水稻白叶枯病菌及其毒素引起烟草叶片组织坏死机制的研究

水稻白叶枯病菌ＪＸＯＩＩ细胞悬浮液及其分泌的毒素溶液接种到烟草叶片中，都能在烟草叶片上产生快速的坏死反应。引起坏死反应所需的最短时间分别为接种后８ｈ和０．５ｈ。低浓度的ＪＸＯＩＩ（＜１０７ｃｆｕ／ｍｌ）接种后３６～４８ｈ内形成褪绿斑，而低浓度的毒素（＜２．５ｍｇ／ｍｌ）接种后随时间延长在接点无任何可见变化。依文斯蓝（Ｅｖａｎｓｂｌｕｅ）染色发现，毒素和ＪＸＯＩＩ分别在接种后０．５ｈ和６ｈ内细胞大量死亡。叶圆片法测定表明，接种毒素后２ｈ内烟草细胞膜透性迅速上升，接种ＪＸＯＩＩ后９ｈ细胞膜透性开始明显上升。毒素处理的烟草叶片中ＬＯＸ、ＰＯＸ、ＳＯＤ、ＣＡＴ活性水平较对照降低，而ＪＸ－ＯＩＩ处理中上述酶活性较对照有不同程度的增加。蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺，ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ和钙离子通道阻断剂氯化镧分别以７．１×１０－５Ｍ、１×１０－４Ｍ和１×１０－３Ｍ浓度有效地抑制ＪＸＯＩＩ在烟草上形成坏死反应，这些抑制剂对毒素在烟草上的坏死反应则没有影响。

桉树对青枯病抗性与多酚氧化酶及其同工酶关系的研究

经过对青枯病具有不同抗性的 7个桉树品系叶和根内多酚氧化酶 ( PPO)活性及其同工酶谱带电泳分析 ,结果表明 :桉树所有品系叶片中多酚氧化酶活性显著高于根部 ,具有不同抗病性的桉树各品系之间其多酚氧化酶存在着显著差异。对青枯病抗性较强的桉树品系内多酚氧化酶活性显著比抗病性弱的品系高。多酚氧化酶同工酶电泳分析发现 ,不同抗病性的桉树品系之间 ,同工酶谱带在条带数及各条带的相对强弱方面表现出明显差异 ,这说明与桉树对青枯病的抗性差异有关。

番茄交替氧化酶基因的克隆和表达(英文)

利用简并PCR扩增产物做探针筛选番茄cDNA基因文库获得一个全长交替氧化酶cDNA基因LeAoxlau。经序列分析得出,该基因全长1418bp,编码区序列长1077 bp,编码约40 kD的前体蛋白。该蛋白在转运到线粒体时被加工成32kD的成熟蛋白。Southern印迹杂交分析结果显示该基因以单拷贝形式存在于番茄的基因组中RTPCR显示,该基因在在番茄植株的根、茎、叶和子叶中表达。重组表达实验表明该基因能在大肠杆菌中表达。

植物病害的系统获得抗性

植物病害的系统获得抗性南京农业大学植保系宋从凤黄迎春潘小玫王金生系统获得抗性（ＳｙｓｔｅｍｉｃＡｃｑｕｉｒｅｄＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＳＡＲ）最初是由Ｒｏｓｓ（１９６１）描述烟草用ＴＭＶ预接种后，可使植株获得对ＴＭＶ再接种具有抗性时采用的，是植物病害...

桉树对青枯病抗性与过氧化物酶及同工酶关系的研究

对 7个具有不同青枯病抗性的桉树品系的叶部和根部的过氧化物酶活性进行了测定 ,对同工酶进行了电泳分析。酶活性测定结果表明 ,桉树各品系叶部的过氧化物酶活性显著高于根部。对青枯病具有不同抗性的 7个桉树品系 ,其叶部的过氧化物酶活性存在着显著差异。对青枯病抗性较弱的 F11和 E13 品系体内的过氧化物酶显著比其它抗性品系体内的酶活性低。同工酶电泳分析表明 ,桉树对青枯病不同抗病性品系之间的同工酶谱带 ,在条带数和各条带的相对活性上表现出差异 。

大白菜软腐病菌游动性突变体在大白菜体内增殖扩展研究

用培养皿滤纸吸附测定法和不伤根土壤拌菌处理及针刺接种法 ,测定了大白菜软腐病菌游动性突变体进入大白菜体内、并在其中侵染定殖和扩展的特性。结果表明 ,游动性丧失和增强的突变体都可以通过种子萌发和主动接触进入大白菜体内、并可以在体内有短期的繁殖 ,但菌量远低于野生菌。大白菜叶片接种实验说明 ,这两种突变体也都可以进行短距离扩展 ,但扩展距离和菌的繁殖量低于野生菌。

转hpa1_(Xoo)基因棉花活性氧产生及防卫相关基因的表达

采用H2O2和酶活性检测、DAB染色、定量实时PCR等方法研究转hpa1Xoo基因棉花T-34叶组织中的活性氧。结果显示:无病原菌侵染时,T-34和出发品种Z35均未产生活性氧。在接种黄萎病菌分生孢子悬浮液后,与Z35相比,在T-34叶组织中接菌0～8 h H2O2含量变化呈现2个峰值;接菌8 h时PAL和POD酶活性显著增强;DAB染色显示褐红色斑产生;2个防卫基因ghAOX1和hsr203J超表达。这些结果表明,转hpa1Xoo基因棉花为某些防卫基因超水平表达提供了分子基础,使受到病原菌侵染时才诱导产生的高水平活性氧及相关基因表达,并且组成型表达的HarpinXoo赋予转基因棉花对黄萎病菌的抗性。

表达全长与截短Harpin_(Xoo)对转基因烟草抗病性的影响

将水稻黄单胞细菌白叶枯致病变种(Xanthomonas oryzaepv.oryzae)编码HarpinXoo的hrfA基因及其N-末端缺失突变基因AB分别连接到双元载体pBI121上,构建成转基因载体,并经冻融法转化土壤杆菌EHA105。采用叶盘法转化烟草,用卡那霉素抗性筛选再生植株。通过PCR扩增检测了转化烟草中的靶基因序列及35S启动子序列,对T1代PCR阳性植株进行了PCR-Southern杂交和RT-PCR分析。结果显示,外源基因已经整合到转基因烟草基因组中,并在转录水平正常表达。用从转hrfA基因和AB片段的烟草中提取的可溶性蛋白注射烟草都能引起过敏反应,说明目的基因在转基因烟草中能表达出有活性的蛋白。抗病性鉴定结果表明,转N-末端AB片段的烟草和转hrfA全长基因的烟草一样表现出对烟草花叶病毒(TMV)的抗性。

高效液相色谱法测定烟草和棉花中生长素含量

生长素是最早发现的一类天然植物激素,即吲哚乙酸（Indole-3-aceticacid,IAA）。它对植物的许多生理活动具有影响,包括纵向生长、细胞分裂、分化、生根、开花、落叶、向光性等。最近更多研究报道认为IAA可能在植物防卫机制中担当一定的角色。因此,研究植物组织中生长素含量的变化,对进一步研究其作用机制,

水稻IR26悬浮细胞与白叶枯病菌互作的过敏反应现象

当水稻IR26 悬浮细胞与白叶枯病菌的不亲和小种(JXOV)互作时,在数小时内,悬浮细胞死亡率可达 60% 、膜透性增加 40% 、呼吸升高一倍多,而水稻IR26 悬浮细胞与白叶枯病菌的亲和小种(JXOIII)互作时,在数小时内,悬浮细胞死亡率只有20% 、膜透性只增加20% 、呼吸升高不足40% ,这些数据表明在水稻悬浮细胞与白叶枯病菌互作系统中可能存在着和水稻植株与白叶枯病菌互作系统中相似的互作机制。

转小麦冷胁迫蛋白截短基因烟草及其抗病性分析

TA3-13是克隆于小麦冷胁迫蛋白基因的截短片段。原核表达的TA3-13蛋白能够诱导烟草产生显著的抗烟草花叶病毒(TMV)的作用。文章将TA3-13基因片段克隆到植物表达载体pBI121上,构建成转基因重组体pB-3-13,通过冻融法转化农杆菌EHA105,构建成转基因侵染菌株。采用叶盘法将pB-3-13转化三生烟草,经卡那霉素抗性筛选,获得48株T0代再生植株。通过PCR检测,鉴定出33株转基因单株,收获了20株种子作为T1代株系。PCR-Southern杂交结果显示,PCR阳性条带与TA3-13探针有特异性杂交,说明外源基因被转化到烟草的基因组中。选取两个T1代株系的烟草植株用于各项测定。GUS组织化学活性鉴定和RT-PCR检测结果显示,外源基因可以成功地表达。接种TMV病毒后,转基因烟草抗TMV的能力较转空载体烟草提高3～5倍。转基因烟草具有抗TMV侵入和抗病毒病害发展的作用,同时转基因烟草可以抗细菌软腐病菌的扩展。

水稻白叶枯病菌avrBs3/PthA家族基因的随机缺失及突变体PXO99Δavr功能的研究

利用来源于水稻白叶枯菌株JXOⅢ的无毒基因avrXa3构建的同源序列突变转化单元,同源重组得到PXO99A菌株的1个缺失突变体PXO99△avr。PXO99A及其突变体基因组DNA以内切酶BamHⅠ完全消化后进行同源检测,发现突变体PXO99△avr中有3条杂交带消失,有2条带信号减弱。进一步以相同探针检测PXO99A的基因文库,限制性酶切分析和Southern杂交归类,共获得13个不同的阳性克隆。众多avrBs3/PthA基因在基因组中单独存在,或2个和2个以上串联排列。经比对,克隆p5所含条带与突变体缺失的5条带大小相同。因此认为随机交换产生的突变体中有5个基因被敲除。将此文库克隆（p5）分别导入PXO99A和突变体PXO99△avr中,苗期接种试验表明：p5互补突变体能使其毒性恢复接近PXO99A的致病表型,推测此克隆正是突变体缺失的基因。同时也表明：缺失的5个串联基因的综合作用主要表现为毒性功能。

棉花黄萎病菌对转hpa1_(Xoo)基因棉花幼苗相对电导率的影响

以两个转hpa1x00基因的棉花株系T一33和T一35及其出发品种即非转基因棉品种Z35的2～3叶期棉花幼苗为试材，通过无底塑料盆钵菌液浇根接菌法，在0～10d不同时段测定叶片浸出液电导率。转基因棉T-34在0～10d间相对电导率呈增加趋势，10d时增加率达到115．90％；T一33在接菌后0～1d间的电导率增幅反而略有下降，但3～10d的增幅均呈现上升趋势，到10d时达到140．61％；Z35从接菌后0～10d的电导率增幅均呈现逐渐上升趋势，到10d时相对电导率增加率达到180．78％。转基因棉到达相对电导率峰值的时间晚于非转基因棉，其峰值也低于非转基因棉；同时两个转基因棉花株系相对电导率的增加率均低于非转基因棉。被黄萎病菌感染后转基因棉的显症时间较非转基因棉出现晚，两个转基因株系的受危害程度也低干非转基因棉。

建议设立本科生导师负责制

本文阐述了设立本科生导师负责制的必要性及其构想,介绍实施这一制度的具体做法。

植物非寄主抗性

本综述从植物 微生物互作出发 ,对决定植物非寄主抗性的遗传基础和信号传导途径进行了分析 。

转hpa1_(Xoo)基因棉花悬浮细胞培养及其对黄、枯萎病菌的抗性

为验证对黄萎病菌(Verticllium daliae)、枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)的早期抗性反应,确定了转hpa1Xoo基因棉花株系T-33悬浮细胞适宜的培养条件,并成功获得了T-33和其出发品种Z35的悬浮细胞。以1:20的比例,将T-33悬浮细胞与黄、枯萎菌分生孢子液分别共培养0～24h,发现T-33悬浮细胞在0～6h对两种病原菌的抗性能力较强,悬浮细胞死亡率显著低于Z35(P<0.05〉。与Z35相比,在3h和6h时,针对棉花黄萎病菌T-33悬浮细胞死亡率分别低52%和35%,针对枯萎病菌分别低42%和25%。说明hpa1Xoo编码的harpinXoo表达赋予转基因棉花T-33悬浮细胞系对两种病原菌的抗性高于其出发品种Z35。

一种检测模拟沉积环境下植物叶片DNA降解的方法

采用模拟自然沉积环境的实验装置,以Brassicachinensis叶片作为实验材料,运用定量PCR技术对目标基因片段(28SrDNA片段,630bp)进行特异性扩增.通过统计分析,初步建立起以PCR产物含量变化来反应模拟实验过程中模板DNA含量变化的定量检测方法.另外,我们通过设计对照实验及分离叶片组织内微生物的方法证明所研究的DNA片段是来自于叶片组织内源的DNA片段.此定量检测方法的建立,使我们能够迅速有效地获取模拟自然条件下目标基因片段降解规律方面的信息.

转hpa1_(Xoo)基因棉花对棉铃虫全基因组转录谱的影响

【目的】明确转hpa1Xoo棉花抗虫性及其作用机制。【方法】采用生测法和芯片技术分析了转hpa1Xoo棉T-34的抗虫性和harpinXoo表达对棉铃虫全基因组转录谱的影响。【结果】饲喂T-34棉叶的棉铃虫发育明显迟缓,棉铃虫死亡率为90.95%,而饲喂其出发品种(Z35)棉叶的棉铃虫死亡率为12.20%。利用和棉铃虫同属鳞翅目的家蚕的23KOligo探针,以分别饲喂T-34和Z35叶片的棉铃虫RNA为模板,制作了棉铃虫Oligo表达谱芯片,获得了24280个EST数据,从中检测到了2927个基因。在T-34和Z35上饲喂的棉铃虫有872个差异表达基因,其中上调基因328个(ratio>2.0),下调基因544个(ratio<0.5)。872个差异表达基因主要涉及13个生物功能、96个代谢通路。【结论】转hpa1Xoo棉花对棉铃虫的抗性涉及棉铃虫蛋白酶分解和合成、ATP合成等多个生物代谢途径的改变。

Agrova对小麦生长和病害防治的效果

小麦起身后期喷施不同浓度agrova可以促进小麦生长和增强小麦的抗病性。Agrova处理后小麦茎粗增加 0 .1～ 0 .2mm ,次生根平均增加 3～ 4.6条 ,小麦功能叶延迟衰退 2～ 4d。Agrova处理使小麦的小穗退化减少 ,结实率提高 ,千粒重增加 0 .6 2～ 1.94g ,小麦平均亩产增加 5 %～2 9%。处理后的小麦对小麦纹枯病有 2 4.5 6 %～ 6 9.5