一株具有多种毒力基因的粪肠球菌噬菌体的研究分析

以之前分离出的奶牛乳房炎源粪肠球菌SL22为宿主菌,从临床型乳房炎乳样中分离纯化噬菌体,对其进行生物学特性分析、小鼠治疗试验及毒力基因与耐药基因检测。结果分离到1株噬菌体,该噬菌体形成的噬菌斑如针尖状,电镜下发现该噬菌体无尾,头部呈对称多面体,直径约66 nm,将其命名为vB_Eco T_PSL22(简称PSL22);只裂解其宿主菌,核酸类型为dsDNA;最佳感染复数为0.1,裂解量约为52 PFU/cell;在p H4.0~12.0时活性稳定,能耐受60℃左右高温。对小鼠治愈率为33.33%(2/6),含有2个耐药基因(Acc和aac(3)-Ⅳ)和4种毒力基因(gelE、cylA、ace和efaA)。通过本次试验,可为临床型乳房炎奶牛乳房中噬菌体的多样性研究提供参考,也可为研究奶牛乳房中的微生态系统提供依据。

奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了了解新疆石河子地区奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的耐药表型及耐药基因携带情况,试验对采自石河子地区2个规模化奶牛场患乳房炎奶牛的乳样进行细菌分离,使用种特异性引物对分离株进行鉴定,并采用纸片琼脂扩散法、最小抑菌浓度(MIC)测定法和PCR方法对分离得到的金黄色葡萄球菌的耐药表型和耐药基因进行检测。结果表明:从患乳房炎奶牛的138份乳样中共分离出74株金黄色葡萄球菌,镜检为阳性球菌,经PCR扩增确定为金黄色葡萄球菌,分离率为53.62%(74/138)。所有分离株均有不同程度的耐药性,对万古霉素、甲氧西林、磺胺甲口恶唑、林可霉素、青霉素、恩诺沙星的耐药率分别为97.30%、82.43%、79.73%、71.62%、67.57%、67.57%,其他9种药物的耐药率为16.22%~59.46%;对庆大霉素和多西环素两种药物的敏感性较高,分别为52.70%、74.32%。耐3种及以上抗生素的菌株占90.54%,耐9种及以上抗生素的菌株占56.75%,其中1个分离株对所有检测的抗生素均耐受。74株分离株中共检测到blaZ、linA、ermB、aacA-aphD、aac6-aph2、aph(3′)-a和tetM 7种耐药基因,其中氨基糖苷类耐药基因aacA-aphD检出率最高,为8.10%,其余耐药基因的检出率在2.70%~4.05%之间。说明新疆石河子地区奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌普遍耐药,且多重耐药现象较为严重,建议临床上根据药敏试验结果科学治疗奶牛乳房炎。

1株羊源多重耐药肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析

【目的】多重耐药病原菌的出现对公共卫生安全构成严重威胁,本试验拟对1株羊源多重耐药肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行生物学特性和基因组特征分析,为寻找可用于防治肺炎克雷伯菌感染的噬菌体制剂提供参考。【方法】以羊源多重耐药肺炎克雷伯菌分离株YH-2为宿主菌,采用双层琼脂平板法从粪污样品中分离纯化噬菌体,通过透射电镜观察其形态;测定噬菌体宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、热稳定性、酸碱耐受性等生物学特性;基于全基因组测序对其基因组特点进行分析。【结果】试验成功分离到1株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体,命名为vB_KpnP_PYH-2(简称PYH-2),电镜观察发现PYH-2属于短尾噬菌体科,其噬菌斑中心透亮,周围有晕圈。随着培养时间的延长,晕圈会向四周扩散。噬菌体PYH-2不仅可以裂解1株羊源肺炎克雷伯菌,还能裂解5株奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌。噬菌体PYH-2的最佳MOI为0.001,潜伏期为15 min,爆发期为10 min,裂解量为63 PFU/cell;在40~50℃和pH 4.0~12.0的环境下均能保持稳定活性。噬菌PYH-2基因组全长45958 bp,GC含量为51.86%,不含耐药基因及毒力基因;全基因组中包含52个开发阅读框(ORFs),只有21个为已知功能基因,其中尾部相关蛋白有6个。【结论】本研究分离到1株潜伏期短、生物特性稳定、能高效杀菌的噬菌体,可作为裂解动物源肺炎克雷伯菌的噬菌体候选毒株,为噬菌体防治多重耐药性肺炎克雷伯菌感染奠定了基础。

2022—2023年新疆部分地区猪伪狂犬病毒抗体检测及分析

试验旨在了解2022—2023年新疆部分地区猪群中伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染情况和免疫抗体水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对新疆6个地区13个规模化养猪场的510份血清样品分别进行了PRV-gE和PRV-gB两种蛋白的抗体检测。结果显示,2022—2023年,新疆部分地区的猪群平均PRV-gE蛋白抗体阳性率为21.76%(111/510),不同地区与不同规模化养殖场间的平均PRV-gE蛋白抗体阳性率存在较大的差异。新疆地区规模化猪场平均PRV免疫抗体阳性率为59.41%(303/510),低于国家规定标准(70%),仅有38.46%(5/13)的猪场免疫抗体阳性率达到了国家规定标准,不同地区与不同规模化养殖场间的PRV免疫抗体阳性率存在较大的差异。研究表明,2022—2023年新疆部分地区PRV野毒感染率仍处于较高水平,免疫合格率较低,存在较大的风险,需加强对PRV的免疫防控工作。

潜在的人兽共感染脓肿分枝杆菌研究进展

脓肿分枝杆菌(Mycobacterium abcscessus,MAB)是一种高度耐药的机会致病菌,也是最主要的快速生长型非结核分枝杆菌。在动物医学领域,目前尚缺乏对MAB的相关研究。本文对医学领域的MAB生物学特性、耐药性、感染特性和诊断方法等方面的研究进展进行综述,分析MAB的人兽共感染风险,提出在动物医学领域应深入开展相关调查研究,包括深入研究MAB在不同宿主中的致病机理和免疫逃逸机制,加强对野生动物和家畜的MAB监测和流行病学调查,强化跨学科合作,探索有效的预防和控制措施,旨在系统回顾文献的基础上,提高对MAB在“同一健康”理念上的相关认知,减少MAB对人类和动物生命健康的危害。

2022-2023年新疆部分地区猪圆环病毒2型抗体检测及分析

研究旨在了解2022—2023年新疆部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平,以期为该病的科学防控提供参考。试验采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对来自3个地区11个猪场的296份血清样品进行PCV2抗体检测。结果显示,PCV2抗体平均阳性率为85.47%(253/296),高于国家规定标准(70%);在调查的11个规模化猪场中,除A场和C场的PCV2抗体水平未达到国家规定标准外,81.82%(9/11)的猪场PCV2抗体水平均达到群体免疫的抗体水平和免疫标准。研究表明,新疆地区猪场PCV2的整体免疫效果较好,但部分猪场的PCV2抗体水平较低,需要对现有免疫程序进行调整和完善,确保各猪群健康。

不同饲喂方式对断奶仔猪生长性能和健康状况的影响

试验旨在研究液态和固态两种不同饲喂方式对断奶仔猪生长性能和健康状况的影响。将断奶后健康状况良好且体重较均一的360头“杜×长×大”三元仔猪随机分为对照组和试验组,每组5个重复,每个重复36头仔猪。对照组饲喂固态饲料,试验组饲喂水料比2.5∶1的液态料。试验期40 d。结果显示:试验组断奶仔猪的平均日增重较对照组提高了17.82%(P<0.05),平均日采食量提高了13.11%(P>0.05);成活率较对照组提高了1.41%,腹泻率降低了30.51%。试验第7 d时,试验组断奶仔猪腹泻率比对照组降低了16.64%;随着饲养日龄逐渐增加,两组的腹泻率均呈不同趋势逐步降低;试验第40 d时,试验组和对照组断奶仔猪的腹泻率分别为0.46%、1.16%。不同饲喂方式对断奶仔猪的毛况和肤色影响不显著(P>0.05),但具有一定的改善趋势。研究表明,液态饲喂对断奶仔猪的生长性能和健康状况均具有一定的改善作用。

一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

为了分离一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体,对抗多重耐药细菌,试验从健康鸡粪便中分离富集噬菌体,采用双层琼脂平板法纯化、增殖,超速离心法浓缩,利用透射电镜观察噬菌体形态,通过提取噬菌体基因组、酶切、电泳确定核酸类型,同时测定噬菌体的宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱及热稳定性等生物学特性。结果表明:从鸡粪中分离得到1株裂解性噬菌体,命名为PSP2-22。该噬菌体头部直径为(60±5)nm,尾部长为(130±5)nm,为长尾噬菌体科;核酸类型为双链DNA。该噬菌体不仅能裂解鸡白痢沙门氏菌,还可裂解鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌;最佳感染复数为0.1;平均裂解量约为136 pfu/cell,效价最高可达9.83 lg pfu/mL;在pH值6~11时相对稳定,70℃作用60 min之后仍具有一定活性。说明噬菌体PSP2-22是一株对不同温度和pH值有较强适应能力的双链DNA噬菌体,宿主谱相对较宽,具有潜在的应用价值。

一株致病性临床型乳房炎源粪肠球菌SL22的分离与鉴定

为了解北疆某规模化奶牛场临床型乳房炎源粪肠球菌的耐药与毒力情况,采集了47份临床型乳房炎乳样进行细菌分离,通过生化鉴定及16S rRNA对粪肠球菌进行鉴定,进行了药敏试验及33种耐药基因检测,了解其耐药情况;通过小鼠LD50、病变观察及6种毒力基因检测,了解其致病性。分离鉴定出了1株粪肠球菌,命名为SL22;遗传进化树构建中,与粪肠球菌菌株MD48、MD60(GenBank登录号分别为MW5784.17.1、MW5784.16.1)同源性为92.00%;在哥伦比亚血平板上具有溶血现象,为α溶血;在耐药情况检测中,SL22对青霉素G、杆菌肽耐药,对万古霉素等药物敏感,含有4种耐药基因(qnrD、floR、aac(6’)-lb-cr、int I 1);在毒力测定中,SL22对小鼠的LD50约为1.6×10^(9)CFU/只,死亡小鼠肝脏、小肠出血明显,且含有4种毒力基因(gelE、cylA、ace、efaA)。本试验为奶牛乳房粪肠球菌感染的防治提供了参考。

2021年新疆部分地区猪圆环病毒2型抗体检测及分析

为了了解2021年新疆部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平,以期为该病的科学防控提供参考。本试验采用间接ELISA (酶联免疫吸附试验)对来自3个地区7个猪场的201份血清样品进行PCV2抗体检测。结果显示,PCV2抗体平均阳性率为87.06%(175/201),高于国家规定标准(70%),抗体的平均离散度为0.77;在调查的7个规模化猪场中,所有猪场的PCV2抗体阳性率均达到国家规定标准,表明新疆地区猪PCV2的免疫效果较好,但一些猪场的PCV2抗体的S/P值变异系数偏大,免疫抗体S/P值参差不齐,需要对现有免疫程序进行调整和完善。本试验为新疆地区猪PCV2的防控工作提供一定的参考。

2021年新疆部分地区规模化猪场猪瘟病毒抗体检测及分析

为了解2021年新疆部分地区规模化猪场的猪瘟病毒(CSFV)抗体水平,本试验采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对来自新疆6个地区13个规模化猪场的513份血清样品进行猪瘟病毒抗体水平检测。结果显示,CSFV抗体平均阳性率为73.88%(379/513),高于国家规定标准(70%);除1号和3号地区外,其余4个地区的CSFV抗体平均阳性率均达到国家规定标准;61.5%(8/13)规模化猪场的CSFV抗体阳性率高于国家规定水平,有3个养殖场CSFV抗体阳性率较低,且抗体离散度较大。表明新疆部分地区规模化猪场的CSFV整体免疫效果较好,不同地区及不同养殖场间CSFV抗体水平存在明显差异,个别地区和养殖场的CSF发病风险高,需对现有的免疫程序进行调整和完善。本试验可为新疆部分地区的CSFV防控工作提供一定的参考。

2021年新疆部分地区规模化猪场O型口蹄疫病毒抗体检测与分析

为了解2021年新疆不同地区规模化猪场O型口蹄疫的免疫水平,本试验采用液相阻断酶联免疫吸附试验(LPBELISA)方法对采自3个地区的7家规模化猪场的353份血清样品进行抗体检测与分析。结果显示,O型口蹄疫病毒抗体平均阳性率为76.77%(271/353),达到国家规定标准(70.00%);3个地区的O型口蹄疫病毒抗体阳性率均高于70.00%;7个猪场中,仅有B场的抗体阳性率为62.96%,低于国家规定标准,该场需要及时加强免疫,并科学合理地调整其免疫程序。本结果可为新疆地区猪场O型口蹄疫的防控提供依据。

一株奶牛乳房炎源链球菌噬菌体P27的分离及生物学特性分析

本试验旨在分离奶牛乳房炎源链球菌裂解性噬菌体,并对其进行生物学特性测定及比对分析。以实验室保存的奶牛乳房炎源链球菌为宿主菌,从新疆石河子地区奶牛场粪便、污水及奶牛饮用水中分离纯化裂解性噬菌体。利用双层琼脂平板法测定其裂解能力、最佳MOI、一步生长曲线的变化、热稳定性、酸碱耐受性等,并对结果进行比对分析。本试验中分离纯化出了1株裂解性噬菌体。使用透射电子显微镜观察P27其头部长约76.2 nm,尾长约153.1 nm,为常见的肌尾噬菌体,将其命名为vB_SMC_P27(简称P27)。P27最佳MOI为10℃、60℃下50 min活性丧失;在pH4.0~12.0时,噬菌体P27活性未有明显下降;裂解量约为156 PFU/cell,潜伏期约为15 min,爆发期约为140 min。其对奶牛乳房炎源链球菌的裂解率为33.33%(6/18)。P27裂解效果较好,增殖迅速,在生产中具有防治奶牛乳房炎源耐药链球菌的潜力。

戊型肝炎流行病学研究进展

戊型肝炎(hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)引起的病毒性肝炎,主要经粪-口途径传播,多呈散发性流行,也可引起暴发性流行.随着对HEV动物宿主研究的开展,已在多种动物中检测到抗HEV抗体或病毒RNA,同时也发现多起因生食或半生食肉制品发生人员感染的病例,已经证实HE是一种新出现的人兽共患病毒病[1-2].在散发病例中,HE占急性肝炎总数的10%～20%.HEV主要侵害青壮年,常表现为暴发型肝炎,孕妇感染后病死率可达到20%.……

绵羊肺炎支原体PCR检测方法的建立

为检测绵羊肺炎支原体感染,根据公开发表的绵羊肺炎支原体16SrRNA序列设计特异性引物,建立了PCR诊断方法。通过对绵羊肺炎支原体标准株、临床分离株、丝状支原体山羊亚种及临床病羊鼻拭子的检测。发现应用该检测方法能够对标准株、分离株和临床病羊鼻拭子扩增出特异性产物,而对丝状支原体山羊亚种则扩增不出。证实所建方法在绵羊支原体性肺炎的诊断上具有特异性、相对快速、简便等优点,值得在临床中推广应用。

新疆一株滑液囊支原体的分离鉴定及遗传进化分析

为初步了解新疆地区滑液囊支原体的发病及流行情况,对新疆地区某疑似感染滑液囊支原体(My⁃coplasma synoviae,MS)的肉鸡场的病鸡进行剖检观察、病原菌分离培养和基因测序,并对其16S rRNA测序结果进行遗传进化分析。通过病原分离培养、16S rRNA基因序列测序比对,结果表明该病例为MS感染。将分离所得菌株命名为XJMS-yb1,对XJMS-yb1的遗传进化分析显示,其与现已分离得到的MS菌株同源性较高。本试验为新疆地区MS的进一步研究提供了科学依据。

人工孵化后期死亡鸡胚的细菌分离试验

对后期死亡鸡胚的卵黄囊和肝脏进行细菌分离纯化 ,通过生化试验进行初步鉴定。在 15枚死胚中 ,大肠埃希氏菌 (EscherichiaColi)的检出率为 33.3% ,鸡白痢沙门氏菌 (SalmonellaPullorum)检出率为 40 %。

猪源戊型肝炎病毒基因IV型ORF3编码蛋白的表达及鉴定

通过PCR从已构建的猪源戊型肝炎病毒全基因克隆扩增ORF3全基因,将扩增产物插入到pMD18-T载体中,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-ORF3表达载体,转入E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。Ni-NTA层析柱纯化表达蛋白,用SDS-PAGE、免疫印迹、ELISA等方法分析鉴定表达产物。结果成功扩增到345bp的目的基因;构建了重组表达载体pET28a-ORF3;转化宿主菌E.coliBL21(DE3)后表达产物的相对分子质量在6.50～16.5kDa之间,与预期表达的目的蛋白相对分子质量相符;表达的目的蛋白能与阳性猪源和人源血清发生特异性反应,证实其具有较好的反应原性。

兔链球菌的分离与鉴定

对石河子某种兔场采集到的病死兔组织和病死兔的母乳进行细菌分离,通过形态鉴定、生化鉴定、药敏试验、动物致病性试验等一系列微生物学诊断,证实兔链球菌感染是引起死亡的主要原因。根据药敏试验结果对其进行针对性治疗,使病情得到有效控制。

新疆某肉种鸡场鸡胚与种蛋的细菌分离及初步鉴定

本试验分别对鸡胚、弱雏及种蛋进行细菌分离。从鸡胚与弱雏的卵黄囊和肝脏、种蛋的卵黄进行细菌的分离纯化,通过常规的生化鉴定,发现鸡胚与弱雏带菌率均为100%,其中大肠埃希氏菌的检出率56.0%,沙门氏菌的检出率为28.6%;种蛋带菌率为96.7%,其中大肠埃希氏菌的检出率为56.7%,沙门氏菌的检出率为30%。对分离细菌进行了药敏试验,提出了相应的防治措施。