多参数流式细胞技术分析髓系白血病细胞相关免疫表型

目的 探讨常见的急性髓系白血病细胞相关免疫表型,并阐述其在临床中的应用价值。方法 应用多参数流式细胞技术分析47例急性髓系白血病(AML)患者骨髓标本中白血病细胞相关免疫表型,并对其免疫分型结果与治疗、预后的相关性进行统计分析,进而探讨AML免疫分型在临床中的应用。结果 47例AML患者阳性高表达的髓系抗原有CD33(93.62%)、CD13(89.36%)、MPO(89.36%)、CD117(82.98%)、CD64(38.30%);造血干/祖细胞CD分子阳性表达以CD38(93.62%)、CD34(65.96%)、HLA-DR(51.06%)为主;其他抗原以CD56(48.94%)、CD7(23.40%)、CD19(19.15%)为主。经相同时间治疗后,23例(48.94%)AML患者病情得到完全缓解,患者阳性表达T细胞系抗原CD7的完全缓解率显著低于阴性患者(P<0.05)。6例(26.09%)患者在1 a内复发,没有任何一种抗原表达情况与之有关(P>0.05)。随访结束后,有26例(55.32%)患者死亡,阳性表达NK细胞系抗原CD56和T细胞系抗原CD7患者的死亡率显著性高于阴性表达的患者,阳性表达B细胞系抗原CD19的患者死亡率显著性低于阴性表达的患者(P<0.05),幼稚标志与成熟标志不同步的患者死亡率高于幼稚标志与成熟标志同步的患者(P<0.05)。结论 髓系抗原CD33、CD13、MPO、CD117、CD64是AML诊断中可靠的抗原标志物,AML患者的免疫分型结果可为临床医生确定治疗方案和判断预后提供参考。

乙肝疫苗无应答者CD4^+T细胞TCR Vβ基因克隆化特征的研究

目的:研究乙肝疫苗接种者CD4+T细胞TCR Vβ基因克隆化特征,分析乙肝疫苗有应答者和无应答者TCR Vβ基因单克隆改变的差异性。方法:采用多引物PCR技术扩增80例乙肝疫苗接种者CD4+T细胞TCR Vβ基因22个家族的CDR3区基因片段,对PCR产物分别应用琼脂糖凝胶电泳和基因扫描两种方法检测。结果:80例乙肝疫苗接种者中有58例产生抗体,有22例未产生抗体。TCR Vβ基因单克隆改变主要集中在Vβ2、Vβ8、Vβ9、Vβ11和Vβ17五个家族上,乙肝疫苗无应答组这五个Vβ基因单克隆改变频率明显低于乙肝疫苗有应答组(P<0.01或P<0.05)。结论:CD4+T细胞TCR Vβ基因克隆化改变是影响机体对乙肝疫苗免疫应答效果的重要因素之一。

FasL、抗人DR5单克隆抗体诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的探讨FasL、Anti-DR5mAb对肿瘤细胞Hela、BGC823、MCF-7、L342、H9101、D6的杀伤作用及机制。方法采用RT-PCR、MTT比色法、电泳、DNA倍体分析、Westernblot等方法。结果H9101、Hela细胞株DR5mRNA水平有表达,D6细胞无表达;H9101、L342细胞株FasmRNA水平有表达,D6细胞无表达。H9101、L342细胞株对FasL、Anti-DR5mAb敏感并呈剂量依赖性;MCF-7、BGC823细胞株对FasL敏感,对Anti-DR5mAb相对敏感。Hela对FasL相对敏感,对Anti-DR5mAb敏感;D6对两种凋亡诱导剂耐受。结论FasL、Anti-DR5mAb能不同程度地诱导肿瘤细胞凋亡,其机制与Fas、DR5、Caspase-8、Bcl-2的表达有关。

HCV抗原诱导Th1/Th2细胞增殖活性分析及其在丙型肝炎诊断中的应用

目的 通过检测Th1 Th2特征性细胞因子 ,分析Th1 Th2细胞增殖活性 ,探讨其在丙型肝炎慢性化进程中的免疫学作用 ,研究HCV感染者肝病慢性化的免疫学因素。方法 首先用淋巴细胞分离液分离丙肝病毒感染者的PB MC ,纯化其CD+4T细胞 ,然后用HCV混合Ag刺激培养CD+4T细胞 ,最后用ELISA法检测IL 2、IL 4的含量 ,分析Th1和Th2细胞增殖活性。结果 本课题研究病例共包括 2 3例急性肝炎病例 (其中 7例呈自限性病程 ,16例转变为慢性肝炎 )和 2 0例慢性肝炎病例 ,以上病例CD+4T细胞经HCV混合抗原刺激培养后 ,其中 7例急性自限性病例表现为Th1样反应 (IL 2分泌增加 ) ,与 16例急性转慢性病例比较有显著性差异 (t =2 1.76、P <0 .0 1) ;7例自限性病例在HCVAg刺激前后Th1样反应有显著性差异 (t =18.15、P <0 .0 1)。 16例急性转慢性病例表现为Th2样反应 (IL 4分泌增加 ) ,与 7例自限性病例比较有显著性差异 (t =7.75、P <0 .0 1) ;16例急性转为慢性病例在HCVAg刺激前后Th2样反应有显著性差异 (t=4 .0 8、P<0 .0 1)。 2 0例慢性化病例主要为Th2样反应 ,其与急转慢性病例无显著性差异 (t=1.0 1、P >0 .0 5 )。结论 HCVAg能够特异性地刺激Th前体细胞向Th1或Th2细胞分化 ;Th1样应答与疾病的好转有关 ,Th2样应答与慢性化有?

HCV基因分型在丙肝诊断和治疗中的应用

目的 建立ＨＣＶ基因分型方法，研究ＨＣＶ基因型与肝病程度的关系，探讨ＨＣＶ基因型与ＩＦＮ－ａ２ｂ抗病毒疗效的关系。方法 ＨＣＶ基因组ＮＳ５区ＰＣＲ扩增产物酶切分型。结果 ７３例ＨＣＶ感染者中有ＨＣＶⅡ型４５例，ＨＣＶⅢ型２８例。Ⅱ型ＨＣＶ感性肝炎３１例，肝硬化１４例；Ⅲ型ＨＣＶ感染者中有慢性肝炎２６例，肝硬化２例。Ⅱ型ＨＣＶ感染者的肝硬化发生率显著高于Ⅲ型ＨＣＶ感染者（Ｐ〈０．０５）。

单胺氧化酶活性分析在HBV感染者中的应用

目的分析乙肝病毒(HBV)感染者血清单胺氧化酶活性,研究其临床应用价值.方法应用终点比色法检测血清单胺氧化酶(MAO)活性;ELISA法检测乙肝病毒标志物;PCR法检测HBv DNA;常规方法检测ALT.结果 ALT异常组,大三阳HBsAg(+),HBeAg(+),Anti-HBc(+)和小三阳HBsAg(+),Anti-HBe(+),Anti-HBc(+)合并HBV DNA阳性的HBV感染者MAO显著升高,而小三阳并HBV DNA阴性者MAO升高不明显;ALT正常组仅40例大三阳患者MAO升高明显,其他各组MAO大多在正常范围内.结论 HBV感染后,只要有病毒复制,就会破坏肝细胞,引起MAO升高.MAO活性分析对肝脏病情的判断有重要价值.

HCV基因型与HCV感染者ALT的关系

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）与ＨＣＶ感染者血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）的关系，本文应用ＨＣＶＮＳ５区逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对７９例抗－ＨＣＶ阳性者进行ＨＣＶＲＮＡ检测，同时用限制性内功酶法对ＨＣＶ进行基因分型。检出ＨＣＶＲＮＡ阳性者６９例，其中ＨＣＶⅡ型３０例，Ⅲ型２７例，Ⅱ／Ⅲ混合型１２例，ＨＣＶ不同的基因型在ＡＬＴ正常组和异常组中的分布有显著性差异（Ｐ＜０．０１），Ⅱ型和Ⅱ／Ⅲ混合型主要分布于ＡＬＴ异常组中，Ⅲ型主要分布于ＡＬＴ正常组中。提示Ⅱ型和Ⅱ／Ⅲ混合型很可能是导致ＡＬＴ异常的主要型别，应引起足够重视。

强直性脊柱炎患者外周血单核细胞亚型检测的临床意义

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血单核细胞亚型检测的临床意义.方法应用流式细胞仪检测66例AS患者外周血单核细胞亚型百分率,并与40例正常对照组进行比较.应用ELISA法测定血浆4种细胞因子(TNF-α,IL-6,IL-18和IL-17)的含量,并分析AS患者单核细胞亚型百分率与细胞因子表达水平的相关性.结果AS组中间型单核细胞百分率明显高于对照组(P<0.01),经典型单核细胞百分率低于对照组(P<0.01),非经典型单核细胞百分率在AS组与对照组间无差异(P>0.05);AS组血浆4种细胞因子与对照组比较均升高(P<0.05),且与中间型单核细胞含量呈正相关.结论中间型单核细胞与AS的发生密切相关;检测AS患者外周血单核细胞亚型含量可为AS诊断提供新的实验指标.

强直性脊柱炎患者CD16^(+)单核细胞及表面分子变化特征研究

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者应用英夫利昔单抗治疗过程中CD16^(+)单核细胞亚型及其表面分子的变化特征,为AS临床诊治提供新的实验诊断学指标.方法选择AS患者40例,健康对照组40名.AS患者应用英夫利昔单抗治疗,在0、4和12周3个时间节点采集标本,健康对照组只采集1次标本.应用多参数流式细胞技术检测外周血经典、中间和非经典单核细胞亚型及各亚型细胞表面HLA-DR和CD11b表达量,动态分析各时间节点所检测指标的变化特征.结果AS组用药治疗前(0周)CD16^(+)单核细胞(中间型和非经典型单核细胞)百分率高于健康对照组(P<0.05),经典型单核细胞百分率低于健康对照组(P<0.05);AS组各亚型单核细胞表面HLA-DR和CD11b表达量高于健康对照组(P<0.05).AS组在应用英夫利昔单抗治疗过程中,CD16^(+)单核细胞百分率及表面HLA-DR和CD11b的表达量均呈现下降趋势,12周与0周比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论检测CD16^(+)单核细胞亚群,特别是CD14^(hi)CD16^(+)的中间型单核细胞亚群及表面活化相关标志、黏附相关标志在AS的诊断和治疗过程中具有重要临床意义.

中老年肝细胞癌患者乙型肝炎病毒X基因检测与分析

目的检测慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染后肝细胞癌(HCC)患者血清HBVX基因,并与慢性乙型肝炎、肝硬化患者HBVX基因检出率对比分析。方法在微孔板上包被HBVX基因片段的捕获探针;PCR扩增被检标本中目的片段,其引物用Bio-Ⅱ-dUTP修饰,在微孔板上杂交后用链霉亲和素碱性磷酸酶系统显色。结果该方法检测HBVX基因灵敏,特异;乙型肝炎后HCC患者HBVX基因检出率明显高于慢性乙型肝炎组和肝硬化组。结论检测HBVX基因对HCC具有辅助诊断价值。

乙型肝炎病毒感染者CD8^+T淋巴细胞T细胞抗原受体Vβ基因互补决定区3克隆化特征的研究

目的研究乙型肝炎病毒感染者CD8+T淋巴细胞T细胞抗原受体(TCR)Vβ基因互补决定区3(CDR3)克隆化特征。方法选用20例乙型肝炎感染者及20例同期健康体检者,应用多引物聚合酶链反应(PCR)方法同时扩增TCR Vβ基因CDR3区多个片段,高分辨率琼脂糖凝胶电泳检测克隆化特征。结果乙型肝炎病毒感染者CD8+T细胞TCR Vβ9和Vβ14克隆化明显高于正常对照组,分别为70.0%vs 25.0%、85.0%vs 30.0%(P<0.01)。结论乙型肝炎病毒感染者存在CD8+T细胞TCR Vβ9和Vβ14克隆性变化。

地方性甲状腺肿细胞周期检测与DNA倍体分析

目的研究地方性甲状腺肿甲状腺细胞周期变化和DNA异倍体细胞出现情况,探讨甲状腺细胞增殖特征。方法应用流式细胞术,采用碘化丙锭细胞单染法进行细胞周期检测和DNA倍体分析。对地方性甲状腺肿、正常对照组、甲状腺机能亢进和甲状腺癌进行对照分析。结果地方性甲状腺肿组甲状腺S期细胞和G2期细胞明显高于对照组和甲亢组(P<0.01);地方性甲状腺肿组DNA异倍体细胞出现率明显低于甲状腺癌组(P<0.01)。结论应用流式细胞术检测甲状腺细胞周期可以判断甲状腺细胞的增殖特征;进行细胞DNA分析有助于肿瘤的早期发现和早期诊断。

微孔板杂交技术检测乙肝病毒X基因及其临床应用价值

目的建立微孔板杂交技术检测乙肝病毒X基因的方法，研究其临床应用价值．方法在微孔板上包被HBVX基因片段的捕获探针；PCR扩增被检标本中目的片段，其引物用Bio-Ⅱ-dUTP修饰，在微孔板上杂交后用链霉亲和素碱性磷酸酶系统显色．结果该方法检测HBVX基因灵敏，特异；乙肝后肝细胞癌患者X基因阳性率明显高于急、慢性乙肝和肝纤维化组．结论检测HBVX基因对HCC具有辅助诊断价值．

丙型肝炎患者外周血NKT细胞含量变化特征的研究

目的探讨丙型肝炎病毒感染者外周血NKT细胞含量变化的特征。方法应用FITC标记的TcR Vα24单克隆抗体和PE标记的TcR Vβ11单克隆抗体对丙型肝炎病毒感染者外周血进行标记,流式细胞仪检测TcR Vα24/TcRVβ11双阳性NKT细胞的含量。结果抗-HCV+、HCV RNA+组NKT细胞明显低于抗-HCV+、HCV RNA-组和对照组(P<0.01);抗-HCV+、HCV RNA-与正常对照组的NKT细胞无显著性差异(P>0.05)。结论NKT细胞数量减少不利于丙型肝炎病毒的清除。

流式细胞术检测TcR Vα24/Vβ11双阳性NKT细胞及其在HCV感染者中的应用

目的研究丙肝病毒感染者外周血NKT细胞含量与HCV感染状态之间的相关性.方法应用流式细胞术检测TcR Vα24/Vβ11双阳性NKT细胞.结果抗-HCV阳性且HCVRNA也阳性的病例NKT细胞数量明显低于抗-HCV阳性而HCV RNA阴性的病例（P〈0.01）,明显低于正常对照组（P〈0.05）.结论由于NKT细胞数量减少或活化受阻,造成HCV的持续感染,不利于病毒的清除;另一方面,由于肝内有HCV的存在,NKT细胞大量向肝内趋化,导致外周血的数量相对减少.

流式细胞术检测淋巴细胞Fc受体及其对HBV感染者疾病诊断价值的研究

目的建立FcR标记检测方法,探讨FcR的表达在乙型肝炎慢性化过程中的作用。方法制备FITC标记的聚合IgG,标记淋巴细胞表面的FcR,应用流式细胞术分析急性和慢性乙型肝炎患者各病程时期FcR表达的阳性淋巴细胞百分率。结果慢性乙型肝炎患者FcR的表达较对照组和急性乙型肝炎康复患者显著低下(P<0.01);急性乙型肝炎患者急性发作期FcR阳性细胞百分率明显高于对照组(P<0.01);急性乙型肝炎应用干扰素(IFN)治疗1个月后及完全康复后FcR阳性细胞百分率与正常对照组相一致。结论流式细胞仪检测淋巴细胞FcR表达,有助于判断乙型肝炎患者的病情、估测预后和指导治疗。

微孔板杂交检测乙肝病毒X基因及其对肝细胞癌诊断价值的研究

目的建立微孔板杂交技术检测乙肝病毒X基因的方法,研究其在肝细胞癌诊断中的应用价值。方法在微孔板上包被HBV X基因片段的捕获探针;应用Bio-11-dUTP修饰的HBV X基因扩增引物,对待测标本进行PCR扩增,在微孔板上杂交后用链霉亲和素碱性磷酸酶系统显色。结果成功建立了微孔板杂交技术检测HBV X基因的方法;乙肝病毒感染后肝细胞癌患者X基因阳性检出率明显高于慢性乙肝患者和肝纤维化患者(P<0.01)。结论检测HBV X基因对肝细胞癌具有辅助诊断价值。

2′,5′-寡腺苷酸合成酶的表达及其单克隆抗体的制备与应用

目的用基因工程技术表达2′,5′腺苷酸酶(2-5AS)蛋白为抗原制备单克隆抗体,供荧光素标记抗体流式细胞术检测细胞内2-5AS应用。方法将2-5AS基因片段插入到带有His.Tag的pET-30a(+)质粒,并转化到宿主菌E.coli.BL21(DE3),ITPG诱导表达,Ni柱纯化,获得2-5AS蛋白后制备单克隆抗体。结果插入片段酶切测序证实,插入的片段与目的片段序列相符;Ni柱纯化过程中可见目的蛋白的洗脱峰;经Tricine-SDS-PAGE电泳,Western Blotting鉴定,得到表达蛋白;用该蛋白制备了2-5AS单克隆抗体。结论基因工程技术表达2-5AS获得成功,制备了单克隆抗体,为进一步应用流式细胞术检测细胞内2-5AS提供保证。

地高辛掺入法检测HCV RNA含量在肝病诊断中的应用

目的；研究血清ＨＣＶ ＲＮＡ含量与ＨＣＶ感染者肝病程度的关系。方法：应用地高辛掺入法检测血清ＨＣＶ ＲＮＡ含量。在ＰＣＲ过程中将ＤＩＧ－ｄＵＴＰ掺入到ＰＣＲ产物叶地用ＰＣＲ ＥＬＩＳＡ法检测ＰＣＲ产物，结合标准参考样本而达定量目的。结果；丙肝后肝硬化组血清ＨＣＶ ＲＮＡ含量显著高于丙型肝炎组。

HCV基因型与IFN-α2b抗病毒疗效的关系

目的；研究丙肝病毒基因型与丙肝患者使用ＩＦＮ－α２ｂ治疗效果的关系。方法；采用ＨＣＶ基因组ＮＳ５区ＰＣＲ产物酶切分型方法，对７９例丙肝患者做ＨＣＶ基因分型。所有病例均按预定方案应用ＩＦＮ－α２ｂ治疗，根据ＡＬＴ的变化情况和判断疗效。首先考察应用１ＭＵ和３ＭＵ ＩＦＮ－α２ｂ两种剂量在治疗效果上的差异性；然后研究ＨＣＶ基因型对ＩＦＮ－α２ｂ治疗效果的影响。