基于高效液相色谱-串联质谱和线粒体呼吸功能对开心散药效物质基础研究

目的基于高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术和“化学成分谱-血浆暴露成分谱-线粒体功能”联合分析,揭示开心散药效物质基础。方法通过研究文献、数据库及前期研究成果,系统梳理人参、远志、茯苓和石菖蒲的化学成分,建立开心散水提物的化学成分定性分析方法,并对开心散水提物化学成分进行鉴定。建立基于HPLC-MS/MS大鼠血浆定性分析方法,并利用该法对大鼠灌胃开心散水提取物后的血浆暴露成分谱进行分析。使用Seahorse细胞能量代谢分析仪进行有氧呼吸检测,评估开心散关键成分对线粒体有氧呼吸的影响。结果对开心散水提取物中4类主要成分(皂苷、寡糖酯、[口山]酮和三萜)进行鉴定,共鉴定出化合物231个。对大鼠灌胃给予开心散30 min时的血浆进行分析,共鉴定开心散相关成分55个。利用体外细胞实验对入血的4类成分进行有氧呼吸检测,发现人参皂苷Rg1、3,6'-二芥子酰基蔗糖、远志[口山]酮Ⅲ、茯苓新酸B均可显著提高线粒体呼吸能力。结论皂苷、寡糖酯、[口山]酮和三萜类成分可能是开心散通过改善线粒体功能发挥药效的物质基础。“化学成分谱-血浆暴露成分谱-线粒体功能”联合分析为深入研究中药药效物质基础提供了新思路。

基于标准提取物的欧洲越橘提取物质量控制方法及药效活性关联研究

目的建立对照品非依赖性的20种花青素类成分定量分析方法,并利用该法对市售欧洲越橘Vaccinium myrtillus提取物进行质量控制,同时筛选出代表性抗氧化活性成分。方法以欧洲越橘标准对照提取物替代对照品,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)联用技术,建立一种针对20种花青素类成分的定量方法,并利用该法对10批市售欧洲越橘提取物中的花青素类成分含量进行研究。采用DPPH自由基清除法和总抗氧化能力测试法评价不同欧洲越橘提取物的抗氧化能力。结果方法学验证结果显示,20种花青素类成分线性良好,r为0.9994~1.0000,精密度RSD为0.05%~4.23%,稳定性RSD为0.29%~3.38%,平均加样回收率为98.1%~102.1%,RSD为0.50%~4.12%。样品分析结果显示,不同样品中部分花青素类成分含量存在显著差异,其中锦葵素变化最大,RSD为18.23%。欧洲越橘提取物具有较好的DPPH自由基清除能力和总抗氧化能力。其中矢车菊素与DPPH自由基率相关性为0.94,芍药素-3-O-半乳糖苷与总抗氧化活性相关性为0.93。二者有望作为欧洲越橘提取物清除DPPH自由基活性和总抗氧化活性的潜在质控成分。结论基于UPLC-QQQ-MS/MS所建立的对照品非依赖性的欧洲越橘提取物中20种花青素类成分定量分析方法,灵敏度高,准确性好,方法简单,适用于欧洲越橘提取物中20种花青素类成分的含量测定,为中药对照提取物替代单体对照品在中药质量控制中的应用提供了数据支撑,为中药材质量控制研究提供新的研究思路。