微小RNA的发现:基因调控的革命——2024年诺贝尔生理学或医学评述

微小RNA(miRNA)的发现标志着分子生物学的新阶段,2024年诺贝尔生理学或医学奖授予维克托·安布罗斯和加里·鲁夫昆,以表彰其对miRNA的开创性研究。目前,非编码RNA研究已成为后基因组时代生命科学的前沿,正在引领现阶段生命科学研究的发展。我国在miRNA领域的研究与国际同步切入,已取得重要突破,促使我国在非编码RNA研究领域的国际地位逐渐上升。本文介绍了首次发现miRNA的研究基本背景,分析了该研究获得诺贝尔奖的深层原因及其对人类社会认知和推动科技进步的重大意义,重点梳理了国内在该领域的研究成果、现状以及差距,探讨了未来发展趋势以及研究方向。

乳腺癌转化医学研究的热点问题及思考

“转化医学”概念的提出和发展已有20多年的历史。1992年，CHOI在《Science》杂志上首次提出“从实验室到病床（from Bench to Bedside）”的概念，1996年，GERAGHTY在《Lancet》杂志首次明确提出转化医学（translational medicine）这一新名词，2003年ZERHOUNI在《Science》杂志全面阐述转化医学这一概念的含义是将基础研究成果转化为有效的临床治疗手段。

p53蛋白在胰腺癌与癌旁组织中表达的临床意义

目的：了解胰腺癌及其癌旁组织的ｐ５３蛋白表达，并分析其临床意义。方法：作者对３６例胰腺导管癌、２５例胰腺癌旁组织、１０例慢性胰腺炎和１２例正常胰腺组织石蜡标本进行ｐ５３单抗的免疫组化染色。结果：３６例胰腺癌和２５例癌旁组织中呈ｐ５３蛋白阳性染色分别为２１例（５８％）和１１例（４４％），且其阳性率间有显著相关性。（Ｐ＜０．０１）。而慢性胰腺炎和正常胰腺组织均未见ｐ５３蛋白阳性染色，与胰腺癌和癌旁组织ｐ５３阳性率间均有显著差异（Ｐ＜０．０１）。不同临床分期及组织学分型胰腺癌，ｐ５３蛋白阳性染色率间无显著差异。结论：ｐ５３蛋白的表达与胰腺癌的发生有关；胰腺癌旁组织中某些细胞呈ｐ５３阳性染色，这些细胞可能较易发生癌变，使胰腺癌呈多中心性发生。

P糖蛋白在胰腺癌中的表达及其与p21^(ras)和p53蛋白表达的关系

为了解Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）在原发和复发胰腺癌组织中的表达及其临床意义，并分析其表达与ｐ２１ｒａｓ和ｐ５３蛋白表达的关系。采用免疫组化法对４８例原发胰腺导管癌（其中１８例为胰腺癌淋巴结转移灶）和１５例复发胰腺癌的石蜡包埋标本进行Ｐｇｐ、ｐ２１ｒａｓ蛋白和ｐ５３蛋白单抗的免疫组化染色。其结果为４８例原发胰腺癌（其中１８例淋巴结转移灶）和１５例复发胰腺癌组织中呈Ｐｇｐ染色阳性分别为２１例（４３．８％），７例（３８．９％）和１１例（７３．３％），复发胰腺癌组织Ｐｇｐ阳性率高于原发癌（Ｐ＜０．０５）。Ｐｇｐ阴性组的原发癌患者经根治手术后平均生存期明显较阳性组长（Ｐ＜０．０１）。另外，原发癌Ｐｇｐ阳性组与ｐ２１ｒａｓ阳性组有相关性（Ｐ＜０．０５）而与ｐ５３阳性组则无相关性。结果提示Ｐｇｐ表达与胰腺癌对化疗的耐药性有关。

实体瘤中肿瘤干细胞研究进展

自肿瘤干细胞(CSC)学说提出以来,受到了科学界的广泛关注,也是争论的焦点问题。正确认识肿瘤干细胞的生物学特性和调控机制,寻找治愈肿瘤的新途径新方法,是目前最重要研究方向之一。本文就实体瘤中CSC的起源、分离鉴定方法,以及信号通路、微环境,小分子RNA与CSC的作用和肿瘤的靶向治疗等方面展开论述。

CD_(44)和p21ras在胰腺癌及其转移灶中的表达

为探讨胰腺癌组织ＣＤ４４和ｐ２１蛋白表达与其转移特性的关系，以及两者表达的相关性，作者采用针对ＣＤ４４各种变异体的鼠抗人单克隆抗体Ｆ１０－４４－２和ｐ２１蛋白单克隆抗体，对４６例胰腺癌原发灶，１８例胰腺癌淋巴结转移灶和５例胰腺癌肝转移灶进行免疫组化染色。结果胰腺癌转移灶ＣＤ４４和ｐ２１蛋白的阳性染色率显著高于原发灶；有转移的胰腺癌组织ＣＤ４４和ｐ２１的表达均高于无转移者，两者均有显著性差异。相关性检验显示ＣＤ４４阳性组和ｐ２１阳性组有显著的相关性。结果表明：ＣＤ４４或ｐ２１表达阳性的胰腺癌组织，较易发生转移，作者认为ｐ２１蛋白通过引起变异型ＣＤ４４表达升高来促进转移。

RasP21在正常胰腺、慢性胰腺炎与胰腺癌中的表达及临床意义

用免疫组化法检测36例胰腺癌、15例胰腺癌转移淋巴结、10例慢性胰腺炎和12例正常胰腺组织P21的表达。发现胰腺癌P21染色阳性率为61%,高于正常胰腺组织(P<0.05),而与慢性胰腺炎组织比较则无显著差异(P>0.5)。P21阳性组的胰腺癌病例淋巴结转移率较阴性组高(P<0.05)。提示:①慢性胰腺炎与胰腺癌的相关性具有分子生物基础;②P21阳性的胰腺癌组织较易发生淋巴结转移。

乳腺癌精准治疗的基础研究和临床决策

精准医学是指根据个体的分子变异指导疾病的预防和治疗。2015年1月20日，美国总统奥巴马在2015年度国情咨文中宣布了生命科学领域新项目--精准医疗计划，通过分析一百多万名男女志愿者库，研究遗传变异对人类健康和疾病产生的影响、疾病形成机理、开发相应药物、实现“精准用药”，以期为合适的患者在合适的时间提供合适的治疗［1］。肿瘤的精准医学研究需要整合临床信息和多种组学技术，鉴定与肿瘤生物学行为和治疗应答密切相关的分子标志物，并在设计合理的临床试验中验证，指导肿瘤的精准分型和精准治疗。在肿瘤精准医学研究中，乳腺癌相关研究所占的比例高达38.0%，位居各类肿瘤榜首［2］。目前，通过二代测序，大数据分析及相关基础医学来开发新的靶点并籍此研发新药，已成为乳腺癌转化医学的研究重点，也是实现乳腺癌精准治疗的基础。目前，分子分型指导下的乳腺癌治疗已经取得初步成效，未来精准医学引领下的乳腺癌研究方向和相关成果更值得关注［3］。

变异型CD_(44)v6和Rasp21在胰腺癌及其转移灶中的表达

目的:胰腺癌细胞株的研究证明变异型CD_(44)v6和p21蛋白的表达与胰腺癌细胞的转移特性有关。我们用针对CD_(44)v6变异体的鼠抗人单克隆抗体和p21蛋白单克隆抗体,对46例胰腺癌原发灶,18例胰腺癌淋巴结转移灶,5例肝转移灶和8例胃窦十二指肠转移灶进行免疫组化染色。结果表明:胰腺癌转移灶CD_(44)v6和p21蛋白的阳性染色率显著高于原发灶;有转移的胰腺癌组织CD_(44)v6和p21的表达均高于无转移的病例,前者有显著差异,后者则无。说明CD_(44)v6或p21表达阳性的胰腺癌组织较易发生转移。另外,胰腺癌淋巴结转移灶的CD_(44)v6表达高于其它转移灶,提示CD_(44)v6可能在介导胰腺癌淋巴结转移中起作用较大。相关性检验显示CD_(44)v6阳性组和p21阳性组间有显著的相关性,这与文献提出p21蛋白通过引起变异型CD_(44)(CD_(44)v)表达升高来促进转移的结论一致。

胰腺癌及其癌旁组织癌基因与抑癌基因的表达

采用免疫组化法对42例胰腺导管癌、相应的27例胰腺癌旁组织和对照的12例正常胰腺组织石蜡包埋标本进行p21和p53蛋白单抗的免疫组化染色。42例胰腺癌组织中呈p21和p53蛋白阳性染色分别为24例(57％)和20例(48％);27例癌旁组织呈阳性染色则分别为13例(48％)和11例(41％),染色细胞呈灶性分布,其相应的癌组织亦为阳性;对照组正常胰腺组织除1例仅呈p21阳性染色外,余均未见p21或p53阳性染色,与胰腺癌和癌旁组织p21或p53阳性率间均有显著差异(P<0.01)。结果显示:胰腺癌旁组织中某些细胞呈p21或p53阳性染色,这些细胞可能较易发生癌变,使胰腺癌呈多中心性发生。

RNA干扰技术治疗恶性肿瘤的靶点选择和靶向导入

一、RNA干扰技术的简介 RNA干扰（siRNA）是指小分子双链RNA抑制同源序列的基因表达的现象，是生物进化过程中保留下来的机制。早期的研究发现RNA干扰参与了植物细胞防御病毒感染和转位子侵袭的免疫反应。2001年Tuchl等发现siRNA能在哺乳动物细胞内高效沉默目标基因的表达，掀起了生命科学领域对siRNA的基础和应用研究的热潮。

祛邪还需扶正:免疫治疗给肿瘤治疗带来新曙光

随着中国社会的发展和老龄化,恶性肿瘤在2012年已成为我国城市和农村居民主要疾病死因的第一位,为我国带来极大的经济和社会负担.目前肿瘤的主要治疗方式包括手术、化疗、放疗内分泌治疗和靶向治疗等,但其整体效果仍不尽如人意,我国癌症患者五年生存率仅为30.9%.近年来兴起的免疫治疗以调动人体的免疫系统来对抗肿瘤,是一种全新的肿瘤治疗方式,迅速成为肿瘤研究和临床的热点.2013年《科学》（Science）杂志将其评为该年度十大科学进展的首位,

GSTPi在正常胰腺、慢性胰腺炎与胰腺癌中的表达及临床意义

GSTPi在多种恶性肿瘤中有较高表达,有人认为它是诊断癌肿的标志物,此外,它与癌肿对化疗耐药性有关,我们用免疫组化法检测36例胰腺导管癌,15例胰腺癌转移淋巴结,10例慢性胰腺炎和12例正常胰腺的GSTPi表达,结果表明:包括正常胰腺和慢性胰腺炎的非肿瘤组与肿瘤组的GSTPi单抗阳性染色率无明显差异(P>0.5);原发胰腺癌GSTPi阳性率显著高于相应淋巴结转移灶(P<0.01);经Kaplan-Meier曲线比较和log-rank检验结果显示:GSTPi染色阴性组胰腺癌预后优于阳性组,提示:GSTPi不能作为病理诊断胰腺癌的标志物,原发胰腺癌与相应淋巴结转移灶对化疗敏感性存在差异,GSTPi可作为判断胰腺癌术后预后参数之一。

DNA梯度化分析软件系统在细胞凋亡定量检测中的应用

目的:检验我们设计的DNA梯度化分析软件在细胞凋亡定量检测中的应用价值 方法:用Camptothesin(CAM)诱导U937细胞株凋亡,通过该系统计算DNA琼脂糖凝胶电泳后DNA的梯度值,并与凋亡细胞胞浆寡聚核小体的Elisa检测值进行相关性分析.结果:随着CAM浓度的增加,DNA琼脂糖凝胶电泳后梯度化程度越明显,测出的梯度值也越大,而且与胞浆寡聚核小体的Elisa检测值呈正相关(r=0.989,p<0.01)结论:利用DNA梯度化分析系统可对琼脂糖凝胶电泳后的凋亡细胞DNA片段,进行定量分析,提供简便直接的方法.

175例胆系恶性肿瘤的外科处理

总结了本院1976年～1995年间收治的129例胆管癌和46例胆囊癌.胆囊癌与同期良性胆囊疾病(2597例)的比例为1:56.46,后10年比前10年增加1.83倍.27例(59%)并胆囊结石,B超对胆囊癌的诊断准确率为73.9%,高于CT确诊率,129例胆管癌中高位胆管癌68例.中位37例和低位24例.与同期良性胆管疾病(5605例)的比例为1:43.45,后10年比前10年增长1.49倍,59例(46%)并胆管结石.19例曾行胆道手术的病例中12例属胆管空肠Roux—Y吻合术,且癌肿发生部位位于吻合口上10厘米以内.CT对胆管癌的诊断准确率高于B超,且在术前分期中有一定价值.前10年本组所有胆道癌病例行根治术仅16.3%,而后10年上升至38.95%.

急性下消化道出血定位诊断——出血量与检查方法选择

总结了我院自1980年1月至1994年12月收治的40例急性下消化道出血病例,探讨急性下消化道出血的临床征象与定位检查相关性、按出血量分大出血组13例,其中7人次在术前检查未发现灶情况下部腹探查,8人次进行了选择性动脉造影(其中2例手术未发现病灶,术后进行了动脉造影).结果显示动脉造影较直接部腹探查更易发现出血灶(P<0.05).非大出血组27例,其中20例行紧急纤维结肠镜检查,发现出血灶14例(70%).认为根据病人出血量来选择急性下消化道出血的定位手段是合理的;大出血病例可先考虑行选择性动脉造影检查,而非大出血病例则可先选择紧急纤维结肠镜检查较为合适.

Fas-siRNA对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

【目的】建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型,探讨针对Fas基因的siRNA对小鼠肝缺血再损伤的保护作用。【方法】健康、雄性(8～10周,23～28g)昆明小鼠(N=80)分为4组,每组20只,每组按时点(30min,1、2、6和24h5个时点)随机分成5个小组(n=4)。空白组(Shamgroup)尾静脉注射PBS液1mL,8h和24h后各重复1次。麻醉和剖腹后关腹,不阻断肝门。对照组(Controlgroup)同样注射3次PBS液1mL,部分阻断肝门(约70%)30min后再灌注。GFP-siRNA组(GFPgroup)和Fas-siRNA组(Fasgroup)分别尾静脉注射3次GFP-siRNA和Fas-siRNA1mL,其余操作同对照组。按时间点分别处死小鼠,不作重复测量,检测血清ALT水平和肝细胞凋亡(TUNEL)情况。【结果】缺血再灌注30min,1、2、6和24h后的血清ALT水平(U·L-1))空白组的为78～86,对照组的分别为528、610、724、914和572,GFP-siRNA组分别为594、668、802、916和666,Fas-siRNA组分别为456、555、504、640和415。缺血再灌注后血清ALT水平逐渐升高,6h达到高峰,随后逐渐下降。各个时点对照组与空白组血清ALT水平有统计学意义(P<0.05);相同时点Fas-siRNA组与对照组、GFP-siRNA组血清ALT水平有统计学意义(P<0.05)。2h时点对照组的肝细胞凋亡指数为2.95,GFP-siRNA组为2.65,Fas-siRNA处理组为1.70。

不阻断腹主动脉和下腔静脉的Fish-Lewis大鼠原位肾移植慢性排斥模型的建立

【目的】建立大鼠原位肾移植研究肾移植慢性排斥的模型。【方法】自1998年8月至2003年1月,以Fisher大鼠作为供体,Lewis大鼠为受体。模拟活体供肾肾移植中供受体同步手术的顺序,采用显微外科技术,进行不阻断腹主动脉和下腔静脉的大鼠原位肾移植,共完成650例。【结果】此模型并发症少,移植肾术后成活率达98.2%。术后第14天;1个月;2个月;3个月;4个月;5个月和6个月成活率分别为96.8%;95.8%;95.4%;95.4%;94%;94%和92.5%。术后10～12周,开始出现蛋白尿,血肌酐升高的典型慢性排斥反应。【结论】此模型具有手术简单、成功率高、影响肾功能因素少、结果稳定等优点。适应于研究肾移植慢性排斥反应。

广东省家族性和早发性乳腺癌BRCA1基因突变的相关研究

目的研究广东省家族性和早发性乳腺癌患者的BRCA1基因突变情况及其与ER、PR、HER2和ALN等表达的关系。方法抽取广东省58例家族性和早发性乳腺癌患者的外周静脉血,提取基因组DNA,应用PCR技术对BRCA1基因的全部编码序列进行扩增,突变分析由变性高效液相色谱分析(DHPLC)进行预筛后,进行DNA测序方法证实。免疫组化法检测患者中ER、PR、HER2和ALN的表达情况,并分析其表达与BRCA1基因突变的关系。结果58例乳腺癌患者中,2例年龄<35岁的患者发生BRCA1致病突变,而且其中1个为新发现的拼接点突变(331G→A)。BRCA1基因突变位点与ER、PR、HER2和ALN的表达无关。结论广东省早发性乳腺癌患者和家族性乳腺癌患者的BRCA1基因突变的发生率明显低于西方国家;331G→A致病突变位点可能是广东省早发性乳腺癌的特有突变位点;基因突变位点可能与ER、PR、HER2和ALN等组织学表达无关。

Matrigel对不同Her2表达的乳腺癌细胞原位成瘤、增殖、凋亡和转移的影响

目的:探讨matrigel对Her2阳性和阴性的乳腺癌细胞原位成瘤、增殖和凋亡的影响。方法:将Her2阳性的人乳腺癌BT474和Her2阴性的人乳腺癌MDA-MB231细胞分为单纯原位移植组和matrigel联合移植组,分别接种于裸鼠乳房脂肪垫(mammary fad pat,MFP),每3d测量肿瘤大小,第30d处死裸鼠,肿瘤组织及相关脏器送病理切片和HE染色及免疫组化,并比较matrigel对2种乳腺癌细胞移植后肿瘤形成时间、成瘤率、肿瘤生长、增殖、凋亡和转移的情况。结果:Matrigel应用后2种乳腺癌细胞的成瘤时间较单纯MFP移植明显缩短(P<0.01);Her2阴性的MDA-MB231细胞的转移率由25.0%上升至37.5%(P<0.05);Her2阳性乳腺癌BT474细胞的转移率,2种乳腺癌细胞的成瘤率、增殖率和凋亡率无明显差异(P>0.05)。结论:Matrigel应用于Her2阳性和阴性乳腺癌的原位移植可以缩短成瘤时间,提高Her2阴性乳腺癌的转移率,但对2种癌细胞的成瘤率、增殖率和凋亡率无明显影响。