鳖甲煎丸药物血清对PDGF诱导大鼠肝星状细胞增殖及迁移的影响

[目的]研究鳖甲煎丸药物血清对PDGF诱导的肝星状细胞(HSC)增殖和迁移的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。[方法]通过大鼠整体给药,制备浓度分别为1.5 g·kg-1、3 g·kg-1、6 g·kg-1的鳖甲煎丸药物血清,分别处理大鼠肝星状细胞HSC-T6和由PDGF-BB干预的HSC-T6,MTT法观察细胞体外增殖情况,采用Transwell小室检测细胞迁移。[结果]MTT检测结果显示,浓度分别为1.5 g·kg-1、3 g·kg-1、6 g·kg-1的鳖甲煎丸药物血清在不同血清百分比(5%、10%、20%)对HSC细胞体外增殖均有显著的抑制作用(P<0.05,P<0.01),在不同血清百分比(10%、15%、20%)对10 ng·m L-1PDGF干预24 h的HSC细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.05,P<0.01),未呈现浓度依赖关系;Transwell小室实验结果显示,10%各剂量药物血清对10 ng·m L-1 PDGF诱导的HSC细胞迁移有显著的抑制作用(P<0.05)。[结论]鳖甲煎丸药物血清对HSC-T6细胞体外增殖及PDGF诱导的HSC增殖、迁移均有显著的抑制作用,推测鳖甲煎丸可能通过抑制肝星状细胞增殖和迁移发挥抗肝纤维化作用。

不同方法建立的人大细胞肺癌裸鼠移植瘤模型的生物学特点

目的比较三种常用的皮下移植瘤造模方法建立的人大细胞肺癌NCI-H460裸鼠移植瘤模型的不同生物学特点,为不同的研究寻找合适的造模方法提供实验依据。方法分别用NCI-H460细胞,NCI-H460移植瘤组织块和移植瘤匀浆液对于BALB/c-nu/nu裸鼠建立皮下移植瘤模型,运用一般生物学指标观察三种移植瘤的成瘤率、瘤重、倍增时间和组织形态;采用全自动生化分析仪检测其外周血中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血糖(G1u)、尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)等生化指标;利用血球分析仪检测白细胞总数(WBC)并进行分类,最后体外对其腹腔巨噬细胞吞噬活性和NK细胞活性进行了考察。结果本实验中细胞法和匀浆法的成瘤率及肿瘤生长速率显著高于埋块法且其生长更为均一,差异较小。接种5周后,与正常裸鼠比较,三组荷瘤小鼠血液中ALT、AST显著升高,BUN、CREA显著降低,埋块组的AST和BUN两项指标显著高于其他两荷瘤组。此外,接种2周后,荷瘤裸鼠的GLU显著低于正常裸鼠,匀浆液组的GLU降得最低。白细胞中,三种方法组荷瘤小鼠血液中LYM%、MN%、HGB均有降低,匀浆液组和细胞培养组的荷瘤小鼠血液中WBC、NEUT%、PLT显著高于埋块组。免疫细胞活性方面,两种细胞均呈现出正常细胞组>匀浆组>细胞组>埋块组的趋势。结论细胞培养法接种数量可控,肿瘤生长均匀,适合建立不同实验需求的移植瘤模型,组织块移植法适于建立中药抗肿瘤筛选的动物模型,而匀浆液移植法则不推荐使用。裸鼠的生理生化状态和免疫功能与肿瘤的生长有密切的关系。

卵白蛋白介导白毛黑眼兔变应性鼻炎模型树突状细胞功能的改变

目的比较观察卵白蛋白(OVA)诱导的白毛黑眼兔(WHBE兔)和日本大耳白兔(JW兔)变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)模型外周血来源树突状细胞(dendritic cells,DC)的功能,揭示WHBE兔对AR敏感的可能机制。方法以OVA诱导建立WHBE兔和JW兔AR模型,每次激发后观察动物一般体征,进行鼻黏膜HE染色,观察组织病理学改变。分离外周血DC,流式细胞仪检测外周血DC表面分子CD86的表达以及DC摄取抗原的能力,同时,采用荧光定量PCR检测外周血DC甘露糖受体(mannose receptor,MR)的mRNA表达水平。进一步以CFSE标记T细胞,流式细胞仪检测外周血DC诱导T细胞增殖能力。结果一般体征和HE染色观察显示,WHBE兔和JW兔模型组动物均表现为典型的变应性鼻炎症状和组织病理学改变,提示模型构建成功。WHBE兔AR模型组外周血DC CD86的表达不仅极显著高于正常对照组,亦极显著高于JW兔AR模型组(P<0.01,P<0.01)。正常稳态下,WHBE兔外周血DC MR的mRNA相对表达量极显著高于JW兔(P<0.01),经OVA诱发建立AR模型,WHBE兔外周血DC MR的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),且显著高于JW兔模型组(P<0.05)。并且,WHBE兔模型组外周血DC摄取OVA647的能力极显著高于正常对照组(P<0.01),亦极显著高于JW兔模型组(P<0.01)。结论 WHBE兔DC对变应原更敏感,可能与其高表达抗原识别受体MR,具备更强的分化成熟、摄取抗原能力有关。

不同的人癌裸鼠移植瘤模型中磷脂酶A2的表达

目的观察磷脂酶A2(PLA2)在不同的人癌裸小鼠移植瘤模型中的蛋白表达及特征。方法分别采用肺癌、鼻咽癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、食管癌和卵巢癌肿瘤细胞株构建裸小鼠皮下移植瘤模型,待肿瘤生长至瘤体积达1 cm3后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤组织、正常组织及血清中4种主要类型PLA2(cPLA2、sPLA2、iPLA2和lp-PLA2)的蛋白表达,并以正常裸小鼠血清作对照。结果在呼吸系统、消化系统和生殖系统的8种人肿瘤细胞裸小鼠移植瘤模型中,肿瘤组织cPLA2、sPLA2、lp-PLA2的蛋白表达均显著或极显著高于正常组织(P<0.05,P<0.01),肿瘤组织iPLA2的蛋白表达均高于正常组织,除人结直肠癌细胞HT-29移植瘤模型外,均呈现极显著性差异(P<0.01)。8种移植瘤模型中,荷瘤小鼠血清中4种类型PLA2的蛋白含量均极显著高于正常小鼠(P<0.01)。结论 4种类型PLA2在呼吸系统、消化系统和生殖系统不同的裸小鼠移植瘤模型的肿瘤组织和血清中均呈现高表达,无肿瘤类型特异性,表明磷脂酶A2可能参与肿瘤的发生、发展。

WHBE兔骨髓、外周血和脾脏来源树突状细胞的比较

目的建立大耳白黑眼兔（WHBE兔）树突状细胞（Dc）体外诱生培养的经济有效的方法，为进一步实验奠定基础。方法分离WHBE兔骨髓、外周血和脾脏三种来源单核细胞分别作为DC的前体细胞，以GM-CSF和IL-4联合诱生未成熟DC，并经LPS刺激分化成熟。通过DC形态学和超微结构观察、表型鉴定以及同种异体混合淋巴细胞反应检测，比较三种DC的生物学特征和免疫功能。结果三种来源单核细胞经LPS刺激后其表面均显示出明显的树枝状突起，外周血和脾脏的DC分化速度较骨髓稍快，均能成功诱生出106～107数量级的DC，其中外周血来源获得的数量最多。CD86分子表达显著升高，脾脏来源DC的表达稍高于另外两组。具有显著刺激T细胞增殖的能力（P〈0．05），但三组之间无显著性差异（P〉0．05）。结论采集外周血单核细胞体外诱导扩增DC是获得WHBE兔树突状细胞最简便经济的手段。

日粮粗蛋白质水平对生长期实验兔生长性能和免疫功能的影响

本试验旨在研究日粮粗蛋白质水平对生长期(断奶至3月龄)实验兔生长和免疫功能的影响。选用平均初始体重为(950±90)g的40日龄断奶实验兔60只,随机分为5组(每组12个重复,每个重复1只),分别饲喂粗蛋白质水平为12%(Ⅰ组)、14%(Ⅱ组)、16%(Ⅲ组)、18%(Ⅳ组)和20%(Ⅴ组)的等消化能(10.0 MJ/kg)等粗纤维(12%)日粮,进行6周饲养试验,并测定动物生长性能、免疫学指标和相关血液指标。结果表明:幼兔日增重(y)与粗蛋白质水平(x)间存在二次回归关系(y=-0.233x2+7.637x-40.335,r=0.79,P<0.01),日粮粗蛋白质水平为16.4%时,动物日增重最大。血清胰岛素样生长因子-Ⅰ含量以Ⅲ组和Ⅳ组较高,与Ⅰ组差异显著(P<0.05)。各组实验兔的自然杀伤细胞活力、脾脏指数和胸腺指数均以Ⅴ组最高,且Ⅴ组在以上3项指标上分别相应地与Ⅰ组、Ⅰ组和Ⅱ组差异显著(P<0.05)。脂多糖刺激指数以Ⅳ组较高,且与Ⅰ组差异显著(P<0.05)。Ⅲ组刀豆素蛋白刺激指数显著或极显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05或P<0.01)。日粮粗蛋白质水平对免疫球蛋白含量无显著影响(P>0.05),而Ⅳ组的白介素-1β的浓度显著高于Ⅰ组(P<0.05)。血清一氧化氮含量和超氧化物歧化酶活性以Ⅲ组和Ⅳ组为高,与Ⅰ组差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);而丙二醛含量则与超氧化物歧化酶活性的变化规律相反。由此可知,日粮粗蛋白质水平在16.4%时可满足生长期实验兔最大生长需要,该水平略低于实验兔维持最佳免疫状态对日粮粗蛋白质的需要。

黄芩素诱导乳腺癌细胞自噬

目的:考察黄芩素诱导乳腺癌细胞的自噬作用,并初步探讨其机制。方法:采用MTT实验考察黄芩素对乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞活力的影响,确定给药剂量。Western blot检测黄芩素(25、50和100μmol/L)及联合自噬抑制剂3-MA作用下,MCF-7细胞和4T1细胞中自噬特征蛋白LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ的表达水平,流式细胞术Annexin V/PI双染法观察3-MA对黄芩素诱导MCF-7细胞和4T1细胞凋亡的影响,确认黄芩素诱导自噬的作用。通过Western blot考察自噬信号通路相关蛋白p-mTOR、mTOR、p-AKT和AKT的蛋白水平,结合AKT-mTOR激活剂EGF明确AKT-mTOR通路在黄芩素诱导乳腺癌自噬中的作用。结果:50μmol/L及其以上剂量的黄芩素可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞的活力,其作用具有显著的时效和量效性。Western blot结果表明,50和100μmol/L黄芩素作用下MCF-7细胞和4T1细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例显著增强,3-MA加入后又明显降低。流式细胞术结果显示,相比黄芩素单用组,联合自噬抑制剂可促进MCF-7细胞的坏死和凋亡。通路蛋白研究表明mTOR和AKT总量不变,其活化蛋白水平在黄芩素作用下显著降低,而加入EGF后又再次增加。结论:黄芩素可通过抑制AKT-mTOR通路诱导乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞自噬。

微卫星技术在大耳白黑眼兔近交系培育中的监测分析

利用微卫星技术监测大耳白黑眼兔(white hair black eyes rabbits,WHBE兔)近交培育中第五代(F5)、第六代(F6)和第七代(F7)的遗传多样性。选取21个微卫星座位,筛选出扩增产物稳定并且具有多态性的11对微卫星引物用于本研究。结果表明,F5代WHBE兔在每个座位上的等位基因数(Na)为3～9个不等,11个座位的平均有效等位基因数(Ne)为1.81个,平均观察杂合度(Ho)和平均多态信息含量(PIC)分别为0.381和0.524,累积个体识别率(CDP)达到100%,累积非父排除概率(CPE)在双亲信息都是未知情况下的为0.926,而在得知任一亲本信息的情况下,CPE值为0.993。F6代WHBE兔在每个座位上的Na为3～8个不等,11个座位的平均Ne为1.68个,平均Ho和PIC值分别为0.356和0.548,CDP达到100%,CPE在双亲信息都是未知情况下的为0.931,而在得知任一亲本信息的情况下,CPE值为0.994。F7代WHBE兔在每个座位上的Na为2～6个不等,11个座位的Ne为1.51个,平均Ho和PIC值分别为0.287和0.498,CDP达到100%,CPE在双亲信息都是未知情况下的为0.891,而在得知任一亲本信息的情况下,CPE值为0.986。在近交系培育过程中,从F5代到F7代,WHBE兔的平均Ne和平均Ho都呈下降趋势,提示随着近交代数的增加,WHBE兔的基因纯合度越来越高。

应用微卫星标记研究Dunkin Hartley豚鼠封闭群的遗传背景

目的检测我国现有Dunkin Hartley豚鼠封闭的遗传背景,分析评估其遗传多样性水平和遗传分离情况,为建立标准化的豚鼠封闭群监测方法提供基础资料。方法应用筛选获得的8个微卫星位点,从一个数量为1000的豚鼠封闭群中随机选择72个个体,通过PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,进行等位基因检测。并根据检测结果分析评估了该豚鼠封闭群的遗传现状。结果共检测到28个等位基因,每个座位的等位基因数为2～5个,有效等位基因数为1.5191～3.4422,平均2.3093。平均期望杂合度为0.5294。各位点多态信息含量在0.3154～0.6545之间,平均值为0.4687。有5个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡。结论豚鼠封闭群的遗传多态性处于中等水平,遗传平衡检测结果提示种群的繁殖过程未能实现完全随机交配,近交现象一定程度上存在。本研究的结果将为豚鼠封闭群遗传监测方法和标准的建立提供基础。

活体成像技术动态观测华蟾素对裸小鼠BxPC3-luc2异体移植胰腺癌的抗肿瘤作用

[目的]利用小动物成像技术,探讨华蟾素对裸小鼠Bx PC3-luc2胰腺癌的抗肿瘤作用。[方法]Bx PC3-luc2胰腺癌细胞接种于24只雄性裸小鼠皮下7d后,分成3组:即空白组、华蟾素组[6g·kg-1华蟾素(生药)]、顺铂组(2mg·kg-1DDP),每组8只,连续腹腔注射给药14d;用游标卡尺和活体生物发光成像仪分别在第7d和第14d检测各组裸小鼠胰腺癌肿瘤生长情况,并在第14d处死小鼠,取实体瘤称重。[结果]与空白组比较,华蟾素组体重无明显变化,肿瘤体积和重量明显减小,肿瘤光子量明显降低,在给药第7d和14d时,肿瘤光子量抑制率分别为30.11%和63.81%,但6g·kg-1华蟾素作用弱于2mg·kg-1顺铂,而华蟾素对小鼠体重无明显变化,具有一定的优势。[结论]华蟾素具有较好的抑制裸小鼠Bx PC3-luc2胰腺癌的作用。

束缚应激致亚健康状态大鼠的免疫功能改变与中药干预的影响

目的观察束缚应激致亚健康状态大鼠模型的免疫功能的改变，探讨中药的干预作用及其机制。方法40只雄性SD大鼠，随机分为正常对照组、模型对照组、抗衰老片组和六味地黄丸组，采用限制活动模拟人类心理应激因素，建立大鼠亚健康状态模型，同时，用抗衰老片和六味地黄丸进行干预，测定应激大鼠的免疫功能指标。结果造模21d后，模型大鼠的T淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性、IL-2和IFN-γ含量及胸腺指数均显著降低（P〈0．05）。给予抗衰老片和六味地黄丸后，模型大鼠T、B淋巴细胞增殖能力、胸腺指数、IL-2含量均显著升高俨〈0．05），NK细胞活性有升高趋势。结论束缚应激致亚健康状态大鼠模型的免疫功能下降，给予抗衰老片和六味地黄丸后，可明显提高亚健康状态大鼠的免疫功能，提示中药提高免疫功能的作用可能与调节机体细胞与体液免疫有关。

RAPD标记技术用于WHBE兔近交系培育中的遗传分析

目的探讨用随机引物扩增多态性DNA技术对大耳白黑眼兔近交系培育中的遗传监测作用。方法选用F4、F5、F6和F7代共70只WHBE兔的皮肤组织样品提取基因组DNA,用60个随机引物对基因组DNA进行PCR扩增,根据电泳结果筛选出其中25个多态性较高的引物进行RAPD-PCR分析,再利用Popgene 3.2统计软件对共检测到的584个扩增片段进行遗传分析,获得实验数据。结果①F4代扩增得到124条片段,F5代扩增得到150条片段,F6扩增得到152条片段,F7代扩增得到158条条带;其中F4代与F5代的共有条带数为105,F5代与F6代的共有条带数为119,F6代与F7代的共有条带数为125。②F4代与F5代的遗传相似度为0.7674,F5代与F6代的遗传相似度为0.7984,F6代与F7代的遗传相似度为0.8092。结论随着WHBE兔近交培育代数的增加,遗传相似度呈上升趋势,说明RAPD技术可以用于WHBE兔近交系培育的遗传检测。

中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉小鼠免疫功能调节作用的比较

目的观察中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉对小鼠免疫功能的影响。方法分别给予中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉后,测定观察对小鼠碳粒廓清功能、迟发性变态反应、溶血素抗体、淋巴细胞增殖和NK细胞活性等的影响。结果 3.0 g/kg中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉可显著提高小鼠吞噬指数和半数溶血值(P<0.01)、显著提高T、B淋巴细胞增殖能力(P<0.01,P<0.05)、显著提高NK细胞活性(P<0.05),0.5～1.5 g/kg中国被毛孢都能显著抑制小鼠耳廓肿胀(P<0.01,P<0.05),同时还能抑制脾脏和胸腺增大(P<0.01,P<0.05)。结论中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉均具有免疫调节作用,而中国被毛孢免疫抑制及增强天然免疫系统作用要优于蝙蝠蛾拟青霉,而对适应性免疫系统增强作用蝙蝠蛾拟青霉优于中国被毛孢。

不同血瘀造模对B_(16)荷瘤鼠肝转移模型的影响

目的比较不同血瘀造模对B16荷瘤鼠肝转移模型的影响。方法取60只6周龄雌性C57BL/6J小鼠,随机分为正常对照组、单纯荷瘤组、BS1(利血平法)组、BS2(游泳复合高分子右旋糖酐法)组、BS3(寒凝复合肾上腺素法)组和BS4(地塞米松复合肾上腺素法)组,首先根据中医理论用不同造模方法形成血瘀模型,然后经脾接种B16黑色素瘤建立肝转移模型。用激光多普勒观察小鼠耳廓微循环变化,并在接种后第15天小鼠眼眶取血,检测红细胞免疫功能和血清唾液酸酶(SA)含量的变化,并麻醉处死动物,观察肝转移情况。结果①单纯荷瘤组和各血瘀荷瘤组小鼠的耳廓微循环血流均明显减少(P<0.01),以BS2组降低显著。②单纯荷瘤组和各血瘀荷瘤组小鼠的红细胞免疫功能亦明显降低(P<0.01),血清SA含量显著升高(P<0.05,P<0.01),以BS2和BS3组变化明显。③肝转移发生率:单纯荷瘤组、BS2组和BS3组均为100%,BS1组为80%,BS4组为60%,肝转移抑制率:BS2组、BS3组、BS1组和BS4组分别为-71.76%、3.90%、16.42%、100.6%。④荷瘤鼠肝转移的肝重与其耳廓微循环血流、红细胞免疫功能和唾液酸酶含量具有显著的相关性(P<0.05,P<0.01)。结论不同血瘀造模对B16荷瘤鼠肝转移模型肝转移发生程度具有明显的影响,应注意血瘀模型的选择,且其与红细胞免疫功能低下有关。

解毒化浊方对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响

目的观察解毒化浊方血清对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响,探讨解毒化浊方治疗HER-2阳性乳腺癌的作用机制。方法将雌性Wistar大鼠分为对照组、中药组、西药组、联合组4组,分别给药制备含药血清,再以给药血清干预SK-BR-3细胞,采用Western blot检测HER-2、p-HER-2蛋白表达以及PI3K/Akt通路相关蛋白p-Akt、Bad、p-Bad表达。结果 Western blot检测显示,中药组、西药组、联合组HER-2、p-HER-2灰度比较对照组均降低;西药组、联合组HER-2、p-HER-2、p-Akt灰度比较对照组明显降低,西药组、联合组较对照组HER-2、p-HER-2、p-Akt表达含量差异有统计学意义(P<0.05)。中药组、西药组、联合组Bad、p-Bad灰度比较对照组降低,总Bad表达含量各组间差异无统计学意义(P>0.05)。西药组、联合组p-Bad表达含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论解毒化浊方具有下调PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达,协同抑制剂发挥减毒增效的抗肿瘤作用。

不同因素致亚健康大鼠血液生化、血气电解质指标的影响

目的观察不同因素致亚健康模型大鼠血液生化和血气电解质指标的变化。方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为5组,即多因素(MF)组、热水游泳(WS)组、睡眠不足(SD)组、单纯束缚(PC)组和正常对照(C)组,每组12只。采用热水游泳、睡眠剥夺和单纯束缚等单因素或多因素联合建立亚健康大鼠模型,各组造模5d后,处死6只,剩余动物进行恢复性饲养3 d后处死。分别测定造模结束后和恢复3 d时大鼠的血清中的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、血糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和血气电解质等指标。结果 (1)与正常对照(C)组比,造模5d后MF组的大鼠BUN和TG水平显著降低(P<0.05,P<0.01),同时CREA、AST、CK、CK/AST和LDH水平显著升高(P<0.01),WS组的大鼠TC、CK、CK/AST和LDH水平亦升高显著(P<0.01),且各模型组的大鼠GLU浓度明显增加(P<0.01);恢复3 d后,MF组的大鼠TC、AST、ALT、ALB、BUN、CK、CK/AST和LDH水平均明显高于C组(P<0.05,P<0.01);WS组的大鼠血清AST、CK、CK/AST比值和LDH水平亦显著高于C组(P<0.01),SD组的大鼠CK显著高于C组(P<0.05);(2)与C组比,造模5d后MF组、SD组和PC组的大鼠PCO2、Hct和Hb均明显升高(P<0.05,P<0.01),WS组Hct和Hb升高显著且Na+显著降低(P<0.01),MF组的大鼠PO2和SO2%均显著降低且K+明显升高(P<0.05),且各造模组的大鼠HCO3-♂的浓度均显著升高(P<0.05,P<0.01);恢复3 d后,除各造模大鼠的血液pH值和PO2均明显下降(P<0.05,P<0.01)外,MF组、SD组和PC组的大鼠PCO2升高并伴有SO2%的降低(P<0.05,P<0.01),MF组和WS组Na+仍明显低于C组(P<0.05,P<0.01),SD组的大鼠K+和Mg2+则明显高于C组(P<0.05,P<0.01)。结论不同因素诱导的亚健康状态大鼠的血液生化、血气电解质指标均出现了不同程度上的改变,故血液生化和血气电解质指标能有效评估亚健康状态机体血液微环境的改变。

活体生物发光示踪术观察中国被毛孢抑制小鼠4T1-luc乳腺癌肺转移作用

[目的]利用活体生物发光成像技术,探讨中国被毛孢菌丝体对小鼠乳腺癌肺转移的影响。[方法]4T1-luc乳腺癌细胞原位接种于50只BALB/c小鼠2周后,取40只荷瘤小鼠,分成4组,即模型组(10mL.kg-1NS)、HSM低剂量组(1.0g.kg-1HSM)、HSM高剂量组(2.0g.kg-1HSM)、阳性组(20mg.kg-1CTX),每组10只,连续给药21d;测定各组小鼠原位肿瘤体积和重量,并用活体生物发光成像仪观察各组小鼠乳腺癌肺转移情况。[结果]小鼠灌胃给予1.0g.kg-1、2.0g.kg-1HSM后,原位肿瘤体积和重量明显降低(P<0.05,P<0.01),原位肿瘤抑瘤率分别为22.92%和32.50%;给予2.0g.kg-1HSM的小鼠乳腺癌肺转移明显减少(P<0.01),乳腺癌肺转移的抑制率为51.77%。[结论]中国被毛孢菌丝体具有较好的抑制小鼠乳腺癌肺转移作用。

白毛黑眼兔眼部虹膜Trp1、Trp2基因克隆与分析

目的克隆日本大耳白兔白毛黑眼系(白毛黑眼兔)眼部虹膜Trp1、Trp2基因,获取其完整的外显子序列。进一步推测这两个基因编码的蛋白,并分析其特征。方法从白毛黑眼兔的黑色虹膜组织中提取RNA,并反转录成cDNA。利用来自小鼠、大鼠和人的同源引物,扩增获得白毛黑眼兔Trp1、Trp2基因外显子片段。然后对已知片段进行3’RACE和5’RACE,从而获得白毛黑眼兔Trp1、Trp2基因外显子完整序列。利用相关软件对获得序列进行翻译和分析。结果首次获得了白毛黑眼兔Trp1、Trp2基因外显子全序列。该实验兔Trp1基因的编码序列全长1604个碱基,其核苷酸序列与人的相似度为87.9%,与小鼠的相似度为82.7%。TRP1成熟蛋白包含513氨基酸,氨基酸序列与人的相似度为89.8%,与小鼠的相似度为86.6%。该实验兔Trp2基因序列全长1554个碱基,其核苷酸序列与人的相似度为83.2%,与小鼠的相似度为81.9%。TRP2成熟蛋白包含494个氨基酸,其序列与人的一致度为84.2%,与小鼠的一致度为84.4%。结论本研究获得的TRP1、TRP2的序列与已知的家兔酪氨酸相关蛋白家族成员TYR的序列进行比对,结果显示这三种蛋白之间有较高的相似度,并且TRP1和TRP2蛋白序列表现出了酪氨酸酶家族结构上的保守性和特有的结构特征。

实验兔酪氨酸酶基因家族表达水平与毛色和虹膜颜色性状的关系研究

目的探讨家兔酪氨酸酶家族基因表达量与动物不同毛色和虹膜颜色性状与之间的关系。方法选取白毛黑眼兔、日本大耳白兔、獭兔和青紫兰兔4个品系家兔各12只,分别取皮肤和虹膜组织提取RNA,采用荧光定量PCR和ΔΔC T方法检测其中Tyr,Tyrp1,Dct基因的相对表达量,并在品系间和组织间进行比较。结果 Tyr基因在白毛黑眼兔和青紫兰兔虹膜组织中的表达水平极显著高于该基因在日本大耳白兔和獭兔虹膜组织中的表达水平。Tyrp1基因在青紫兰兔皮肤组织中的表达水平极显著高于该基因在日本大耳白兔、獭兔和白毛黑眼兔皮肤组织中的表达水平。而Tyr基因在各品系实验兔的皮肤组织中,Tyrp1基因在各品系实验兔的虹膜组织中,以及Dct基因在各品系实验兔的皮肤和虹膜组织中虽然有一定的高低变化,但差异均未出现显著性。结论黑毛家兔皮肤组织中Tyrp1基因平均表达水平显著高于白毛家兔。黑眼家兔虹膜组织中Tyr基因的表达水平显著高于红眼家兔。本研究揭示了家兔酪氨酸酶基因家族成员Tyrp1和Tyr的表达量分别与家兔的毛色和虹膜颜色表型具有相关性。

磁珠富集法筛选实验豚鼠微卫星分子标记

目的直接从实验豚鼠基因组DNA中筛选获得微卫星分子标记。方法应用磁珠和生物素标记的微卫星探针与豚鼠基因组酶切片段杂交,捕获200～1000 bp含有微卫星序列的DNA片段,连接到pMD-18V载体中,转化到感受态细胞E.coli DH5α中构建富集微卫星序列的小片段插入文库。然后用PCR法进行筛选。结果从约2000个转化子中获得240个阳性克隆。对其中98个进行了测序,并成功设计豚鼠微卫星引物17对。结论经过优化的磁珠富集法能够稳定、高效地获得豚鼠微卫星标记。本研究获得的微卫星位点将成为豚鼠遗传学研究的有力工具。