超高效液相色谱-串联质谱法检测畜禽肉中199种药物及代谢物残留

建立了一种可检测猪肉、鸡肉、牛肉和羊肉四种畜禽肉中199种药物及代谢物残留的超高效液相色谱-串联质谱法。样品经Mcllvaine-Na_(2)EDTA缓冲液和2%甲酸乙腈溶液提取后,高速离心去除蛋白质等杂质,用captiva EMR-Lipid小柱净化。以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸溶液为流动相洗脱,在C_(18)色谱柱上分离。ESI离子源正负离子模式同时扫描,并采用多反应监测模式(MRM)检测,基质匹配标准溶液外标法定量。结果表明:各药物及代谢物在空白猪肉、鸡肉、牛肉和羊肉基质匹配系列浓度范围内均呈现良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.990;在4种基质中的定量限范围在0.5~20μg/kg之间;在定量限~200μg/kg添加浓度上的回收率范围为60%~120%,批内与批间相对标准偏差均小于20%。该方法具有简便快捷、选择性好、定性准确,重复性好等特点,可进行多种类药物及代谢物残留的同步处理和同时检测。对提高实际样品检测工作效率,更好的确保动物性食品安全,保护人类健康具有重要意义。

欧盟兽药上市许可途径介绍及EMA集中审评程序批准兽药情况分析

本文介绍了欧盟兽药上市许可途径,汇总了EMA(含EMEA)成立以来由集中审评程序(CP)批准的兽药情况,并从批准动物和批准用途等方面进行统计分析,希望能对我国的兽药研发和审评工作有一定指导意义。

社会化能力验证基层单项能力考核工作的探索——以兽药残留及违禁添加物快速检测为例

根据2022、2023年开展社会化能力验证基层单项能力考核——兽药残留及违禁添加物快速检测工作的初步探索,本文从单项能力考核实施方式、两年能力考核结果等方面总结了基层单项能力考核的总体情况,分析了考核扣分的主要原因,针对存在的问题,从5个方面重点阐述了检测单位如何提高快速检测单项考核能力,并就如何做好快速检测基层单项能力考核工作提出了4点建议。

美国FDA兽药上市许可途径介绍及近年来新批准兽药情况分析

介绍了美国FDA兽药上市许可途径,汇总了2018年1月至2024年3月美国FDA原始批准的新兽药申请(NADA)、简化新兽药申请(ANADA)和有条件批准(CA)三种类型的兽药品种,并从批准动物种类和批准用途种类等方面进行统计分析,希望能对我国新兽药研发和审评工作有一定的指导意义。

兽用化学药品血药浓度法生物等效性试验注册资料技术评审要点及常见问题

生物等效性试验作为兽药获批上市的关键试验,其研究过程和技术评审都要遵循特定的法规和指导原则。以药动学参数为终点的血药浓度法生物等效性试验是目前普遍采用的研究方法,适用于药物活性成分吸收进入体循环具有全身作用的剂型(大多数内服剂型和特殊注射剂)。本文根据生物等效性定义、相关法规和指导原则,结合近年来新兽药注册资料,对血药浓度法生物等效性试验资料的技术评审要点及常见问题进行梳理,旨在为新兽药的研发和注册提供参考。

高效液相色谱-串联质谱法检测牛组织和奶中咪多卡残留的研究

建立了一种检测牛组织和牛奶中咪多卡残留检测的高效液相色谱-串联质谱法。牛组织(肌肉、肝脏、肾脏、脂肪)和奶在NaAc缓冲体系中酶解,经HCl溶液提取,WCX固相萃取柱净化,以0.3%甲酸水溶液(含20 mM甲酸铵)和0.3%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,在HILIC色谱柱上分离,在电喷雾正离子(ESI^(+))模式下,用多反应监测(MRM)模式检测,同位素内标法定量。结果表明:咪多卡在2.5~1000 ng/mL的浓度范围内呈现良好线性关系,相关系数(R^(2))大于0.99;咪多卡在牛组织和奶中的检测限均为10μg/kg,定量限均为20μg/kg;咪多卡在牛组织和奶中20~4000μg/kg添加浓度水平上的回收率在70.9%~109%范围内;批内RSD在0.55%~9.59%之间,批间RSD在2.21%~12.1%之间。该方法具有灵敏度高、定量准确,重复性好等特点,可以满足牛组织和奶中咪多卡残留检测的要求。

高效液相色谱法检测猪肉中替米考星残留量不确定度评定

本研究依据“农业部1025号公告-10-2008”《动物性食品中替米考星残留检测高效液相色谱法》,对猪肉中替米考星的残留量进行了测量不确定度评定。共涉及对照溶液配制、样品称量、样品溶液制备以及仪器峰面积、样品回收率5个评定分量,结果显示:检测替米考星的相对标准不确定度分量依次为3.09×10^(-2)、5.78×10^(-3)、4.00×10^(-3)、2.31×10^(-2)和1.34×10^(-2),其中对照溶液配制、仪器峰面积、回收率不确定度分量对合成不确定度的贡献较高。兽药替米考星在猪肉样品中的检测结果在95%的置信限(k=2)内可表示为:71.6±5.92μg/kg(k=2)。不确定度评定结果为系统评价高效液相色谱法检测猪肉中替米考星残留结果的准确程度和方法的可靠性提供依据。

蛋鸡兽用抗菌药使用减量化养殖现状与研究对策

不合理使用抗菌药严重威胁到蛋鸡养殖健康,引起鸡蛋中药物残留和细菌耐药性产生风险,影响鸡蛋食品安全和公共卫生安全。本文基于我国自2018年起开展的涵盖蛋鸡养殖的兽用抗菌药使用减量化行动,从蛋鸡养殖的减量化现状、问题、对策等方面进行综述,以期为推动蛋鸡兽用抗菌药使用减量化养殖提供参考。

高效液相色谱-串联质谱法检测鸡蛋和鸡组织中恩诺沙星、环丙沙星残留的研究

为建立一种高效液相色谱-串联质谱法检测鸡蛋和鸡组织(肝脏、肾脏、肌肉、脂肪)中恩诺沙星、环丙沙星的残留,鸡蛋和鸡组织(肝脏、肾脏、肌肉、脂肪)经酸化乙腈提取,正己烷除脂净化,以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,同位素内标法定量。结果显示:恩诺沙星、环丙沙星均在线性范围内呈现良好线性关系,相关系数(R2)均大于0.99;恩诺沙星、环丙沙星在组织中的检测限为1μg/kg,定量限为5μg/kg;两种药物的平均回收率范围为75.5%~106%,批内、批间变异系数均小于11.2%。研究表明,该方法样品前处理简单,灵敏度高,适用同时检测鸡组织(肝脏、肾脏、肌肉、脂肪)和鸡蛋中恩诺沙星、环丙沙星残留。

水飞蓟素对丙烯酰胺诱导人肝癌细胞氧化损伤的保护作用

研究水飞蓟素对人肝癌细胞系(human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2)增殖的影响以及对食品加工过程中产生的丙烯酰胺所致肝细胞毒性的预防效果,同时对其保护机制进行探讨。通过噻唑蓝法检测水飞蓟素对HepG2细胞增殖的影响和对丙烯酰胺诱发HepG2细胞毒性的保护效果;利用荧光探针法对Hep G2细胞内活性氧的变化进行检测,并运用比色法分别检测细胞内脂质、蛋白质及DNA的氧化损伤标志物(丙二醛、蛋白羰基和8-羟基脱氧鸟苷)含量;利用酶活力试剂盒检测细胞内过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力的变化。结果显示,12~96μg/m L的水飞蓟素对HepG2细胞无毒性;水飞蓟素可以抑制丙烯酰胺引起的细胞存活率降低和氧自由基水平升高,减少丙烯酰胺对脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤,并提高细胞内抗氧化物酶CAT、SOD和GSH-Px活力。研究证明,水飞蓟素能够缓解丙烯酰胺对肝细胞造成的氧化损伤。

恩诺沙星可溶性粉在北京油鸡体内残留消除规律研究

为研究恩诺沙星可溶性粉在北京油鸡体内的残留消除规律,以确定休药期,试验采用推荐剂量(75 mg/L)和2倍推荐剂量(150 mg/L)恩诺沙星自由饮水方式连续对北京油鸡给药5 d,在最后一次给药后0(停药后4 h)、1、3、5、7、9、12和15 d,采集北京油鸡肝脏、肾脏、肌肉和脂肪,采用高效液相色谱串联质谱法测定各组织中的恩诺沙星及其代谢物环丙沙星的残留量,并用WT1.4软件计算休药期。结果显示,推荐剂量5%恩诺沙星可溶性粉在北京油鸡各组织的休药期分别为肝脏7.1 d、肌肉3.8 d、肾脏5.2 d、脂肪4.4 d,2倍推荐剂量的休药期分别为肝脏9.6 d、肌肉4.2 d、肾脏6.4 d和脂肪8.4 d。结果表明,恩诺沙星在北京油鸡的休药期可设置为8 d。

液相色谱-三重四极杆/线性离子阱复合质谱技术检测牛奶中莫昔克丁残留

建立了牛奶中莫昔克丁残留检测的液相色谱-三重四极杆/线性离子阱复合质谱技术(LC-QTRAP)。样品用乙腈提取后,用C18固相萃取柱净化,上机测试。液相色谱条件:色谱柱为BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸水溶液+0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温为30℃,进样量为5μL。质谱条件:电喷雾正离子源(ESI^+),采用多反应监测-信息依赖扫描-增强子离子扫描(MRM-IDA-EPI)方式采集。结果表明:在牛奶中,莫昔克丁在1~80 ng/mL基质匹配标准溶液浓度范围内均呈现良好的线性关系,相关系数(R^2)大于0.990,定量限为2μg/kg。牛奶中莫昔克丁在2、40和80μg/kg三个添加浓度平均回收率都在60%~120%之间,批内、批间RSD均小于15%。该方法简便快捷、定性准确、灵敏度高,回收率和精密度满足残留检测要求。

蛋鸡抗菌药使用减量化养殖中的全链条综合措施

为推动国家兽用抗菌药使用减量化行动落实落地,结合蛋鸡养殖生产特点,提出科学有效、实操性强的减抗养殖全链条综合措施,包括蛋鸡减抗养殖基本要求、抗菌药使用减量化养殖技术要求、抗菌药使用减量化评估等,旨在促进蛋鸡养殖企业切实提高生物安全水平和科学饲养水平,切实有效降低抗菌药的使用,确保蛋鸡健康养殖,有效促进蛋鸡养殖业高质量发展。

超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱复合质谱法测定鸡蛋中黏菌素残留的研究

建立了鸡蛋中黏菌素残留检测的超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱复合质谱方法(UPLC-QTRAP)。样品用25%甲醇提取后,正己烷去脂,固相萃取柱净化,上机测试。液相色谱条件:色谱柱为BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.5%甲酸水溶液+0.5%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温为30℃,进样量为5μL。质谱条件:电喷雾正离子源(ESI+),采用多反应监测-信息依赖扫描-增强子离子扫描(MRM-IDA-EPI)方式采集。结果表明:在鸡蛋中,黏菌素A和黏菌素B在20~800 ng/kg基质匹配标准溶液浓度范围内均呈现良好的线性关系,相关系数(R2)大于0.990;鸡蛋中黏菌素A和黏菌素B的定量限均为30μg/kg,检测限为10μg/kg。鸡蛋中黏菌素A和黏菌素B在30、150和300μg/kg三个添加浓度平均回收率都在67.2%~106%之间,批内、批间RSD均小于20%。该方法定性准确、灵敏度高、简便快捷,回收率和精密度满足残留检测要求。

牛、羊奶中莫昔克丁残留高效液相色谱荧光检测方法的建立

建立了适用于牛、羊奶样品中莫昔克丁残留的高效液相色谱荧光检测方法。以乙腈为提取液,C18固相萃取柱净化,并用N-甲基咪唑-乙腈(1+1,V/V)和三氟乙酸酐-乙腈(1+2,V/V)进行衍生化。乙腈+水(90+10,V/V)为流动相,荧光法定量。经测定,该方法对牛、羊奶中莫昔克丁的检测限为2μg/kg,定量限为5μg/kg。空白牛、羊奶中标准品莫昔克丁添加量分别为5、20、40和80μg/kg时,牛奶中莫昔克丁平均回收率范围为75.5%~110%,其批内变异系数小于7.38%,批间变异系数小于7.87%;羊奶中莫昔克丁平均回收率范围为77.5%~95.6%,其批内变异系数小于5.06%,批间变异系数小于5.92%。该方法准确性强、灵敏度高,适用于牛、羊奶中莫昔克丁的快速检测。

高效液相色谱法测定牛、羊可食性组织中莫昔克丁残留量

建立了适用于检测牛、羊可食性组织中莫昔克丁残留的高效液相色谱法。样品经乙腈提取,C_(18)固相萃取柱净化,氮气吹干。将N-甲基咪唑-乙腈(1+1,V/V)和三氟乙酸酐-乙腈(1+2,V/V)作为衍生化试剂,65℃避光反应15 min进行衍生化。以乙腈+水(90+10,V/V)作为流动相,等度洗脱,荧光法测定。结果显示:莫昔克丁在线性范围内呈良好线性关系,相关系数(r)大于0.999,检测限和定量限分别为2μg/kg和5μg/kg。该方法在以上各组织中的回收率范围为60.5%~110%,其批间、批内变异系数范围为0.62%~15.8%。该方法准确性强、灵敏度高,可满足实验室实际工作需求。

基于ITS2条形码的天麻及其伪品DNA分子鉴定

目的:利用内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2, ITS2)条形码技术对天麻及其伪品进行鉴别,为天麻药材的鉴别提供新的方法。方法:从32份天麻及其伪品的样品中提取总基因组DNA,经过PCR扩增获得这些样品的ITS2片段后进行双向测序得到ITS2序列;从GeneBank数据库下载获得天麻、6种伪品及2种近缘种的ITS2序列共计168条;利用MEGA 7.0软件对测序及下载所得的200条ITS2序列进行比对,计算种内和种间的Kimura2-Parameter(K2P)遗传距离,构建Neighbor-Joining(NJ)系统进化树;通过数据库预测ITS2二级结构。结果:天麻的最大种间K2P遗传距离远小于其与伪品的最小种间K2P遗传距离;NJ树表明天麻及伪品可被明显区分;比较天麻与伪品的ITS2二级结构发现在螺旋区的茎环数目、大小、位置以及螺旋发出的角度都存在显著差异。结论:作为一种DNA条形码,ITS2序列能够稳定、准确地区分天麻及其伪品,可作为保障天麻安全用药的新技术手段。