基于多成分定量比较厚朴姜制前后化学成分的变化

目的比较厚朴姜制前后化学成分变化,分析不同姜制方法对厚朴化学成分的影响,为其临床应用提供参考依据。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定厚朴酚与和厚朴酚含量,《中国药典》四部附录挥发油测定法甲法测定挥发油含量,可见分光光度法(UV)测定多糖及鞣质的含量,并采用多重比较进行统计分析。结果与厚朴生品比较,4种姜制品中的厚朴酚、和厚朴酚、鞣质含量均有不同程度的增加,且与厚朴生品之间差异均有统计学意义(P<0.05);姜炙品、姜煮品与生姜紫苏制品中的挥发油和多糖含量均降低,姜浸品则明显升高,且4种厚朴姜制品中除生姜紫苏制品的挥发油含量变化不明显,其他3种姜制品的多糖与挥发油含量较生品差异均有统计学意义(P<0.05)。4种厚朴姜制品中的5种成分含量两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。姜炙品和姜煮品的各类成分变化趋势一致。结论厚朴姜制前后多种化学成分发生了不同程度的改变;厚朴姜炙品和姜煮品在临床上可作为同一种炮制品应用,而厚朴姜浸品和生姜紫苏制品炮制后药性变化及功效具有何特点尚需进一步研究。

基于口尝和电子舌技术探讨味道检测在黑顺片质量评价中的实用价值

目的:通过口尝和电子舌技术,结合胆巴含量,研究味道检测在黑顺片质量评价中的实用价值。方法:通过口尝和电子舌检测饮片味道,利用主成分分析(PCA)和Fisher模型分析市售黑顺片味道差异,利用偏最小二乘法(PLS)建立口尝评价和电子舌传感器数值的关系模型,建立电子舌CTS(咸)传感器与胆巴含量线性回归方程。结果:采集的样品中有84%具有咸涩味,与《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2015年版规定的“味淡”不一致。电子舌技术结合PCA和fisher模型可明显区分“味淡”饮片与其余27批黑顺片。电子舌CTS(咸)传感器响应值(X)与胆巴含量(Y)线性回归方程为Y=-19.013+0.025 X(r=0.9304)。结论:电子舌能够快速准确辨别黑顺片是否符合《中国药典》2015年版“味淡”的要求,由CTS(咸)传感器响应值可推测出对味道影响较大的胆巴的含量,味道检测在黑顺片质量评价中具有实用价值,可以作为中药饮片质量评价的补充。

基于UPLC指纹图谱、含量测定及化学计量学的乳香质量评价

目的建立指纹图谱、5种乳香酸的含量测定及化学计量学相结合的乳香质量评价方法。方法采用UPLC法建立乳香指纹图谱,测定其中11-羰基-β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸、α-乳香酸、β-乳香酸、3-乙酰基-β-乳香酸的含量;基于指纹图谱共有峰峰面积结果,采用聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)的化学计量学方法评价乳香整体质量。结果乳香UPLC指纹图谱共确定24个共有峰;5个乳香酸类成分在各自浓度范围内线性关系良好(r≥0.9994),26批样品中11-羰基-β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸、α-乳香酸、β-乳香酸、3-乙酰基-β-乳香酸的含量分别为3.12%~5.63%、7.48%~15.33%、1.29%~2.08%、2.72%~6.23%、2.91%~6.84%。26批乳香聚为3类;主成分分析得到4个影响乳香质量评价的主要因子;偏最小二乘判别分析显示11-羰基-β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸、β-乳香酸等10个成分含量对乳香质量有较大影响。结论所建立的方法稳定、可靠,能较全面地反映并评价乳香的整体质量,为乳香的质量控制提供参考。

基于形性、化学、生物活性相关联优选黄芩炭炮制终点

目的:基于抗炎药效挖掘黄芩炭炮制过程的形性、化学、生物指标变化规律及其内在关联,寻找黄芩炭炮制终点判断的客观量化指标。方法:改变加热温度或时间以制备不同炮制程度的黄芩炭,使用色差仪测定饮片粉末色度值(L^(*)、a^(*)、b^(*))作为形性指标;HPLC测定浸膏中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量作为化学指标;以黄芩炭浸膏对LPS诱导的Raw264.7细胞释放NO、IL-6的抑制率作为生物指标。通过多元统计方法分析三类指标之间的关联性。结果:随着加热程度的增加,黄芩炭饮片颜色逐渐加深,L^(*)、b^(*)持续降低,a^(*)先增后减;黄芩炭饮片及其浸膏中的黄芩苷、汉黄芩苷持续减少,黄芩素、汉黄芩素先增后减;黄芩炭浸膏对IL-6的抑制率先增后减,过度加热时对NO的抑制率明显降低。相关性分析与主成分分析显示,黄芩炭饮片的L^(*)、b^(*)、黄芩苷、汉黄芩苷之间具有正相关关系,a^(*)、黄芩素、汉黄芩素之间具有正相关关系,NO抑制率、IL-6抑制率与前述两组指标均具有一定的相关性。综合三性指标结果,150℃炒制50 min、150℃炒制60 min、180℃炒制30 min、210℃炒制20 min的黄芩炭炮制适中。结论:黄芩炭炮制过程的形性、化学、生物指标具有明显的变化规律与相互关联。根据细胞抗炎药效,黄芩素、汉黄芩素含量达到极大值时为黄芩炭炮制终点,而此终点可以通过a^(*)达到极大值进行快速判断。

联合体内外多维化学物质组和分子对接策略的炮附子抗炎药效物质基础研究

目的挖掘炮附子Aconiti Lateralis Radix Praeparata潜在的抗炎药效物质基础。方法采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS)鉴别炮附子的体内外多维化学物质组;通过蛋白互作网络、拓扑学分析以及相关文献筛选疾病靶点并结合分子对接技术筛选与目标蛋白结合良好的化合物。结果鉴定了炮附子中53个化学成分、37个入血成分;确定Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)受体、纤溶酶原(plasminogen,PLG)受体为关键靶蛋白,发现卡拉可林、宋果灵、海替生、易混翠雀花碱、黄草乌碱丁、绣线菊碱C、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、三小叶翠雀碱E、裸翠雀亭等21个化合物为炮附子潜在的抗炎药效物质。结论所建立的方法充分考虑中药饮片化学成分的复杂性,从多个层次逐步推进,方便快捷地筛选出炮附子潜在的抗炎药效物质,可为中药药效物质筛选提供借鉴。

基于HPLC特征图谱、UPLC-Q-TOF/MS定性及多成分定量的黄芩酒炙前后化学成分变化研究

目的比较黄芩酒炙前后化学成分变化,为建立全面的黄芩饮片质量评价方法提供参考。方法HPLC法建立黄芩片、酒黄芩的特征图谱,并生成对照特征图谱,标定共有峰并进行相似度评价。采用UPLC-Q-TOF/MS定性分析黄芩酒炙前后化学成分,利用UPLC-TQMS对2种饮片中11种黄酮类成分(黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A、千层纸苷、野黄芩苷、芹菜素、高车前素、木犀草苷、白杨素)进行定量分析,并以含量为变量进行多元统计分析。结果建立了黄芩片、酒黄芩的特征图谱,标定9个共有峰,2种饮片相似度均在0.947以上。在黄芩饮片中,共发现50种成分,通过多级质谱数据分析,保留时间匹配,并结合对照品及数据库检索,鉴定了其中44种成分。UPLC-TQMS定量结果显示酒炙后黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷等黄酮苷类成分含量略有下降,黄芩素、汉黄芩素等黄酮苷元类成分含量稍有增加。经多元统计学分析,2种饮片有明显的分离趋势,载荷图结果表明黄芩苷、汉黄芩苷、千层纸苷的含量差异可能是引起黄芩酒炙前后化学成分变化的主要因素。结论黄芩酒炙后没有新增或消失成分,但成分含量有所变化。所建立黄芩饮片的定性、定量方法重现性好,分析快速、准确,可用于黄芩饮片酒炙前后的质量评价。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap/MS的姜黄连炮制前后化学成分比较研究

目的 分析姜黄连的化学成分,在物质基础层面探究姜炙对黄连的影响。方法 采用Waters Acquity UPLC BEH C;色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,利用LTQ-Orbitrap/MS正、负离子模式采集数据,通过高分辨质谱数据解析,对姜黄连的化学成分进行定性分析。结果 黄连、姜黄连和生姜汁中共鉴定出34种化合物,其中归属于黄连25种、姜黄连32种、生姜汁9种;黄连和姜黄连的共有成分25种,黄连姜炙后新增7种姜辣素类物质,均为生姜汁中的成分。结论 黄连姜炙后化学成分发生变化,新增了7种姜辣素类成分,为姜黄连的药效物质基础研究提供参考。

仲景炮附子对慢性心力衰竭的治疗作用及机制研究

目的研究仲景炮附子Aconiti Lateralis Radix Preparata对慢性心力衰竭(CHF)的治疗作用,并采用超高效液相色谱四级杆静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-QE-Orbitrap-MS)测定仲景炮附子水煎液的成分,结合网络药理学探究其治疗CHF的作用机制。方法采用ip盐酸阿霉素构建大鼠CHF模型,ig给予仲景炮附子水煎液(3.3 g·kg^(-1))16d后,试剂盒法检测血清脑钠素(BNP)含量、心肌组织Ca^(2+)-ATP酶和Na^(+),K^(+)-ATP酶活性,苏木素-伊红(HE)染色后镜下观察左心室组织病理学形态变化。采用UPLC-QE-Orbitrap-MS测定仲景炮附子水煎液的成分,借助Swiss Target Prediction、DrugBank、Gene Cards、OMIM、TTD等平台预测仲景炮附子治疗CHF的作用靶点,利用Cytoscape软件构建相关作用网络,并对核心基因进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果与对照组比较,模型组大鼠出现稀便、腹水、体质量减轻等现象;血清BNP水平显著升高(P<0.01);Ca^(2+)-ATP酶、Na^(+),K^(+)-ATP酶活力均有降低趋势;左心室心肌组织切片出现明显的心肌纤维断裂,心肌间隙增宽,出现部分空泡变性等病理变化。与模型组比较,仲景炮附子水煎液组大鼠稀便情况得到一定程度改善,腹水和体型消瘦情况改善不明显;BNP水平显著降低(P<0.05);Ca^(2+)-ATP酶、Na^(+),K^(+)-ATP酶活力均有升高趋势;左心室组织病理学形态有明显改善。采用UPLC-QE-Orbitrap-MS共鉴定出仲景炮附子水煎液主要成分52个。通过网络药理学预测得到仲景炮附子治疗CHF活性成分43个,活性成分靶点472个,CHF疾病靶点1063个,活性成分与疾病交集靶点68个;网络分析结果表明,仲景炮附子可能通过作用于信号转导与转录激活子3(STAT3)、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、MAPK1等关键靶点发挥抗CHF作用,涉及到RAS相关蛋白1(Rap1)、磷脂酰肌醇3'-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路。结论仲景炮附子对阿霉素诱导的慢CHF有一定的治疗作用,可通过多成分、多靶点、多途径发挥作用。