NGAL基因新型TPA反应元件结合蛋白的研究

以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, 在启动子- 152～- 60 区段存在着一种新型的 TPA 反应元件(TPA response element, TRE), 但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来. 采用寡核苷酸 DNA 亲和层析法(oligonucleotide trapping)从食管癌细胞中分离纯化了 NGAL 基因 TRE 结合蛋白; 经 SDS-PAGE进一步分离, 银染显示目标蛋白带. 人工切取各目标蛋白带进行 MALDI-TOF-MS 分析, 通过 Mascot 软件搜索 NCBI 数据库, 根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定 8 个核蛋白因子: C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β、FAM54A、KLF15、KLF10 和 YY-1. 最后, 利用 RT-PCR 验证了这些核蛋白因子表达的 TPA 反应性, 结果表明 C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β和 KLF15 等编码基因的转录表现出了明显的 TPA 反应性, 提示可能是食管癌细胞中应答 TPA刺激, 参与 NGAL 基因过表达的转录激活因子.

某地级市三甲医院2015-2019年科研现状分析及思考

目的通过分析医院科研现状,探讨改进医院科研管理的有效对策,从而提高医院科研管理能力和科研水平。方法对某地级市三甲综合医院2015—2019年科研情况,包括科研课题数量、课题级别、课题经费、SCI论文数量、科技获奖及专利等科研成果进行整理、筛选,通过数据分析发现存在的问题。结果2015—2019年,该医院科研课题数和资助经费呈平稳上升趋势,课题主要来源于厅局级课题,约占5年总课题数的92.6%;省部级、国家级课题仅占7.4%;SCI论文数量和总影响因子逐年上升,SCI论文影响因子以低分组为主,占比约60.9%;中分组SCI论文占比约26.1%,高分组SCI论文占比约13.0%;市科技奖11项;国家专利32项,专利技术转让3项,转化率不足1%。结论该医院整体研究水平不高,高水平科研成果较少,获奖成果级别不高,以市级奖项为主,无国家级、省级奖项,科研成果转化率低。医院应该从加强平台建设、高层次人才引进和培养入手,完善激励措施、增强成果转化意识和注重科研培训等方面加以改善提高,使医院的科研走上可持续发展道路。

肾综合征出血热病毒耐雾化和冲击的稳定性观察

采用测定ＨＦＲＳＶ喷雾液和ＨＦＲＳＶ气溶胶采样液的病毒浓度方法，确定ＨＦＲＳＶ的气溶胶存活力和感染力。结果在Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞上，ＨＦＲＳＶ空斑大小均匀；乳小鼠脑腔接种ＨＦＲＳＶ，动物反应剂量基本呈线性关系（ｒ＝０．８８，Ｐ＜０．０５），ＭＩＣＬＤ（５０）＝５７０ｐｆｕ。研究表明，ＨＦＲＳＶ用ＴＫ发生器雾化３０ｍｉｎ，存活５０％，提示该病毒耐雾化能力强。ＡＧＩ采样器采样冲击５ｍｉｎ，存活５０％，而冲击１０ｍｉｎ，仅存活０．０１％，故采样控制在２ｍｉｎ左右为宜．

葶苈大枣泻肺汤加减联合顺铂治疗癌性胸水40例

癌性胸水是晚期恶性肿瘤的常见并发症,运用辨证治疗、行气利水的同时,经予胸腔注入抗癌药物可取得较好的疗效。顺铂是广谱抗肿瘤药物,与肿瘤细胞DNA结合,抑制肿瘤细胞的有丝分裂,葶苈大枣泻肺汤泻肺化饮降气化痰捕以补气健脾以达到邪祛正复,对化疗药物有减毒增效之功。

吉西他滨联合卡铂治疗晚期非小细胞肺癌142例临床观察

笔者自2005年3月至2008年3月应用吉西他滨联合卡铂治疗142例晚期非小细胞肺癌（NSCLC），取得较好疗效，现报道如下：

趁疼散联合唑来膦酸治疗恶性肿瘤骨转移疼痛疗效观察

目的:观察趁疼散联合唑来膦酸治疗转移性骨肿瘤的骨痛有效率、体力状况改善情况及不良反应。方法:31例恶性肿瘤骨转移患者服用趁疼散的同时采用联合唑来膦酸4mg加入0.9%氯化钠100m L静滴15min以上,每四周1个疗程,连用2个疗程。结果:治疗骨痛有效率为96.77%,体力状况改善率为64.5%,主要不良反应为发热,发生率为22.6%。结论:趁疼散联合唑来膦酸治疗恶性肿瘤骨转移疼痛有效,能显著改善患者的生存质量,不良反应少,可方便安全用于恶性肿瘤骨转移的治疗。

HFRSV在玻璃平皿表面和鼠粪尿中自然衰亡的研究

室温下用第２１代感染肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）的乳小鼠脑悬液滴加于无菌玻璃平皿和盛有鼠粪尿的平皿中，再立即以１６４０细胞培养液反复洗涤后回收，对鼠脑悬液和回收液分别进行ＴＣＩＤ５０测定，计算玻璃平皿表面ＨＦＲＳ病毒的存活情况。结果ＨＦＲＳ病毒在玻璃平皿表面存活率为５３．７９８４％；自然衰亡率为４６．２０１６％。病毒加入鼠粪尿中的存活率为０．００１２％；自然衰亡率为９９．９９８８％。

如何培养现代女性体育锻炼能力

根据女生的生理、心理特点从三个方面阐述培养女生体育锻炼能力。第一个方面谈培养女生体育锻炼能力为将来走上社会尽快适应环境奠定基础的重要性。第二个方面谈培养女生体育锻炼能力应从那些方面入手。第三个方面谈培养女生体育锻炼能力的过程中应注意的问题。

北京地区大气微生物粒子谱的研究

本文用国产6级ANDERSEN生物粒子采样器对大气细菌和真菌的粒子谱进行了一年的观测研究,同时观测了降雨对粒子谱的影响。结果表明,大气细菌粒子谱为无峰型,大气真菌粒子谱为单型峰,峰值中心位于3.0～6.0μm之间。降雨对大气细菌粒子有明显的减少作用。

ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5′侧翼区序列转录活性的鉴定

目的检测ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5′侧翼区序列的转录活力,探讨ezrin基因在癌细胞的表达调控机制。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测ezrin基因在食管癌细胞EC109、EC171、EC8712、SHEEC,胃癌细胞N87、BGC823,肺癌细胞A549、95D,肝癌细胞HepG2,白血病细胞K562和宫颈癌细胞HeLa中的mRNA和蛋白表达水平;采用PCR法构建以ezrin基因翻译起始位点上游-1444/+134序列为启动子的真核细胞表达质粒pGLB-hE(-1444/+134);采用双荧光素酶报告基因分析系统检测-1444/+134序列在EC109、Hela、A549和BGC823细胞中的转录活力。结果ezrin基因在食管癌等几种癌细胞中均有高表达,其5′侧翼区-1444/+134序列具有较强的转录活力。结论ezrin基因5′侧翼区序列的转录活性可能对ezrin基因的几种癌细胞中的高表达起重要作用。

肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的顺式作用元件及转录因子的鉴定

研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶报告基因分析系统检测ezrin基因5′侧翼嵌套缺失序列和位点突变序列的转录活性,鉴定肺癌细胞中ezrin基因的基本启动子区以及关键的顺式作用元件Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58).其次,利用凝胶电泳迁移率变动分析证明,肺癌细胞核蛋白提取物能够与ezrin基因含有关键顺式作用元件的DNA序列结合,形成DNA-核蛋白复合物,而且Sp1结合位点和AP-1结合位点与重组蛋白rhSp1和rhAP-1的结合具有位点特异性.最后,利用瞬时转染实验证实,转录因子Sp1和AP-1(由c-Jun和c-Fos组成的异源二聚体)分别通过Sp1结合位点和AP-1结合位点,增强ezrin基因基本转录活性,而且,过表达转录因子Sp1、c-Jun或c-Fos上调了Ezrin蛋白表达.研究确定,肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的关键顺式作用元件是Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58),与之作用的转录因子Sp1和AP-1对于ezrin基因的转录激活作用至关重要.

肾综合征出血热病毒气溶胶动物实验感染研究

为了研究HFRSV的吸入感染性和动物与动物间空气传播感染,用TK_2型气溶胶发生器发生H8205株病毒气溶胶,引入动态气溶胶暴露装置并对实验动物进行暴露.以AGI微生物气溶胶采样器进行采样,以Vero-E_6细胞空斑法分析病毒含量,对病毒耐气溶胶化和吸入病毒剂量进行了测定.对染毒动物产生气溶胶引起交叉感染能力进行了观察.结果表明:HFRS病毒雾化30min回流液病毒存活50%,AGI冲击5分钟其效价下降不明显.数种动物对该病毒气溶胶比较敏感.在本实验装备和条件下其气溶胶乳小鼠吸入0.065pfu全部感染;离乳小鼠吸入0.72pfu几乎全部感染;乳小鼠半数吸入致死量(ILD50)为0.57pfu.从乳小鼠脏器组织分离出了HFRS病毒.结果认为,气溶胶传播是HFRS流行的重要危险因素.

生物防护口罩的研制及其防护效果评价

为了给医护、实验室及现场操作人员提供对SARS等传染病有效的呼吸道防护装置 ,研制了一种高效生物防护口罩并对其生物防护效果进行了评价。该口罩根据中国人脸形特征设计 ,口罩主体为 3层无纺布复合的腔式结构 ,鼻梁部采用双层反向锯齿形密封结构。采用直接生物气溶胶过滤采样方法 ,对该口罩防护效果进行检测。结果 ,测得气溶胶的质量中值直径 (MMD)分别为 2 .2 7和 1.35 μm ,几何标准差分别为 (σg) 1.2 2和 1.17,气溶胶粒谱分布均匀 ,接近于单分散气溶胶。该口罩对粘质沙雷菌和大肠杆菌F2 噬菌体的滤除率分别为 99.99%和 99.5 4 %。结果提示 ,该口罩可以有效地防止生物气溶胶的危害。

16SrRNA序列分析法在大气微生物检测中的应用

随着微生物核糖体数据库的日益完善 ,16SrRNA序列分析技术已应用于海洋、湖泊和土壤等环境微生物多样性的分析 ,但尚未见其在大气微生物菌群分析中的应用报道。本研究选择 5株大气中采集分离的菌株 ,通过细菌 16SrRNA通用引物PCR扩增其对应序列 ,直接对PCR产物进行测序 ,分析鉴定其对应细菌的种属 ,并将该结果同细菌表型鉴定、全自动微生物分析仪以及气相色谱分析结果加以比较。结果表明 16SrRNA序列分析获得的鉴定结果与表型分析和气相色谱分析结果较为一致 ,该方法具有快速、准确和不依赖于细菌生长状态等优点 ,说明 16SrRNA序列分析法可以作为大气微生物分析的一个有效技术。

谈高校投掷整体教学法——控制论在铅球教学中的应用

前言高校田径项目教学中,投掷项目是属于技术复杂,难度较大的项目之一,原因之一,技术动作是由非周期性运动的各个技术环节所构成;同时又要在身体处于较高的运动速度中去完成这一系列的连贯动作;其难度之二,受场地(2.135米)和时间(1分半钟)的限制;而难度之三,则是初学者对远度盲目追求,在调查中占95%的人认为要取得铅球成绩,主要是靠发挥投掷臂力量,第四个问题就是对铅球这一项目不感兴趣,调查中男生占92%,女生占99%(表略)。投掷教学是复杂的,教学方法运用的是否正确,将直接影响教学的效果。如何在有限和较少的教学时数内(5学时)较好地掌握运动技术,提高运动成绩。笔者在几年来的铅球教学中进行了改革尝试。

中国人脸形分布与生物防护口罩设计研究

为设计出适用于我国人脸形的生物防护口罩 ,选择有代表性人群 ,对人的面宽、面长、颧点距、鼻中宽和鼻中高等参数进行了精确测量。结果 ,我国人群面宽范围为 115～ 16 5mm ,面长为 6 2～ 12 2mm ,颧点距为 72～ 136mm ,鼻中宽为 2 0～ 4 5mm ,鼻中高 8～ 2 7mm ,其中变异最大的为鼻中高。结果提示 ,面长和颧点距是设计口罩外形尺寸的必要参数 ,鼻中宽和鼻中高是设计鼻部密封结构的重要参数 ,鼻部的密封是口罩设计的关键因素。根据调查结果 ,提出了半脸式口罩的设计参考尺寸。

重组p16腺病毒的构建及其对人白血病细胞的抑制作用

为了探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及野生型 p1 6基因的抗肿瘤特性 ,构建了复制缺陷型重组 p1 6腺病毒 .首先将 p1 6全长 c DNA插入穿梭质粒 p Ad CMV产生重组质粒 p Ad-CMV- p1 6,然后通过脂质体介导与 p JM1 7共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生 E1区缺失的重组腺病毒空斑 .用纯化后的腺病毒感染人白血病细胞株 HL- 60后 ,PCR及 Western blot分析显示在感染细胞中有外源性 p1 6 c DNA存在和 p1 6蛋白表达 ;被感染的 HL- 60细胞的生长受到明显抑制 ,而未感染细胞及对照腺病毒感染的细胞没有受到抑制 .结果表明 ,腺病毒作为一种新型基因转移载体 ,可有效地介导肿瘤抑制基因 p1 6的表达 ,在肿瘤基因治疗方面具有很大的应用前景 .