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抗犬瘟热病毒荧光标记单抗的制备和初步鉴定 被引量:18
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作者 苏建青 褚秀玲 +2 位作者 杨松涛 夏咸柱 岳妙姝 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期3552-3554,共3页
[目的]建立利用单克隆抗体检测犬瘟热病毒的直接免疫荧光诊断方法。[方法]通过搅拌法,用异硫氰酸荧光素标记G蛋白纯化的抗犬瘟热病毒单抗CE3,对荧光抗体进行纯化、鉴定,并确定其最适工作浓度。对61份临床可疑犬瘟热病料进行直接免疫荧... [目的]建立利用单克隆抗体检测犬瘟热病毒的直接免疫荧光诊断方法。[方法]通过搅拌法,用异硫氰酸荧光素标记G蛋白纯化的抗犬瘟热病毒单抗CE3,对荧光抗体进行纯化、鉴定,并确定其最适工作浓度。对61份临床可疑犬瘟热病料进行直接免疫荧光检测。[结果]吸收试验、阻断试验和特异性试验结果显示,标记抗体具有高度的敏感性和特异性,与犬细小病毒(CPV)、犬副流感病毒(CPIV)、犬腺病毒(CAV)、狂犬病毒(RV)无交叉反应,其最优化工作浓度为1∶80。对临床可疑犬瘟热病料的阳性检出率是48%。[结论]该研究建立的直接免疫荧光方法具有快速、特异和简便的优点,对犬瘟热疾病的早期诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 直接免疫荧光 单克隆抗体
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犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定 被引量:7
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作者 苏建青 岳妙姝 +2 位作者 王化磊 薛琳 夏咸柱 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期88-92,共5页
用纯化的犬瘟热病毒免疫Balb/C小鼠,采用间接ELISA方法筛选分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,挑选阳性孔进行亚克隆,用Vero细胞交叉反应试验及间接免疫荧光试验检测单抗的特异性。结果获得6株能稳定分泌抗犬瘟热病毒的单克隆抗体细胞株,分别... 用纯化的犬瘟热病毒免疫Balb/C小鼠,采用间接ELISA方法筛选分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,挑选阳性孔进行亚克隆,用Vero细胞交叉反应试验及间接免疫荧光试验检测单抗的特异性。结果获得6株能稳定分泌抗犬瘟热病毒的单克隆抗体细胞株,分别命名为AD7、AE2、CE3、EH5、GG6和GF1。交叉反应试验及间接免疫荧光染色检测表明,6株单抗的特异性良好;经过体外连续传代及反复冻存、复苏,杂交瘤细胞均能稳定分泌特异性单抗。培养上清液及小鼠腹水ELISA效价分别为26~211和104~107。相加试验表明:单抗AE2、CE3、GG6和GF1具有共同的表位,而单抗AD7和EH5识别的位点与其他4株不同。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 单克隆抗体 间接酶联免疫吸附试验
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TaqMan探针实时荧光定量PCR诊断犬瘟热病毒方法的建立 被引量:8
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作者 苏建青 郑学星 +2 位作者 候小强 岳妙姝 夏咸柱 《中国农学通报》 CSCD 2007年第11期33-37,共5页
根据犬瘟热病毒核蛋白基因的保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针建立荧光定量PCR。构建FQ-PCR绝对定量的标准品,并对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并与普通RT-PCR法进行比较;特... 根据犬瘟热病毒核蛋白基因的保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针建立荧光定量PCR。构建FQ-PCR绝对定量的标准品,并对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并与普通RT-PCR法进行比较;特异性检验后进行临床标本的检验。结果显示:实验成功构建了绝对定量的参照质粒,标准曲线相关系数为0.994。犬瘟热病毒FQ-PCR检测反应的灵敏度为10TCID50;5种非犬瘟热病毒病原体检测均为阴性;说明实验建立的FQ-PCR具有快速、灵敏和稳定的特点,适用于临床样品的检验。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 荧光定量 犬瘟热病毒
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狂犬病病毒和犬瘟热病毒疫苗株混合感染Vero细胞的实验研究 被引量:2
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作者 王化磊 杨松涛 +6 位作者 郑学星 苏建青 王承宇 赵柏林 岳妙姝 薛琳 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第6期401-403,407,F0002,共5页
目的研究狂犬病病毒(RV)及犬瘟热病毒(CDV)共同感染Vero细胞及混合感染对产毒量的影响,比较病毒检测方法的敏感性。方法将单独培养的RV、CDV及RV-CDV混合培养物进行连续10倍稀释后同步接种Vero细胞,37℃5%CO2培养5d,分别以直接免疫荧光(... 目的研究狂犬病病毒(RV)及犬瘟热病毒(CDV)共同感染Vero细胞及混合感染对产毒量的影响,比较病毒检测方法的敏感性。方法将单独培养的RV、CDV及RV-CDV混合培养物进行连续10倍稀释后同步接种Vero细胞,37℃5%CO2培养5d,分别以直接免疫荧光(DFA)、RT-PCR及荧光定量RT-PCR方法检测病毒的半数细胞感染量,并对各病毒检测方法进行比较。结果RV和CDV可同时感染Vero细胞,并在其中增殖。CDV单独感染Vero细胞的TCID50为10-5.8/0.05ml,RV和CDV混合感染Vero细胞的TCID50为10-5.5/0.05ml。DFA、RT-PCR和荧光定量RT-PCR阳性的RV-CDV感染最大稀释度分别为10-6、10-5和10-6。结论混合培养对RV和CDV的感染滴度及产毒量影响很小。免疫荧光灶检测与RT-PCR及荧光定量RT-PCR方法检测的敏感性相当。犬瘟热-狂犬病毒联合疫苗的病毒滴度检测可不经中和其中的一个病毒直接将联合疫苗接种Vero细胞,然后分别进行免疫荧光检测。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 狂犬病毒 混合感染 病毒滴度
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Preparation and Preliminary Identification of Fluorescein Labeled Monoclonal Antibody against Canine Distemper Virus 被引量:3
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作者 苏建青 褚秀玲 +2 位作者 杨松涛 夏咸柱 岳妙姝 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第1期115-118,144,共5页
[Objective] The aim of the present study was to develop a direct immunofluorescence method for the diagnosis of canine distemper (CD) with FITC-conjugated monoclonal antibodies (FITC-McAb).[ Metbod] The McAb again... [Objective] The aim of the present study was to develop a direct immunofluorescence method for the diagnosis of canine distemper (CD) with FITC-conjugated monoclonal antibodies (FITC-McAb).[ Metbod] The McAb against CDV, designated as CE3, was purified with protein G and labeled with FITC through agitation method. After purification and identification, the optimal working concentration of FITC-labeled CE3 was determined. Then 61 clinical samples of suspected canine distemper were detected by direct immunofluorescence assay. [ Result] The absorption test, blocking test and specificity test showed that the labeled antibody had high specificity and sensitivity, but didn't have cross reaction with canine parvovirus (CPV), canine parainfluenza virus (CPIV), canine adenovirus (CAV) and rabies virus (RV). The optimal working concentration was 1:80. The positive rate of clinical suspected samples was 48%. [ Conclusion] The direct immunofluorescence assay developed in this study was rapid, specific and convenient, and had great significance for the early diagnosis of canine distemper. 展开更多
关键词 Canine distemper virus Direct immunofluorescence assay Monoclonal antibody
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犬瘟热病毒荧光抗体的制备及其鉴定 被引量:1
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作者 郝淑美 岳妙姝 +3 位作者 苏建青 杨松涛 夏咸柱 李牧 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1008-1010,共3页
采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)(Onderstepoort株)核蛋白单克隆抗体(MAb);小鼠腹腔注射阳性克隆生产腹水;以G蛋白亲和层析法进行纯化;用透析法对单抗进行FITC(异硫氰酸荧光素)标记;Sephad... 采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)(Onderstepoort株)核蛋白单克隆抗体(MAb);小鼠腹腔注射阳性克隆生产腹水;以G蛋白亲和层析法进行纯化;用透析法对单抗进行FITC(异硫氰酸荧光素)标记;Sephadex G-25去除游离荧光素;测定F/P值及荧光抗体工作浓度;以吸收、阻断、抗原交叉试验对荧光抗体进行特异性鉴定。结果表明,获得6株能稳定分泌CDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取抗CDV核蛋白的CE3单抗成功地制备了质量较高的荧光抗体。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 单克隆抗体 荧光抗体
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