教学阅片在检验医学科血液体液住院医师规范化培训中的实践探索

教学阅片是以临床病例的图像信息为教学内容,在指导医师的指导下,以住院医师为主体,将理论知识与临床病案和图像信息相结合的教学活动。该文以《住院医师规范化培训教学阅片指南(2022年版)》为依据,结合检验医学专业《住院医师规范化培训内容与标准(2022年版)》在血液体液亚专业尝试开展了教学阅片活动,探索教学阅片教学模式的应用。通过制定详细的教学阅片计划、充分的准备工作,顺利开展教学阅片活动。这种互动式的教学方式激发了住院医师的学习热情,全面锻炼了其分析问题和解决问题的能力,强化了学习效果,得到住院医师的一致好评。在整个教学阅片准备与实施的过程中,指导医师不但提高了专业知识和授课技能,也增进了与住院医师的沟通和交流,真正实现了教学相长的目标。

报告单分析在检验医学科免疫亚专业住院医师规范化培训中的应用探索

报告单分析是检验医学科住院医师规范化培训非常重要的教学活动,目前尚无相关指南性文件。北京大学第一医院根据《住院医师规范化培训基地标准(2022年版)》检验医学科培训细则要求,在检验医学科免疫亚专业进行报告单分析的教学活动,增强了住院医师的工作能力,使其收获成就感并提升自信心,住院医师普遍反馈良好。该教学活动形成“计划-准备-实施-效果评价-改进”全流程闭环管理,促进检验医学科住院医师规范化培训质量的提升。

Zeste同源物2增强子在桥本甲状腺炎B淋巴细胞亚群中的表达及其抑制剂的治疗机制及效果研究

背景甲状腺自身抗体是诊断桥本甲状腺炎(HT)的标志,B淋巴细胞在HT的发病机制中发挥重要作用。Zeste同源物2增强子(EZH2)是一种表观遗传学蛋白,在淋巴细胞的发育与功能调控中扮演重要角色。目的本研究探讨EZH2在HT甲状腺组浆母细胞及浆细胞中的表达,进一步探讨EZH2抑制剂在实验性自身免疫甲状腺炎(EAT)模型中的治疗作用。方法收集北京大学第一医院2010—2020年6例行甲状腺手术的患者,取肿瘤对侧的甲状腺组织(HT及正常甲状腺组织各3例),通过RNA-seq筛选B淋巴细胞相关基因的表达情况;收集16例HT患者的甲状腺组织和8例健康对照(HD)甲状腺组织,分别利用免疫组化及免疫荧光验证EZH2在HT甲状腺组织中B淋巴细胞中的表达;收集25例HT甲状腺细针穿刺液(FNA)、19例HT外周血以及12例健康人外周血样本应用流式细胞分析检测EZH2在浆母细胞及浆细胞中的表达改变。将15只7周龄NOD.H-2^(h4)小鼠EAT模型分为对照组(n=5)、EAT无注射(n=5)或注射EZH2抑制剂GSK126处理组(10 mg/kg,腹腔注射3次/周,n=5),8周后观察甲状腺炎症程度及甲状腺球蛋白抗体(TgAb)水平的改变。结果RNA-seq结果显示,相较于正常甲状腺组织,HT甲状腺组织中EZH2水平上调,一些与B淋巴细胞表型相关的基因例如CD19、CD27、CD38、CD52相应增加。免疫组化结果显示,16例HT甲状腺组织标本中EZH2免疫组化染色均可在生发中心(GC)见到阳性细胞,呈强阳性,8例正常甲状腺组织染色中未观察到阳性细胞。HT甲状腺组织中EZH2染色高表达在GC区,EZH2特异性地表达在CD_(19)^(+)B淋巴细胞中。流式细胞术检测结果显示HT FNA样本中CD_(19)^(+)B淋巴细胞、浆母细胞及浆细胞比例均高于HD外周血、HT外周血样本(P<0.01),HT FNA样本中EZH2在CD_(19)^(+)B淋巴细胞、浆母细胞中的阳性比例高于HT外周血(P<0.005)。小鼠实验中,EAT组甲状腺的淋巴细胞浸润较对照组增加。GSK126处理组炎症程度评分和TgAb水平高于对照组,低于EAT组(P<0.001)。结论EZH2在HT甲状腺组织CD_(19)^(+)B淋巴细胞中表达异常升高,可能促进了B淋巴细胞分化成浆细胞进而促进自身抗体生成破坏甲状腺,EZH2抑制剂可以减缓EAT模型甲状腺炎症程度。浆母细胞中EZH2表达增加可能参与了HT的发病机制,EZH2可能成为治疗HT的新靶点,相关机制需要进一步深入研究。

高龄心房颤动患者抗凝治疗中国专家共识(2024)

心房颤动是高龄老年常见心律失常,显著增加心力衰竭、血栓栓塞事件及全因死亡风险。为规范年龄≥80岁高龄心房颤动患者抗凝管理,中国老年保健医学研究会血栓防治分会特制定《高龄心房颤动患者抗凝治疗中国专家共识2024》。1 高龄心房颤动特点1.1 高龄心房颤动流行病学特点心房颤动患病率随增龄而显著增加,≥80岁高龄人群心房颤动患病率显著上升,80~84岁人群患病率为6.52%,95岁以上高达8.18%。

1例c.1117C>T/c.7288-9T>G复合杂合突变所致血管性血友病家系的发病机制分析

目的探讨1例血管性血友病(vWD)家系的诊断及发病机制。方法家系收集。收集北京大学第一医院就诊的先证者及其家系成员(共4人),检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、血管性血友病因子抗原(vWF:Ag)和活性(vWF:Ac)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)、vWF瑞斯托霉素辅因子(vWF:RCo),进行瑞斯托霉素诱导血小板聚集试验(RIPA)、vWF胶原结合(vWF:CB)试验,对先证者及其家系成员进行诊断。提取先证者及其家系成员外周血基因组DNA,进行全外显子测序,分析vWF基因突变,采用生物信息分析工具进行基因突变位点致病性分析,探讨先证者发病机制。结果先证者(Ⅲ_(1))的APTT轻度延长、FⅧ:C正常、vWF:Ag、vWF:Ac、vWF:RCo和vWF:CB明显减低,1.0 mg/mL和1.25 mg/mL的RIPA无明显聚集;父亲(Ⅱ_(3))的APTT、FⅧ:C、vWF:Ag、vWF:Ac和vWF:CB均正常,vWF:RCo轻度减低;母亲(Ⅱ_(4))的APTT、FⅧ:C、vWF:Ag、vWF:RCo和vWF:CB均正常,vWF:Ac明显减低;哥哥(Ⅲ_(2))的APTT、FⅧ:C均正常,vWF:Ag、vWF:Ac、vWF:RCo及vWF:CB均不同程度减低;父亲(Ⅱ_(3))、母亲(Ⅱ_(4))和哥哥(Ⅲ_(2))的1.0 mg/mL RIPA均无明显聚集。基因分析显示先证者(Ⅲ_(1))存在vWF基因c.7288-9T>G和c.1117C>T复合杂合突变,其父亲(Ⅱ_(3))存在vWF基因c.7288-9T>G杂合突变;母亲(Ⅱ_(4))和哥哥(Ⅲ_(2))存在vWF基因c.1117C>T杂合突变。结论先证者为2A型vWD,其vWF基因c.1117C>T和c.7288-9T>G杂合突变可能是导致该先证者发病的原因。

血栓病患者凝血、抗凝和纤溶活性改变的研究

目的 观察血栓病患者凝血、抗凝和纤溶指标的变化 ,以探讨出凝血系统机能紊乱与血栓病发生的关系 ,并在此基础之上为以后临床筛查、确诊血栓病提供依据。方法 应用ACLFutura全自动凝血仪对 50例静脉血栓、51例动脉血栓病患者及 36例正常人进行凝血、抗凝及纤溶系统蛋白分子检测 ,包括凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅷ活性测定 ,蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、抗凝血酶 (AT)、纤溶酶原 (PLG)、α2 抗纤溶酶 (α2 PI)活性测定 ,D 二聚体、纤维蛋白原含量测定及狼疮抗凝物 (LA)、活化蛋白C抵抗 (APCR)的检测。结果 LA阳性者 ,正常组中有 4例 ,静脉组中有 1 6例 ,动脉组中有 1 3例。PC系统缺陷在静脉血栓病组中 ,共有 1 4例 ,分别为PC缺陷 8例 (1 9 0 % )、PS缺陷 5例 (1 1 5% )、APCR 1例 ;动脉血栓组中 ,PC系统缺陷共 1 1例 ,PC缺陷 2例 ,PS缺陷 7例、APCR 2例。结论 获得性因素LA阳性和PC系统缺陷是引起血栓病的主要原因 ,建议对于血栓患者首选这两项实验进行筛查 。

抗人血小板膜糖蛋白VI抗体的制备

目的:制备抗人血小板膜糖蛋白Ⅵ(glycoprotein Ⅵ,GPⅥ)多克隆抗体,用于建立流式细胞术(FCM)检测人血小板膜GPⅥ的方法,并观察健康人血小板表面GPⅥ表达情况。方法:以重组融合蛋白为抗原,制备抗人血小板膜GPⅥ多克隆抗体并鉴定其特异性,运用该抗体结合FCM检测101名健康受试者血小板膜GPⅥ。结果:所制备的多克隆抗体BJ010经免疫沉淀技术、ELISA双抗夹心法证实能与血小板裂解液中变性及天然血小板膜GPⅥ结合;经FCM检测证实可识别血小板膜GPⅥ。101名健康受试者血小板膜GPⅥ的平均几何荧光强度的中位数为57.7(28.8～98.0),最大值是最小值的3.5倍,性别间表达无差异。该法日内和日间变异系数分别为6.3%和8.8%。结论:成功制备获得抗人血小板膜GPⅥ多克隆抗体BJ010,并建立了FCM检测血小板膜GPⅥ的方法,该方法简单、快速,为临床研究提供了工具。

冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗术后抗血小板药物治疗监测及平均血小板体积变化

目的比较血栓弹力图(TEG)和光学比浊法(LTA)在监测冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后抗血小板药物中的相关性;观察PCI术后双联抗血小板治疗患者平均血小板体积(MPV)变化。方法回顾2013年3月至2014年5月在北京大学第一医院行PCI并接受规范双联抗血小板治疗的患者177例;回顾分析其TEG测定的二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)诱导的血小板抑制率,服用抗血小板药物前后MPV,以及其中99例患者LTA测定的血小板聚集率。结果 ADP、ARA诱导的LTA血小板聚集率与TEG血小板抑制率无相关性(P均>0.05)。氯吡格雷低反应性LTA和TEG检出率分别为30.3%和45.5%,阿司匹林低反应性检出率分别为19.2%和31.3%,低反应性检出率LTA低于TEG法(P<0.05)。177例患者中,氯吡格雷低反应组和敏感组、阿司匹林低反应性组和敏感组服药后MPV均较服药前降低(P均<0.01);服药前及服药后氯吡格雷低反应性组MPV均低于敏感组(P均<0.05);氯吡格雷及阿司匹林低反应组服药后PLT高于服药前(P均<0.05)。结论 TEG和LTA两种方法相关性较差,抗血小板药物低反应检出率均较高,值得临床医生注意;服用双联抗血小板药物后MPV降低;服药后PLT上升患者更易发生药物低反应性;MPV偏低患者氯吡格雷低反应性发生可能性更大。

尿蛋白试纸条定性与尿清蛋白/肌酐比值的相关性分析

目的对尿蛋白试纸条定性与尿清蛋白/肌酐比值(ACR)的关系进行分析,为尿蛋白试纸条定性的结果解读提供依据。方法入选2011年10月至2013年10月在北京大学第一医院心内科及神经内科住院,同时检测了尿蛋白试纸条定性和ACR的946例冠心病或缺血性脑卒中患者。尿蛋白试纸条定性采用基于溴酚蓝反应的自动干化学法。尿清蛋白浓度采用免疫比浊法检测。尿肌酐浓度采用碱性苦味酸动力学法测定。用Spearman检验分析两者的相关性。以ACR≥30 mg/g作为蛋白尿的诊断标准,评估尿蛋白试纸条定性分析对于蛋白尿诊断的特异性和敏感性。结果尿蛋白试纸条定性与ACR之间呈正相关,相关系数为0.658,P<0.01。尿蛋白试纸条阴性的患者88.5%为正常蛋白尿(ACR<30 mg/g)。尿蛋白试纸条微量的患者61.2%为正常蛋白尿,而38.8%为轻度或重度蛋白尿(ACR≥30 mg/g)。尿蛋白试纸条1+的患者87.1%为轻度或重度蛋白尿。尿蛋白试纸条≥2+的患者99.2%为轻度和重度蛋白尿。结论尿蛋白试纸条定性存在假阴性和假阳性,应结合临床进行尿蛋白定量检测。

应用血栓弹力图评价经皮冠状动脉介入治疗术后患者抗血小板药物的治疗效果

目的应用改良血栓弹力图(thrombelastography,TEG)测定不同诱导剂诱导下的血小板抑制率,分析经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术后患者氯吡格雷及阿司匹林低反应的发生率,并分析可能的影响因素。方法入选2013年3月至2014年5月在北京大学第一医院行PCI并接受规范双联抗血小板治疗的患者184例,采用改良TEG的方法分别测定静脉全血、腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)诱导及花生四烯酸(arachidonic acid,AA)诱导的TEG最大幅度(MA),计算血小板抑制率。将ADP诱导的血小板抑制率<30%定义为氯吡格雷低反应,AA诱导的血小板抑制率<50%定义为阿司匹林低反应。收集临床及实验室资料,进行分析。结果所有患者中,有65例(35.3%)存在阿司匹林低反应,63例(34.2%)存在氯吡格雷低反应,32例(17.4%)同时存在阿司匹林及氯吡格雷低反应。年龄、冠心病分型、是否合并高血压或糖尿病未影响抗血小板药物低反应的发生率。临床用药方面,质子泵抑制剂使用与否未影响抗血小板药物低反应的发生率,使用不同种类他汀类药物的患者抗血小板药物的反应相似。结论 TEG检测的抗血小板药物低反应发生率较高,常规临床因素对其影响尚未明确,需引起临床医师的关注。

皮肤T细胞淋巴瘤外周血淋巴细胞免疫表型的变化及其意义

目的探讨外周血淋巴细胞免疫表型分析在皮肤T细胞淋巴瘤中的应用价值。方法采用流式细胞术检测52例确诊皮肤疾病患者[包括31例皮肤T细胞淋巴瘤(恶性皮肤病组)、21例炎症性皮肤病(良性皮肤病组)]外周血淋巴细胞免疫表型并进行形态学检查。比较良性和恶性皮肤病淋巴细胞亚群、免疫表型特点及其外周血形态学特点。结果恶性皮肤病组CD4/CD8双阴性T淋巴细胞明显高于良性皮肤病组(P<0.05),而恶性皮肤病组B淋巴细胞百分比明显低于良性皮肤病组(P<0.05)。恶性皮肤病组中Sézary综合征亚组T淋巴细胞百分比、CD4/CD8比值以及CD4/CD8双阴性T淋巴细胞百分比高于其他恶性皮肤病亚组以及良性皮肤病组(P<0.05),B淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞百分比降低(P<0.05)。恶性皮肤病组中有14例(45.1%)免疫表型异常,有15例(48.4%)外周血淋巴细胞形态异常;良性皮肤病组中有5例(23.8%)免疫表型异常,有6例(28.6%)外周血淋巴细胞形态异常。结论外周血淋巴细胞免疫表型分析可为皮肤T细胞淋巴瘤的临床诊断提供佐证,有助其鉴别诊断。

脓毒症患者免疫功能的研究进展

近年来,脓毒症的高死亡率是重症医学中亟待解决的难题。循环往复的细胞因子风暴和持续存在的免疫抑制,使脓毒症患者治疗更加困难。随着对脓毒症病理过程研究的逐渐深入,目前认为重症感染之后,占主导地位的免疫抑制是脓毒症患者高死亡率的主要原因。运用流式细胞仪监测淋巴细胞数量、细胞因子和T、B淋巴细胞亚类的功能变化,辅助临床医生及时发现免疫紊乱,综合运用免疫激活剂和炎症抑制剂,可有效避免免疫抑制的发生,促进脓毒症患者的康复。该文着重探讨脓毒症患者免疫功能的研究进展,同时对免疫治疗进行相关阐述,望能为临床治疗脓毒症提供免疫学参考和借鉴。

3种检测系统常规血液凝固试验结果一致性比较

目的比较3种系统测定凝血酶原时间(PT)、国际标准化比值(PT-INR)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体(DD)、纤维蛋白(原)降解产物(FDP)结果的一致性,并观察质控物的基质效应。方法选取不同水平患者样本100份,采用CA7000血液凝固分析仪、Top700血液凝固分析仪、CP2000血液凝固分析仪(分别简称CA7000、TOP700、CP2000)同时检测PT、PT-INR、APTT、Fib、TT、DD、FDP,采用线性回归分析评价不同系统检测患者样本结果的相关性,计算两两系统间相对偏差。选取18种不同来源质控物在3种检测系统上同时检测PT、Fib、DD,评价质控物互换性。结果不同系统检测患者样本PT、PT-INR、Fib结果有良好的相关性(r2为0.91～0.99),两两系统间偏差分别<15%、15%、20%;3种系统检测DD的结果显著相关(r2≥0.90),CA7000、CP2000检测DD一致性好,但Top700测定结果显著低于CA7000、CP2000;不同系统检测患者样本APTT、TT结果有中度相关性(r2为0.56～0.76),且三者间测定结果有系统偏差。3种系统均采用同一品牌试剂盒及配套校准品检测FDP,系统间FDP检测结果有良好相关性(r2>0.99)。不同系统检测DD结果相关性良好(r2为0.92～0.99),但两两系统间测定结果偏差显著。18种质控物PT、Fib、DD的检测结果在3种检测系统间均无互换性。结论不同检测系统血液凝固试验检测结果一致可比程度不同,血凝质控物基质效应显著,使其在不同系统上检测结果偏差大于患者样本的检测结果。

稀释凝血酶时间试验检测血浆达比加群水平的性能评价

目的评价稀释凝血酶时间(d TT)试验用于检测血浆达比加群水平的性能,观察其是否能满足临床实验室检测需求。方法参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP15-A2、EP6-A、EP7-A及C-24文件对d TT试验检测血浆达比加群水平的精密度、正确度、分析测量范围、携带污染率、抗生物干扰进行评价,并观察血浆样品的稳定性。结果 d TT试验检测血浆达比加群水平的日内、日间变异系数(CV)均符合厂家声明的CV;3个水平美国病理学家协会(CAP)能力验证计划物质达比加群浓度与靶值的相对偏差均<10%;在30.92~249.13 ng/m L范围内d TT试验检测达比加群水平结果呈线性分布;携带污染率为-0.84%;Hb≤3 g/L、三酰甘油≤873 mg/d L、肝素≤2.2 IU/m L、FDP≤29 mg/L对d TT试验检测达比加群水平无影响;血浆样品在常温保存不宜超过4 h,4℃不宜超过4 d,-20℃不宜超过1个月,-80℃条件下可以存放半年。结论 d TT试验检测达比加群浓度的精密度、正确度、分析测量范围、携带污染率、抗生物干扰能力基本符合实验室要求。血浆样品稳定性满足临床要求。

血小板糖基化的研究进展

糖基化是蛋白质翻译后修饰的重要途径之一。通过调节蛋白质活性,糖基化参与细胞功能的发挥及疾病的发生发展。血小板糖蛋白具有丰富的糖萼,其糖基化在血小板生成、分化中发挥重要作用,与出血及血栓性疾病的发病机制密切相关,多个糖蛋白分子,如P选择素、C型凝集素样受体2、血小板内皮细胞黏附分子等的糖基化修饰均参与调控血小板的功能。该文主要综述了血小板糖基化在出血及血栓性疾病中的研究进展及主要检测方法。

嗜异性抗体所致化学发光法检测心肌肌钙蛋白I假阳性1例

1临床资料患者女,68岁。主因“左足麻木2年,加重伴间歇性跛行半年”于2017年10月入北京大学第一医院。临床表现为间断左足麻木2年,近半年加重伴跛行,腰椎核磁示L1~S1椎间盘突出,为行手术收入骨科。既往乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性30年,糖尿病病史12年。否认高血脂、卒中、外周血管疾病史;否认吸烟史及心脏病家族史。入院查体:血压130/75 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),心率105次/分,双肺呼吸音清,未闻及啰音;心界不大,心律齐,各瓣膜听诊区未闻及杂音及心包摩擦音;未见异常血管征,双下肢无水肿。实验室检查示:心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)2.790 ng/ml(参考范围0~0.03 ng/ml),肌酸激酶(creatine kinase,CK)及肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)均正常。

UniCel DxH推染片一体机染色条件的设置及效果评价

目的探索UniCel DxH推染片一体机的最佳染色条件,并对染色效果进行评价。方法通过改变瑞氏-吉姆萨复合染液的染色时间、染液配比等方法获取推染片一体机的最佳染色条件,在显微镜下观察并评价不同方法制备的血涂片的染色效果。结果延长缓冲液的染色时间可增强血涂片的着色效果,再在缓冲液中加入5%-10%的染液后可进一步提高血涂片的染色效率,且对于血细胞形态的识别可以达到手工制片染色的效果。结论在适宜的染色条件下,UniCel DxH制备的血涂片基本可以达到与手工染色相同的效果,对血细胞异常形态的识别较准确,各实验室应建立适宜的最佳染色方案。