β-氨基丙腈饮水联合血管紧张素Ⅱ埋泵建立小鼠主动脉夹层模型

目的应用β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)饮水联合血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)皮下埋泵建立小鼠主动脉夹层模型。方法 40只3周龄雄性C57Bl/6J小鼠随机分为两组,均每日给予0.1 g/(kg·bw)BAPN饮水,BAPN饮水后第28天给予皮下埋泵,BAPN饮水+生理盐水埋泵组持续泵入生理盐水,BAPN饮水+Ang II埋泵组持续泵入Ang II,每分钟1000 ng/(kg·bw)。采用小鼠无创血压测量计尾套法检测小鼠血压和心率。实验中死亡小鼠立即解剖,分离主动脉。埋泵72 h后,未死亡小鼠注射过量戊巴比妥钠处死,留取主动脉。苏木素-伊红染色显微镜下观察主动脉壁假腔形成情况。结果 BAPN饮水+Ang II埋泵组小鼠总的夹层发生率为95%,死亡率为24%(夹层动脉瘤破裂死亡),BAPN饮水+生理盐水埋泵组夹层发生率为5%,死亡率为0;镜下主动脉病理切片显示夹层主动脉有假腔形成。结论成功建立高主动脉夹层发生率的小鼠模型。

丹参酮IIA对小鼠主动脉粥样硬化斑块形成的影响及机制研究

目的观察丹参酮ⅡA对高脂饲养Apo E-/-小鼠主动脉粥样硬化斑块形成的影响及其机制。方法将36只8周龄雄性Apo E-/-小鼠和C57BL/6小鼠分为3组:对照组(C57BL/6小鼠予羧甲基纤维素钠灌胃)、模型组(Apo E-/-小鼠予羧甲基纤维素钠灌胃)、模型+丹参酮ⅡA组(Apo E-/-小鼠予30 mg/kg丹参酮ⅡA灌胃),每组12只。各组均给予高脂饲料喂养26周,取材前6周开始给予丹参酮ⅡA/羧甲基纤维素钠灌胃1次/天,连续42天。取材收集主动脉血管流出道组织,一半进行石蜡包埋切片,HE染色评估主动脉狭窄程度,Movat染色评估斑块进展,免疫组织化学染色检测a-SMA、OPN、PCNA和p-YAP表达并进行定量分析;另一半组织经实时定量PCR检测血管平滑肌细胞标志分子a-SMA和OPN的表达改变。结果与对照组相比,模型组出现明显的动脉粥样硬化斑块,血管中膜SMA蛋白表达减少,血管内膜OPN蛋白表达增加,血管全层SMA mRNA表达减少、OPN mRNA表达增加,血管内膜PCNA及p-YAP蛋白表达增加;与模型组相比,模型+丹参酮ⅡA组主动脉狭窄百分比降低,血管内膜SMA蛋白表达增加、OPN蛋白表达减少,血管全层OPN mRNA表达减少,血管中膜PCNA蛋白、内膜PCNA及p-YAP蛋白表达减少。结论丹参酮ⅡA通过抑制血管平滑肌细胞表型转化,减轻高脂饲养Apo E-/-小鼠主动脉粥样硬化斑块的形成,在此过程中丹参酮ⅡA可能通过抑制PCNA及p-YAP表达而发挥心血管保护作用。

非诺贝特抑制Th17细胞的体外分化

在众多自身免疫病和炎性疾病中,诸如多发性硬化症、类风湿性关节炎、1型糖尿病和动脉粥样硬化等等,T细胞功能的变化伴随着疾病的发生和发展过程。近来有研究发现,T细胞的亚群之一的Th17细胞在自身免疫病和炎性疾病中发挥着重要作用。

基于NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路探讨生慧益智汤改善SAMP8小鼠学习记忆能力的作用机制

目的观察生慧益智汤对AD模型快速老化小鼠(SAMP8)学习记忆能力的影响,并探讨其作用机制。方法将24只SAMP8小鼠按随机数字表法分为模型组、安理申组(1 mg/kg)、生慧益智汤组(15.6 g/kg),每组8只,8只同龄、同品系的对抗快速老化小鼠(SAMR1)设为对照组,分别给予相应药物或等体积蒸馏水连续灌胃90 d。给药结束后,采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆和空间探索能力,免疫组化染色检测小鼠海马β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)表达,ELISA法检测海马IL-1β、IL-6、TNF-α水平,采用实时荧光定量PCR、Western blot法检测海马组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、Caspase-1、IL-1βmRNA和蛋白表达。结果与模型组比较,生慧益智汤组和安理申组小鼠空间探索能力和记忆能力改善(P<0.05或P<0.01),海马区Aβ1-42表达减少(P<0.01),TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低(P<0.01或P<0.05),NLRP3、Caspase-1及IL-1βmRNA及蛋白表达降低(P<0.01或P<0.05)。结论生慧益智汤可有效改善SAMP8小鼠的学习记忆能力,其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路抑制炎症小体活化、抑制神经炎症反应有关。

丹参酮ⅡA抑制血管外膜肥大细胞活化减轻颈动脉粥样硬化斑块形成

目的观察丹参酮ⅡA灌胃对高脂饲养Apo E-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块形成及血管外膜肥大细胞活化的影响。方法采用16只8周龄雄性Apo E-/-小鼠和8只相匹配的C57BL/6小鼠,按随机区组设计法分为3组:对照组(C57BL/6小鼠予羧甲基纤维素灌胃)、模型组(Apo E-/-小鼠予羧甲基纤维素灌胃)、模型+丹参酮ⅡA组(Apo E-/-小鼠予30 mg/kg丹参酮ⅡA灌胃)。各组均给予高脂饲料喂养26周。取材前6周开始灌胃给予丹参酮ⅡA/羧甲基纤维素。取材收集血清及颈动脉组织,ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;取同一侧颈总动脉进行石蜡包埋切片,HE染色评估颈动脉狭窄程度,Movat染色评估斑块进展,甲苯胺蓝染色显示血管外膜肥大细胞浸润情况,免疫组织化学染色检测5-羟色胺(5-HT)、TNF-α、IL-6表达情况;取另一侧颈动脉剥取血管外膜组织后,实时定量PCR检测肥大细胞标志分子Fcer1a表达情况。结果高脂喂养26周后,模型组小鼠颈动脉出现严重的动脉粥样硬化斑块,模型+丹参酮ⅡA组动脉粥样硬化斑块形成所导致的颈动脉狭窄百分比低于模型组[(58.48±8.07)%比(80.31±4.08)%,P<0.05]。与模型组比较,模型+丹参酮ⅡA组血清TNF-α[(12.39±1.62)pg/ml比(17.44±1.42)pg/ml]和IL-6[(116.24±12.16)pg/ml比(166.05±19.09)pg/ml]水平较低,血管外膜TNF-α蛋白表达[(20 145±1 556)比(25 288±1 671)]和IL-6[(25 688±1 604)比(35 286±4 198)]较低(P均<0.05);模型+丹参酮ⅡA组血管外膜肥大细胞数量、活化百分比、5-HT表达和Fcer1a mRNA水平均较低(P均<0.05)。结论丹参酮ⅡA可减轻高脂饲养Apo E-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块的形成。血管外膜肥大细胞数量及活化比例降低,炎症细胞因子释放减少,血管局部炎症反应减轻可能是丹参酮ⅡA抗颈动脉粥样硬化的作用机制之一。

骨化三醇对哮喘小鼠气道重塑及气道上皮细胞凋亡的影响

目的 观察骨化三醇对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道重塑及气道上皮细胞（AECs）凋亡的影响.方法 24只雌性清洁级Balb/c小鼠按随机数字表法均分为对照组、慢性哮喘组、骨化三醇干预组各8只：（1）慢性哮喘组：于第1、14天小鼠腹腔注射0.1ml致敏液[卵清白蛋白（OVA,20 μg）＋氢氧化铝凝胶（50μl）],从第21天开始雾化吸入1％ OVA溶液10 ml进行激发,30 min/次,3次/周,连续8周;（2）骨化三醇干预组：OVA致敏和激发同慢性哮喘组,每次激发前30 min予以100 ng骨化三醇腹腔注射;（3）对照组：使用生理盐水代替OVA进行致敏及激发.末次激发后24h内处死小鼠,取左肺多聚甲醛固定后石蜡包埋切片,分别行HE染色、阿利辛兰-过碘酸雪夫（AB-PAS）染色、Masson染色、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组织化学染色,图像分析软件测定支气管基底膜周径、管壁总面积及AB-PAS、Masson、α-SMA染色阳性面积,结果均以基底膜周径将其标准化.石蜡切片经末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（TUNEL）检测气道上皮细胞凋亡,B细胞淋巴瘤/白血病2 （Bcl-2）免疫组织化学染色法检测Bcl-2蛋白在气道上皮组织中的相对表达量.结果 慢性哮喘组、骨化三醇干预组小鼠出现慢性哮喘气道炎症及气道重塑典型改变.骨化三醇干预组管壁总面积及AB-PAS、Masson、α-SMA染色阳性面积与基底膜周径的比值分别为（14.12±2.13）、（3.72 ±0.57）、（4.31 ±0.65）、（3.27±0.46） μm2/μm,均显著低于慢性哮喘组的（19.24±1.70）、（5.23±0.90）、（7.63±1.55）、（5.40±0.69）μm2/μm而高于对照组的（7.79±1.01）、（0.05 ±0.03）、（1.37±0.25）、（1.40 ±0.24）.μm2/μm（均P＜0.01）.骨化三醇干预组气道上皮细胞凋亡指数显著低于慢性哮喘组而高于对照组[（14.89±1.75）％比（29.73±5.74）％、（0.45±0.38）％,均P＜0.01].骨化三醇干预组Bcl-2蛋白相对表达量显著高于慢性哮喘组而低于对照组（0.114±0.009比0.091±0.023、0.160±0.021,均P＜0.05）.结论 骨化三醇可减轻慢性哮喘小鼠的气道重塑及气道上皮细胞凋亡;其减少哮喘小鼠气道上皮细胞凋亡的机制涉及机体对线粒体凋亡途径重要分子Bcl-2的调控.

前列地尔注射液对β-氨基丙腈诱导的小鼠主动脉夹层的作用及其机制探讨

目的探讨前列地尔注射液对β-氨基丙腈(BAPN)诱导的主动脉夹层的作用及其机制。方法选取3周龄雄性C57BL/6小鼠26只随机分成对照组(普通饮水,n=13)和模型组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水,n=13),14 d时提取主动脉组织RNA和总蛋白,采用实时定量聚合酶链式反应和蛋白质免疫印迹检测对照组和模型组主动脉炎症相关基因、EP基因mRNA(每组各6只)和前列地尔受体4(EP4)蛋白(每组各7只)表达。选取3周龄雄性C57BL/6小鼠88只,按随机区组设计法分为3组:对照组(普通饮水+生理盐水80μg·kg^-1·d^-1,n=22)、模型组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+生理盐水80μg·kg-1·d-1,n=33)和治疗组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+80μg·kg^-1·d^-1前列地尔注射液,n=33)。BAPN饮水前1 d开始每日腹腔注射给药,连续给药28 d。记录每组小鼠体重、血压变化及因主动脉夹层破裂死亡情况。28 d时,大体解剖观察主动脉夹层发生情况;取主动脉组织进行固定、包埋和切片,苏木素-伊红和维多利亚蓝-核固红染色观察主动脉的形态结构变化,同时,免疫组化染色观察对照组(6只)和模型组(6只)EP4蛋白的表达分布情况。并对模型组(3只)和治疗组(4只)血浆PGE1进行ELISA检测。选取3周龄雄性C57BL/6小鼠13只,随机分为模型组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+生理盐水,n=7)和治疗组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+80μg·kg^-1·d^-1前列地尔注射液,n=6),14 d时对主动脉EP4蛋白表达进行定量分析。结果模型组小鼠BAPN诱导14 d时主动脉单核细胞趋化因子1[(2.74±1.55)比(1.00±0.49)]和基质金属蛋白酶2[(1.38±0.42)比(1.00±0.27)]的mRNA表达及EP4蛋白(1.48±0.51比1.00±0.19)表达高于对照组(P均<0.05)。免疫组化结果显示EP4可在模型组的内皮细胞、炎症细胞中表达。小鼠主动脉解剖观察可见模型组和治疗组均有明显的夹层,苏木素-伊红和维多利亚蓝-核固红染色显示模型组和治疗组主动脉夹层血管可见弹力板断裂、充满红细胞的假腔形成和炎症细胞浸润。对照组无主动脉夹层和死亡发生,与对照组相比,模型组主动脉夹层发生率(60.6%,20/33)、破裂死亡率(30.3%,10/33),以及治疗组的主动脉夹层发生率(72.7%,24/33)、死亡率(24.2%,8/33)均明显升高,体重明显降低(P均<0.05),但模型组与治疗组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组间血压无明显差异(P>0.05)。相较于模型组,治疗组在给药后血药浓度高[(0.540±0.041)μmol/L比(0.436±0.012)μmol/L,t=4.10,P<0.05],EP4蛋白表达低[(0.60±0.30)比(1.00±0.20),P<0.05]。结论在BAPN诱导的小鼠主动脉夹层模型中EP4表达增高,但使用前列地尔注射液腹腔给药对该模型中主动脉夹层的破裂无保护作用,其可能原因是前列地尔反馈抑制了EP4的表达。