耐热芽孢杆菌E2菌株纤维素酶基因克隆的研究

用质位ｐＢＲ３２２作载体，大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５αＦ＇作受体，克隆到耐热芽孢杆菌Ｅ２菌株的羧甲基纤维素酶（ＣＭＣａｓｅ）基因。重组质粒ｐＢＧ３从产生ＣＭＣａｓｅ的转化子中分离得到。克隆到的ＣＭＣａｒｅ基因位于４．０ｋｂＨｉｎｄＩＩＩ片段上。功能状态ＣＭＣａｓｅ基因被亚克隆到２．４ｋｂＤＮＡ片段上。同位素杂交结果显示出克隆到的ＣＭＣａｓｅ基因与供体菌染色体ＤＮＡ的亲合性。重组质粒ｐＢＧ３所表达的ＣＭＣａｓｅ的最适作用ｐＨ为６．５，最适作用温度为５５℃，不作用于任何实验过的天然纤维素。含重组质粒ｐＢＧ３的转化子产生的纤维素酶在细胞中的分布为：胞内占８２．９％，胞外占７．９％，质壁空间（ｐｅｒｉｐｌａｓｍｉｃｓｐａｃｅ）占９．２％。

芽孢杆菌E2菌株纤维素酶性质的研究

芽孢杆菌Ｅ２菌在５５℃下生长良好，在培养液中能大量积累胞外纤维素酶（１９０ｍｕ／ｍＬ培养液），所产生的纤维素普单一的羧甲基纤维素酶（ＣＭＣａｓｅ）。羧甲基纤维素钠（ＣＭＣＮａ）为其专一性底物。该酶作用的ｐＨ为４．５－８．０；最适ｐＨ为６．５－７．０；在ｐＨ４．０－８．０范围内较稳定，酶作用的最适温度为５５℃；在６０℃处理１０，３０，６０，９０以及１２０分钟后，残余酶活分别为９５％，８０．３％。

耐药细菌蛋白质的分泌——新抗攻击的靶点

几十年来 ,由于抗生素的大量使用 ,导致了细菌对很多药物的抗药性 .为了克服细菌的抗药性问题 ,需要用新的思路去发掘新的抗生素 ,包括发掘细菌细胞中存在的抗生素作用的新靶点 .蛋白质的分泌过程对于细菌是生死攸关的 ,它可能成为新药物的适合靶点 .

芽孢杆菌E2菌株纤维素酶形成条件的研究

芽孢杆菌 E_2菌株(Bacillus sp.strain E_2)能在55℃下良好生长并在培养液中大量积累胞外纤维素酶(190 mu/ml 培养液),所产生的纤维素酶为单一的 CMCase。对芽孢杆菌 E_2菌株产酶条件进行了研究.该菌产酶的最适培养基装量为200ml/500ml 三角瓶,最适起始pH 为6.5,最适产酶温度为45℃,产酶高峰在培养时间8—12小时。E_2菌株不能利用单一的无机氮源形成纤维素酶。酩蛋白是试验过的供 E_2菌株形成纤维素酶的最好氮源,其用量为3g/L。CMC-Na,纤维二糖,能作为碳源供芽孢杆菌 E_2菌株形成纤维素酶。高浓度的葡萄糖(8g/L)对芽孢杆菌 E_2菌株纤维素酶的形成有抑制作用。天然纤维素不能作为芽孢杆菌 E_2菌株形成纤维素酶的碳源。

高温堆肥发酵工艺处理城市生活垃圾过程中的部份微生物学问题

本文描述了高温堆肥发酵工艺处理城市生活垃圾过程中的微生物生态学过程。多种微生物分别在不同阶段参与了垃圾堆肥的发酵腐熟过程。论述了垃圾发酵期间 ,人工接种功能微生物菌剂可以加速堆肥材料的发酵腐熟作用 ,缩短发酵周期 ,节省城市生活垃圾处理的运行成本。

一株生长pH较宽的产甲烷菌分离与系统发育分析

采用Hungate厌氧操作技术,从造纸厂阴沟污泥中分离到一株生长pH范围为5.5～9.5的产甲烷菌株SH4.该菌对酸碱具有良好的适应性,培养3d后,在初始pH值6.0～8.0的培养基中甲烷产量相差不大,且基本达到最大产量.SH4革兰氏染色阳性,短杆状,多数单生,不运动;菌落近圆形,微黄;利用H2+CO2或甲酸盐作为唯一碳源生长,不利用乙酸盐,对氯霉素非常敏感.该菌最适生长pH为7.0,最适生长温度为35℃,最适NaCl浓度为0～1.5%.实验表明,与仅添加厌氧污泥作为接种物相比,添加SH4菌液可使产甲烷启动时间缩短1/3,甲烷总产量亦有大幅提高.形态、生理生化特征以及16S rDNA序列分析表明,该菌为嗜树木甲烷短杆菌(Methanobrevibacter arboriphilus).

西南银莲花的活性三萜皂苷

目的 研究西南银莲花 Anemone davidii根状茎和地上部分的活性三萜皂苷。方法 用甲醇室温提取 ,大孔树脂 D10 1、硅胶及反相硅胶柱层析分离纯化 ,NMR分析并结合化学降解鉴定结构 ,体外抑菌和人癌细胞生长抑制实验测试抗菌和抗癌活性。结果 从该植物根状茎中分离鉴定出三萜皂苷 ～ ,从地上部分分离鉴定出三萜皂苷 ～ ,其中 ～ 对人癌细胞体外生长有抑制作用 , , 和 有一定的抗菌活性。结论 上述化学成分均为首次从该植物中分离得到 ,并首次进行抗癌活性测试 ,其中 , 和

β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸研究进展

综述了临床使用的 β 内酰胺酶抑制剂克拉维酸 (clavulanicacid ,CA)产生菌的种类、作用机理、生物合成、代谢调控。

糖肽类抗生素替考拉宁研究进展

本文综述了目前临床上首选治疗多重耐药菌感染的糖肽类抗生素之一替考拉宁的研究进展,包括替考拉宁的结构、抗菌谱、作用机制、产生菌、发酵条件。

细梗紫菊中的化学成分

目的 对细梗紫菊 N otoseris gracilipes全草的化学成分进行分离纯化、结构鉴定和抗菌活性测试。方法 以甲醇室温提取 ,采用各种色谱技术进行分离纯化 ,根据 NMR等波谱数据鉴定结构 ,按常规方法进行抗菌活性的定性测定。结果 从细梗紫菊全草的甲醇提取物中分离鉴定出 12个化合物 ,其中 8个为倍半萜内酯 :jacquilenin( ) ,scorzoside( ) ,ixerisoside D( ) ,austricin( ) ,notoserolide A( ) ,crepidiaside A( ) ,crepidiaside B( )和 lactuside B( )。另外 4个化合物分别鉴定为 6 ,7-二羟基香豆素 ( ) ,野莴苣苷 ( ) ,木犀草素 - 7-葡萄糖苷( )和胡萝卜苷 ( ) ,倍半萜内酯的抗菌实验表明化合物 和 对蜡状芽孢杆菌 (Bacillu cereus AS.1.16 88)的生长有抑制作用。结论 这些化合物均为首次从该植物中分离得到目的 对细梗紫菊 N otoseris gracilipes全草的化学成分进行分离纯化、结构鉴定和抗菌活性测试。方法 以甲醇室温提取 ,采用各种色谱技术进行分离纯化 ,根据 NMR等波谱数据鉴定结构 ,按常规方法进行抗菌活性的定性测定。结果 从细梗紫菊全草的甲醇提取物中分离鉴定出 12个化合物 ,其中 8个为倍半萜内酯 :jacquilenin( ) ,scorzoside( ) ,ixerisoside D( ) ,austricin( ) ,notoserolide A(

曲霉sp.136的化学成分研究(英文)

从曲霉sp.136的固体发酵物中分离得到6个化合物.应用波谱分析及与已知品对照的手段将它们鉴定为烟曲霉酸(1)、(20S,22E,24R)-5α,8α-表二氧-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(2)、β-谷甾醇(3)、(2S,3S,4R)-2-[(2′R)-2′-羟基二十四烷酰氨基]-1,3,4-三羟基十八烷(4)、4-羟基苯乙酸(5)和烟碱酸(6).

地涌金莲的化学成分

目的 研究地涌金莲 Musella lasiocarpa全草中的化学成分。方法 用甲醇室温浸提 ,溶剂萃取分段 ,硅胶柱层析分离纯化 ,波谱分析鉴定结构 ,体外抑菌实验测试抗菌活性。结果 从该植物全草中分离出 4个phenylphenalenone型化合物 ,通过波谱分析将其分别鉴定为 :2 - hydroxy- 9- (4′- hydroxyphenyl) - phenalen- 1- one( )、 2 - methoxy- 9- (4′- hydroxyphenyl) - phenalen- 1- one ( )、 2 - hydroxy- 9- phenylpehenalen- 1- one ( )和 2 -methoxy- 9- phenylphenalen- 1- one( )。抗菌实验表明 ,化合物 对蜡状芽孢杆菌 (Bacillus cereus)的生长具有抑制作用。此外从该植物中还获得豆甾醇、豆甾醇葡萄糖苷和 1个长链脂肪酸的混合物。结论 4个 phenylphenalenone型化合物为首次从该植物中分离得到。

南川鹭鸶草的化学成分

目的 研究南川鹭鸶草DiurantherainarticulataWangetK .Y .Lang根部的化学成分。方法 用硅胶柱色谱等方法分离纯化 ,波谱分析和TLC对照鉴定结构 ,按微生物学常规实验方法进行抗菌活性测试。结果 从其根部的甲醇提取物中分离得到 10个化合物 ,其中 9个分别鉴定为 :大叶吊兰苷A(III) ,鹭鸶草苷A(IV) ,鹭鸶草苷B(V) ,鹭鸶草苷F(VI) ,鹭鸶草苷G(VII) ,2α ,3α ,19α 三羟基乌苏 12 烯 2 8 酸 (VIII) ,3 ,6 ,7,3′,4′ 五甲氧基黄酮 (IX) ,芰皂配基(X)和胡萝卜苷 (XI)。抗菌活性实验表明III -VI对白色假丝酵母 (Candidaalbicans)的生长有抑制作用 ,III,IV和VI对丝状真菌黑曲霉 (Aspergillusniger)的生长有抑制作用。结论 上述化合物均为首次从该植物中分离得到 。

薄层色谱紫外分光光度法定量测定微生物发酵产物辅酶Q_(10)

报道了一种微生物发酵液中辅酶Q10的定量检测方法.该方法分为两个步骤:第一步是离心收集菌体和结合使用超声波处理的辅酶Q10丙酮抽提;第二步是硅胶薄层色谱,根据标样位置取产物斑点乙醇洗脱后用紫外分光光度法测定辅酶Q10含量.结果表明,该方法具有操作简便、重复性好、相对误差小等优点,可用于细菌发酵生产辅酶Q10研究过程中发酵产物的快速定量检测.

克拉维酸产生菌的改良

以棒状链霉菌Streptomyces clavu ligerus CCRC11518(ATCC27064)为出发菌,采用经典物理和化学诱变剂处理的微生物诱变技术和现代理性化筛选方法,通过筛选抗终产物结构类似物舒巴坦钠突变株、底物甘油耐受型突变株、营养缺陷型突变株,最后获得一株克拉维酸高产突变株III50,其克拉维酸摇瓶产量为834.8μg/mL,是出发菌株产量(282.4μg/mL)的2.96倍.该突变株在琼脂斜面培养基上连续转接传代8代,克拉维酸的产量保持稳定.

克拉维酸高产菌的选育

在克拉维酸高产菌的选育过程中,应用解除终产物结构类似物作为选择压力,能有效地除去低效价菌株,提高高产菌株的检出率,较传统筛选法优越.试验表明,以带棒链霉菌Strep tomycesclavuligerusCCRC11518(效价为382.4×10-6g/mL)为出发菌,经紫外线诱变,筛选到一株抗20×10-3g/mL的舒巴坦钠突变株my51,my51菌株产克拉维酸的效价达到834.7×10-6g/mL,比出发菌提高了1.18倍.该菌株连续传代7代,克拉维酸的效价保持稳定.

药囊花茎叶的化学成分研究

药囊花 (CyphothecamontanaDiels)茎叶的乙醇提取物具有抗菌活性 ,进一步的活性追踪表明活性成分在乙酸乙酯和正丁醇萃取物中。我们从这两种萃取物中共分离鉴定出 9个化合物 ,其结构通过波谱分析等分别鉴定为 :槲皮素 3 O α L 鼠李糖甙 (1)、杨梅素 3 O α L 鼠李糖甙 (2 )、山萘酚 3 (2″ ,6″ 二 O (E) p 羟基苯丙烯酰 β D 吡喃葡萄糖甙 (3)、3,3′ O 二甲基逆没食子酸 4 O β D 吡喃葡萄糖甙(4)、槲皮素 (5 )、2α ,3β ,19α ,2 3 四羟基乌苏 12 烯 2 8 酸 2 8 O β D 吡喃葡萄糖甙 (6 )、乌苏酸 (7)、β 谷甾醇 (8)和胡萝卜甙 (9)。这些化合物均为首次从我国该特有单种属植物中分离得到。

一株耐酸碱嗜热产甲烷菌的分离与系统发育分析

从垃圾填埋场分离得到一株嗜热产甲烷菌RY3。该菌株具有优良的耐酸碱性能,其生长pH范围为5.5～10.5,最适生长pH为6.0～8.0。菌株RY3为革兰氏阳性,长杆状,多数单生,不运动;菌落浅黄色,形状近圆形;利用H_2+CO_2或甲酸盐作为唯一碳源生长,不利用乙酸盐,对氯霉素非常敏感。该菌最适生长温度为55～65℃,最适NaCl浓度为0～2%。根据形态和生理生化特性及16S rDNA序列分析将其初步定为Methanothermobacter thermautotrophicus。添加RY3菌液与仅添加厌氧污泥作为接种物相比一周内可使达到最大产甲烷速率所需时间缩短2/3,甲烷总产量提高约1.8倍。

棒状链霉菌突变株CCRC11518-Ⅲ_(50)克拉维酸发酵条件的研究

通过单因子和多因子摇瓶正交优化试验,确定了克拉维酸产生菌棒状链霉菌突变株Streptomyces clavuligerusCCRC11518-Ⅲ50的三角瓶发酵条件.发酵培养基组成(ρ/g L-1):甘油30,大豆蛋白胨60,麦芽浸膏7.5,K2HPO4·3H2O 1.0,MgSO4·7H2O 2.0,FeSO4-7H2O 1.0;培养基初始pH 6.5;接种量15％;培养基装量20 mL/250 mL三角瓶;培养温度25℃;发酵时间72 h.克拉维酸效价由优化前的834.8 μg mL-1提高到1 082.615 μg mL-1,提高了29.7％.还在1 600 mL发酵罐中进行了初步放大试验.当接种量15％,通气量1:0.5,转速450 r min-1,25℃发酵60h克拉维酸效价达到高峰1 025 μg mL-1.