2022年杭州市发热儿童呼吸道病毒检测及流行病学特征

目的分析2022年杭州市门诊发热儿童呼吸道病毒感染情况及流行病学特征。方法采集2022年1月至12月在浙江大学医学院附属儿童医院发热门诊就诊患儿的咽拭子样本并收集患儿基本信息,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测6种呼吸道病毒核酸。卡方检验用于比较不同年龄、性别患儿之间的感染情况。结果在1880例发热患儿样本中,检出呼吸道病毒阳性529例(28.14%),其中单病毒感染512例(27.23%),合并感染17例(0.9%)。甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒1型(PIV1)和副流感病毒3型(PIV3)病毒总检出率分别为5.7%、5.6%、4.8%、5.2%、1.4%和6.4%。在合并感染的患儿中,RSV+ADV最常见(23.5%)。男女患儿的感染率以及合并感染率差异无统计学意义(P>0.05)。6~12月龄儿童感染率最低,其他年龄段感染率相近。结论2022年杭州市门诊发热儿童呼吸道病毒感染模式复杂且呈现季节性,需加强防护,做好儿童呼吸道病毒预防工作。

儿童巨细胞病毒感染的诊断

巨细胞病毒(CMV)是儿童先天性感染和生后获得性感染的重要病原,可引起多种急、慢性感染和神经系统迟发后遗症。早期和准确诊断儿童感染对优生优育和儿童健康意义重大。本文在结合国内外CMV感染诊断标准的基础上,介绍CMV感染的类型、诊断方法和诊断策略,并重点关注儿童CMV感染诊断方面的最新进展。

人巨细胞病毒研究新进展

人巨细胞病毒(HCMV)为疱疹科β属的双链DNA病毒,是人类先天性感染的常见病原,在免疫功能低下的人群中可引起严重疾病。对HCMV致病机制、诊断方法、防治措施等的研究始终是国内外医学界关注的热点,近年来在这些方面也取得了许多有意义的新进展。本文就最近几年来在HCMV免疫逃避机制、与肿瘤关系、定量聚合酶链式反应(PCR)诊断技术、疫苗等方面取得的研究进展作一简要介绍。

新生儿败血症凝固酶阴性葡萄球菌的粘质测定与电镜观察

对我院1988年9月至1990年2月新生儿败血症分离出的75株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)进行了粘质测定与电镜观察,结果发现双份血培养CNS具有相同质粒谱与限制酶酶切谱22株(感染株)81.8％产粘质。而污染的CNS仅34.0％(18/55)产粘质(P<0.005)。扫描电镜观察产粘质CNS能粘附在光滑的玻璃表面,形成微小菌落;透射电镜下可见CNS细胞周围有形成伪足样突出的粘质。以上发现均未见于不产粘质的CNS。粘质有助于CNS的粘附、定植,可阻挡抗生素和抵抗白细胞的吞噬,故在新生儿CNS败血症的致病性中起着相当重要的作用。

甘露聚糖结合凝集素与儿童常见病原菌的结合活性研究

目的从人血清中分离纯化甘露聚糖凝集素(MBL),并鉴定其与儿童感染性疾病中常见细菌的结合活性。方法用甘露聚糖-Sepharose4B亲和柱进行亲和层析,从人血清中分离纯化出MBL分子,用酶联凝集试验(ELLA)鉴定其与8个菌种97株不同细菌的结合活性。结果MBL对不同的细菌有不同的结合力,对解鸟氨酸克雷伯菌、大肠埃希菌有很强的结合力;对溶血性葡萄球菌、阴沟肠杆菌、表皮葡萄球菌的结合力相对较弱;对肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌的不同菌株结合力差异较大。结论MBL对不同的细菌有不同的结合力,对革兰阴性菌的结合力相对较阳性菌强,对某些细菌的不同菌株结合力差异较大。

用聚合酶链反应技术检测流产和死胎组织的巨细胞病毒与弓形虫

作者通过人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）分离、套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）及限制酶切分析、弓形虫分离及一次性ＰＣＲ，对不明原因的流产、死胎组织进行ＨＣＭＶ与弓形虫检测。结果发现，２８份流产、死胎组织中，１例死胎肺组织ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，但病毒分离阴性；１例胎儿心、肺、脑、肝、肾、眼组织弓形虫ＤＮＡ阳性，其脑、肺、眼、肝组织经动物接种后，在小白鼠腹水中找到弓形虫滋养体，但心、肾结果阴性。结果提示：临床上有些不明原因的流产、死胎可能是由于胎儿感染ＨＣＭＶ或弓形虫所致。ＰＣＲ技术较常规病原体分离敏感、快速，适合于ＨＣＭＶ／弓形虫感染所致流产、死胎的早期诊断。

套式聚合酶链反应检测各孕期孕妇巨细胞病毒感染

目的评价套式聚合酶链反应（ＮＴ－ＰＣＲ）加限制酶切分析在各孕期人类巨细胞病毒（ｈＣＭＶ）感染检测中的应用。方法ｈＣＭＶ检测采用病毒分离、血清学试验、ＮＴ－ＰＣＲ加限制内切酶谱分析。结果３６７例孕妇中孕早、中、晚期ｈＣＭＶ阳性检出率分别为８．６％、１．６％及７．０％。经ＮＴ－ＰＣＲ检测，１８例ｈＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率为４．９％，而病毒分离，特异性ＩｇＭ及ＩｇＡ阳性率分别为３．０％、１．１％及２．２％。ＮＴ－ＰＣＲ阳性检出率高于病毒分离等其它方法（Ｐ＜０．０２５），与ＰＣＲ法比较，病毒分离特异性为１００％，敏感性为６１．１％，近３０％ｈＣＭＶ感染的孕妇ＰＣＲＤＮＡ阳性，表现为ＤＮＡ血症。结论ＮＴ－ＰＣＲ能早期检出孕妇ｈＣＭＶＤＮＡ，对孕妇ｈＣＭＶ感染的监控有重要意义。

儿童感染性疾病的病原学诊断

感染性疾病严重威胁儿童的生命与健康,病原学诊断是儿童感染性疾病防治工作中的关键环节。本文在分类介绍病原学诊断常用技术的基础上,着重对近年来免疫学、分子生物学、细胞学等方面的一些新技术进行评价和展望。同时也对下呼吸道感染、中枢神经系统感染、败血症等儿科常见感染性疾病的病原学诊断现状作一分析。

套式聚合酶链反应及限制酶分析对孕早期孕妇巨细胞病毒感染的研究

在人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）－ＡＤ＿（１６９）株直接早期基因的ＥｃｏＲＩＪ片段内，自行设计二对引物，建立套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）加限制酶分析检测ＨＣＭＶＤＮＡ，经实验证明有高度的特异性与敏感性，对其它疽疹类病毒及正常人基因组ＤＮＡ无交叉反应。一次性ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株基因组的最小检出量为１００ｆｇ，而套式ＰＣＲ可达１０ｆｇ。经ＰｓｔＩ酶切后，得到的片段与设计相符。对５８名孕早期孕妇外周静脉血进行ＨＣＭＶＤＮＡ、病毒分离、特异性ＩｇＭ及ＩｇＡ检测，结果阳性率分别８．６％、６．９％、１．７％及３。４％。２８例死胎组织中，发现一死胎肺组织ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，与病毒分离相比，套式ＰＣＲ的特异性，敏感性及符合率分别达到１００％，９８．１％及９８．３％。提示：套式ＰＣＲ能提高诊断ＨＣＭＶ感染的特异性与敏感性，适合于孕早期ＮＣＭＶ感染的监测。

流产死胎组织中的巨细胞病毒、弓形虫感染监测

本文通过人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）分离、套式聚合酶反应（ＰＣＲ）及限制酶切分析、弓形虫分离及一次ＰＣＲ，对不明原因的流产、死胎组织进行ＨＣＭＶ及弓形虫检测。结果发现，２８份流产、死胎组织中，１例死胎肺组织ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，病毒分离阴性；１例胎儿心、肺、脑、肝、肾、眼组织弓形虫ＤＮＡ阳性，其脑、肺、眼、肝组织经动物接种后，在小白鼠腹水中找到弓形虫滋养体，但心、肾结果阴性。提示：临床上有些不明原因的流产、死胎是由于胎儿感染ＨＣＭＶ或弓形虫所致。ＰＣＲ技术较常规病原体分离敏感、快速，适合于ＨＣＭＶ／弓形虫感染所致流产、死胎的早期诊断。

质粒分析在凝固酶阴性葡萄球菌感染中应用的进展

近廿年来,在抗微生物疾病能力受到损害的患者中,所见到凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase negatire staphylococcus,CNS)的严重感染日益增多。因为CNS在皮肤上滋生占优势,而在住院期间又常有些人工装置植入患者体内,这样恰好增加CNS严重感染的机率。目前已知CNS有15种,它是人造瓣膜、脑脊液分流、手术后伤口、

应用聚合酶链反应检测各孕期孕妇弓形虫感染

我们通过聚合酶链反应(PCR)、血清学试验及部分动物接种,对367名各孕期孕妇外周静脉血、脐血及死胎组织进行弓形虫检测。结果:PCR DNA阳性 7例,循环抗原(CAg)阳性2例,特异性IgM阳性 1例。总阳性率 1.9％。对其中 1例 PCR DNA、CAg阳性的孕妇血进行动物接种,结果阳性。28份死胎组织中,发现一死胎心、肺、肝、肾、眼、脑组织弓形虫DN A均阳性。提示:孕妇弓形虫感染的危害在我国(省)并非少见。开展对孕妇弓形虫感染的检测,将有利于优生优育工作的开展。PCR较其它方法更具特异性及敏感性,且操作简便、快速,适合于孕妇弓形虫感染的监测。

套式聚合酶链反应在母婴传播巨细胞病毒研究中的应用

本文建立了套式ＰＣＲ技术加限制酶分析方法，对１０５份母脐血配对进行套式ＰＣＲ，病毒分离，特异性ＩｇＭ及ＩｇＡ测定。结果母血ＨＣＭＶＤＮＡ阳性６份，脐血３份，母－脐传播率为３／６。三对被证实为母婴传播ＨＣＭＶ套式的标本中，二对套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＭ及ＩｇＡ均阳性。一对套式ＰＣＲ病毒分离、特异性ＩｇＡ阳性，但特异性ＩｇＭ阴性，提示：套式ＰＣＲ是一种敏感、特异、简便快速，能早期诊断ＨＣＭＶ的检测手段，适用于孕妇及胎儿ＨＣＭＶ感染的监测。

孕妇弓形虫感染及其可能导致的宫内传播

目的：探讨弓形虫感染与优生的关系，摸索早期诊断弓形虫感染的方法。方法：通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）、血清学试验及部分动物接种，对３６７名各孕期孕妇外周静脉血、脐血及死胎组织进行弓形虫检测。结果：ＰＣＲＤＮＡ阳性７例，循环抗原（ＣＡｇ）阳性２例，特异性ＩｇＭ阳性１例。总阳性率１９％。对其中１例ＰＣＲＤＮＡ、ＣＡｇ阳性的孕妇血进行动物接种，结果阳性。２８例死胎组织中，发现一死胎心、肺、肝、肾、眼、脑组织弓形虫ＤＮＡ均阳性。结论：孕妇弓形虫感染的危害在我国（省）并非少见。开展对孕妇弓形虫感染的检测，将有利于优生优育工作的开展。ＰＣＲ较其它方法更具特异性及敏感性，且操作简便、快速，适合于孕妇弓形虫感染的监测。

小儿下呼吸道感染的细菌病原学分析

目的下呼吸道感染是造成儿童住院的最常见疾病之一。在发展中国家，病原菌以细菌感染相对多见，而病原菌的分布特点则常因年代不同而发生变迁。该研究的目的是了解本地区小儿下呼吸道感染常见病原菌及其对常用抗生素的耐药性，为临床药物治疗提供有价值的参考。方法对2001年8月至2002年7月住院的所有下呼吸道感染患儿，常规进行深部痰培养，并用纸片扩散法、Etest法和Vitek系统进行药敏试验。结果下呼吸道感染儿共4238例，其中1181例分离到1种或1种以上致病菌，阳性率为27．9％，最常见的病原菌为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌，分离率分别为5．2％，5．1％，5．1％，4．0％和2．1％。女性患儿肺炎链球菌的分离率显著高于男性（x^2=4．63，P〈0．05），而肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌在男性中的分离率均高于女性（x^2=5．71，4．57，P〈0．05）。年龄分布显示，1～3岁是肺炎链球菌和流感嗜血杆菌的好发年龄段，而肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和阴沟肠杆菌以及非常见菌感染则在1岁以内的婴儿中多见。季节分布上，12月份至3月份是大多数细菌感染分布较集中的时段。药敏结果显示青霉素不敏感肺炎链球菌、耐氨苄西林流感嗜血杆菌、耐苯唑西林金黄色葡萄球菌和产ESBL肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌的比率分别为55．0％，16．5％，41．2％，42．6％和4．5％。结论肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌是小儿下呼吸道感染常见致病菌，但在不同年龄的感染率存在明显差异，治疗上应根据药敏结果选择敏感抗生素。

婴幼儿肺炎支原体感染41例临床分析

应用聚合酶链反应(PCR)于1995年7月～1996年7月检测下呼吸道感染住院患儿鼻咽吸出物(NPA),其中肺炎支原体(MP)DNA阳性确诊婴幼儿MP感染41例,现总结如下。

16S-23S rRNA基因区间细菌鉴定实验研究

目的 :探讨 16 S- 2 3S r RNA基因区间对细菌鉴定的应用。方法 :以 16 S- 2 3S r RNA基因区间为靶序列设计引物 ,采用聚合酶链反应检测标准菌株及临床菌株 DNA。结果 :对 2 7株代表 2 7个菌种的标准菌株进行 PCR扩增 ,分别出现不同的 DNA图谱 ,该图谱能直接或经核酸内切酶处理后用于细菌分类 ,敏感性可达 2 .5 CFU/ml的细菌 ,与人外周血白细胞 DNA和真菌及病毒无交叉。 32株临床细菌标本均扩增出与相应标准菌株一致的图谱。结论 :16 S- 2 3S r RNA基因区间 PCR扩增技术检测细菌 ,具有敏感、特异、快速、准确的优点 。

新生儿败血症及败血症休克时血清IL-6、IL-6mRNA表达水平的研究

为探讨血清IL_6水平变化在新生儿败血症中的意义 ,采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测正常与严重感染新生儿血清IL_6值 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT_PCR)技术测定外周血单个核细胞 (PBMC)IL_6mRNA表达情况。结果 :血清IL_6水平以败血症休克组最高 ,败血症组次之 ,恢复期迅速下降 ;检测5例败血症新生儿PBMC均见IL_6mRNA表达 ,而6例对照新生儿中仅3例有IL_6mRNA表达 ;按百分位数法初步确定血清IL_6≥23ng/L为诊断新生儿败血症的参考指标 ,此指标敏感性为81% ,特异性为83 %。提示新生儿败血症及败血症休克早期血清IL_6水平升高、IL_6mRNA表达增强 ,与病情、预后有关 。

应用CLSI新的折点值标准判读儿童分离的肺炎链球菌非脑膜炎株的耐药性

目的应用美国临床和实验室标准化研究所(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)新的折点值标准,比较2001—2002年和2008年儿童分离的肺炎链球菌非脑膜炎株对青霉素及其它抗生素的耐药情况。方法肺炎链球菌的药物敏感试验采用Kirby-Bauer法,青霉素最低抑菌浓度检测采用E-test法,药敏结果参照2010年CLSI M100-S20版指南判读;组间率的比较采用χ2检验。结果 2008年度83.7%的菌株对青霉素敏感,15.1%中介,1.2%耐药,青霉素MIC50和MIC90分别为1.0μg/mL和3.0μg/mL;2001～2002年97.5%的菌株对青霉素敏感,2.5%中介,无耐药株,青霉素MIC50为0.064μg/mL,MIC90为1.5μg/mL,两者耐药率有显著性差异(χ2=23.48,P<0.05)。所有菌株对万古霉素敏感。菌株对红霉素的耐药率最高,在两个时期分别达92.2%和91.4%。结论本地区2008年度分离的肺炎链球菌对青霉素的敏感率较2001～2002年明显下降,但总体敏感率仍维持在较高水平,青霉素仍可作为治疗该菌颅外感染的一线有效药物。

人感染埃博拉病毒的研究进展

2014年3月23日WHO宣布几内亚埃博拉病毒(Ebola virus)感染所致的埃博拉病毒病,又称埃博拉出血热(Ebola hemorrhagic fever,EHF)暴发,并在几内亚首都科纳克里和利比里亚和塞拉利昂的边界也出现EHF疑似病例[1]。感染者的血标本经PCR方法检测到埃博拉病毒,从L基因的部分序列的初步结果表明与扎伊尔埃博拉病毒的同源性高[2]。至今包括几内亚、利比里亚和塞拉利昂西非国家发生人感染埃博拉病毒疫情暴发,被定性为'埃博拉病毒史上最致命性暴发',尤其是1名美国籍感染者在2014年7月20日从利比里亚乘飞机来到尼日利亚,并于5天后病故于拉各斯,提示埃博拉病毒可能随感染者乘飞机扩散至世界各地,2014年8月1日WHO将西非地区人感染埃博拉病毒疫情应急反应级别提高至第3级(最高级别)。经全基因组测序以及系统进化的分析表明,来自几内亚的埃博拉病毒是一种新型变异株,形成一个独立的分支,与已知的来自刚果和加蓬共和国的埃博拉病毒株有关联[2]。