重点把握早晚高峰时段专线公交车辆的调度、多场馆车辆协同调度和观众入退场交叠场馆的交通组织问题,并据此从整体、分区域、分场馆三个层面分析了奥运观众交通需求,提出针对性建议,如增大安检缓冲区面积等。

新吉细毛羊KAP24.1基因多态性及羊毛性状的相关性分析

为了解角蛋白关联蛋白(KAP)24.1基因在新吉细毛羊群体中的多态性与其毛用性状的关联性,试验采用DNA测序法对新吉细毛羊基因组编码区进行测序,找出基因突变位点,然后采用PCRSSCP技术对497只新吉细毛羊KAP24.1基因编码区序列进行多态性分析,并利用最小二乘模型对其多态性与产毛量、纤维直径、拉伸长度进行关联性分析。结果表明:在编码区有两处突变点,一处在348 bp处发生C→T的突变,脯氨酸突变为亮氨酸;另一处在414 bp处发生T→C的突变,丝氨酸突变为脯氨酸,均属于错义突变,KAP24.1基因的AA、AB、BB和CC基因型与纤维直径不相关(P>0.05),BB基因型的产毛量和拉伸长度显著大于AB基因型、CC基因型(P<0.05)。说明KAP24.1基因可以作为新吉细毛羊产毛量和拉伸长度主要候选基因之一,BB基因型可以作为分子标记用于预测绵羊产毛量和拉伸长度。

地方高校应用技能型人才培养的兽医学案例库建设与研究

为满足地方高校应用技能型专业发展及其人才培养的需要,兽医学专业在教学过程中应对课程教学逐步实施案例教学方式,保证教学过程中理论教学与实践相互融合;但在实施过程中普遍存在教学案例数量不足、内容与生产实践脱节等显著问题。在探讨案例库建设困境的基础上,以研究兽医学专业案例库的建设为重心,并以培养应用技能型兽医人才为出发点,提出兽医学专业教学案例库建设的合理化建议。

民族性高校动物解剖学教学改革与实践能力培养研究

立足于民族性地方高校动物解剖学人才培养问题,探讨了其理论教学、实验教学、实践教学、考核体系的改革问题,旨在提高学生的实践能力。

中草药肠宁Ⅱ对9种细菌的体外抑菌试验

采用体外最小抑菌浓度MIC检测法和抗菌效率检测法分别对常见的消化道病原菌、呼吸道病原菌、乳房炎病原菌进行测定.表明中药肠宁Ⅱ对常见病原菌表现出不同程度的抑菌作用,可以抑制和杀灭体外病原菌的生长发育.

中药制剂CNⅡ对新生犊牛红细胞免疫水平的影响

为探讨中药制剂CNⅡ对新生犊牛红细胞免疫功能的影响,本试验选择12头健康新生犊牛分为试验组和对照组,连续给药10天。分别在第10、20、30天静颈脉采血,测定红细胞C3bR受体花环率、红细胞IC花环率,并进行比较。结果经统计学分析差异显著。表明中药制剂CNⅡ具有增强新生犊牛红细胞免疫水平的作用。

中药制剂肠宁Ⅱ对新生犊牛免疫水平的影响

为探讨中药制剂肠宁Ⅱ对新生犊牛免疫水平的影响,选择12头健康新生犊牛分为试验组和对照组,连续给药10 d。分别在第10、20、30天颈静脉采血,测定红细胞C3b受体花环率、红细胞IC花环率、淋巴细胞转化率、Ea花环率和EAC花环率,并进行比较。统计学分析结果显示差异显著,表明中药制剂肠宁Ⅱ具有增强犊牛机体免疫水平的功能。

国家标准《城市轨道交通客流预测规范》送审稿专家审查会在宁波举行

2014年4月3日，由北京交通发展研究中心主编的国家标准《城市轨道交通客流预测规范》（以下简称《规范》）送审稿专家审查会在宁波召开。会议由住房和城乡建设部城市轨道交通标准化技术委员会主持，住房和城乡建设部标准定额研究所有关领导到会指导，中国城市规划设计研究院、上海市城市综合交通规划研究所、广州市交通规划研究所、南京市城市与交通规划设计研究院有限责任公司、中国地铁工程咨询有限责任公司等参编单位和宁波市规划设计研究院的部分同仁参加了会议。

麝鼠巴氏杆菌病的诊断

1.临床症状 2009年2月，吉林省图们市某麝鼠养殖场的麝鼠突然发病，表现为精神沉郁、背毛粗乱、鼻镜干燥、体温升高、食欲废绝、并伴随腹泻、下痢、迅速消瘦，不愿活动，视粘膜充血、发绀，尿血、便血，神经症状明显，抽搐、麻痹，病程1至2天。