基因枪喷射技术在家蚕外源基因转移中的应用

自从J.C.Sanford建立了基因枪喷射转移外源基因技术以来,已经在动植物基因工程领域内得到了广泛的应用,并有许多获得成功的实例。自1984年前田进利用家蚕生产出α-干扰素后,人们对转移基因家蚕的研究表现出极大的兴趣,相继开展了家蚕受精卵为受体的外源基因转移技术的研究。据田村和尼古拉耶夫,A.I.研究报道。

新油蚕基因of的发现

新油蚕基因ｏｆ的发现孟智启，伴野丰，土井良宏（浙江省农业科学院蚕桑研究所）（日本九州大学家蚕基因资源中心）家蚕正常幼虫皮肤内含有大量白色尿酸盐结晶呈不透明状。而油蚕因在其真皮细胞内缺乏吸附这种尿酸盐的蛋白质，致使油蚕的皮肤呈透明状［１］。油蚕是一个十...

雄蚕产业化发展战略的思考

本文在概述专养雄蚕优越性的基础上 ,从分析专养雄蚕的技术积累、市场价值、市场需求等出发 ,得出了专养雄蚕产业化发展的有益性 ,并在此基础上提出了雄蚕产业化发展中产业链的建立、产业新格局的形成等若干战略性的意见和建议。

桑蚕磁生物学效应的研究

近年来,磁场生物学效应研究十分活跃,有些研究成果已在医学和农业上推广应用。但在蚕业界这方面的研究报道较少。据苏联Аблулаевт.м等研究报道,在蚕蛾交配过程中,给予800～4850高斯强度的磁场幅照处理,在其后代可产生雄多于雌2、3倍的性比差群体。为了验证上述方法的可行性,我们于1988年早、中秋蚕期开展了桑蚕磁生物学效应的研究,现将结果概述如下。

浙江省桑蚕品种资源的耐氟性调查研究

蚕品种资源的耐氟性调查是一项重要的基础性工作。作者对浙江省保存的76个蚕品种进行了耐氟性测定。通过研究,初步提出2龄蚕的耐氟阀值,并提供各地理类型品种耐氟性的差异和耐氟特强和特弱品种的成绩资料,对指导耐氟蚕品种选育有参考意义。

天蚕丝素基因及丝腺超微结构研究进展

天蚕(Antheraea yamamai)是栖息在我国东北部和日本本州北部的一种野生吐丝昆虫。天蚕丝具有华丽的光泽和自然的色彩,是一种被称为“钻石纤维”的珍贵蚕丝,以高出家蚕丝数十倍的价格在国际市场上倍受青睐。近年来,有关学者对于天蚕丝蛋白及丝腺结构在分子水平上开展了一系列的研究,已成功地分离克隆3天蚕丝素基因;天蚕丝的超微结构及形成机理也日趋阐明。本文试将这方面的研究进展作一概要译述。

基因枪法转移CAT基因在家蚕早期受精卵中的瞬间表达

基因枪法转移ＣＡＴ基因在家蚕早期受精卵中的瞬间表达孟智启，刘静（浙江省农业科学院，杭州３１００２１）Ｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌａｃｅｔｙｌｔｒｎｓｆｅｒａｓｅ（ＣＡＴ）ｇｅｎｅｉｎｔｈｅｅａｒｌｙｆｅｒｔ...

转基因蚕研究进展概述

转基因动、植物的研究,是近年来在基因工程中发展很快的一个研究领域,已经有转基因牛、猪和转基因水稻,棉花获得成功并在生产中应用推广.家蚕作为一种独特的经济昆虫被人们利用已有数千年的历史,蚕的许多遗传背景和生理生化反应机制已被阐明,这些知识和成果的积累无疑为开展转基因蚕的研究,奠定了良好的基础.因此,尽管转基因蚕的研究起步较迟,但已有一些颇有趣味的研究结果崭露,本文就近年来的研究结果作一概述.

家蚕4眠期与5龄期后部丝腺细胞蛋白质组成分析

为探讨家蚕丝腺细胞合成分泌蛋白质过程中有关基因的表达调控机理,采用蛋白质双向电泳和图像分析技术,研究了家蚕4眠期和5龄期后部丝腺细胞的蛋白质组成。在4眠家蚕的后部丝腺细胞中检测到425个蛋白斑点,5龄期随着生长发育的进程,可检测到新的特异蛋白斑点,说明不同的发育时期,后部丝腺细胞的蛋白组成是不一致的。5龄前、中期新增加的特异蛋白斑点可能与丝素蛋白的合成、分泌有关,而5龄后期新增加的特异蛋白斑点可能与丝腺组织的形态变化、细胞的分解凋亡有关。

组蛋白修饰及其生物学效应

组蛋白是染色质的主要成分之一,其氨基端的氨基酸残基可以被共价修饰,进而改变染色质构型,导致转录激活或基因沉默。组蛋白修饰除了简单地调控基因表达,更在于它可以招募蛋白复合体,影响下游蛋白,从而参与细胞分裂、细胞凋亡和记忆形成,甚至影响免疫系统和炎症反应等。不仅如此,最近的研究表明,组蛋白修饰与CTD密码、生物节律、DNA修复之间也存在一定的联系。这些发现证明了组蛋白修饰的重要性。在组蛋白的密码形成与密码破译、修饰级联与招募蛋白质过程中,蛋白复合体的特殊结构域起到的中介作用都是无法替代的。因此,这些特殊结构域将是了解"组蛋白密码"的关键。目前质谱分析等技术的广泛应用,正使得许多新的结构域不断被发现。文章旨在对组蛋白密码的基本内容作一述评,同时对可能的研究热点进行展望。

雄蚕新品种“秋丰×平28”的育成

以家蚕平衡致死系平30为受体亲本,以茧丝质优、抗性强的现行家蚕品种白玉为优良基因的供体材料,通过杂交、自交和回交3个过程,育成了经济性状优良的家蚕性连锁平衡致死系平28,用该品种与皮斑限性品种秋丰组配成雄蚕杂交组合秋丰×平28。杂交种的雄蚕率达98%以上,茧层率、万蚕茧层量、鲜茧出丝率分别比对照品种秋丰×白玉高3.1%、0.166 kg、1.76%,而且解舒率较为稳定,是一对综合经济性状优良的雄蚕品种。2005年通过浙江省家蚕品种审定。

蜜蜂(Apis mellifera)腺苷酸转移载体基因cDNA的电子克隆

以果蝇腺苷酸转移载体基因cDNA序列为信息探针,对蜜蜂EST数据库进行同源检索筛选,克隆了蜜蜂腺苷酸转移载体基因(Am ant)的cDNA序列(GenBank登记号为AY332626),该基因全长1 251bp。经RT-PCR克隆、序列分析验证,结果表明与电子克隆序列完全一致;该基因具有完整的开放阅读框架(ORF),编码蛋白为300个氨基酸,通过对人、果蝇、家蚕及烟草天蛾的腺苷酸转移载体蛋白序列比较,发现该基因具有高度的保守性;说明根据物种间同源基因序列,进行跨物种EST数据库的同源检索筛选、拼接,是基因克隆的一条有效途径。

家蚕五龄第1天与第4天后部丝腺蛋白质双向电泳图谱比较

【目的】家蚕后部丝腺是合成分泌占蚕丝总量75%～80%丝素蛋白的器官,通过后部丝腺蛋白的研究,有利于阐明家蚕分泌丝素蛋白及蚕茧优质、高产的机理。【方法】采用蛋白质双向电泳和图像分析技术,研究了家蚕不同品种五龄第1天和第4天后部丝腺细胞的蛋白质组成变化。【结果】发现各个品种五龄第1天和第4天后部丝腺细胞的蛋白质组成存在差异,但蛋白质水平的差异,远远小于从EST分析得出的基因表达水平的差异;不同家蚕品种,从五龄第1天到第4天,后部丝腺细胞的蛋白质组成的变化规律各不相同。【结论】暗示了家蚕丝素分泌的过程可能受到多种蛋白的调控,不同的品种,在调控位点及调控蛋白上存在着一定的差异,从而导致了不同品种家蚕后部丝腺细胞在分泌丝素能力上的差异。

根癌农杆菌介导的灰葡萄孢菌遗传转化研究

以pCAMBIA1300-N载体为骨架,成功构建了以绿色荧光蛋白(gfp)为报告基因,潮霉素(hph)为抗性筛选标记的载体pKPG,并利用根癌农杆菌介导转化系统,成功获得了能表达绿色荧光蛋白的重组灰葡萄孢菌。通过PCR检测转化子的绿色荧光蛋白基因和潮霉素抗性表达框,观察菌丝和分生孢子的荧光表型,以及gfp基因的Southern杂交验证,结果表明:被测转化子基因组中均成功整合了目的基因片段。

枯草芽孢杆菌作为外源基因表达系统的研究进展

枯草芽孢杆菌是目前研究较为详尽的外源基因表达宿主,但由于受自身分泌蛋白酶多、构建的表达质粒不太稳定等因素影响,其应用受到一定的限制。文章综述了枯草芽孢杆菌基因组的特征、蛋白的分泌机制、重组表达质粒不稳定的原因,指出了枯草芽孢杆菌作为外源蛋白表达系统的瓶颈及今后的研究重点。

家蚕抗菌肽-死亡素杂合肽基因在大肠杆菌中的克隆与表达

A 44-residue hybrid peptide (CB (1-24)-Arg-Ser-Tyr-Tan (4-21)) incorporating 1-24 residues of cecropin B (CB) and 4-21 residues of thanatin (Tan) was designed and constructed. The CB-Tan gene was cloned into expression plasmid pGEX-3X and expressed in E.coli BL21. The fusion protein was purified by affinity chromatography. After digested with enterokinase the gene product released with antibacterial activity and gave one band in Tricine-SDS-PAGE.

毒死蜱对稀有鮈鲫不同生命阶段的毒性效应

为探明毒死蜱对鱼类不同生命阶段的毒性效应，以稀有的鲫Gobiocyprisrarus为测试生物，评价了毒死蜱对其的急性毒性及对胚胎生长发育的毒性效应。结果表明：毒死蜱对稀有的鲫胚胎、仔鱼、幼鱼和成鱼的96h—LC铀值分别为7．59（5．14～9．86）、0．393（0．326～0．447）、0．0478（0．0382～0．0549）和0．0272（0．0219～0．0419）mg／L，毒死蜱对稀有的鲫4个生命阶段的毒性大小依次为成鱼〉幼鱼〉仔鱼〉胚胎；稀有的鲫暴露于毒死蜱后最明显的中毒症状是脊柱畸形；此外，质量浓度为6．13—35．8mg／L的毒死蜱在48h时可明显促进稀有绚鲫胚胎的孵化。

利用EST库资源克隆家蚕腺苷酸转移酶基因

根据物种间同源基因相对保守的特点 ,利用生物信息学方法以果蝇 (Drosophilamelanogaster)腺苷酸转移酶基因 (adeninenucleotidetranslocase,ant)cDNA序列作为模板 ,对家蚕 (Bombyxmori)EST数据库进行同源检索筛选 ,克隆了家蚕腺苷酸转移酶基因的cDNA序列 (GenBank登录号为AY2 2 70 0 0 ) ,全长为 1936bp ,并经RT PCR克隆、序列分析验证 ,结果与电子克隆序列完全一致。该cDNA序列具有完整的开放阅读框架 (ORF ,2 0 7～ 110 9bp) ,推测编码蛋白为 30 0个氨基酸 ,通过与烟草天蛾 (Manducasexta)、蜜蜂 (Apismellifera)、绿蝇 (Luciliacuprina)、果蝇、蚊子(Anophelesgambiae)等昆虫的腺苷酸转移酶蛋白序列比较 ,发现该基因具有高度的保守性。表明根据物种间同源基因序列 ,对跨物种间EST数据库进行同源检索筛选、拼接 ,是基因克隆的一条有效途径。

利用雌蚕无性克隆系的新型雄蚕品种选育及应用

利用性别控制技术实现"农村专养雄蚕,蚕种场多养雌蚕"对提高蚕茧生产的茧丝产量和品质,以及降低雄蚕杂交种的生产成本具有重要意义。将育成的高发生率和高孵化率雌蚕无性克隆系与平衡致死雄蚕杂交,按不完全双列杂交方法组配成31个雄蚕杂交组合,通过3年5期的比较试验,从中筛选出综合经济性状优良的新型雄蚕品种雌35×平28和雌29×平28,并在浙江主蚕区成功试养。新型雄蚕品种与现行雄蚕品种相比,张种产量提高8.53%,解舒丝长增加45m,鲜茧出丝率提高0.7个百分点。新型雄蚕品种的育成有望进一步降低雄蚕杂交种的生产成本,加速专养雄蚕产业化的进程。