不同环境和营养条件对捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌生长、产孢及几丁质酶表达的影响

[目的]研究温度、pH和不同营养条件对捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌(Arthrobotrys conoides)生长及产孢特性的影响,分析其在碳氮饥饿条件下几丁质酶的表达水平,优化该菌的培养条件,为该菌的扩大培养提供参考依据。[方法]将圆锥节丛孢菌AC-shz1菌株接种于YPSSA培养基,分别置于不同温度(15、20、25、30和35℃)、pH(5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5和8.0)、碳源(果糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、纤维素、几丁质)、氮源(甘氨酸、苯丙氨酸、蛋白胨、酵母粉、硫酸铵、尿素)和碳氮比(1∶1、5∶1、10∶1、20∶1、40∶1)环境条件下进行培养,观察并记录菌丝的生长速度及形态,测定其产孢能力;在碳氮源饥饿条件下,采用实时荧光定量PCR方法对4种几丁质酶基因的表达水平进行分析。[结果]圆锥节丛孢菌在温度15~30℃均能生长,其中以25℃时菌丝生长最快且产孢能力最强;在pH为6.5~7.5时菌丝生长良好,其中以pH 7.0时产孢能力最强。圆锥节丛孢菌最适菌丝生长和产孢碳源为葡萄糖和蔗糖,其中含葡萄糖的培养基产孢量最高;最适氮源为酵母粉和蛋白胨,含酵母粉的培养基产孢量最高,以葡萄糖和酵母粉为碳氮源的最适碳氮比为5∶1。与对照组相比,在碳饥饿条件下,捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-14(AC-14,P<0.01)和捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-190(AC-190,P>0.05)基因转录水平上调,捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-379(AC-379,P>0.05)和捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-483(AC-483,P<0.01)基因转录水平下调;在氮饥饿条件下,上述4种几丁质酶基因转录水平均极显著下调(P<0.01)。[结论]菌丝生长和产孢最适温度为25℃,最适pH为7.0,最适碳氮源分别为葡萄糖和酵母粉,最适碳氮比为5∶1。本研究结果为进一步研发具有高效的捕食线虫真菌生物防控制剂奠定了基础。

少孢节丛孢菌几丁质酶AO-492对线虫的降解作用研究

【目的】为探究捕食线虫真菌少孢节丛孢菌几丁质诱导过程中分泌蛋白AO-492的生物学功能。【方法】对少孢节丛孢菌几丁质酶AO-492主要结构域编码区进行基因克隆及分子特征分析,并在毕赤酵母中进行表达。利用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白ReAO-Z492,采用NAG检测法分析了该重组蛋白在不同温度、pH及金属离子条件下的酶学活性,并将其作用于秀丽隐杆线虫及虫卵分析其生物学功能。【结果】几丁质酶AO-492有信号肽,无跨膜结构域,含有两个几丁质结合结构域和一个糖苷水解酶18家族结构域,并含有糖苷水解酶18家族几丁质酶高度保守的底物结合位点-SVGGWT-和水解酶活性位点-FDGGDLDWE-,含有典型的TIM桶形分子结构。系统进化分析显示,该蛋白与坚粘孢单顶孢几丁质酶(EPS35099.1)的亲缘关系相对最近。SDS-PAGE和Western Blot分析表明,ReAO-Z492分子量约为59 kD,可与小鼠抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生特异性反应。ReAO-Z492最适温度为40℃,最适pH为7.0;Mg^(2+)对其酶活有促进作用,而Ag^(+)、Cu^(2+)、Fe^(3+)和Zn^(2+)有抑制作用。ReAO-Z492对秀丽隐杆线虫体壁及其虫卵卵壳有较强的降解活性。【结论】少孢节丛孢菌几丁质酶 AO-492 对秀丽隐杆线虫及虫卵具有较强的降解作用。

感染LM小鼠巨噬细胞外泌体的转录组测序及差异表达miRNA特征分析

[目的]分离和鉴定感染单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)小鼠巨噬细胞外泌体(Exosomes,Exos)并分析其miRNA表达谱,为揭示巨噬细胞Exos miRNA在LM感染中的调控机制奠定研究基础。[方法]以未感染LM的巨噬细胞为对照组,感染LM的巨噬细胞为试验组,采用超速离心法分离提取巨噬细胞上清中的Exos,通过透射电镜、纳米颗粒追踪技术和Western blot对Exos形态、大小及表面标志分子特征进行鉴定。利用Illumina SE50测序平台对2组巨噬细胞Exos miRNA进行Small RNA-seq测序,筛选出显著差异表达的miRNA。使用Targetscan、miRDB和miRWalk数据库对差异表达miRNA靶基因进行预测,并对差异miRNA靶基因进行GO和KEGG-Pathway功能富集分析。利用Cytoscape软件绘制前20位Hub基因的miRNA-mRNA调控网络图。[结果]Exos直径为30~150 nm,具有典型的双层膜结构,Exos表面标志分子CD9、CD63和TSG101呈阳性表达。高通量测序结果显示,与对照组相比,试验组Exos中共筛选出9个显著差异表达的miRNA,其中显著下调基因8个(mmu-miR-7a-5p、mmu-miR-365-2-5p、mmu-miR-122-5p、mmu-miR-122b-3p、mmu-let-7i-5p、mmu-miR-151-3p、mmu-miR-182-5p和mmu-miR-1198-5p),显著上调基因1个(mmu-miR-192-5p),共预测miRNA调控靶基因1064个。GO富集分析结果显示,差异miRNA靶基因主要富集在轴突形成、细胞连接组装、肌动蛋白结合和金属离子跨膜转运等过程;KEGG分析显示,靶基因显著富集在cGMP-PKG信号通路和FcγR介导的吞噬作用通路。[结论]感染LM的小鼠巨噬细胞Exos miRNA表达谱发生了显著改变,其调控的潜在靶基因主要参与感染和免疫反应等信号通路。

sRNA GcvB对鼠伤寒沙门菌毒力的调控作用研究

小RNA(sRNA)是一种调节分子,可以在转录后水平调节基因表达,从而改变细菌的生理特征。为了研究sRNA GcvB在鼠伤寒沙门菌毒力中的调控作用,本研究构建了GcvB基因缺失株、互补株及示踪菌,检测其对鼠伤寒沙门菌生物被膜形成及泳动能力的影响;分析亲本株与缺失株在毒力及感染动力学上的差异,预测并分析了GcvB调控的潜在靶基因,探究了GcvB对ST生物被膜、氧化应激和毒力的调控作用。结果显示,与亲本株和回补株相比,GcvB缺失后生物被膜形成能力升高、抗氧化应激能力显著增强;半数致死量(LD50)上升至3.98倍。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测靶基因gcvA、bapA、hilA、igaA及sitD,结果显示gcvA、bapA、igaA及sitD的转录水平表达量上调,而hilA下降。本研究证实sRNA GcvB参与了鼠伤寒沙门菌生物被膜形成、氧化应激和毒力作用,为揭示sRNA GcvB在ST生物被膜、氧化应激和毒力中的调控机制提供了研究基础。

新疆包虫病流行病学及防控策略

包虫病是新疆地区人畜间流行的重要疫病之一。2005年以来,国家以及新疆地方各级政府加大了对包虫病的防控力度,取得了良好的防控成效。现有的流行病学调查表明,新疆细粒棘球绦虫的基因型主要为G1、G3和G6,多房棘球绦虫有16个单倍型。囊型包虫病在儿童、1岁以内绵羊的感染率分别由控制前的6.7%和4.5%下降到2.2%和1.3%;家犬细粒棘球绦虫的感染率由11.6%下降至1.6%。对终末宿主犬主要采取“犬犬投药、月月驱虫”的策略;对中间宿主绵羊实行强制免疫的防控措施;对患病脏器进行无害化处理;加大宣传、科学防范、加强联防联控等措施。泡型包虫病在野生动物为主的病原循环链间传播,目前尚缺乏有效的措施用于泡型包虫病的防控。

地方本科院校大学生劳动教育课程建设的实践理路

劳动教育已成为当今学校教育的重要组成部分。地方本科院校以培养学生应用能力为主,更需加强劳动教育,树立服务型学习意识。通过对内蒙古四所地方本科院校劳动教育相关负责人的访谈得知,当前各校在劳动教育的课程价值、课程内容、教育方法以及教育管理部门等方面都存在不同看法。因此,大学生劳动教育目标的厘定、教育内容的确定、课程体系的架构、开展方法的规划、课程归属的划定变得尤为重要。鉴于此,应在对比中小学劳动教育课程的基础上,结合当地劳动教育特有的课程资源等渠道,建构起符合本地区实际的大学生劳动教育课程框架和实施路径。

麻黄定喘汤通过调控NLRP3炎症小体改善咳嗽变异性哮喘豚鼠气道炎症

目的:探讨麻黄定喘汤对咳嗽变异性哮喘(CVA)豚鼠气道炎症的影响及其治疗作用是否与NLRP3信号通路有关。方法:选取50只雄性豚鼠随机分为正常组、模型组、麻黄定喘汤低剂量组(5 g/kg)、麻黄定喘汤高剂量组(20 g/kg)和地塞米松组(0.5 mg/kg),每组10只。除正常组外其余建立CVA模型,连续给药4周。末次给药后辣椒素气溶胶激发记录咳嗽次数及咳嗽延迟时间;肺泡灌洗液(BALF)进行Diff-Quik染色检测炎症细胞计数;肺组织进行HE染色、PAS染色、Masson染色观察病理改变;Caspase-1活性试剂盒观察肺组织Caspase-1活性变化;ELISA检测BALF中IL-1β、IL-18、IL-17A、IL-22、IL-23细胞因子含量;Western blot检测肺组织中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-18、IL-1β蛋白表达水平;免疫组织化学法和免疫荧光法观察NLRP3在气道周围的分布。结果:麻黄定喘汤有效减少咳嗽次数,降低BALF中炎症细胞数及IL-1β、IL-18、IL-17A、IL-22、IL-23炎症细胞因子含量;下调肺组织中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-18、IL-1β蛋白表达水平;减弱肺组织NLRP3的荧光强度,降低肺组织中Caspase-1活性。结论:麻黄定喘汤可能通过抑制NLRP3炎症小体改善CVA豚鼠气道炎症。

建设中华民族现代文明:科学内涵、重要意义、实践路径

文章以习近平文化思想为指引,联系中华文明的五个突出特征阐释中华民族现代文明蕴含的深厚含义,联系当前国家任务分析建设中华民族现代文明的重要意义,并从思想自觉、政治自觉和行动自觉三方面提出建设中华民族现代文明的实践途径,为新时代建设中华民族现代文明提供有益的借鉴。

初中数学教学中学生创新思维培养

为了培养初中学生的创新思维,文章首先阐述了创新思维类型,然后分析了初中数学教学中学生创新思维培养的意义和存在的问题,接着提出了初中数学教学中学生创新思维培养的原则,最后论述了初中数学教学中学生创新思维培养策略,包括积极探究讨论,培养学生发散思维;激发学生学习兴趣,培养学生延伸思维;更新教学手段,培养学生拓展思维。

神龙摆尾

小朋友,过年啦!今年是龙年哦,你在大街上看到舞龙表演了吗?没看到也没关系,晚上回家和爸爸一起来玩一玩“神龙摆尾”小游戏,神气活现地迎接新一年吧!玩法一:小朋友和爸爸分别站在障碍物的一侧,弯腰双手双脚撑地,双脚并拢左右摇摆跳过障碍物,和爸爸比一比一分钟之内谁跳得多。

礼物搬运工

小朋友,你家中的小玩偶多吗?它们是不是都是你收到的礼物呀?今天不妨把它们都找出来,让它们陪你和爸爸一起玩一个好玩的小游戏吧!1.爸爸和宝宝并排坐在地垫上,保持腿部悬空。2.爸爸取一只玩偶从腿部下方绕到身后再通过腿部下方传递给宝宝。3.宝宝以同样的方式将玩偶从身体周围绕过,并放到一侧。

小书立,大整理

小朋友,牛奶箱或鞋盒是家里常见的废旧物品,把它们改造一番,做成书立,就可以很好地帮助我们收纳整理各类书本啦!快来一起做一做吧!1.将纸盒平放,两边量出相等的距离并将两个点连接成直线。2.用美工刀沿线将纸盒切割开(这一步请家长协助哦)。

红灯停,绿灯行

小朋友,遵守交通规则是保护自身安全的第一步哦,“红灯停,绿灯行,黄灯等一等”的口号一定要牢记心间。今天,不妨和爸爸一起来玩一个执行“红绿灯”规则的花样小游戏,看看你和爸爸谁的反应能力更胜一筹吧!

运动挑战赛

小朋友,爸爸发起运动挑战,你敢应战吗?不妨来试一试下面的项目,和爸爸比一比,看你能赢得几项吧!

糖尿病合并周围神经病变的内分泌机制研究及其临床治疗效果评价

本研究旨在深入探讨糖尿病合并周围神经病变的内分泌机制,并评价其临床治疗效果。方法 选取了60例糖尿病合并周围神经病变患者,随机分为实验组和对照组,每组各30例。对照组采用常规治疗方法,而实验组则在常规治疗基础上,结合内分泌机制研究进行针对性治疗。结果 经过对比,实验组的总有效率高达93.3%,显著高于对照组的63.3%(χ2=7.9533,P=0.003)。此外,实验组的空腹血糖、餐后2小时血糖及糖化血红蛋白(HbA1c)水平均较对照组显著降低(P=0.0033)。结论 针对糖尿病合并周围神经病变患者的内分泌机制进行深入研究,并据此制定相应的治疗方案,能够显著提高治疗效果,有效降低患者的血糖及糖化血红蛋白水平,为糖尿病合并周围神经病变的治疗提供了新的思路和方法。

没有痕迹,有回忆

小朋友,外出旅游或游玩时,我们都会有很多愉快的体验,通常也会采用一些方法去留下这些美好的印记。当然,我们都知道,在当地刻画“某某某到此一游”肯定不对。那么,你是如何正确留下游玩痕迹的呢?

拯救大熊猫

小朋友,你喜欢大熊猫吗?它可是我们国家的一级重点保护动物,而且是我们国家最特别的“外交官”,深受全世界人民的欢迎。如果大熊猫遇到危险,我们当然要不顾一切“拯救”它,今天就和爸爸一起来玩一玩“拯救大熊猫”的游戏吧!

探究新形势下国企海外工程项目基层党建如何开展

随着国有企业参与海外工程项目的不断增加,新形势下国企海外工程项目基层党建工作变得尤为重要。本文以实际国有企业项目为例,研究了在新背景下,如何开展基层党建工作,提出了强化基层组织人员配备、加强组织学习、拓宽新领域的党建工作、发挥传帮带作用以及融入企业文化的策略。本文的研究成果旨在为相关人员和工程项目提供参考,以适应新形势下国企海外工程项目基层党建工作的挑战和机遇。

一起来拉伸

小朋友,睡前适当拉伸有助于我们长高,还能让你睡得更好哦!今天晚上睡觉之前,不妨和爸爸一起来学几个拉伸动作,让身体充分舒展10分钟吧!

脚印“图鉴”

小朋友,我们身边的一切物品都有它独特的形态,请你准备一份颜料,帮它们在这个世界留下一个特别的“脚印”吧!