补体C3水平对冻融胚胎移植妊娠结局的早期预测价值

目的探讨补体C3对冻融胚胎移植(F-ET)妊娠结局的早期预测价值。方法前瞻性收集378个F-ET周期相关资料,依据补体C3预测F-ET妊娠结局的最佳截断值分为A组(补体C3≤1.05)120个周期;B组(补体C3>1.05)258个周期,比较两组结局。分析B组补体C3预测F-ET自然流产的最佳截断值。结果年龄是F-ET妊娠成功的危险因素(P<0.05);补体C3和胚胎类型是F-ET妊娠成功的保护因素(P<0.05)。补体C3对F-ET妊娠结局的受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积为0.702,最佳截断值为1.05 g/L,其预测临床妊娠灵敏度为87.60%、特异度为52.00%。B组临床妊娠率(67.05%)和胚胎着床率(52.75%)明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。补体C3早期预测F-ET后自然流产最佳截断值为1.32 g/L,ROC曲线下面积为0.760,灵敏度为69.00%、特异度为81.20%。结论补体C3对早期预测F-ET妊娠结局有一定的临床意义,当补体C3超过1.32 g/L可能会导致自然流产率升高。

干细胞条件培养液促进小鼠卵母细胞体外成熟

目的：研究骨髓问充质干细胞（MSCs）条件培养液对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的作用。方法：分离、培养小鼠MSCs，获得MSCs条件培养液。收集3类生发泡期卵母细胞，分别在对照培养基和条件培养液中培养，观察卵母细胞成熟率，判断最佳时间点；FDA、Hoechst33258和PI联合染色评价细胞活力；荧光标记检测皮质颗粒分布、迁移及纺锤体复合物的形成情况。结果：条件培养液组3类生发泡期卵母细胞的成熟率高于对照培养基组；其中，完全／大部分裸露的生发泡卵母细胞和周围有疏松的颗粒细胞包裹的生发泡卵母细胞的最佳体外成熟时间为16h，有完整的数层颗粒细胞紧密包裹的生发泡卵母细胞的最佳体外成熟时间为24h。体外成熟卵母细胞活力良好，皮质颗粒分布及纺锤体复合物形成与体内成熟卵母细胞一致。结论：MSCs条件培养液有利于小鼠体外成熟卵母细胞核、细胞质同步成熟，提高卵母细胞质量，是一种较好的体外成熟培养体系。

来曲唑预防卵巢过度刺激综合征的临床效果

目的探讨口服来曲唑预防卵巢过度刺激综合征(OHSS)的临床效果。方法选取2017年9月至2018年7月在安徽省妇幼保健院生殖中心行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的OHSS高危患者116例,采用掷硬币的方法将患者分为两组:治疗组(56例)患者取卵即日起每天口服来曲唑5mg,连用5d;对照组(60例)患者未口服来曲唑。比较两组患者OHSS相关指标、自觉症状及中重度OHSS的发生率。结果治疗组患者取卵后第3、6、9天雌二醇(E2)水平、白细胞(WBC)计数以及取卵后第3天的盆腔积液量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或校正后P<0.0167)。治疗组患者自觉症状发生率(60.71%)、中重度OHSS的发生率(14.29%)均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者取卵后第3、6、9天的红细胞压积(HCT)、D-二聚体水平、取卵后第3天的卵巢直径以及重度OHSS患者住院率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论来曲唑可以降低OHSS高危患者黄体期E2及WBC计数,改善OHSS患者的自觉症状,降低中重度OHSS的发生率。

阿托西班联合人绒毛膜促性腺激素宫腔灌注对不孕症患者妊娠结局的影响

目的探讨阿托西班联合人绒毛膜促性腺激素(h CG)宫腔灌注对不孕症患者妊娠结局的影响。方法选择2015年1月至2017年2月安徽医科大学附属妇幼保健院生殖中心胚胎着床失败2次或2次以上的患者121例,按随机数字表法分成A(39例)、B(40例)、C(42例)3组。其中,A组患者给予h CG宫腔灌注治疗,灌注后行冻融胚胎移植(F-ET)45个周期,B组患者静推阿托西班后,行F-ET44个周期,C组患者给予宫腔灌注联合阿托西班静推,后行F-ET45个周期。比较3组患者临床妊娠率、多胎妊娠率、着床率、流产率、异位妊娠率及活产率情况。结果 3组患者的胚胎着床率、活产率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。C组患者胚胎着床率(43.53%)高于A组(21.84%)和B组(31.76%),与A组比较,差异有统计学意义(χ2=9.212,P=0.002),与B组比较,差异无统计学意义(χ2=2.506,P=0.113);C组患者活产率(57.78%)高于A组(28.89%)和B组(45.45%),与A组相比,差异有统计学意义(χ2=7.647,P=0.006),与B组相比,差异无统计学意义(χ2=1.353,P=0.245)。结论 F-ET前给予阿托西班静推联合h CG宫腔灌注可提高F-ET着床率和活产率。

不同刺激因子组合诱导NK细胞体外扩增及其功能的研究

目的探讨不同刺激因子组合对人自然杀伤细胞(NK细胞)体外扩增及其功能的影响。方法 VarioMACS分选健康成人外周血单个核细胞(PBMC)中的NK细胞,依据添加刺激因子的不同分为A组(IL-2)、B组(IL-2+IL-15)、C组(IL-2+IL-15+饲养细胞),饲养细胞为30 Gyγ射线照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs),未添加任何刺激因子的细胞的作为对照组,在干细胞生长培养基(SCGM)中进行培养扩增14 d,第1天添加PHA及OKT3,第5天离心洗去;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测分选及扩增前后CD56+CD3-NK细胞纯度;改良的MTT法检测NK细胞对K562、HO8910及PBMC的杀伤活性。结果经VarioMACS免疫磁珠阴性分选后NK细胞纯度由分选前的(9.2±2.9)%提高到(93.5±3.2)%,培养14 d后,除对照组NK细胞纯度降低外,其余组与扩增前无明显差异(P>0.05)。细胞扩增倍数分别为17.2±1.7、51.3±6.6和82.4±9.8倍,均显著高于对照组(5.7±1.2)(P<0.01)。实验组组间比较,C组明显高于A组和B组(P<0.01)。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,各组的杀伤活性显示为C组>B组>A组>对照组,C组扩增的NK细胞对K562及HO8910的杀伤率可分别达到(70.1±8.9)%和(64.6±6.2)%,显著高于对照组、A组(P<0.01)和B组(P<0.05),对PBMC的杀伤率仅为(4.2±1.2)%。结论经VarioMACS分选获得的NK细胞,在体外使用SCGM培养基培养,添加IL-2、IL-15和照射后AlloMNCs作为刺激因子,可获得高效扩增和有效活化的NK细胞,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增高纯度NK细胞的方法。

c-myc基因扩增与HPV感染在宫颈病变中的关系

分别以HC-Ⅱ法及荧光原位杂交(FISH)法检测109例不同级别宫颈病变患者宫颈脱落细胞中高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染情况及c-myc基因扩增情况,结果显示宫颈脱落细胞中c-myc基因的扩增率、高危型HPV的感染率与宫颈病变程度密切相关,高危型HPV感染和c-myc基因扩增在宫颈癌的发生发展中可能起着协同作用。

辐照后的AlloMNCs诱导NK细胞体外扩增

目的探讨照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs)对人自然杀伤细胞(NK)体外扩增的影响,为NK细胞的过继免疫治疗奠定基础。方法 Ficoll密度梯度离心法分离健康成人外周血单个核细胞(PBMCs),30、50和70 Gyγ射线照射后的AlloMNCs作为饲养细胞,分别加入上述PBMCs,在添加细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中进行培养扩增,同时选择未添加饲养细胞的作为对照组;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测CD56+CD3-NK细胞纯度;MTT法检测细胞杀伤活性。结果加入饲养细胞的PBMCs在添加了细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中可培养21 d,30 Gy照射后的AlloMNCs作为饲养细胞时细胞扩增最明显,在第21天时扩增了270.3±10.4倍,CD56+CD3-NK细胞纯度由培养前的(9.7±2.4)%提高到扩增后的(56.5±7.8)%,与无饲养细胞的对照组相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,添加30Gy照射后的AlloMNCs刺激扩增的NK细胞对K562和HO8910的杀伤率平均达到59.7%、63.2%,分别与对照组的28.3%、32.2%相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 30 Gy照射后的AlloMNCs可作为饲养细胞在体外促进NK细胞的增殖,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增NK细胞的方法。

IL-15基因修饰的NK细胞对原代卵巢癌细胞的杀伤作用

目的:探讨γ射线照射后的IL-15基因修饰的NK细胞(简称NK-ustc细胞)对原代卵巢癌细胞的体内外杀伤活性。方法:分离卵巢癌患者腹水原代卵巢癌细胞。不同剂量γ射线(0、1、2、4、8、16 Gy)照射NK-ustc细胞,3H-TdR掺入法检测照射后NK-ustc细胞的增殖情况,51Cr释放法检测NK-ustc细胞对K562和原代卵巢癌细胞的杀伤活性。建立人裸鼠荷卵巢癌模型,随机分为NK-ustc治疗组(模型鼠腹腔注射辐照后的NK-ustc细胞)和培养基对照组,同时设空白对照组(正常裸鼠腹腔注射辐照后的NK-ustc细胞),观察各组裸鼠体重、腹围及生存期。结果:1、2、4、8、16 Gy辐照后NK-ustc细胞的增殖率分别为(62.1±9.8)%、(41.3±8.7)%、(14.6±4.1)%、(0.1±0.03)%和(0.2±0.04)%。当效靶比为10∶1时,0、8 Gy辐照后NK-ustc细胞对K562的杀伤率分别为(45.4±8.9)%和(43.1±6.4)%,对原代卵巢癌细胞的杀伤率分别为(54.6±6.4)%和(48.3±5.8)%,说明辐照不影响NK-ustc细胞的杀伤活性(P>0.05)。辐照后NK-ustc细胞治疗组荷瘤小鼠的中位生存期为75 d,对照组为39 d(P<0.05),空白对照组小鼠全部存活。结论:γ射线照射可有效抑制NK-ustc细胞增殖,但保留该细胞对原代卵巢癌细胞的杀伤活性。

曲古菌素A联合全反式维甲酸对宫颈癌HeLa细胞株杀伤机制的研究

目的探讨曲古菌素A(TSA)联合全反式维甲酸(ATRA)对宫颈癌HeLa细胞株的杀伤作用及其作用机制。方法 TSA联合ATRA或单独处理HeLa细胞,CellTiter 96AQueous法检测细胞增殖抑制情况;7-AAD荧光染色法观察细胞凋亡改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测p21、p53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达变化。结果 TSA联合ATRA对HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,诱导细胞凋亡,出现核碎裂等典型凋亡改变,细胞凋亡率明显升高,与对照组和单独用药组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,TSA联合ATRA组中p21、p53、活化性Caspase-3蛋白的表达显著升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论 TSA联合ATRA在体外对HeLa细胞有明显的杀伤作用,推测其机制可能是上调p21、p53、活化性Caspase-3蛋白表达水平,下调Bcl-2蛋白表达水平有关。

干细胞条件培养液对小鼠体外成熟卵母细胞发育潜能的影响

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）条件培养液对小鼠体外成熟卵母细胞发育潜能的影响。方法：分离、培养小鼠MSCs,获得MSCs条件培养液;收集4~6周小鼠生发泡期（GV）卵母细胞,在MSCs条件培养液中体外成熟（IVM）;同时部分小鼠促排处理,收集体内成熟卵母细胞;体外受精（IVF）后,比较受精率、4-细胞形成率及囊胚形成率差异;Hoechst33342染色后观察内细胞团（ICM）和滋养层细胞形成情况,计数内细胞团数。结果：IVM卵母细胞IVF后的受精率、4-细胞形成率和囊胚形成率及囊胚内细胞总数与体内成熟组比较,无显著差异（P〉0.05）;IVM组各时期的胚胎形态正常,囊胚内细胞染色后的荧光图像与体内成熟组基本一致。结论：MSCs条件培养液能保持小鼠IVM卵母细胞良好的质量和发育潜能,是一种较理想的IVM培养体系。

体外成熟的卵母细胞胞质成熟的评价指标

卵母细胞的体外成熟培养(in vitro maturation,IVM)是辅助生殖技术的重要过程之一。优质的IVM的卵母细胞必须是细胞核和细胞质同步成熟,以保证成功受精、胚胎正常发育乃至健康子代的出生。目前,细胞核成熟的评价标准已得到共识,而细胞质的成熟却表现复杂,尚缺乏有效的观察评价指标。近年来研究发现,卵母细胞成熟时其超微结构、一些信号分子和细胞因子均发生某些变化,这为评价细胞质成熟提供了依据。

新生鼠卵巢中卵泡膜干细胞的分离培养及鉴定

目的分离、培养、鉴定小鼠卵巢组织中的卵泡膜干细胞。方法取2～4 d新生鼠卵巢组织,胶原酶、胰蛋白酶联合消化获得单个细胞悬液,GSM-K无血清培养基培养细胞观察细胞球形成;RT-PCR法检测膜基因Ptch1和透明带基因Zp1、Zp2、Zp3的表达,免疫荧光法检测干细胞标记物碱性磷酸酶(AKP)、Oct4、膜细胞标记物Gli3与颗粒细胞标记物FSHR的表达;体外诱导分化,RT-PCR法检测分化标记物Gli2,油红O染色后观察。结果 GSM-K中培养2 d形成细胞球;Ptch1、AKP、Oct4和Gli3表达阳性,不表达Zp1、Zp2、Zp3和FSHR;诱导分化后,Gli2表达,油红O染色阳性。结论新生鼠卵巢组织中存在卵泡膜干细胞,且具有分化潜能。

树突状细胞疫苗在妇科肿瘤免疫治疗中的研究进展

树突状细胞（DC）具有摄取、加工、处理和呈递抗原以及激活初始T淋巴细胞的功能，是体内功能最强的专职抗原递呈细胞，也是免疫应答的关键细胞。近年来研究发现，体外经肿瘤抗原刺激的DC回输到病人体内，能诱导机体产生细胞毒性T淋巴细胞，从而发挥特异性肿瘤杀伤作用。根据这一发现研制的DC疫苗目前在妇科肿瘤免疫治疗中已取得重要进展，因而受到日益广泛的关注。

不同组合黄体支持方案在激素替代冻融胚胎移植中的临床研究

目的比较4种不同组合黄体支持方案对激素替代周期冻融胚胎移植(HRT-FET)妊娠结局的影响。方法回顾性分析安徽省妇幼保健院生殖中心2011年1月至2013年1月259周期HRT-FET治疗资料,根据不同的黄体支持方案分为四组,A组:黄体酮针+阴道黄体酮软胶囊(73周期);B组:口服地屈孕酮+阴道黄体酮软胶囊(61周期);C组:黄体酮针+口服黄体酮胶囊(70周期);D组:口服黄体酮胶囊+阴道黄体酮软胶囊(55周期)。分别比较四组资料的临床妊娠率、早期流产率、着床率、活产率、阴道流血率及平均黄体支持时间。结果 4组资料临床妊娠率、早期流产率、着床率、活产率比较差异无统计学意义(P>0.05);阴道流血率(A^D组27.4%、13.1%、27.1%、12.7%)、黄体支持时间[A^D组(35.10±24.43)d、(27.59±16.27)d、(35.83±25.80)d、(27.05±15.75)d],A、C组分别与B、D组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。A、C、D组均有不同程度药物副反应,B组无明显不良反应。结论 HRT-FET后黄体支持选择口服地屈孕酮+阴道黄体酮软胶囊更有优势。

荧光原位杂交技术检测宫颈病变中C-MYC基因的表达及其意义

目的:探讨c-myc原癌基因在宫颈病变中的表达及其临床意义。方法:筛选114例宫颈细胞涂片,按最终病理学结果分组,其中正常宫颈20例,CINⅠ20例,CINⅡ25例、CINⅢ25例、宫颈癌24例;同时选取上述病例的宫颈病理切片,均用FISH方法检测c-myc基因的表达情况。结果:①C-myc基因在不同细胞学分级中即ASCUS、LSIL、HSIL和SCC宫颈脱落细胞中的阳性表达率为0.0%、20.8%、38.9%、61.2%、95.2%,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。②C-myc基因在不同病理学分级中即正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌脱落细胞中的阳性表达率分别为0.0%、10.0%、44.0%、72.0%、90.2%,其组间差异有统计学意义(P<0.01)。③在宫颈病理切片组织中C-myc基因阳性表达率在正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌组织中依次为0.0%、20.0%、56.0%、80.0%、95.0%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:c-myc基因在各级CIN和宫颈癌的脱落细胞及组织中均有异常扩增,其扩增率随着宫颈病变程度增加而增加,提示c-myc基因异常扩增在宫颈病变筛查中具有一定的价值和意义。

曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用

目的:探讨曲古菌素A(TSA)联合全反式维甲酸(ATRA)诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用及其相关机制。方法:TSA与ATRA联合或者单独作用于SiHa细胞,采用CellTiter 96Aqueous法检测细胞增殖情况,7AAD荧光染色法观察细胞凋亡形态,Annexin V/7AAD法流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot法检测P53、BCL-2和Caspase-3蛋白的表达变化。结果:细胞增殖实验结果显示TSA联合ATRA对SiHa细胞有显著的增殖抑制作用;7AAD荧光染色结果显示联合用药组细胞凋亡明显增加,出现核碎裂等典型凋亡改变;流式细胞术检测结果显示联合用药组凋亡率显著增高;Western Blot结果显示:与对照组比较,联合用药组中P53和活化性Caspase-3蛋白的表达水平显著升高,而BCL-2蛋白表达水平显著下降。结论:TSA联合ATRA在体外对SiHa细胞具有明显的协同抑制增殖和诱导凋亡作用,推测其机制可能与P53和活化性Caspase-3蛋白表达水平上调、BCL-2蛋白表达水平下调有关。

体外受精-胚胎移植与单精子卵胞浆内注射临床妊娠结局的比较与分析

目的比较体外受精-胚胎移植(IVF-ET)和单精子卵胞浆内注射(ICSI)的妊娠结局。方法对安徽省妇幼保健院2012年1月至2013年11月436个IVF-ET及117个ICSI治疗患者的临床资料进行回顾性分析,分别比较两组的临床妊娠率、流产率、异位妊娠率。结果 IVF-ET组与ICSI组患者的临床妊娠率(35.53%、34.19%)、流产率(14.7%、12.5%)、异位妊娠率(7.05%、5%)的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 ICSI组与IVF-ET组的临床妊娠结局、流产情况及异位妊娠结局相似,提示ICSI显微操作并不增加妊娠风险。

醋酸亮丙瑞林缓释微球治疗子宫内膜异位症的疗效

目的:了解国产亮丙瑞林缓释制剂治疗子宫内膜异位症的临床疗效。方法:100例子宫内膜异位症患者予国产醋酸亮丙瑞林缓释微球注射剂,3.75 mg,皮下注射,每28天注射1次,疗程3～6针。比较治疗前后患者临床体征、妊娠结局及不良反应。结果:月经复潮后3个月内患者主观症状改善有效率>79%,月经复潮前后主观症状的明显改善率、改善率之间差别无统计学意义。用药后患者子宫体积缩小,血清CA125水平降低。15例有生育要求的患者中3例成功妊娠,其不良反应发生率均低于相关文献报道,主要为雌激素水平低下的一系列表现。结论:国产亮丙瑞林缓释微球治疗子宫内膜异位症安全、可逆、起效快,与进口GnRH-a制剂无明显治疗差异。

子宫动脉及子宫内膜血流对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的探讨经阴道彩超检测子宫动脉、子宫内膜及内膜下血流对体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)结局的影响。方法选取2010年6月至2012年6月安徽省妇幼保健院生殖中心行IVF-ET或卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)治疗的165例患者的临床资料,根据妊娠结果分为妊娠组66例和未妊娠组99例。使用经阴道彩色多普勒超声成像技术监测注射人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)日子宫内膜厚度及类型,ET日子宫动脉的收缩期与舒张末期流速比值(systolic/diastolic ratio,S/D)、阻力指数(resisitance index,RI)、搏动指数(pulsatility index,PI)、子宫内膜及内膜下血流等指标,比较两组间的各项指标。结果两组子宫内膜厚度及子宫内膜类型比较差异无统计学意义(P>0.05);妊娠组子宫内膜有血流所占比例[45.45%(30/66)]高于非妊娠组[25.25%(25/99)](P<0.05);妊娠组子宫内膜下血流RI(0.30±0.05)低于非妊娠组(0.69±0.07)(P<0.05)。结论经阴道彩超检测子宫内膜血流及子宫内膜下血流RI对IVF-ET结局有一定预测价值。

子宫内膜局部损伤对冻融胚胎移植妊娠结局的影响

目的探讨于月经周期第3天行子宫内膜局部损伤对冻融胚胎移植(F-ET)临床结局的影响。方法选取2017年10月至2019年4月在该中心行冻融胚胎移植的420个周期不孕症患者为研究对象,分为损伤组(210个周期)和对照组(210个周期)。比较两组不孕症患者临床妊娠率、着床率、流产率及多胎妊娠率等。结果损伤组转化日子宫内膜厚度(9.93±1.74)mm明显高于对照组(9.05±1.66)mm,差异有统计学意义(P=0.023)。损伤组转化日A+B型子宫内膜比例(97.14%)明显高于对照组(88.10%),差异有统计学意义(P<0.001);转化日内膜有血流比例(96.67%)明显高于对照组(89.05%),差异有统计学意义(P=0.003);临床妊娠率(56.19%)、多胎妊娠率(33.90%)和着床率(43.08%)均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论既往移植失败次数大于或等于1次的患者月经周期第3天行子宫内膜局部损伤可以改善子宫内膜形态、血流和F-ET妊娠结局。