目的探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子2(silent information regulator2,SIRT2)基因沉默对肝癌细胞的迁移和侵袭能力的影响。方法 Western blot分析SIRT2在多个肝癌细胞系和永生化肝细胞中的表达,通过慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉...目的探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子2(silent information regulator2,SIRT2)基因沉默对肝癌细胞的迁移和侵袭能力的影响。方法 Western blot分析SIRT2在多个肝癌细胞系和永生化肝细胞中的表达,通过慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默SIRT2的表达,并通过Real-time PCR和Western blot验证SIRT2基因的沉默效果。细胞迁移及侵袭实验检测SIRT2基因沉默对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,Western blot检测上皮细胞间充质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)指标蛋白(E-cadherin、α-catenin、α-SMA、N-cadherin)的表达。结果 SIRT2在多个肝癌细胞系中蛋白表达水平明显上调;慢病毒介导的shRNA能显著抑制细胞SIRT2的表达水平(P<0.05)。SIRT2基因沉默能抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01),并使上皮属性蛋白E-cadherin、α-catenin表达水平升高,使间质属性蛋白α-SMA、N-cadherin表达水平降低。结论 SIRT2基因沉默可以通过抑制肝癌细胞上皮细胞间充质转化从而抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力。展开更多
目的探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子1(silent information regulator1,SIRT1)基因沉默对肝癌细胞老化的影响及机制。方法通过慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默SIRT1的表达,并通过Real-time PCR和Westernblot验证SIRT1基因的沉默效...目的探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子1(silent information regulator1,SIRT1)基因沉默对肝癌细胞老化的影响及机制。方法通过慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默SIRT1的表达,并通过Real-time PCR和Westernblot验证SIRT1基因的沉默效果。BrdU标记实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化;β-半乳糖苷酶染色观察肝癌细胞有无老化;Western blot检测衰老相关基因p53和p21蛋白的变化。结果慢病毒介导的shRNA能显著抑制细胞SIRT1的mRNA及蛋白水平。SIRT1沉默能抑制肝癌细胞的增殖,抑制率达70%~80%;同时,SIRT1沉默能显著诱导G1期细胞周期阻滞:感染shCont的细胞处于G1期比例为(44.29±0.36)%,而感染shSIRT1-1的细胞处于G1期细胞为(69.20±1.24)%,感染shSIRT1-2的细胞处于G1期比例为(65.86±1.75)%。SIRT1沉默后肝癌细胞中衰老相关的β-半乳糖苷酶染色显著增高,阳性细胞占40%~50%(P<0.05),并伴随衰老相关基因p53和p21蛋白表达增加。结论 SIRT1基因沉默可能通过p53/p21途径促进细胞衰老。展开更多