敲除CRFK细胞氨基肽酶N对猫传染性腹膜炎病毒复制影响的研究

猫氨基肽酶N(fAPN)参与猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的感染过程,为研究f APN对FIPV复制的影响,本研究针对f APN第14外显子设计了1对sg RNA,将sg RNA退火后克隆至p X458质粒中,构建同时含有Cas9蛋白和sg RNA的重组质粒。重组质粒经PCR及测序鉴定正确后,瞬时转染猫肾细胞(CRFK)中,24 h后通过流式细胞仪分选带有绿色荧光的单克隆细胞。单克隆细胞经稳定传代培养后,细胞中的绿色荧光消失,对细胞进行PCR和测序,结果显示:3株单克隆细胞在f APN第14外显子有1个碱基的插入,造成移码突变,导致f APN不能正常表达,表明敲除f APN蛋白的CRFK细胞系正确构建,命名为KO-APN14。将FIPV分别感染CRFK细胞及培养20代的KO-APN14细胞,48 h后通过间接免疫荧光试验(IFA)检测FIPV N蛋白的表达;将FIPV分别感染CRFK细胞及KO-APN14细胞,在感染4 h、12 h、24 h、36 h时采用RT-q PCR分别检测FIPV N基因、视黄酸(维甲酸)诱导基因I(RIG-I)、黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、Toll样受体3(TLR3)、干扰素β(IFN-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的转录水平。IFA结果显示:感染FIPV的CRFK细胞出现绿色荧光,未感染FIPV的CRFK细胞、未感染FIPV的KO-APN14细胞及感染FIPV的KO-APN14细胞均无绿色荧光;RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后病毒N基因的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够极显著抑制FIPV N基因的转录(P<0.0001);RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后上述各细胞因子的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够抑制RIG-I、MDA5、TLR3、IFN-β、IL-6、IL-10、TNF-α及f APN的转录。综上所述,f APN是FIPV在侵入细胞及病毒复制过程中发挥重要作用,并在FIPV引起的炎症反应过程中起关键作用。本研究为f APN在免疫炎症反应中作用的研究提供科学依据,并为培育基因编辑抗病育种猫奠定实验基础。

ETFE树脂粉末涂料的应用

综述了乙烯-四氟乙烯共聚物(ETFE)树脂粉末理化性质、加工属性和国内外市场概况,详细介绍了其在化工防腐领域应用时的工艺要点。最后,指出了国内ETFE树脂粉末加工制造的发展方向及趋势。

全氟磺酸树脂的合成与应用

全氟磺酸树脂是由四氟乙烯与侧链末端带—SO2F基团的全氟烯醚在一定条件下反应得到的共聚物,通常用作离子交换树脂,是氟材料行业的尖端材料,具有广泛的应用前景。介绍了国内外全氟磺酸树脂的制备方法和技术现状以及全氟磺酸树脂下游产品的应用情况。

PVDC涂布薄膜工艺专利检索分析

通过对聚偏二氯乙烯(PVDC)涂布薄膜专利技术进行专利检索,根据技术专利申请及授权趋势、技术来源国/地区排名、主要申请人技术分布、专利集中度分析,找出了PVDC涂布薄膜专利技术所有人在全球范围的专利布局情况,通过重点专利的确定,得出了该技术的分析规模最大的专利家族,这些专利在全球得到了广泛布局保护。

乙烯-四氟乙烯共聚物粉末喷涂影响因素研究

分析了乙烯-四氟乙烯共聚物(ETFE)喷涂用树脂的基础性能,研究通过破碎、分级得到目标粒径范围内满足喷涂用ETFE树脂粉末,在试制工件表面喷涂,并对喷涂样品测试评价。结果表明,ETFE树脂易破碎,可通过破碎工序得到小颗粒树脂,再通过分级工艺达到适合的粒径分布,大大提升了产品的利用率;MFR与熔点的差异对ETFE喷涂树脂的耐受性差异不明显,聚合工艺对其影响较大,其中溶剂相法制备的ETFE耐酸碱盐性能更佳。

傅里叶变换红外光谱法检测含氟聚合物不稳定末端基团

含氟聚合物是一种重要的特种材料,但因特殊的生产工艺,使其产生了不稳定的末端基,需要对不稳定末端基进行处理后才能使用。简要介绍了含氟聚合物不稳定末端基团的发现、研究历程及产生机理,采用傅里叶变换红外光谱技术测试了含氟聚合物中不稳定末端基团的数量。

交叉口车辆行为感知在线半监督混合方法

自动驾驶感知系统须对目标车辆运动进行感知,以制定合理交互决策。针对行为感知在时间上的滞后性和数据中可能存在的波动和异常值导致感知准确率差的问题,本文提出一种在线半监督混合方法。首先,采用自回归积分移动平均和在线梯度下降优化器设计基于数据驱动的车辆运动状态在线预测算法。然后,构建基于微簇的初始模型,并以K近邻为基分类器建立集成学习策略,设计错误驱动代表性学习和指数衰减策略实现对初始模型的迭代更新。最后,基于驾驶模拟平台采集了验证所提算法有效性的实验数据。结果表明,所提出的方法对于车辆行为波动具有快速适应性,在线预测算法可准确预测车辆运动趋势,行为感知算法对于不同预测时间下的车辆行为均有较强适应能力。

测绘工程技术在不动产测量中的实践应用分析

在国家整体经济日益提升背景下,不动产测量工作涉及范围越来越广,因此测量的精准性十分重要。在现代科学技术不断创新与研发过程中,测绘工程技术在不动产测量环节中得到良好的运用效果,应用频率也比较多。目前,在科学技术持续提升过程中,也促使测绘工程技术逐步研发和完善,从一定程度上提高不动产测量的精准性。所以,全文对不动产测量加以概述,分析测绘工程技术的应用原则,提出测绘工程技术在不动产测量中的实践应用要点,同时详细研究了应用的优化措施,希望为相关工作者带来有价值参考,最大程度上提高不动产测量工作的有效性。

气虚血瘀型糖尿病周围神经病变患者采用当归活血汤联合穴位贴敷治疗的疗效

目的:分析当归活血汤联合穴位贴敷治疗气虚血瘀型糖尿病周围神经病变的疗效。方法:选择2020年9月—2023年10月松桃苗族自治县孟溪镇中心卫生院收治的气虚血瘀型糖尿病周围神经病变患者60例作为研究对象,随机数字表法分为研究组和对照组,各30例。对照组给予常规治疗,研究组在对照组基础上给予当归活血汤联合穴位贴敷治疗。比较两组患者治疗效果、治疗前后多伦多临床评分(TCSS)与震动感觉阈值(VPT)。结果:研究组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组TCSS评分、VPT比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗1个月后,研究组TCSS评分、VPT低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:对气虚血瘀型糖尿病周围神经病变患者采用当归活血汤联合穴位贴敷治疗的效果确切,能够有效改善神经功能与感觉功能。

猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV结合位点敲除细胞系,经PCR和western blot鉴定结果显示,正确构建一株敲除pAPN aa668~aa963的ST细胞系,即敲除pAPN 15-21外显子,命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-qPCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-qPCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化,结果显示,TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3(NOD-like receptor protein 3)mRNA转录水平无显著变化,但RIG-I和MDA5的转录水平显著上调(P<0.05)。上述结果首次表明,敲除pAPN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制,但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化,TGEV不能进入敲除pAPN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应,该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案。

国内外乙烯-四氟乙烯共聚物合成专利简析

采用智慧芽(Patsnap)数据库对乙烯-四氟乙烯共聚物的合成进行专利检索分析,从专利申请趋势、申请人排名和专利价值排名等方面进行数据统计,简要分析国内外乙烯-四氟乙烯共聚物合成专利的整体情况,为国内相关技术人员提供研究方向和趋势。

山区高速铁路高陡边坡稳定性与变形分析

以某高速铁路高边坡为例,分别计算不同施工阶段滑面为圆弧面和折线面、坡体无水和饱和等各种条件下边坡的稳定性安全系数并分析影响规律。系统地计算施工过程中各种条件影响下坡体水平位移与垂直位移的大小和变化规律。研究结果表明:按现行高速铁路规范设计的边坡,其位移在可接受的范围内,开挖卸荷引起的回弹明显,位移最大值发生在施工最后阶段;地下水对坡体竖向位移值没有明显影响,但会增大水平位移,在地下水变化较大的山区和雨季施工时应引起注意,加强观测和预防措施;锚杆对控制岩质边坡局部位移有一定的作用。研究成果可用于指导该山区高速铁路的边坡设计,可供同类工程设计和施工参考。

绵羊慢病毒北疆株自然感染新疆美利奴羊的研究

选１２只自然感染绵羊慢病毒（ＯｖＬＶ）的成年新疆美利奴羊，用琼脂凝胶免疫扩散（ＡＧＩＤ）试验连续检查血清中ＯｖＬＶ沉淀抗体，发现抗体应答的类型发生转换，即只出现对病毒核心蛋白抗原（如ｐ２５）的抗体（外线）、出现对病毒包膜糖蛋白（ｇｐ１３５）的抗体（内线），同时出现对ｐ２５和ｇｐ１３５二者的抗体（双线）互相转换。从试验羊的多个器官中分离到３株ＯｖＬＶ，分别命名为ＯｖＬＶＮＸＪ５５，ＮＸＪ７３和ＮＸＪ０４１８株，其ＴＣＩＤ５０／ｍＬ值依次为１×１０－５．６，１×１０－５．４和１×１０－４．５。剖检的６例均有淋巴细胞性乳腺炎，其中２例同时有淋巴滤泡形成，病变率为１００％。肺无淋巴细胞性间质性肺炎病变，２例肺内有淋巴滤泡形成。脑、滑膜无ＯｖＬＶ感染的特异性病变。所有试验羊未发生任何与ＯｖＬＶ感染有关的临床症状。结果表明，乳腺是对ＯｖＬＶ最敏感的靶器官，ＯｖＬＶ北疆株为弱毒株，新疆美利奴羊是对ＯｖＬＶ的低敏性品种。

红景天种内遗传多样性分析AFLP方法建立

研究建立一种用于药用植物红景天种内遗传多样性分析的AFLP分子标记方法。以提取红景天(Rhodiola.roseaL)种基因组DNA为模板,25μL酶切体系中采用两步双酶切(Mse I、EcoR I),在20μL连接体系中采用T4连接酶,22℃连接过夜,50μL体系预扩增,TaqPlus酶2.5 U,dNTP 160μM,对应引物0.5μM,10×PCR Buffer(含Mg2+)4.5μL,25μL体系选择性扩增,TaqPlus酶1.5 U,dNTP 80μM,对应引物0.25μM,10×PCR Buffer(含Mg2+)2.5μL。AFLP分子标记技术是一种快速、准确、稳定的药用植物红景天的种内遗传多样性分析手段。

倾斜摄影测量技术在不动产测绘中的应用研究

相对于常规的不动产测绘技术,倾斜摄影测量技术数据采集更方便,在应用过程中不需要选择投影点,具有整体操作简单、投入少等诸多优点,在能够满足目前不动产测绘现实需求的同时,保证测绘工作的效率与质量。当前倾斜摄影测量技术在不动产测绘中应用较为广泛,但仍需要对具体应用情况进行分析,从而提升倾斜摄影测量技术应用价值,为不动产测绘工作的可持续发展提供保障。

禽流感病毒NP cDNA反义逆转录病毒载体的构建及重组病毒的鉴定

根据反义ＲＮＡ作用原理，以禽流感病毒（ＡＩＶ）Ｈ１４Ｎ５ ｃＤＮＡ全长及５’端２３５个ｂｐ为目的基因，反向插入反转录病毒载体 ｐＬＸＳＮ中，命名为 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ及 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ，用脂质体包裹重组质粒转染包装细胞 ＰＡ３１７，Ｇ４１８筛选抗性克性，扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒ＲＮＡ（ｖＲＮＡ），以巢式ＰＣＲ方法检测，以及用包装细胞上清（重组病毒）感染滴定细胞系ＮＩＨ３Ｔ３，表明已筛选出产毒的的克隆细胞质，得到重组逆转录病毒，为反义ＲＮＡ抑制禽流感病毒复制的实验研究奠定了物质基础。

开采浅层地下水对高速铁路工程的影响分析

本文根据浅层地下水的性质,阐述了抽水引起的地面沉降机理和计算方法,结合实例计算了由于抽取浅层地下水引起的小范围地面沉降和影响范围,分析了这种小范围地面沉降对客运专线路基、桥梁、轨道工程的影响。

H5亚型禽流感病毒HA基因昆虫／杆状病毒系统的表达及对BALB/c小鼠的免疫保护

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1／96 H5N1亚型1．7kb HA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacA的蜜蜂蜂毒素分泌信号下游中,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染Sf9昆虫细胞。将重组杆状病毒感染HFive细胞,72h左右收获细胞,超声波裂解,SDS—PAGE结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得表达。蛋白胶薄层扫描分析显示:表达的HA蛋白占重组杆状病毒感染细胞总蛋白含量的17．1％。Western-blot 及血凝实验结果显示,表达的禽流感H5N1亚型病毒HA蛋白具有生物学活性。表达的H5 HA蛋白定量乳化后,皮下多点注射免疫SPF 级BALB/c雌性小鼠,免疫后产生了H5 HA特异抗体,并在三免前后达到并保持较高水平。用致死剂量的HPAIV H5N1攻击小鼠,免疫组小鼠提供了100％的保护力,而对照组小鼠先后发病且死亡:为研制禽流感H5N1亚型病毒亚单位疫苗,防制禽流感奠定了基础。

绿色荧光蛋白基因真核表达载体的构建与表达检测

拟构建绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ， ＧＦＰ）基因的真核表达载体 ｐｃＤＮＡ_３ＧＦＰ，并观察其在 ＭＤＣＫ细胞（大肾细胞系）中的表达。以Ｎｏｔ Ⅰ切取ＧＦＰ后插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ_3，以ＢａｍＨⅠ鉴定方向，以ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥＴＭ将ｐｃＤＮＡ３ＧＦＰ转染至培养的ＭＤＣ Ｋ，经Ｇ４１８筛选ｐｃＤＮＡ３ＧＦＰ阳性克隆，荧光显微镜下观察。结果证实成功构建了含ＧＦＰ ｃＤＮＡ的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３ＧＦＰ，并成功转染ＭＤＣＫ，在荧光显微镜下阳性克隆细胞呈绿色。 ＧＦＰ基因可在 ＭＤＣＫ细胞中成功表达，并发出绿色荧光，是一良好的报告基因和筛选标记。

高速铁路地基土液化及稳定性研究

根据室内动三轴试验结果和地基土(粉土)中孔隙水压力的发展变化规律,结合达西定律,建立了考虑消散作用时地基土中孔隙水压力发展变化的计算模型,并推导了该计算模型的有限元形式,编制了相应的有限元计算程序;利用该计算模型和室内动三轴试验结果对高速列车作用下孔隙水压力发展变化过程进行了分析研究。结果表明:在高速列车通过时,地基中部分区域可能会发生液化现象,但是随着时间延长,地基土中孔隙水压力会逐渐消散;即使一列列车通过后不会发生液化现象,但如果通过的列车时间间隔较短,由于前几次列车通过时所产生的孔隙水压力无法充分消散,经过多次列车通过后,地基中也可以产生液化区域。