雌激素受体基因多态性与女性绝经后骨质疏松症中医辨证分型关系的研究

目的 :研究中国绝经后女性雌激素受体基因多态性与绝经后骨质疏松症中医辨证分型的关系。方法 :对 2 4 6名中国绝经后女性 (年龄 4 4～ 80岁 ,平均 65 8岁 ) ,用分子生物学的方法分析内切酶PvuⅡ、XbaⅠ限制性长度片段多态性 (RFLPs) ,运用双能X线骨吸收法分别测其腰椎 (L1～ 4 )和股骨 (粗隆间、股骨颈、Ward′s区 )骨密度 ,根据中医虚证辨证分型标准 ,将研究对象分为肾阴虚型、肾阳虚型和阴阳俱虚型 ,观察雌激素受体基因多态性与骨密度及中医辨证分型的关系 ,RFLPs用Pp(PvuⅡ )和Xx(XbaⅠ )来表示 ,限制性部分缺失者用大写字母表示 ,存在者用小写字母表示。结果 :PPxx基因型 ( 2 1例 )骨密度Z score明显低于其他基因型 ( 2 2 5例 ) ,腰椎 ( - 0 71± 0 4 6) g/cm2 ,粗隆间 ( - 0 31± 0 58) g/cm2 ,股骨颈 ( - 0 84±0 66) g/cm2 ,Ward′s区 ( - 0 96± 0 85) g/cm2 ,该基因型女性中医辨证属阴阳俱虚型。结论 :雌激素受体基因RFLPs与中医辨证分型有关。

补肾方药对地塞米松所致实验性骨质疏松大鼠卵巢功能的影响

目的 :探讨补肾中药对地塞米松 (DXM )所致实验性骨质疏松 (OP)大鼠卵巢功能的影响。方法 :采用放射免疫分析方法对正常对照组、病理对照组、中药治疗组大鼠生长激素 (GH)、黄体生成素(LH)、卵胞生成素 (FSH)、雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)、睾酮 (T)和泌乳素 (PRL)的水平进行比较。并对三组大鼠卵巢、子宫分别称湿重和进行组织形态学观察。结果 :病理对照组与正常对照组大鼠比较GH、LH、FSH、E2和P的水平明显降低 (P <0 0 5) ,子宫和卵巢重量减轻 (P <0 0 5)。中药治疗组与病理对照组相比GH、LH、FSH、E2 和P的水平显著增高 (P <0 0 5) ,子宫和卵巢重量增加 (P <0 0 5)。各组间T和PRL无显著性变化 (P >0 0 5)。组织形态学观察可见补肾中药能明显改善病理状态下大鼠卵巢和子宫的形态结构。结论 :补肾中药能提高大鼠体内GH、LH、FSH、E2 和P的水平 ,使子宫、卵巢重量增加 ,组织形态改善。说明补肾中药对DXM所致实验性骨质疏松大鼠有治疗作用。

补肾方药对绝经后妇女卵巢功能和骨密度的影响

本文根据 WHO的骨质疏松诊断标准 ,利用双能 X射线骨密度仪 ,对 2 50例绝经后妇女做骨密度检查 ,筛选出临床诊断为原发性骨质疏松症和骨量减少的妇女 131例 ,在筛选过程中 ,确定肝肾功能正常 ,排除风湿病、肾病、甲旁亢、甲亢、胃癌及胃炎、卵巢摘除等继发性骨质疏松的妇女 ,采用随机双盲对照实验 ,分成 3组 :补肾中药组、依普拉封组、对照组 ,目的是观察补肾中药对原发性骨质疏松症和骨量减少的效果和作用机制 ,并与治疗骨质疏松的西药依普拉封做对照。方法是采用放射免疫分析的方法 ,观察被确定为原发性骨质疏松症和骨量减少的妇女治疗前后血清中卵泡生成素 (FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇 (E2 )的变化 ,同时观察治疗前后的骨密度 (BMD)的变化。结果发现 :补肾中药能明显提高雌激素的水平和增加骨密度 ,与西药相比无任何毒副反应 ,而依普拉封则有不同程度的副反应 (如 :反酸等胃部不适、潮热等 ) ,说明补肾中药是通过整体调节 ,提高体内的雌激素水平 ,提高骨密度 ,其疗效优于西药治疗和雌激素替代治疗的效果。

雌激素受体亚型及其配体调节基因转录机制的研究

本文综述雌激素受体亚型(ERα和ERβ)的结构、功能、组织分布、生理作用及雌激素受体配体调节基因转录的机制,目的是深入系统地了解植物雌激素和选择性雌激素受体调节剂的作用路径及其组织特异性的发生机制,最终为提高雌激素类药物的选择性、优化以临床为基础的药物设计提供一条较为系统的思路。结果表明,ERα和ERβ对不同雌激素类化合物产生不同应答,配体的结构不同、调节基因转录的路径不同和募集的辅调节蛋白的不同是雌激素受体两种亚型组织特异性激活或抑制的主要原因。

绝经与骨质疏松症发病的分子机制

本文从三个万面论述 了绝经后雌激素水平降低诱发骨质疏松的发病机制,目的是阐明雌激素水平降低和雌激素受体基因多态性是绝经后骨质疏松发病的主要因素。为绝经后骨质疏松的临床治疗及药物开发提供理论基础。

雌激素、雌激素受体、雌激素受体基因与骨质疏松症

男女共同的生理现象之一是随年龄增加骨量减少，但女性与男性相比骨峰值低且有绝经史，绝经后由于雌激素的多种因素致骨量丢失显著。本文就雌激素、雌激素受体、雌激素受体基因与骨质疏松症做一综述。

骨代谢过程中雌激素的作用及其与细胞因子的关系

骨骼是由骨形成（ 成骨细胞） 和骨吸收（ 破骨细胞） 不断重复进行再建的组织，骨量由两种不同的细胞系（ 成骨细胞系和破骨细胞系） 之间的平衡来维持，其中钙调节激素（ 甲状旁腺素、维生素 Ｄ３ 、降钙素等） 、各种细胞因子等全身和局部因素对其进行着一种复杂的调节，如果这种调节机制被破坏，当骨吸收比骨形成相对亢进时，即发生骨质疏松。

雌激素受体基因多态性与骨质疏松

从雌激素的结构和功能、雌激素受体与骨代谢、人工破坏雌激素受体基因小鼠模型的建立、雌激素受体基因突变的男性病例分析、雌激素受体的同工型及雌激素受体基因多态性等 6个部分综述雌激素及其受体基因在骨质疏松发病中的作用及意义 ,旨在阐明骨质疏松症 ,尤绝经后骨质疏松症的发病及分子机制 ,为基础和临床研究提供系统的思路。

补肾方药治疗骨质疏松的实验研究与临床观察

根据中医“肾主骨”的理论，运用生物化学的理论和方法，从选用补肾方药入手，对骨质疏松进行了实验研究和临床观察，为中西医结合防治骨质疏松提供了理论依据和有效方药。实验研究，选用Ｗｉｓｔａｒ雌性大鼠，用地塞米松制造骨质疏松病理模型。随机分为正常对照组、病理对照组和中药治疗组，１２周观察变化。中药治疗组证明：骨密度、组织形态学变化、骨灰重与病理组比较均有明显改善；血中雌二醇（Ｅ２）、１，２５－（ＯＨ）２－Ｄ３呈正相关，与ＰＧＥ２呈负相关；可促进肠钙的吸收，增加ＣａＢＰ－Ｄ９ｋｍＲＮＡ的生成；尿羟脯氨酸明显降低。临床观察，确诊为原发性骨质疏松病人９０例，随机分为补肾中药组、降钙素组和阿仑膦酸钠组进行对照研究，疗程８周和１２周，继续观察１年。结果揭示，ＢＭＤ无明显差异，血钙提高，ＰＴＨ下降，ＣＴ和Ｅ２提高，综合疗效评定Ａ组为９０％，Ｂ组为８３％，Ｃ组为７３．３８％

原发性骨质疏松发病的相关因素

阐明原发性骨质疏松发病与性别、年龄、饮食、体重、绝经年限和体内雌激素水平的关系。结果证明骨质疏松发生率女性比男性明显增高，并随年龄增长而增高；饮食中加食牛奶者比不食用牛奶者较低；超重和肥胖者比瘦者为低；绝经后骨质疏松随着年龄的增长而增高，并与雌二醇水平呈负相关。

血管紧张素Ⅱ对血管外膜成纤维细胞亚群增殖的影响

血管损伤后发生的管壁结构重塑是血管重建术后再狭窄、动脉粥样硬化等多种心血管疾病发病的共同病理基础。已有研究表明血管外膜并非仅起支撑作用，在血管损伤和高血压中也起重要作用。特别是在某些刺激因子作用下，成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞，表达α-平滑肌肌动蛋白，迁移至内膜下区域和新生内膜中并增殖，同时胶原合成增加，导致血管重构。

晚期糖基化终产物受体与β-淀粉样蛋白的相互作用促进阿尔采末病的发展

晚期糖基化终产物受体(the receptor for advanced gly-cation end products,RAGE)属于免疫球蛋白家族。在中枢神经系统,RAGE主要在神经元、小胶质细胞及血管内皮细胞上表达。阿尔采末病(Alzheimers disease,AD)人脑中RAGE的表达可被β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)上调,上调的RAGE进一步促进了AD的发展。神经元、小胶质细胞和血管内皮细胞膜上RAGE和Aβ结合,引起神经元毒性、持久性的炎症反应、血管功能紊乱。对RAGE-Aβ作用机制的深入理解,可为AD的临床治疗提供理论基础。

大鼠血管外膜成纤维细胞亚群生长特性及功能研究

目的:体外分离培养SD大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞亚群,并对其增殖特性和血管功能进行初步分析。方法:克隆环法进行血管外膜成纤维细胞的单克隆培养,RT-PCR鉴定细胞亚群纯度,MTT检测血管外膜成纤维细胞亚群增殖能力。荧光定量PCR检测血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)及其受体拮抗剂氯沙坦(losartan)和PD-123319对前内皮素原-1(preproET-1)mRNA表达的影响。结果:克隆环法获得血管外膜成纤维细胞2个亚群:圆形细胞亚群和纺锤形细胞亚群。以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照,经RT-PCR检测,结果显示无von Wille-brand因子、CD8、结蛋白和肌球蛋白重链的表达,是纯细胞系。2个细胞亚群的增殖情况有所不同,圆形细胞在第2～4 d进入指数分裂期;纺锤形细胞于第3～5 d进入指数分裂期。Ang Ⅱ在0～1 000 nmol/L范围内对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达无显著影响,而呈浓度依赖性地增加圆形细胞preproET-1 mRNA的表达(P<0.01);losartan阻断了Ang II诱导的圆形细胞preproET-1 mRNA的表达,但对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达无明显影响。结论:SD大鼠血管外膜成纤维细胞有2个细胞亚群:圆形细胞和纺锤形细胞,其生长特性略有不同。AngII显著促进圆形细胞preproET-1 mRNA的表达,提示这2个细胞亚群可能在血管重建和修复过程中发挥不同作用。

丹酚酸B和丹参酮ⅡA对大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响

目的探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)和丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TA)单独用药、二者配伍对SpragueDawley(SD)大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响,以及在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导下,SAB和TA有效成分配伍对大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazoli-um,MTT)方法检测SAB和TA对大鼠胸主动脉成纤维细胞增殖的影响,流式细胞术检测SAB和TA有效成分配伍对细胞周期的影响。结果 MTT检测结果显示,SAB和TA单独用药均可不同程度抑制成纤维细胞增殖,通过一系列浓度筛选,分别获得3个有效浓度,将其两两组合后比较对细胞生长的抑制作用,结果显示TA(10^(-8)mol·L^(-1))和SAB(10-5mol·L^(-1))组合显示明显的抑制作用(P<0.01)。而且,TA(10^(-8)mol·L^(-1))和SAB(10^(-5)mol·L^(-1))配伍组合亦能对AngⅡ诱导的细胞增殖产生明显的抑制作用,进一步采用流式细胞术观察SAB、TA及二者配伍对细胞周期的影响,结果显示,SAB和TA配伍明显地阻滞细胞在G_0/G_1期。对AngⅡ预刺激的细胞,SAB和TA组合,也明显阻滞细胞在G_0/G_1期;而SAB和TA分别给药,细胞主要被阻滞在S期。结论SAB和TA对成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,对AngⅡ诱导的细胞增殖也有明显的抑制作用,并且这种抑制作用主要是通过将细胞阻滞在G_0/G_1期而发挥作用的。

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对血管外膜成纤维细胞亚群增殖和胶原合成的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体拮抗剂氯沙坦(Los)和PD123319对大鼠胸主动脉血管外膜成纤维细胞亚群增殖和胶原生成的影响。方法通过克隆环法获得血管外膜成纤维细胞单克隆,根据细胞表型克隆了两种细胞亚型并分别进行培养,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色方法鉴定细胞的纯度;流式细胞术对两细胞亚群的形状和大小进行比较;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和Western印迹法检测AngⅡ及其受体拮抗剂Los、PD123319对细胞亚群的增殖活性和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)合成的影响。结果克隆环法获得血管外膜成纤维细胞两个亚群,经显微镜和流式细胞仪观察根据细胞表型分别命名为:圆形细胞亚群(RC)和纺锤形细胞亚群(SC)。经RT-PCR和免疫荧光染色对第Ⅷ因子(vWF)、CD8、MHC、Desmin进行检测,结果显示无内皮细胞、平滑肌细胞细胞标志物的表达,分别为两种纯系细胞。实验发现AngⅡ对RC亚群的增殖活性及CollagenⅠ的合成能力均有显著影响,既促进RC的增殖又提高Ⅰ型胶原的合成,但经Los预处理后,AngⅡ的促增殖及胶原合成能力被显著性抑制(P<0.05),而SC亚群的增殖活性和胶原合成情况无显著性改变。经PD123319预处理后,对RC亚群和SC亚群增殖和胶原的合成均无明显影响。结论 AngⅡ在促进两细胞亚群的增殖和胶原合成的能力方面有差异,说明血管外膜成纤维细胞两种亚群在表型、功能和作用机制上具有显著性的差异,提示两种细胞亚群在病理生理机制及其血管重构和修复过程中扮演着不同的角色。

芝麻花粉管介导胰岛素基因的遗传转化

为建立芝麻油体表达体系这一新型植物生物反应器,采用花粉管通道法,将含有胰岛素基因的双元表达载体PBI121质粒转入冀黑芝1号芝麻。对转化株后代进行卡那霉素筛选、PCR扩增及PCR-Southern杂交检测。结果显示:胰岛素基因已整合到受体芝麻的基因组DNA中,并获得了T_5转化株,胰岛素基因可以遗传到第5代转化株。说明芝麻花粉管介导胰岛素基因的遗传转化油体表达体系可行。