基于网络药理学和实验验证探究黄精增强免疫功能的作用机制

目的:探究黄精增强免疫功能的作用机制。方法:使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)收集黄精活性成分,通过SwissTargetPrediction数据库获得对应靶点基因。使用GeneCards、DrugBank数据库筛选免疫抑制(IS)相关靶点基因,并通过Venny数据库获得与黄精靶点基因的交集基因。使用String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,使用Cytoscape软件构建“黄精-有效成分-靶基因-免疫抑制”网络,利用Metascape数据库对交集基因进行基因本体(GO)富集分析以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,使用分子对接对有效成分和靶点进行验证。体外细胞试验采用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞模型,通过MTT法检测不同浓度黄精提取物对细胞的毒性反应;采用Griess法检测黄精提取物对细胞中一氧化氮(NO)的影响。结果:经过筛选,ESR1、SRC、IGF1R、PTGS1、PTGS2等均参与了多个关键生物过程和关键通路。GO富集表明,细胞活化、炎症反应、细胞对应激的反应等为主要生物过程;KEGG富集表明,糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、AMPK、核因子κB信号通路等是关键通路。分子对接结果显示有效成分与核心靶点对接结果良好。体外试验结果显示,与LPS组比较,50,200,800μg/mL的黄精提取物组RAW264.7细胞中NO生成量均显著降低(均P<0.01)。结论:本研究初步预测了黄精增强免疫功能的ESR1、SRC等作用靶点和AMPK、核因子κB等信号通路,并结合Griess法表明黄精可通过调控炎症模型RAW264.7细胞NO的释放来发挥免疫作用。

甘草蜜炙前后对小鼠免疫调节的影响

目的:研究甘草炮制前后对免疫低下小鼠免疫调节作用的影响。方法:小鼠腹腔注射环磷酰胺制备免疫低下模型,给予生甘草、清炒甘草、蜜炙甘草的提取液,检测免疫功能学评价指标,包括免疫器官指数、半数溶血值、溶血空斑数、脾淋巴细胞增值率、自然杀伤(NK)细胞杀伤率、耳肿胀度、碳廓清指数、腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数。结果:与对照组小鼠比较,模型组小鼠各检测指标明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组小鼠比较,各给药组(生甘草组、清炒甘草组、蜜炙甘草组)小鼠各检测指标均能增强。其中,仅蜜炙甘草组能明显增强各检测指标(P<0.05,P<0.01);与生甘草组小鼠相比,清炒甘草组能明显增强血清溶血素和抗体生成细胞、脾淋巴细胞增殖率和NK细胞活性(P<0.05,P<0.01),但对胸腺指数、脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、DTH、碳廓清功能无明显影响,蜜炙甘草组能明显增强除胸腺指数的各项评价指标(P<0.05,P<0.01),但对胸腺指数无明显影响。结论:甘草蜜炙前后对小鼠非特异性免疫、体液免疫及细胞免疫功能均有促进作用,且蜜炙后作用更强,为蜜炙甘草机制研究提供参考。

“以学生为中心”视角下探索课程思政结合多元教学法在“药事管理与法规”教学中的应用

为了更好地推进“以学生为中心”的“药事管理与法规”的课堂教学,结合中医药院校培养高素质创新型应用型人才的目标,通过对“药事管理与法规”教学现状的分析,将课程思政和多元教学法相结合,旨在转变以教师为中心的单向灌输式传统教学模式,培养综合型高素质中医药特色人才,提高“药事管理与法规”教学质量。

基于蜜炙甘草性状特征与内在成分含量的相关性研究

目的 基于熵权法研究不同种类炼蜜炮制的蜜炙甘草内在成分甘草苷、甘草酸和异甘草素与颜色和味觉的相关性。方法 测定15种炼蜜炮制所得不同蜜炙甘草饮片样品中甘草苷、甘草酸、异甘草素的含量,熵权法计算综合指标作为参考评价标准,结合视觉分析仪和电子舌测定样品外观颜色与味觉,运用多元统计学方法对内在成分与色度值、味觉信息进行关联分析。结果 不同炼蜜炮制的蜜炙甘草样品内在成分含量存在显著性差异,甘草苷与色值L^(*)和总色值E^(*)ab呈正向相关性,甘草酸与感应器响应值AHS(酸)、CTS(咸)呈正相关,异甘草素与色度值L^(*)、a^(*)和AHS、ANS(甜)、SCS(苦)有相关性。结论 蜜炙甘草内在成分与颜色、味觉具有显著相关性,性状特征的量化可为质量评价体系的建立提供参考依据。

基于G1-熵权法结合Box-Behnken响应面法优化蜜炙甘草炮制工艺

目的采用G1-熵权法优选蜜炙甘草炮制工艺。方法以炒制温度、炒制时间、炼蜜与水的比例、闷润时间4个因素为自变量,以甘草苷、甘草酸、异甘草素含量的综合评分为响应值,采用G1-熵权法结合Box-Behnken响应面法优化蜜炙甘草的炮制工艺。结果G1-熵权法确定甘草苷、甘草酸、异甘草素的权重系数分别为0.3109、0.4454、0.2438,蜜炙甘草最佳炮制工艺为炒制温度130℃、炒制时间5 min、炼蜜与水的比例2∶2.6、闷润时间43 min。在此条件下,分别进行3批验证试验,甘草苷、甘草酸、异甘草素的平均含量分别为1.0370%、2.3603%、0.0650%,3批验证试验的平均综合评分为79.9324,且试验数据组间比较差异无统计学意义。结论优选的蜜炙甘草炮制工艺稳定、可行,可为蜜炙中药炮制工艺研究提供数据参考。

基于网络药理学和分子对接研究千金子二萜醇酯类成分治疗白血病的作用机制

目的运用网络药理学和分子对接探讨千金子二萜醇酯类成分治疗白血病的潜在作用机制。方法选取千金子中7种代表性二萜醇酯类成分为研究对象,综合运用SwissTargetPrediction、SEA、OMIM、Gene Cards数据库筛选及预测千金子二萜醇酯类成分治疗白血病的潜在靶点。通过STRING数据库和Cytoscape 3.7.2软件来建立PPI网络。使用DAVID数据库对筛选出的靶点进行基因本体(GO)生物学过程分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,并应用Cytoscape 3.7.2构建“成分-靶点-通路”网络,最后对千金子二萜醇酯类成分与关键靶蛋白进行分子对接验证。结果7种千金子二萜醇酯类成分涉及252个作用靶点,筛选得到75个治疗白血病的潜在靶点,PPI核心网络表明治疗白血病的关键靶点为CDK1、CDK2、CCNA2,基因富集分析及“成分-靶点-通路”网络图显示千金子二萜醇酯类成分可能通过调节PI3K-Akt、ErbB、p53等信号通路来发挥对白血病的治疗作用。结论本研究表明千金子二萜醇酯类成分可能通过调节细胞凋亡、增殖分化、转录、细胞周期等多种途径来治疗白血病,诠释了中药通过多成分、多靶点、多途径治疗疾病的研究思路,为进一步深入研究千金子二萜醇酯类成分治疗白血病的作用机制提供了科学依据。

基于层次分析法-熵权法评价不同种类黄酒对酒当归饮片的影响

目的结合层次分析法(AHP)-熵权法(EWA)对不同种类黄酒炮制的酒当归饮片进行质量综合评价研究,为其他中药饮片质量评价提供参考。方法对比15批不同种类黄酒的理化性质,包括总糖、非糖固形物、总酸、氨基酸态氮、氧化钙含量、酒精度和pH值,并用其对当归进行炮制,以阿魏酸、多糖、醇溶浸出物、水溶浸出物、总灰分、酸不溶性灰分为评价指标,采用AHP-EWA建立酒当归质量的量化评价模型,并对黄酒理化性质与酒当归饮片质量综合评分进行相关性分析,探究不同种类黄酒对酒当归饮片质量的影响。结果黄酒的总糖、酒精度与其炮制的酒当归饮片质量存在一定相关性。结论黄酒的种类对酒当归饮片质量具有一定影响,采用AHP-EWA确定各指标的权重,提高了酒当归饮片评价结果的可靠性,可为酒当归饮片质量评价研究提供参考。

千金子制霜前后提取物对人胚肾细胞HEK293的体外毒性作用

目的:比较千金子制霜前后提取物对正常人胚肾细胞HEK293的影响,探究千金子制霜减毒的作用机制。方法:采用HEK293细胞为体外模型,随机分为对照组,千金子生品低、中、高质量浓度(100、200、400μg·mL^(-1))组和千金子霜品低、中、高质量浓度(100、200、400μg·mL^(-1))组。细胞体外培养后,分别给予等体积的无血清培养液和千金子生品、霜品提取物溶液,各组均设置3个复孔。采用CCK-8法评价细胞存活率,利用倒置显微镜观察细胞数量及形态变化;碘化丙啶(PI)染色法和AnnexinV-FITC/PI双重染色法检测细胞周期和凋亡情况;试剂盒法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)、肌酐(Cr)和细胞裂解液中尿素氮(BUN)水平。结果:与对照组比较,千金子生品各质量浓度组HEK293细胞存活率降低,细胞形态异常,细胞数量减少,G_(0)/G_(1) 、 G_(1)/G_(2)期细胞比例明显降低,S期细胞比例明显增加,细胞凋亡率升高(P<0.01),LDH、BUN、Cr水平升高(P<0.05,P<0.01),GSH水平降低(P<0.01);与千金子生品组比较,千金子霜品相应质量浓度可显著增加HEK293细胞存活率(P<0.01),改善细胞形态,增加G_(0)/G_(1) 期、 G_(1)/G_(2)期细胞比例,降低S期细胞比例,同时能明显降低LDH、BUN、Cr水平(P<0.05,P<0.01),提高GSH水平(P<0.01)。结论:千金子制霜后可能通过减轻细胞周期阻滞和细胞氧化损伤改善肾细胞功能、减少细胞凋亡,从而降低体外肾毒性。

延胡索总碱贴片安全性和对神经病理性疼痛大鼠镇痛作用研究

目的 探讨延胡索总碱贴片的安全性及其对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及其机制。方法 (1)安全性实验:采用单次、多次给药的皮肤刺激性实验及皮肤过敏性实验,评价延胡索总碱贴片的安全性。(2)镇痛实验:取48只雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组、模型组、布洛芬组、双氯芬酸钠贴片组及延胡索总碱贴片高、中、低剂量组,每组6只。除正常组和假手术组外,其余组大鼠采用坐骨神经慢性压迫损伤方法诱导神经病理性疼痛模型,术后第8天开始,布洛芬组灌胃给药,双氯芬酸钠贴片组及延胡索总碱贴片高、中、低剂量组分别给予双氯芬酸钠贴片及延胡索总碱贴片腹部贴敷,其余组腹部贴敷空白贴片,均每天1次,连续14 d。分别于术前及干预后1,3,7,10,14 d测定各组大鼠热缩足反射潜伏期;采用Western blot法检测各组大鼠干预结束后脊髓中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、信号传导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达情况。结果 (1)给予延胡索总碱贴片后,皮肤刺激反应评分均小于0.5分,致敏率为0,组织结构与正常皮肤无差异。(2)镇痛实验中,延胡索总碱贴片中、高剂量组干预后3 d和延胡索总碱贴片各剂量组干预后7,10,14 d患侧的热缩足反射潜伏期均明显长于同期模型组(P均<0.05);干预结束后,延胡索总碱贴片各剂量组大鼠脊髓中TLR4、NF-κB、p38MAPK蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05), STAT3蛋白相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05)。结论 延胡索总碱贴片安全性良好,可抑制慢性坐骨神经挤压损伤神经病理性疼痛大鼠痛觉敏感,其机制可能与抑制脊髓中TLR4、NF-κB、p38MAPK表达并上调STAT3的表达有关。

多信息G1-熵权组合赋权法优选醋当归炮制工艺

目的:运用多信息G1-熵权组合赋权法优选醋当归饮片的炮制工艺。方法:采用L9(34)正交试验设计,以阿魏酸含量、醇浸出物含量、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)组成的综合评分为指标,采用G1-熵权组合赋权法计算各指标的权重系数,考察炒制温度、炒制时间、米醋用量和闷润时间对醋当归炮制工艺的影响,进而确定醋当归的最优炮制工艺参数。结果:G1-熵权组合赋权法确定PT、APTT、TT、阿魏酸和醇浸出物的权重系数分别为0.4517、0.2316、0.1306、0.1046、0.0816,醋当归的最佳炮制工艺为每100 g当归饮片加米醋15 mL,闷润1 h,150℃炒制20 min。结论:联合凝血功能指标证实优选的醋当归炮制工艺稳定可靠,可为醋制中药炮制工艺研究提供参考。

UPLC-MS/MS法同时测定红鹤胶囊在大鼠血浆中3种活性成分含量及其药代动力学研究

目的建立同时测定大鼠血浆中红鹤胶囊的竹节参皂苷Ⅳα、金丝桃苷和岩白菜素3种活性成分的UPLC-MS/MS定量分析方法,同时探讨灌胃给予红鹤胶囊后3种活性成分在大鼠体内的药代动力学特征。方法灌胃给予大鼠红鹤胶囊混悬液后,采用乙酸乙酯萃取法处理血浆样品,以葛根素为内标,采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱,0.01%甲酸-乙腈进行梯度洗脱,采用电喷雾电离源,以多反应监测模式检测不同时间点大鼠血浆中竹节参皂苷Ⅳα、金丝桃苷和岩白菜素的浓度,并用DAS 2.0药代动力学软件计算药代动力学参数。结果方法学结果揭示,3种活性成分的线性关系、精密度、准确度、回收率、基质效应和稳定性均符合样品分析要求。大鼠灌胃给予红鹤胶囊后,竹节参皂苷Ⅳα、金丝桃苷和岩白菜素的C_(max)分别为(53.16±31.67)、(6.29±5.42)、(0.37±0.06)μg·L^(-1);t_(max)分别为(49.17±65.76)、(32.50±34.60)、(54.00±21.91)min;t_(1/2)分别为(437.99±127.83)、(535.41±182.87)、(603.12±288.14)min;AUC_((0-t))分别为(12114.75±6435.41)、(1539.98±459.55)、(330.92±88.37)μg·min·L^(-1)。结论该研究建立的UPLC-MS/MS定量分析方法快速、灵敏、精确,适用于大鼠血浆中红鹤胶囊3种活性成分的药代动力学研究,为红鹤胶囊的质量控制以及临床合理应用提供了理论支撑。

Box-Behnken响应面法结合熵权法优化千金子二萜醇酯类成分的闪式提取工艺

以千金子中3种主要的二萜醇酯类成分提取率的综合评分为评价指标,通过Box-Behnken响应面法结合熵权法对千金子二萜醇酯类成分的闪式提取工艺进行优化。确定最佳提取工艺为:料液比1∶14(g∶mL)、提取时间2.5 min、提取电压130 V,在此条件下,3种二萜醇酯类成分提取率的综合评分为0.370,与模拟预测值(0.396)接近。该闪式提取工艺设计合理,可为千金子主要二萜醇酯类成分的快速高效提取提供一定的参考。

延胡索总碱理化性质及体外经皮渗透性的研究

目的考察延胡索总碱的溶解度、油水分配系数等理化性质,研究促透剂及穴位、非穴位贴敷对其体外经皮渗透特性的影响,为指导其经皮给药剂型设计和制备提供参考。方法建立酸性染料比色法和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法对延胡索总碱、延胡索甲素、延胡索乙素及延胡索丑素的含量进行测定,应用饱和溶液法和经典摇瓶法检测延胡索总碱的溶解性及油水分配情况;采用Franz扩散池法考察大鼠神阙穴与非穴位皮肤体外经皮渗透性能。结果结果显示,延胡索总碱纯度大于50%,其在10%乙醇的生理盐水中溶解性较好,可作为扩散池接收介质。当pH在5.5~7.2时,延胡索总碱的log P值控制在-1~0之间,说明延胡索总碱为强亲水性组分,延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丑素的log P值均在0~3之间,体外经皮渗透性良好,神阙穴用药组的24小时体外累积透过量和滞留量优于非穴位(P<0.05)。结论延胡索总碱具有适宜经皮渗透的理化性质及较好的经皮渗透性能,适宜制成经皮给药制剂,且经神阙穴用药具有一定优势,以上结果可为经皮给药剂型设计提供实验基础。

多花黄精酒蒸过程中色泽与化学成分含量的相关性研究

目的探究多花黄精酒蒸过程中色泽与化学成分含量的相关性。方法制备不同炮制时间的多花黄精酒蒸品,采用紫外-可见分光光度法测定黄精多糖含量,高效液相色谱测定5-羟甲基糠醛的含量,热浸法测定水浸出物和醇浸出物的含量,利用色度仪测定色度值,运用多元统计分析对色度值和化学成分进行主成分分析、聚类分析,并对样品粉末色度值与化学成分进行Pearson相关性分析。结果多花黄精在酒蒸过程中,随着炮制时间的延长,样品粉末的L^(*)、b^(*)、E^(*)ab呈下降趋势,a^(*)呈先升高后下降的趋势;水浸出物、醇浸出物、黄精多糖含量呈下降趋势,5-HMF含量呈上升趋势。多元统计分析结果显示,S0样品聚为一类,J1~J2样品聚为一类,J3~J5样品聚为一类。相关性分析结果显示,水浸出物、醇浸出物和黄精多糖的含量与E^(*)ab呈显著正相关(P<0.05),5-HMF含量与E^(*)ab呈显著负相关(P<0.01)。结论基于色差原理分析多花黄精酒蒸过程中各化学成分含量与颜色值的相关性,为多花黄精酒蒸的炮制程度量化分析和炮制机制研究提供参考。

基于AHP-熵权法结合色差原理评价不同辅料大米对米炒党参饮片的影响

目的研究不同地区、不同种类的15批大米理化性质、米炒党参粉末颜色值与米炒党参主要有效成分含量的相关性,探究不同大米对米炒党参饮片质量的影响。方法测定大米理化性质,利用色度仪对不同米炒制的党参粉末颜色值进行测量,采用紫外可见分光光度计对党参多糖进行定量,HPLC法测定党参炔苷、5-羟甲基糠醛含量,并测定醇浸出物含量,采用AHP-熵权法结合多元相关分析评价不同大米炒制的党参饮片质量。结果在相同的炮制条件下,不同大米炒制的党参饮片质量均符合《中国药典》2020年版要求,但饮片内在质量存在一定差异。相关性分析结果显示米炒党参样品中党参多糖含量与颜色值L^(*)、a^(*)、E^(*)ab及大米的过氧化氢酶活动度、直链淀粉含量呈正相关,党参炔苷含量与大米过氧化氢酶活动度成正相关,醇浸出物含量与颜色值L^(*)、a^(*)、b^(*)、E^(*)ab及大米水分含量、直链淀粉含量均呈正相关。结论不同地区、不同种类的大米对米炒党参饮片内在质量产生不同影响,米炒党参饮片主要有效成分含量与颜色值、大米理化性质有一定的相关性。

延胡索总碱贴片经神阙穴与非穴位给药的皮肤渗透性比较

目的:比较穴位与非穴位皮肤的电阻与皮肤结构差异,并研究延胡索总碱贴片经神阙穴和非穴位给药后的皮肤渗透特性,为其临床穴位贴敷治疗慢性疼痛提供实验支持。方法:以延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丑素为评价指标,结合高效液相色谱法(HPLC)进行定量分析,色谱条件为流动相甲醇-0.04 mol·L^(-1)磷酸水溶液(70∶30,用三乙胺调pH 6.0),检测波长281 nm。采用Franz扩散池离体透皮试验与大鼠在体透皮试验相结合的方式,研究延胡索总碱贴片经神阙穴与非穴位给药后的皮肤渗透特性。同时,测定给药前后神阙穴与非穴位皮肤电阻,采用冷冻切片法比较药物在皮肤各层中的分布情况,并运用荧光倒置显微镜进行可视化验证。结果:给药24 h后,体内外试验结果均显示,延胡索总碱贴片经神阙穴贴敷时延胡索甲素、延胡索乙素和延胡索丑素的累积透过量与滞留量均明显高于非穴位皮肤(P<0.05,P<0.01),神阙穴皮肤电阻在给药前后各时间点均低于非穴位皮肤。荧光显微观察结果显示,皮肤各层的药物含量均为神阙穴皮肤>非穴位皮肤,表明神阙穴皮肤对于药物的渗透、贮存作用优于非穴位皮肤。结论:延胡索总碱贴片在神阙穴皮肤的24 h累积透过量和滞留量均高于非穴位皮肤,其机制可能与神阙穴皮肤薄、电阻低及毛囊小体数量多有关。

千金子制霜前后提取物对TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的影响研究

目的研究千金子制霜前后提取物对Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路的影响差异。方法42只BALB/c小鼠按体质量随机分为空白对照组,千金子生品低、中、高剂量组(10.49、20.98、41.96 g/kg)和千金子霜品低、中、高剂量组(10.49、20.98、41.96 g/kg),每组6只,连续灌胃7 d。酶联免疫吸附测定法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,蛋白质印迹法和实时荧光PCR法检测结肠组织TLR4、NF-κB p65、NLRP3蛋白和mRNA表达。30只BALB/c小鼠按体质量随机分为空白对照组、千金子生品组、千金子生品+TAK-242组、千金子霜品组、千金子霜品+TAK-242组,每组6只。各给药组灌胃相应药液(20.98 g/kg),连续7 d,千金子生品+TAK-242组和千金子霜品+TAK-242组于给药第1、5、6、7天给药前30 min腹腔注射TAK-242溶液(3 mg/kg)。采用蛋白质印迹法和实时荧光PCR法检测结肠组织NLRP3、NF-κB p65蛋白表达,以及NLRP3、IL-1βmRNA表达。结果千金子生品可导致IL-1β和TNF-α大量释放,上调TLR4、NF-κB p65、NLRP3蛋白和mRNA表达(P<0.05,P<0.01),千金子制霜后对IL-1β、TNF-α分泌,以及TLR4、NF-κB p65、NLRP3蛋白和mRNA表达的促进作用减弱(P<0.05,P<0.01)。加入TLR4的阻断剂TAK-242后,可抑制NLRP3、NF-κB p65蛋白表达,以及NLRP3、IL-1βmRNA表达(P<0.01)。结论千金子生品可能通过激活TLR4介导的NF-κB/NLRP3通路,促进TNF-α和IL-1β释放,诱导结肠组织产生炎性反应,而制霜后对TLR4/NF-κB/NLRP3通路传导及促炎因子分泌的上调作用明显减弱,提示其制霜减毒的作用机制可能与致炎能力下降及干预TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路有关。

千金子制霜前后提取物通过肝X受体-腺苷三磷酸结合盒转运体A1信号通路对Caco-2细胞中胆固醇外流的影响

目的 研究千金子制霜前后提取物通过肝X受体(LXR)-腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)信号通路对Caco-2细胞中胆固醇外流的影响差异。方法 将Caco-2细胞分为7组:对照组、千金子生品提取物低、中、高剂量组和千金子霜品提取物低、中、高剂量组。对照组仅加入细胞培养液,低、中、高剂量组分别加入生药量为50,200和800μg·mL^(-1)的千金子生品或霜品提取物。用实时荧光定量聚合酶链反应检测LXRα和ABCA1 mRNA的表达水平,用胆固醇流出实验检测胆固醇外流率。结果 千金子生品提取物低、高剂量组和千金子霜品提取物低、高剂量组及对照组的LXRαmRNA相对表达水平分别为0.37±0.03,0.13±0.01,0.53±0.05,0.48±0.03和1.00±0.05,ABCA1 mRNA相对表达水平分别为0.25±0.02,0.06±0.01,0.63±0.06,0.32±0.02和1.01±0.15,胆固醇流出率分别为(37.11±0.21)%,(29.98±0.44)%,(48.38±0.76)%,(37.66±0.25)%和(48.69±0.82)%。千金子生品提取物低、高剂量组的上述指标与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.001);在相同剂量浓度下,千金子霜品提取物组的上述指标与千金子生品提取物组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.001)。结论 千金子生品提取物可能通过抑制LXR-ABCA1信号通路影响膜脂成分胆固醇的流出,而制霜后作用明显减弱,提示千金子制霜减毒作用机制可能与LXR-ABCA1信号通路调控胆固醇外流有关。

基于UPLC-MS/MS技术的千金子制霜前后3种二萜醇酯类成分在大鼠体内的排泄动力学研究

目的:基于UPLC-MS/MS技术,研究大鼠灌胃千金子生品、霜品提取物后千金子素L_(1)、千金子素L_(2)和千金子素L_(3)的尿液及粪便的排泄动力学特征。方法:SD大鼠灌胃给予千金子生品、霜品提取物,收集不同时间段的尿液和粪便,采用建立的UPLC-MS/MS方法对千金子制霜前后3个二萜醇酯类成分的浓度进行测定,以DAS 2.0软件计算尿排泄动力学参数,绘制累积排泄率及排泄速率曲线,比较制霜前后的排泄动力学差异。结果:灌胃给药千金子提取物96 h后,千金子素L_(1)、L_(2)和L_(3)在尿液中的累积排泄率分别为0.009%、0.008%、0.009%,在粪便中的累积排泄率分别为16.05%、51.57%、36.33%;灌胃给药千金子霜提取物96 h后,千金子素L_(1)、L_(2)和L_(3)在尿液中的累积排泄率分别为0.014%、0.01%、0.011%,在粪便中的累积排泄率分别为27.32%、59.03%、35.97%。结论:千金子3个二萜醇酯类成分在体内主要通过粪便排泄,制霜后在尿液的半衰期t_(1/2)减小,消除速率常数k_(e)增大,其制霜后毒性减弱可能与药物从体内的排泄量增加、在体内蓄积减少有关。

千金子生品和霜品提取物中主要二萜醇酯类成分在大鼠肠道菌群中的体外代谢研究

目的:通过大鼠肠道菌群体外实验,分析千金子生品和霜品提取物中主要二萜醇酯类成分在大鼠肠道菌群中的代谢情况。方法:建立同时测定千金子素L_(1)、L_(2)、L_(3)、L_(7a)、L_(7b)、L_(8)的HPLC定量分析方法,并用该方法测定千金子生品和霜品提取物中各成分在体外大鼠肠道菌群作用下各个时间点的含量,随后基于UHPLC-Q-Exactive HF,进一步分析千金子制霜前后主要二萜醇酯类成分的体外代谢情况。结果:千金子生品与霜品提取物中千金子素L_(1)、L_(2)、L_(3)、L_(7a)、L_(7b)、L_(8)在体外的代谢产物一致,但代谢速率不同,千金子霜品组在代谢初期代谢速率最大。采用Q-Exactive HF结合Xcalibur软件共分析鉴定出了6个代谢产物,千金子制霜前后提取物中6个二萜醇酯类成分在体外的主要代谢途径为水解和甲基化。结论:千金子生品与霜品提取物能够在大鼠肠道菌群作用下转化为多种代谢产物,该结果为进一步研究其在体内的作用机制提供实验依据。