表达胃癌MG7-Ag模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗的研制和初步鉴定

目的 研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗。 方法将ＮｃｏⅠ位点和ＭＧ７－Ａｇ模拟表位编码序列的互补序列设计到上游引物的５′端。以含有ＨＢｃＡｇ全序列的质粒ｐ１．２Ⅱ为模板，通过ＰＣＲ扩增，获得ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因。将目的基因插入载体ｐＵＣｍ－Ｔ，经酶切鉴定和序列测定证实后，再亚克隆至与减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０互补的质粒ｐＹＡ３３４１中，再以此重组质粒转化减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０。结果序列测定证实，ＰＣＲ产物为胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因片段；最终得到含有目的基因片段的重组表达载体ｐＹＡ３３４１。重组质粒在Ｘ４５５０中的表达产物，经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ表明，在相对分子质量（Ｍｒ）约在２２ ０００处有１条可与抗ＭＧ７ ｍＡｂ特异性结合的多肽表位。结论成功地研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位减毒鼠伤寒杆菌疫苗，为进一步研究其在胃癌免疫治疗中的作用奠定了基础。

核苷(酸)类似物抗病毒治疗乙型肝炎病毒相关性肾炎疗效观察

目的评价核苷(酸)类似物治疗乙型肝炎(乙肝)病毒相关性肾炎(hepatitis B virus-associated glomerulonephritis,HBV-GN)合并慢性乙肝或肝硬化的临床疗效和安全性。方法选择病理诊断为HBV-GN,同时合并慢性乙肝或肝硬化的患者共36例。患者分成2组:核苷(酸)类似物抗病毒治疗组25例,给予拉米夫定0.1g,1次/d,或恩替卡韦0.5mg,1次/d,空腹口服;对照组11例,未给予核苷(酸)类似物抗病毒治疗。2组均给予常规保肝降酶及保护肾功能的治疗。观察治疗前后临床指标变化,包括用药期间尿蛋白排泄情况、肝肾功能和乙肝病毒学指标以及不良反应。结果治疗12个月时,抗病毒治疗组24h尿蛋白定量较治疗前明显减少,血清ALB较治疗前明显升高;对照组24h尿蛋白定量和ALB与治疗前相比无显著改善。2组ALT和AST水平治疗后均明显改善,但抗病毒治疗组ALT和AST下降幅度明显大于对照组。抗病毒治疗组血清HBV DNA水平治疗后明显下降,对照组治疗前后无明显变化。抗病毒治疗组治疗12个月时的完全缓解率、总有效率明显高于对照组。结论核苷(酸)类似物治疗HBV-GN,可显著降低尿蛋白,使ALB升高,HBV DNA水平降低,缓解肾病综合征的临床症状,取得满意疗效,且耐受性好,未见明显不良反应。

抗乙酰胆碱受体α－银环蛇毒素结合区抗体可变区的序列分析

通过对３株抗乙酰胆碱受体（ＡＣｈＲ）的α－银环蛇毒素（α－ＢＴ）结合区抗体的配位特异性测定和可变区基因序列分析，探讨重症肌无力（ＭＧ）的发病机制。这３株抗体相互竞争对ＡＣｈＲ的结合，说明它们具有共同的识别部位。３株抗体的Ｈ链可能来源于同─种系基因，并且在抗原亲和成熟过程中发生体细胞突变；Ｌ链则由不同的亚组基因编码。结果表明，抗ＡＣｈＲα－ＢＴ结合区抗体的Ｈ链在决定抗体配位特异性上起重要作用。

抗乙酰胆碱受体单抗配位特异性和序列分析

测定了２株抗乙酰胆碱受体（ＡＣｈＲ）单抗的配位特异性，发现这２株抗体识别ＡＣｈＲ上同一表位。免疫印迹法证明：这２株抗体辨认ＡＣｈＲ上γ和δ亚单位。可变区核苷酸序列分析证实：这２株抗体的Ｈ链同源性为９５．３％，Ｌ链同源性为９５．８％。这２株抗体可能来源于同一前体基因，在抗原刺激的亲和成熟过程中，发生了体细胞突变。

一种脑胆碱乙酰基转移酶活性测定法

对测定胆碱乙酰基转移酶的Ｆｏｎｎｕｍ法稍加改进，并严格控制操作条件。应用改进的方法测定了大鼠脑胆碱乙酰基转移酶活性，结果更准确。

稀土元素Ce、La、Y对5182铝合金组织的影响

在5182铝合金中分别加入质量分数为0.1%、0.2%、0.3%的Ce、La和Y稀土元素,用金相显微镜观察研究不同稀土元素以及其不同含量对5182铝合金铸态晶粒尺寸和析出相形貌的影响。结果表明,在5182铝合金中添加一定量的稀土Ce能使合金的第二相得到了很大程度的细化并且呈弥散分布;而在稀土La的作用下,5182铝合金中的第二相出现了球化现象;在5182铝合金中添加稀土Y的变质效果较添加等量Ce或La的要差一些。

5182合金成分优化研究

采用正交试验方法设计了不同成分的5182合金,通过研究其显微组织和性能,对5182合金成分进行优化。结果表明,在5182铝合金中主要存在有Mg2Si、Mg2Al3和(Fe Mn)Al6三种析出相,当5182铝合金中Mg含量达到4.5%、Fe为0.35%、Mn含量为0.35%时,其性能最佳。

Al-5Ti-1B和Ce对5182铝合金组织和性能的影响

用金相显微镜、扫描电镜等分析手段,研究了w(Ce)分别为0.1%、0.2%和0.3%的Al-5Ti-1B和Ce变质剂对5182铝合金铸态组织和性能的影响。结果表明,Al-5Ti-1B对5182铝合金晶粒度的细化程度优于稀土元素Ce的。加入Al-5Ti-1B或Ce的5182铝合金,其力学性能明显提高。当Al-5Ti-1B的质量分数为0.2%时5182铝合金性能最好。

乙酰胆碱受体单克隆抗体重链可变区PCR产物克隆的条件

聚合酶链反应扩增的乙酰胆碱受体单克隆抗体重链可变区基因经ＥｃｏＲ１和ＢａｍＨ１双酶切割后，与载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ连接，并经转化大肠杆菌ＤＨ５α而扩增，扩增后的重组质粒经酶切证实含有乙酰胆碱受体抗体的基因。为核苷酸序列分析准备了材料。

单链噬菌体抗体库的建立

单链噬菌体抗体库的建立孟繁平１杨康鹃２郑承勋１１延边大学医学院微生物学教研室２延边大学医学院生物学教研室关键词抗体；噬菌体；抗原中图法分类号Ｒ３９２．１在机体的免疫系统中，Ｂ细胞受抗原刺激后一方面分化成短命的浆细胞产生抗体，另一方面分化成长命的记忆细...

加强医学微生物学实验室生物安全管理

[目的]增强医学微生物学实验室生物安全意识,避免微生物学实验室污染。[方法]根据医学微生物学实验室特殊性,并结合本实验室自身的特点,制定了一系列相关的规章制度,如常用仪器的安全操作规程,菌种、剧毒药品的管理方法等。[结果]加强实验室的生物安全管理,可以有效杜绝生物安全隐患,本室未发生实验室污染,也未发生1例因实验而被感染的学生及实验室工作人员。[结论]加强实验室的生物安全管理,对增强生物安全意识及消除生物危害隐患具有重要的现实意义。

大鼠酒精性肝病细胞凋亡与细胞色素P450 2E1和氧化应激的关系

目的 观察酒精性肝病（ALD）大鼠肝组织病理学改变,探讨细胞凋亡与细胞色素P4502E1（CYP2E1）的表达以及与氧化应激的关系。方法 用乙醇灌胃法制备ALD大鼠模型,模型组（37只）给予体积分数为40%的乙醇8g·kg^-1·d^-1分两次灌胃,连续8周;对照组（33只）给予等量生理盐水灌胃。实验第8周末,各组选30只大鼠观察肝组织的病理学改变;用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测肝细胞凋亡,用全自动生化仪检测丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）值,用聚合酶链反应（PCR）法测定肝CYP2E1的表达;分别用硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法测定血清丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 模型组凋亡的肝细胞明显增多,主要分布在中央静脉周围、点状和灶状坏死区。对照组CYP2E1的c1基因频率为91.65%、c2基因频率为8.35%;模型组c1基因频率为53.35%、c2基因频率为46.65%,差异均有显著性（P均〈0.05）。长期摄入乙醇的大鼠血清MDA含量增加,SOD活性下降,与ALD肝细胞凋亡程度有相关性（rMDA=0.644,rSOD=-0.511,P均〈0.05）,且MDA与SOD两指标间呈负相关（r=-0.582,P〈0.05）。结论 长期摄入乙醇可引起大鼠ALD及肝功能损伤,肝细胞凋亡明显增加。CYP2E1基因Pst及Rsa限制性片段长度多态性与ALD有关,其中c2基因可能与大鼠ALD的发生有关。MDA含量和SOD活性在ALD的肝细胞凋亡过程及脂质过氧化反应中发挥重要作用。

扶正解毒通络方对人肝癌HepG2细胞MMP-2、MMP-9表达及细胞侵袭作用的影响

目的:探讨扶正解毒通络方对肝癌HepG2细胞侵袭作用和基质金属蛋白酶(Matrix metallo proteinases,MMP)-2、MMP-9表达水平的影响及可能的作用机制。方法:CCK8实验检测扶正解毒通络方对HepG2细胞活性影响;Transwell侵袭实验检测扶正解毒通络方对HepG2侵袭能力的影响;ELISA法检测扶正解毒通络方干预HepG2细胞后MMP-2和MMP-9的表达水平。结果:CCK8实验结果显示,扶正解毒通络方对HepG2细胞意志呈剂量时间相关性。Transwell侵袭实验显示,2.65 mg/ml扶正解毒通络方对HepG2细胞侵袭力抑制率为52.45%(P<0.05)。ELISA检测结果显示,扶正解毒通络方干预后HepG2细胞上清液中MMP-2和MMP-9表达水平下降(P<0.05)。结论:扶正解毒通络方可以抑制肝癌HepG2细胞的生长和侵袭,其机制可能是通过下调MMP-2、MMP-9在肝癌细胞HepG2的表达。

板蓝根对机体免疫功能及流感病毒FM_1的作用

目的研究板蓝根提取物对小鼠机体免疫功能的影响及其抗流感病毒(FM1)的作用。方法昆明种小鼠腹腔注射板蓝根提取液,检测红细胞免疫黏附功能等各项免疫指标;昆明种小鼠滴鼻感染流感病毒FM1后腹腔注射板蓝根提取液,观察板蓝根提取液的抗病毒作用。结果与正常对照组相比,板蓝根组脾指数增加(P<0.05);T、B淋巴细胞刺激指数、RBC-C3bR花环阳性率都明显增高,RBC-IC花环阳性率显著降低,有显著性差异(P<0.01)。与阴性对照组相比,板蓝根组肺指数降低(P<0.05),体重增加值高(P<0.05)。结论板蓝根提取物具有很强的增强机体免疫功能的作用,其提高红细胞免疫系统功能的作用极其显著;同时板蓝根提取物也有一定的抗流感病毒作用。

酒精性肝病细胞凋亡的相关机制研究

目的探讨大鼠酒精性肝病细胞凋亡与细胞色素P4502E1、TNF-α及氧自由基的关系。方法采用灌胃法制备大鼠酒精性肝病(ALD)模型,模型组用40%酒精8g/(kg·d)分2次灌胃,共8周,对照组灌等量的生理盐水。采用TUNEL法检测肝细胞的凋亡、用PCR法测定细胞色素P4502E1的表达、放射免疫法检测血清TNF-α含量、硫代巴比妥酸(TBA)法测血清丙二醛(MDA)的含量、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果模型组凋亡的肝细胞明显增多,主要分布在中央静脉周围、点状和灶状坏死区。CYP2E1表达:对照组c1基因频率为91.65%、c2基因频率为8.35%;模型组c1基因频率为53.35%、c2基因频率为46.65%,差异均有显著性(P<0.05)。血清TNF-α水平与肝细胞凋亡指数及SOD与MDA水平之间有相关性(TNF:AI,r=+0.836;SOD:MDA,r=-0.582)。结论长期酒精摄入可引起肝细胞凋亡增多,CYP2E1基因PstI及RsaIRFLPs与酒精性肝病有关,其中c2基因可能与大鼠酒精性肝病的发生有关,TNF-α和氧自由基及脂质过氧化损伤在酒精性肝病的肝细胞凋亡过程中起一定作用。

延边朝鲜族和汉族脂联素启动子SNPs与原发性高血压的相关性

为了探讨延边朝鲜族和汉族脂联素基因启动子单核苷酸多态性(SNPs)与原发性高血压(EH)的关系,文章采用PCR产物直接测序方法检测了220例EH患者和268例对照个体的脂联素启动子5个SNPs位点:-11426A>G(rs16861194)、-11391G>A(rs17300539)、-11377C>G(rs62620185)、-11156insCA(rs60806105)、-11043C>T(rs76786086),氧化酶法测定空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆脂联素和胰岛素。结果显示:(1)-11426A>G、-11377C>G和-11156insCA3个位点具有多态性,且它们的基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),-11391G>A和-11043C>T位点无多态性;(2)-11426A>G和-11156insCA呈完全连锁不平衡(D’=1;r2=1);(3)-11426G基因频率比较,朝鲜族(21.10%)高于汉族(12.05%),汉族EH组高于对照组;-11377C>G的基因型和基因频率在朝鲜族和汉族间及同一民族内EH组和对照组间比较均无统计学意义(P>0.05);(4)单倍型-11426G-11377C的频率,汉族EH组高于对照组(P<0.05),朝鲜族EH组和对照组比较无统计学意义(P>0.05);(5)EH组的血浆脂联素水平明显低于对照组(P<0.001)。据此得出结论:(1)首次发现-11426A>G和-11156insCA呈完全连锁不平衡,-11426A>G的多态性在朝鲜族和汉族中存在民族差异;(2)-11426G和-11426G-11377C是延边汉族EH的危险因子和危险单倍型,但不是朝鲜族的;(3)低血浆脂联素是延边朝鲜族和汉族EH的重要危险因素;(4)血浆脂联素水平与-11426A>G基因型无关。

抗人乙酰胆碱受体scFv-人血清白蛋白融合蛋白的构建及在大肠杆菌中的表达

目的:制备抗人乙酰胆碱受体单链抗体637(scFv637)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白,提高scFv637的稳定性。方法:用PCR扩增人HSA基因,并克隆到含有抗人乙酰胆碱受体scFv637基因的载体pHEN2中构建重组载体pHEN2-scFv637-HSA。以重组载体转化E.coliHB2151,表达产物用斑点杂交试验检测,并以SDS-PAGE和Westernblot鉴定其融合蛋白的相对分子质量(Mr)。结果:琼脂糖凝胶电泳显示,扩增的人HSA基因和融合基因的大小分别为1770bp和7054bp。构建的scFv637-HSA经测序证实核苷酸序列正确,并且正确克隆至载体的开放读码框架内。表达产物仅存在于pHEN2-scFv637-HSA转化的E.coliHB2151外周质裂解液中。表达的融合蛋白的Mr约为95900。结论:在E.coli中成功地表达scFv637-HSA融合蛋白,为进一步对其进行功能研究和应用奠定了基础。

大鼠酒精性肝病细胞凋亡与细胞色素P4502E1和氧化应激的关系

目的:观察大鼠酒精性肝病组织病理形态学改变,探讨细胞凋亡与细胞色素P4502E1的表达以及和氧化应激的关系.方法:用酒精灌胃法制备酒精性肝病大鼠模型,模型组给予酒精8 g/kg,每天分2次灌胃连续8 wk,对照组给予等量的生理盐水灌胃.实验8 wk末,观察肝组织的病理形态学改变,用原位末端标记法(TUNEL)检测肝细胞凋亡,用免疫组化法检测肝组织中Caspase-3蛋白表达,用全自动生化仪检测ALT和AST的含量,用PCR法测定肝细胞色素P4502E1的基因表达,分别用硫代巴比妥酸法(TBA法)和黄嘌呤氧化酶法测定肝组织丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力.结果:模型组凋亡的肝细胞明显增多,主要分布在中央静脉周围、点状和灶状坏死区;Caspase-3主要分布于中央静脉及肝细胞坏死灶周围细胞的胞质中.模型组肝细胞凋亡指数(AI)和Caspase-3蛋白表达强度明显高于对照组(AI:6.2%±1.7% vs 1.7%±0.8%;Caspase-3:66.7% vs 9.5%,P<0.05,P<0.01).CYP2E1表达:对照组c1基因频率为91.6%,c2基因频率为8.4%;模型组c1基因频率为53.4%,c2基因频率为46.6%,均有显著性差异(P<0.05).长期酒精摄入大鼠血清MDA含量增加(41.53±7.43μmol/L vs 15.72±2.06μmol/L,P<0.05),SOD活力下降(353.12±61.02 kU/L vs 636.82±138.60 kU/L,P<0.05),与酒精性肝病肝细胞凋亡程度有相关性(r=0.644,r=-0.511).结论:长期酒精摄入可引起大鼠酒精性肝病及及肝功能损伤,肝细胞凋亡明显增加.CYP2E1基因PstⅠ及RsaⅠRFLPs与酒精性肝病有关,其中c2基因可能与大鼠酒精性肝病的发生有关.MDA含量和SOD活力在酒精性肝病的肝细胞凋亡过程及脂质过氧化反应中发挥重要作用.

丙型肝炎肝硬化患者HCV基因型与血清白细胞介素17、白细胞介素6及维生素D的关系

目的探讨不同HCV基因分型与丙型肝炎肝硬化患者血清中白细胞介素(IL)17、IL-6及维生素D的关系。方法选取2012年1-12月解放军第三〇二医院收治的76例丙型肝炎肝硬化患者,根据基因型不同分为1b型47例和2a型29例。采用ELISA法检测患者血清中IL-17、IL-6及维生素D水平。计量资料组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ2检验,采用Spearman分析血清中IL-17、IL-6及维生素D与基因分型的相关性。结果在Child-Pugh改良分级结果中,1b型患者中A级所占比例相对于2a型差异具有统计学意义(χ2=4.97,P<0.05);1b型患者的AFP、HCV RNA滴度、IL-17、IL-6、TNFα均高于2a型,差异均有统计学意义(t值分别为21.56、16.51、12.31、10.71、7.23,P值均<0.05),而IFNγ、25-OH-D、1,25(OH)2D低于2a型,差异均有统计学意义(t值分别为3.98、6.32、4.88,P值均<0.05);Spearman相关性分析发现,AFP、HCV RNA滴度、IL-6、IL-17与1b型、2a型基因均呈正相关(P值均<0.05),而IFNγ、TNFα和25-OH-D与1b型、2a型基因呈负相关(P值均<0.05)。结论 1b型患者血清中IL-17、IL-6、AFP及HCV RNA水平均高于2a型患者,而维生素D低于2a型患者,血清中IL-17、IL-6、25-OH-D、AFP及HCV RNA与基因分型有一定的相关性,而1,25(OH)2D则与基因分型无关。