不同治法方药对大鼠脂肪肝Kupffer细胞ERK1/2蛋白活性的影响

目的:观察疏肝、健脾、活血、祛湿、综合不同治法方药对大鼠脂肪肝Kupffer细胞ERK1/2蛋白活性的影响。方法:利用高脂饮食、白酒灌胃复制大鼠脂肪肝实验动物模型,同时给予疏肝、健脾、活血、祛湿、综合不同方药进行干预。12周后以Ⅳ型胶原酶、蛋白酶E联合灌注消化、梯度离心、选择性贴壁分离不同组别大鼠Kupffer细胞,采用Western blotting方法检测不同组别大鼠Kupffer细胞ERK1/2蛋白的表达及其磷酸化水平的变化。结果:模型组大鼠Kupffer细胞ERK1/2蛋白的表达和磷酸化ERK1/2蛋白的表达较正常组明显增加(P<0.01),各干预组ERK1/2表达和磷酸化ERK1/2蛋白的表达较模型组显著降低(P<0.01),其中疏肝组(柴胡疏肝散:柴胡、川芎、枳壳、陈皮、白芍、香附、炙甘草)、健脾组(参苓白术散:人参、白术、茯苓、薏苡仁、砂仁、山药、桔梗、白扁豆、莲子、炙甘草)ERK1/2蛋白表达和磷酸化ERK1/2蛋白的表达下降最为明显。结论:在大鼠脂肪肝的形成过程中Kupffer细胞ERK1/2蛋白高表达和磷酸化ERK1/2蛋白高表达可能起到了重要作用,Kupffer细胞ERK1/2蛋白的高表达和磷酸化ERK1/2蛋白高表达可能参与并促进了脂肪性肝损伤,抑制ERK1/2蛋白的表达及磷酸化可能是健脾疏肝等治法方药抗实验性大鼠脂肪肝的作用机制之一。

猪淋巴细胞白细胞介素-6(PIL-6)基因的克隆和序列分析

将猪外周血淋巴细胞进行体外培养 ,在ConA的刺激下培养 4 8h后 ,提取培养的淋巴细胞总RNA ,应用RT PCR扩增猪淋巴细胞白细胞介素 6基因 (PIL 6 ) ,并克隆到pUC18载体测序 .结果发现 ,PIL 6的cDNA长度为 74 1bp ,开放阅读框为 6 36bp ,编码 2 12个氨基酸 ,分子量2 4kD ,等电点 5 .5 ;其 4 6～ 12 9bp编码PIL 6的信号肽序列 ,130～ 6 81编码PIL

小鼠对猪囊虫抗原基因TS76的免疫应答

将猪囊虫抗原基因 TS76的真核表达型质粒 VTS76单独或与 p UC18联合肌肉免疫注射于 BAL B/ c小鼠 ,以MTT比色法检测小鼠脾淋巴细胞 Con A刺激的增殖反应及 IL - 2的诱生活性 ,EL ISA方法检测免疫小鼠 Ig G总量和特异性抗体水平 ,常规法检测外周血免疫细胞数量的动态变化。结果发现 ,VTS76免疫小鼠各项细胞和体液免疫应答反应指数均比空白对照组小鼠显著提高 ;联合免疫组小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答反应指数均比 VTS76小鼠提高。由此可见 ,以 VTS76免疫小鼠可诱导其特异性细胞和体液免疫反应 ,而 p UC18又明显提高了 VTS76免疫小鼠的免疫应答水平 。

猪带绦虫抗原基因TS76真核表达的研究

将猪囊尾蚴抗原基因ＴＳ７６亚克隆至ＶＲ１０２０真核表达载体中，用菌落原位杂交法筛选重组质粒，将其转染Ｃｏｓ７细胞，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ鉴定插入片段的ｍＲＮＡ转录；用ＥＬＩＳＡ检测其表达产物．结果发现： ＶＴＳ７６在真核细胞中能够转录ＴＳ７６基因；表达产物被兔抗猪囊尾蚴高免血清所识别，在转染真核细胞后２４ｈ，即可检测到正确表达的猪囊尾蚴抗原蛋白．

多种属CpG ODN诱导特异性抗体反应的研究

目的探讨人工合成的CpG ODN对不同物种的免疫刺激活性,开发具有广谱免疫刺激活性的CpG ODN。方法将特定的CpG ODN单独或与不同的抗原联合分别免疫鸡和小鼠,用ELISA检测不同时间鸡和小鼠特异性抗体的滴度。结果CpG ODN均能诱导鸡和小鼠产生抗原特异性抗体,且抗体水平明显高于对照组(P<0.05)。结论这种CpG ODN在一定程度上具有广谱免疫刺激特性。

MAGE-3多肽诱导特异性T细胞对人肝癌细胞株的杀伤作用

目的观察MAGE-3多肽特异性T细胞的诱导和对人肝癌细胞株HepG 2细胞的作用。方法合成MAGE-3多肽271～279肽段,合成肽诱导培养的淋巴细胞与人肝癌细胞株HepG 2细胞共同混合培养,观察T细胞对肿瘤细胞的结合;MAGE-3多肽诱导肝癌患者外周淋巴细胞,四聚体方法检验MAGE-3多肽特异性T细胞的诱导。结果MAGE-3多肽特异性淋巴细胞与对人肝癌细胞株HepG 2细胞有明显的聚集、粘附和可能的攻击作用;肝癌患者外周淋巴细胞中特异性T细胞频数提高。结论MAGE-3多肽可以诱导肿瘤患者特异性T细胞,诱导的特异性T细胞对人肝癌细胞株HepG 2细胞可能有杀伤作用,显示MAGE-3多肽可作为肝癌生物治疗特异性表位肽候选多肽。

山荷减肥颗粒对饮食诱导肥胖大鼠瘦素、脂联素、抵抗素的影响

目的:观察山荷减肥颗粒对高脂饮食诱导的肥胖模型大鼠的减肥降脂作用及对脂肪组织脂联素、抵抗素基因表达的影响。方法:肥胖模型大鼠随机分为山荷减肥颗粒高、中、低剂量3个实验组及高脂对照组、正常组。对给药8周的动物称体重,测体长,计算Lee’s指数,测定大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)及高密度脂蛋白(HDL)的水平,用ELISA法测瘦素水平,用RT-PCR检测附睾周围脂肪组织脂联素、抵抗素mRNA表达。结果:山荷减肥颗粒组大鼠体重、Lee’s指数、脂肪重量、血清TC、TG、LDL水平明显低于高脂组大鼠(P<0.05),瘦素明显低于高脂模型组(P>0.05),脂肪组织脂联素、抵抗素mRNA的表达水平明显高于高脂组大鼠(P<0.05)。结论:山荷减肥颗粒对肥胖大鼠具有减肥降脂作用,调整肥胖大鼠脂肪组织瘦素、脂联素、抵抗素mRNA的表达水平,可能是其治疗肥胖的作用机制之一。

脂质体包裹猪白细胞介素6基因对猪带绦虫抗原基因免疫小鼠的影响

比较研究了BALb/c小鼠分别肌肉注射猪带绦虫抗原基因VTS76、猪白细胞介素 6(VPIL 6)联合VTS76及其阳离子脂质体包裹质粒等 5个处理的免疫效应。结果表明 ,VTS76联合VPIL 6共注射小鼠的IgG含量和抗体滴度 ,脾细胞增殖反应和IL 2诱生活性以及免疫细胞数量 ,均比注射VTS76的显著增强。经阳离子脂质体包裹的VTS76+VPIL 6在减少质粒用量 80 %时 ,免疫应答水平仍显著高于脂质体包裹VTS76,且明显高于VTS76+VPIL 6,证明VPIL 6能显著增强基因疫苗 (VTS76)免疫小鼠的免疫应答。

SARS灭活病毒免疫兔后IgG特异抗体应答

将灭活的SARS冠状病毒抗原每隔两周多点注射免疫兔,共免疫3次,以观察SARS灭活病毒免疫兔后兔血清中IgG特异性抗体的应答变化。免疫前及第一次免疫后第8、14、21、28、35天耳静脉取血,分离血清。间接ELISA法测得血清中特异性IgG抗体持续升高,并表现出一定的剂量依赖性。第35天G1、G2、G3组血清IgG抗体滴度分别为1∶51200、1∶49600、1∶25600;中和试验测得G1组第28天血清样品中和抗体效价为1∶2560;蛋白芯片测得M、N、3CL、S1、S2、S3、S4等病毒蛋白抗原都可特异性结合抗血清中的IgG抗体,但是不同蛋白抗原结合能力有差别。因此可认为SARS灭活病毒经皮下注射免疫兔后,可诱导全身性IgG抗体应答,产生SARS冠状病毒特异性抗体。

成华猪γ-干扰素基因分子克隆与序列分析

为研究猪γ-干扰素在抗御传染性疾病和肿瘤生物治疗中的免疫增强作用,本实验以ConA刺激成华猪外周血淋巴细胞提取激活淋细胞的mRNA,设计合成特异的引物序列,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增和克隆成华猪IFN-γ基因并进行序列测定。成华猪IFN-γcDNA约长500bp,从第68位核苷酸开始编码其信号肽,到569位核苷酸为终止子。IFN-γ基因的开放框架(ORF)由498bp构成,编码166个氨基酸。成华猪IFN-γ与猪IFN-γ基因核苷酸间同源性为98％,在261-269存在点突变,在氨基酸水平完全一致。IFN-γ氨基酸与鼠同源性为30％,与人同源性为40％。

BALB/C小鼠对不同佐剂SARS灭活疫苗的早期免疫反应

目的 :研究含不同佐剂的SARS灭活疫苗免疫小鼠后 ,小鼠的早期细胞免疫和体液免疫反应。方法 :灭活的SARS冠状病毒F6 9株分别与弗氏佐剂、氢氧化铝、CpG佐剂配伍 ,制备灭活疫苗。接种 6周龄SPF级BALB C小鼠。定时采血 ,分析小鼠外周血中CD4 + 、CD8+ T细胞亚群动态变化 ,同时测定鼠血清中特异性IgG抗体及抗体的病毒中和活性。结果 :由3种佐剂制备的SARS灭活疫苗免疫小鼠后 ,CD4 + 、CD8+ T细胞百分比升高或无明显改变 ,CD4 CD8比值无显著性改变。其中 ,弗氏佐剂疫苗免疫小鼠的CD4 + T细胞百分比升高较明显 ,且在一段时间内 ,维持在一个较高的水平 ;铝佐剂疫苗免疫小鼠后 ,未观察到明显T细胞亚群改变 ;而CpG佐剂疫苗免疫小鼠的CD8+ T细胞百分比改变较其它佐剂疫苗改变更明显。与此相异的是 ,3种疫苗均可诱导小鼠产生较高滴度特异性IgG抗体 ,并且所产生的抗体具有中和活性。在初免后第 34天 ,3种佐剂组的IgG抗体滴度分别为 1∶1 2 80 0、1∶32 0 0和 1∶1 6 0 0 ,中和效价分别为 1∶2 5 6 0、1∶96 0和 1∶32 0。结论 :SARS灭活疫苗接种小鼠后 ,可诱导较强的体液免疫反应 ,同时轻度上调CD4 + 、CD8+ T细胞活性 ,程度因佐剂而异。

金丝桃苷药理作用及其作用机制的研究进展

综述金丝桃苷抗急性肝损伤、抗抑郁、抗炎症、抗血栓、抗癌、抗菌、抗氧化应激和抗细胞凋亡等药理作用,介绍其发挥药理作用的主要机制,为进一步研究金丝桃苷的药理作用、潜在治疗靶点和机制提供理论依据。

猪白细胞介素-6基因的原核表达及其活性研究

用DNA重组技术 ,将已克隆的猪IL - 6cDNA片段插入pGEX 1λT质粒 ,转化大肠杆菌 ,以BamHI和PstI酶切鉴定重组子 ,以IPTG诱导融合蛋白表达 ,并作RT PCR及SDS PAGE分析表达情况 ,从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收融合蛋白 ,用MTT法测定重组蛋白刺激小鼠脾淋巴母细胞增殖反应的活性 ,并免疫家兔制备高免血清 ,得到高效表达猪IL 6的质粒pGPIL 6 ,RT PCR确证 pGPIL 6在大肠杆菌中能正确转录 ,经SDS PAGE分析表达蛋白分子量为 4 9kD ,融合蛋白具有较高的促小鼠淋巴细胞增殖反应活性 ,以此免疫家兔 ,可制备滴度为 1∶12 80 0

激素性股骨头坏死模型的建立及病理和影像学特征

目的建立兔激素性股骨头坏死动物模型,观察激素性股骨头坏死的病理及影像学特征。方法将20只健康新西兰兔随机分成两组,每组10只。A组:模型组,注射马血清及醋酸泼尼松龙造模;B组:正常对照组。采用X片及CT观察股骨头形态的变化,处死动物,标本进行常规组织病理学检查,并进行动脉墨汁灌注观察。结果X片及CT结果显示:造模组两侧股骨头密度不均一,关节面模糊;墨汁灌注血管造影显示股骨头血管显著减少;病理组织学观察结果显示:骨小梁骨细胞陷窝空疏,骨细胞核固缩,部分血管栓塞,骨髓腔内造血组织明显减少。结论马血清、激素诱导的激素性股骨头坏死动物模型病理变化、影像学改变符合临床典型股骨头坏死的特征,为进一步研究股骨头坏死发病机制及治疗方法提供基础。

猪囊尾蚴抗原基因Ts11的克隆及其在大肠杆菌的表达

PCR扩增重组噬菌体λTs11克隆的cDNA片段 ,与pUC18连接 ,得到的重组子用以测序 ,并进行同源性比较分析 ;将该片段克隆到原核表达载体pGEX 1λT中 ,免疫印迹筛选得到能正确表达该片段的重组子 ;制备该重组子在大肠杆菌中的表达产物 ,进行浓度梯度SDS PAGE和West ernblotting分析。结果表明Ts11cDNA片段为 52 2bp ,编码含 139个氨基酸残基的多肽 ,在Gen Bank和EMBL数据库均未发现同源序列。重组质粒在大肠杆菌中表达的融合蛋白分子量为 4 1KD ,能与兔抗猪囊尾蚴囊液血清产生很强的免疫反应。这些结果证实分离到一个新的编码具较强免疫原性猪囊尾蚴抗原的cDNA克隆。

髓鞘碱性蛋白反应性淋巴细胞对神经细胞的作用

目的观察髓鞘碱性蛋白反应性淋巴细胞对人脑神经元细胞及其髓鞘的作用。方法合成髓鞘碱性蛋白83-99肽段,合成肽诱导培养的淋巴细胞与人脑神经细胞共同混合培养,扫描电镜观察。结果髓鞘碱性蛋白反应性淋巴细胞对神经细胞和髓鞘有明显的聚集、黏附和可能的攻击作用,神经细胞的细胞膜和髓鞘有损伤,神经细胞有坏死。结论髓鞘碱性蛋白反应性淋巴细胞对神经细胞和髓鞘有聚集、黏附和可能的攻击作用,可引起髓鞘损伤和神经细胞坏死,这种直接作用可能是多发性硬化症的发病机制之一。

山荷减肥颗粒配合有氧运动疗法治疗儿童单纯性肥胖症的临床研究

目的:观察山荷减肥颗粒配合有氧运动疗法治疗儿童单纯性肥胖症的临床疗效及对血脂、瘦素(Leptin)水平的影响。方法:36例单纯性肥胖症患儿均口服山荷减肥颗粒(由山楂、荷叶、泽泻、决明子等组成),同时配合有氧运动疗法。1月为1疗程,共治疗3疗程。主要观察临床疗效及血脂各项指标和瘦素水平的变化。结果:显效21例,有效10例,无效5例,总有效率为86．1％。治疗后肥胖患儿体重指数(BMI)从治疗前(26．06±5．64)降至治疗后(19．88±5．01),治疗前后比较,差异有非常显著性意义(P<0．01)。治疗后除HDL-C外,血脂其他指标均有明显改善,与治疗前比较,差异有非常显著性意义(P<0．01)。 leptin水平治疗前为(37．34±6．69)ng/mL,治疗后为(18．89±10．62)ng/mL,治疗前后比较,差异有非常显著性意义(P< 0．01)。结论:山荷减肥颗粒配合有氧运动疗法治疗儿童单纯性肥胖症疗效显著。

氯霉素竞争ELISA检测方法的研究

用抗氯霉素的MAb2G2建立了检测氯霉素的竞争ELISA,对主要影响因素进行了研究,其回归方程为y=-0.3522x+0.5939,相关系数为R2=0.9906,检测线性范围为0.098ng/mL～25ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为1.848ng/mL,检测限为0.135ng/mL。与氯霉素琥珀酸钠交叉反应率为143%,与其它结构类似物和常见抗菌素的交叉反应率均小于0.01%。批内和批间变异系数分别为4.98%和9.42%,牛奶样的平均添加回收率为101.31%。所建立的检测氯霉素竞争ELISA法,符合检测氯霉素残留的要求,为氯霉素残留快速检测试剂盒的研制奠定了基础。

阳离子脂质体包裹CpG对猪瘟猪肺疫猪丹毒三联疫苗免疫效应的影响

对 3组分别注射猪瘟猪肺疫猪丹毒三联疫苗 (简称三联疫苗 )、CpG +三联疫苗、阳离子脂质体包裹CpG +三联疫苗的小鼠细胞和体液免疫反应进行了比较分析。结果显示 ,阳离子脂质体包裹CpG +三联疫苗免疫小鼠脾细胞增殖反应明显增强 ,白细胞介素 2 (IL 2 )诱生活性和免疫细胞数量、血液IgG含量较仅注射三联疫苗的小鼠显著增加。说明阳离子脂质体包裹CpG能增强小鼠对三联疫苗的体液和细胞免疫应答反应 。

猪带绦虫抗原基因TS76的克隆及原核表达

目的 测定和分析自猪囊尾蚴表达型cDNA文库中筛选出的cDNA克隆 (TS76 )的序列 ,并进行该片段的原核表达研究。方法 采用PCR扩增重组 (噬菌体 (TS76中的TS76cDNA片段 ,亚克隆至 pUC18,得到的重组子用于测序 ,并对测定结果进行分析及同源性比较 ;将TS76片段亚克隆到原核表达载体pGEX - 1(T中 ,免疫印迹方法筛选得到能正确表达TS76片段的重组子 pGTS76 ;制备pGTS76原核表达产物 ,进行浓度梯度SDS -PAGE和Westernblotting分析。 结果 TS76克隆含 5 16对核苷酸 ,编码含 83个氨基酸残基的多肽 ,与EMBL数据库中的猪囊虫免疫原性蛋白质mRNA有 383bp的同源区域。重组质粒在大肠杆菌中表达的融合蛋白分子量为 34KD ,能与抗猪囊尾蚴兔血清产生很强的免疫反应。结论 分离到一个编码具较强免疫原性猪囊尾蚴抗原的基因。