人Lrp蛋白在细胞中的定位及LPS对其表达的影响

为了对脂多糖应答基因(lrp)的功能进行深入的研究,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化后的全长Lrp蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并吸附去除非特异性反应成分.Western印迹表明,吸附纯化后的抗体可以与Lrp蛋白特异结合,并有较高免疫印迹滴度,为Lrp功能研究提供了重要的工具.激光共聚焦扫描荧光显微镜检测显示Lrp主要位于细胞核膜周围.Western印迹、RT-PCR以及细胞免疫组化染色结果都表明,用LPS刺激后,lrp在人HEK293和U937细胞内的表达均有明显的上升.结果提示,Lrp可能与对Lrp介导的反应有关.

人lrp-cDNA全长编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的:扩增人lrp-cDNA全长编码区、并在大肠杆菌中表达和鉴定.方法:提取脂多糖刺激后HEK293细胞的总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出全长人lrp序列,将其克隆入原核表达载体pcTAT后转化大肠杆菌诱导表达,做SDS-PAGE分析;并用免疫印迹法鉴定6His-TAT-LRG融合蛋白表达.结果:测序结果表明,获得了全长人lrp-cDNA全长编码区,其序列与GenBank已经公布的不完全一致;SDS-PAGE分析表明,6His-TAT-Lrp融合蛋白在大肠杆菌中成功表达,表达量约占菌体总蛋白的17%;免疫印迹法鉴定显示,该融合蛋白可与相应抗血清产生阳性反应.结论:得到人lrp-cDNA全长编码区序列,并成功表达,为人lrp功能的深入研究奠定了基础.

全长人lrp基因及其截短和定点突变体真核表达载体的构建

为了对脂多糖应答基因(lrp)的功能进行深入的研究,实验用PCR及双PCR法扩增出lrp基因的截短体(lrpΔC)和突变体(lrpm)序列,测序正确后将正常lrp基因及其截短体和突变体序列均连入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1(+)-lrp、pcDNA3.1(+)-lrpΔC和pcDNA3.1(+)-lrpm。DNA测序结果显示,PCR反应成功得到了lrp基因的截短体和突变体序列;重组质粒酶切鉴定结果显示:人lrp基因及其截短体、突变体成功连入了真核表达载体pcDNA3.1(+)。

环境内毒素相关新基因的克隆测序及生物信息学分析

目的克隆表达环境内毒素相关新基因——人lrg基因(简称Hlrg),并进行生物信息学分析。方法采用RT-PCR扩增Hlrg基因,对扩增产物进行序列的测定,利用Internet和GenBank数据库对测序结果正确的Hlrg基因进行生物信息学分析。结果克隆表达了Hlrg基因,测序结果正确;生物信息学分析表明,该序列编码186个氨基酸,GenBank中不含有同源序列。预测相对分子量为21×103,该序列包含有亮氨酸拉链结构,可能具有重要的功能。结论成功扩增、克隆表达了Hlrg基因,对其功能进行了初步预测,为进一步的功能研究打下基础。

电力隧道渗漏水成因分析及治理措施研究

电力隧道内电缆数量较多,电缆及其他电力设施对水非常敏感,如果积水淹没电缆(尤其是电缆接头部位),可能会造成事故和损失。文章详细分析了暗挖、盾构等结构形式隧道的渗漏水成因,对管片、环梁、沉降缝、墙体及管孔等部位渗漏水治理措施进行研究,提出了针对性的治理建议并进行了试点应用,为电力隧道渗漏水治理工作提供参考。

小鼠脂多糖应答蛋白LRP的大肠杆菌表达及其兔抗血清抗体的制备

目的原核表达小鼠脂多糖应答蛋白并制备兔抗mLRP抗血清。方法参考GenBank中已登录的人lrp-cDNA序列,对小鼠的同源表达序列标签(EST)序列进行拼接,预测mlrpcDNA序列。用设计的引物,进行RT-PCR,从脂多糖刺激的NIH3T3细胞中扩增mlrp的cDNA序列,克隆入pTAT载体中,构建mlrp的原核表达载体。以其转化在大肠杆菌中诱导表达后,将获得的His-TAT-mLRP融合蛋白免疫家兔,用丙酮沉淀全菌蛋白吸附法制备纯化的抗mLRP血清,用West-ernblot鉴定抗体的特异性。结果预测的mlrpcDNA的长度为1905bp。将克隆获得的1554bp大小的mlrp-cDNA编码区序列插入pTAT质粒中,在大肠杆菌中表达出His-TAT-mL-RP融合蛋白。以其免疫家兔,制备了特异性兔抗mLRP的血清。结论mlrp的原核表达及特异性兔抗mLRP血清的制备,为进一步研究mLRP的功能奠定了基础。

基因重组人骨形成蛋白4成熟肽在大肠杆菌中的大规模发酵表达及纯化

含有编码人骨形成蛋白4成熟肽(Bone morphogenetic protein 4 mature peptide,hBMP-4m)cDNA表达质粒的菌株,经50代传代,质粒不丢失,仍然稳定高表达hBMP-4m。将此菌株导入15 L NBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵、诱导表达,测定发酵菌液OD600值为43.5,离心收集菌体,PAGE电泳结果hBMP-4m占细菌总蛋白量的39％。悬浮所收集的菌体、裂菌,洗涤后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的85％。将少量包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解分别上SP阳离子和Q阴离子交换柱,用连续盐浓度的洗脱液洗脱蛋白,收集各蛋白峰做蛋白电泳分析,找到洗脱液的最合适盐浓度。然后将全部包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解,上阳离子交换柱SP柱,以最佳盐浓度洗脱液洗脱,获得纯度为91％的hBMP-4m。再上阴离子交换柱Q柱,最佳盐浓度洗脱液洗脱后,所得hBMP-4m纯度为98％。

尖晶石LiMn2O4的合成和电化学性能研究

采用高温固相反应法合成具有尖晶石结构的锂离子二次电池正极材料LiMn2O4，进行稀土元素La的掺杂修饰，形成复合氧化物LiMn2-xLaO4。对材料进行XRD、FESEM、循环伏安、充放电等测试。实验结果表明，合成的材料具有比较标准的尖晶石结构，La元素掺入可以起到扩展锂离子脱嵌通道和稳定材料骨架结构的作用，更加有利于锂离子的迁移，从而有效提高了LiMn2O4的电化学可逆性和循环稳定性。

大数据背景下医疗信息资源保护措施

大数据时代,数据信息交流也随之增加,这位用户隐私信息带来了很大程度上的安全隐患。基于此,提出大数据背景下医疗信息资源保护措施。从建立医疗数据的分级保护制度、促进医疗信息数字化的创新驱动,以监管数据来源和跨境流动为着力点这三个方面,对医疗信息资源进行有效保护。

DOC2抑制对宫颈癌SiHa细胞系的生长

目的:探讨卵巢癌缺失2(DOC2)基因对宫颈癌Si-Ha细胞系生长的抑制作用.方法:采用基因转染技术,将含有全长DOC2cDNA的真核重组表达质粒和空载体质粒(pcD-NA3.1)转染到人宫颈癌SiHa细胞系(无DOC2基因的表达)中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响.结果:转染DOC2基因的宫颈癌细胞生长受到抑制(P<0.05),其在软琼脂克隆形成能力明显降低(P<0.05).DOC2有使G1期细胞比例增高、S期细胞比例下降的趋势,但SiHa细胞和SiHa-pcD-NA3.1细胞之间无显著差异.结论:DOC2基因能抑制宫颈癌细胞系的增殖.

Hlrg基因定点突变体的构建及其对HepG2细胞的影响

构建Hlrg基因的定点突变体,研究突变Hlrg基因表达的蛋白对HepG2细胞的影响。首先利用数据库对Hlrg基因的结构特点进行分析,在此基础上用PCR法构建Hlrg基因的定点突变体。将突变的Hlrg基因克隆到pcDNA3.1(+)载体中,并稳定转染到HepG2细胞中。流式细胞仪和透射电镜观察突变基因表达的蛋白对HepG2细胞的影响。结果获得了针对Hlrg基因的定点突变体,亮氨酸拉链中的第二个亮氨酸被突变成丝氨酸。发现稳定表达HLrgm蛋白的HepG2细胞中出现一定比例的凋亡细胞。表明构建了Hlrg基因定点突变体,为进一步的功能研究奠定了基础。

原核生物pPLacZ报道分子系统的构建及鉴定

构建可以鉴定原核基因启动子和检测基因转录活性的报道分子系统pPLacZ。用PCR方法从野生型大肠杆菌基因组DNA中扩增lacZ基因的全基因序列(3258bp)和结构基因序列(3089bp)克隆入经改建的含有pUC19的多克隆位点的pBR322载体中,经酶切和测序鉴定正确的两个质粒分别命名为pPLacZ-Control和pPLacZ-Basic。用PCR从野生型大肠杆菌基因组DNA中扩增热休克基因htpX的启动子序列并克隆入pPLacZ-Basic中,经酶切测序鉴定正确的报道载体pPLacZ-htpX转入细菌中,检测高温应激时β-半乳糖苷酶活性水平。成功构建了原核生物报道分子系统pPLacZ以及检测基因htpX的报道质粒pPLacZ-htpX。应用此系统通过检测LacZ的比活性成功测定了大肠杆菌htpX基因高温应激时其转录活性的动态变化。原核生物质粒报道分子系统pPLacZ操作简便,可替代国际通用的原核噬菌体报道分子系统对原核基因的启动子进行鉴定和转录活性检测。

TNF-α对人lrg基因表达的调控

目的:观察TNF-α对脂多糖应答基因(lrg)在人HEK293和U937细胞中表达的影响.方法:正常培养人胚肾细胞(HEK293)和人单核细胞(U937),用TNF-α(终浓度1×106U/L)刺激2h.提取刺激前后HEK293和U937细胞的总蛋白,用纯化后的兔抗人Lrg抗血清作一抗(1∶1000),对TNF-α刺激前后的HEK293和U937细胞进行Western Blot分析.提取刺激前后HEK293和U937细胞的总RNA,用RT-PCR分析TNF-α对lrg在细胞中表达的影响.以β-actin为内参.结果:Western Blot分析显示,用TNF-α刺激2h后,lrg在人HEK293和U937细胞内的蛋白含量明显上升;RT-PCR结果显示,用TNF-α刺激2h后,人HEK293和U937细胞内的lrg mRNA水平明显上升.结论:TNF-α的刺激增强了人HEK293和U937细胞内lrg的表达,提示lrg可能参与了TNF-α诱导的炎症反应.

人Lrp蛋白多克隆抗体的制备

目的:制备人Lrp蛋白多克隆抗体.方法:克隆全长lrp-cDNA编码序列并进行原核表达与鉴定.用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化原核表达的全长Lrp蛋白,获得纯度较高的目的蛋白.用纯化后蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并吸附去除非特异性反应成分.结果:Western印迹结果表明,纯化前后的抗血清在69ku处均检测到目的蛋白条带,说明吸附纯化后的抗体可以与Lrp蛋白特异结合.而纯化后抗体Western印迹结果目的条带只有一条,说明吸附纯化后得到高特异性抗血清,其免疫印迹的效价在10-6以上,有较高免疫印迹滴度.结论:成功制备了高效价高特异性的兔抗人Lrp蛋白的多克隆抗体,为Lrp功能的进一步研究提供了重要的实验工具.

新型智能导盲车的设计分析与研究

盲人是一个没有视觉感知力的弱势群体,盲人行走在川流不息的城市中,会非常的不便和危险。为实现导盲功能化,大众化,受自动清洁试吸尘器的避障工作状态启发,设计了一款基于城市综合路况的智能导盲车。本论文的研究主要分以下几个方面:国内外导盲辅具的研究现状,利用可变式三角形履带及锥环式无级变速装置的导盲车机械行走越障结构,以STM32F103ZET6为控制主板,由超声波传感器,红外线传感器,语音控制模块等组件组成的电控避障指示模块。设计的产品具有结构新颖,控制方便,检测灵敏等特点,并且为智能导盲车的进一步研究具有探索意义。

基于Web的数字医疗信息安全防护系统

目前数字化医疗设备大多是通过计算机控制的,数字化医疗设备在提高工作效率的同时也面临着计算机病毒感染的威胁,因此论文提出了基于Web的数字医疗信息安全防护系统。经过硬件与软件的设计以及试验分析,表明论文设计的系统能有效保护数字化医疗设备信息安全。

响应面法优化魔芋葡甘露聚糖制备工艺及其理化性质分析

为系统研究魔芋葡甘露聚糖的制备、性质及结构,以新鲜魔芋为原料,魔芋葡甘露聚糖得率为考察指标,采用响应面设计试验优化葡甘露聚糖制备工艺,测定其理化性质,并利用扫描电子显微镜、红外光谱仪、X射线衍射对其结构进行观察。结果表明魔芋葡甘露聚糖最佳制备条件为:70%酸性乙醇(pH 5.5)、料液比1∶8(g/mL)、洗脱时间46 min。其持水力为49.81 g/g、膨胀力为18.77 mL/g、持油力为1.43 g/g、阳离子交换能力为0.254 mmol/g,得到的葡甘露聚糖为以非晶态为主的多糖结构,该提取工艺对其功能性质与结构影响较小。

乙苯装置循环苯塔甲苯侧线采出问题分析及改进

采用模拟计算软件分析了循环苯塔内液相组成、侧线组成及温度情况,通过调整塔的操作,使侧线抽出的甲苯馏分组成中甲苯含量高,乙苯含量最少,进而降低能耗物耗,提高经济效益。

基于气相色谱法分析T2DM患者粪便中SCFAs水平与HbA1c的相关性

目的研究2型糖尿病患者粪便中6种短链脂肪酸水平与糖化血红蛋白的相关性。方法采用气相色谱法检测粪便中短链脂肪酸的含量,并对方法学进行考察。选取2018年在本院查体的2型糖尿病患者57例,根据糖化血红蛋白水平将其分为高糖化组(糖化血红蛋白>7.0,28例)与低糖化组(糖化血红蛋白≤7.0,29例)。应用气相色谱法检测两组患者粪便中6种短链脂肪酸水平,并分析6种短链脂肪酸水平与糖化血红蛋白的相关性。结果低糖化组患者粪便中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸水平显著高于高糖化组(均P<0.05),异丁酸与异戊酸水平差异无统计学意义(均P>0.05)。Pearson相关性分析结果表明:在2型糖尿病患者中,糖化血红蛋白与粪便中乙酸呈负相关(r=-0.5401,P<0.0001),与丙酸呈负相关(r=-0.3581,P=0.0062),与丁酸呈负相关(r=-0.4217,P=0.0011),与戊酸呈负相关(r=-0.3268,P=0.0423),与异丁酸、异戊酸无相关性。结论2型糖尿病患者粪便中短链脂肪酸水平与糖化血红蛋白存在一定的相关性,短链脂肪酸水平的下降可能是影响血糖控制不佳的主要原因。

八种灭活型病毒保存液对病毒核酸稳定性的影响

目的评价八种不同的灭活型病毒保存液对病毒核酸的保护效果。方法收集八种商业化的灭活型病毒保存液,分别将新冠病毒假病毒标准物质和禽流感病毒样本加入保存液中,同时设置2个对照组(生理盐水和磷酸盐缓冲液),在保存温度为24℃和37℃条件下,保存时间为0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h,分别提取各保存液中的病毒核酸,采用逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)和逆转录数字PCR方法(RT-dPCR)检测病毒核酸的含量变化。结果四种商业化病毒保存液A、E、G、H在不同温度和时间条件下对病毒核酸的保存效果明显。另外四种保存液保护效果较差:保存液B和C在37℃条件下12 h后保存效果变差,保存液D的保存效果在24℃和37℃下6 h后均明显减弱;保存液F对病毒核酸没有任何保护作用。结论病毒保存液的保护效果差会导致核酸检测的假阴性,建议开展核酸检测时对使用的病毒保护液进行质量控制。