榆耳发酵液多糖对小鼠免疫功能的影响

为了探讨榆耳发酵液多糖对小鼠免疫功能的影响,用1、5和20mg/d的发酵液多糖饲喂小鼠后,测定了脾脏指数、血清溶血素水平、巨噬细胞吞噬率、T淋巴细胞转化率及CD4+/CD8+比值。结果表明,与水对照组相比,低、中、高三个剂量对脾脏指数均无影响;低剂量组可显著提高巨噬细胞吞噬率(p<0.01)和T淋巴细胞转化率(p<0.05);中、高剂量组对血清溶血素水平、巨噬细胞吞噬率、T淋巴细胞转化率及CD4+/CD8+比值等四项免疫指标有显著(p<0.05)或极显著(p<0.01)增高。说明榆耳发酵上清液多糖对小鼠具有良好的免疫增强功效。

榆耳发酵液抑菌谱及抑菌作用稳定性研究

为了探讨榆耳JX 2010菌株发酵液的抑菌谱及其抑菌活性的理化稳定性,试验采用杯碟法进行抑菌效果的研究。结果表明:该菌株发酵上清液对12株指示菌中的多数菌表现出了抑菌作用,并且对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌等革兰阳性菌的抑菌作用强于大肠杆菌、沙门杆菌和鼠伤寒沙门杆菌等革兰阴性菌,但对蜡样芽孢杆菌和酵母菌无抑菌性;以金黄色葡萄球菌为指示菌,进行抑菌活性成分的理化稳定性研究,发现榆耳发酵液具有良好的热稳定性,能在pH值为1～7的范围内较好地保持其抑菌活性,但对碱性环境较敏感。

金黄色葡萄球菌GST-mTSST-1的免疫活性检测方法的研究

通过对影响琼脂扩散反应的多种条件进行优化,建立了检测金黄色葡萄球菌无毒诱变中毒性休克综合征毒素1融合蛋白GST-mTSST-1免疫活性的双向免疫琼脂扩散检测方法.检测的灵敏度可达到120ng/mL.此方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等特点,对具有免疫活性的抗原蛋白的定量检测有一定的参考价值.

人体表金黄色葡萄球菌超抗原毒素基因型系统分析

采用以4组反应管同时检测18种金黄色葡萄球菌超抗原毒素的多重PCR检测方法,对人体表面分离的金黄色葡萄球菌进行超抗原毒素基因系统分型。结果表明,在人体皮肤、头发及鼻腔中采集的682份样品中共分离到16株金黄色葡萄球菌,鼻腔中检出率最高,为4.35%(10/230);分离株超抗原毒素基因携带率高达81.25%,多数菌株同时携带1种以上基因;肠毒素基因携带率为56.25%,所有携带肠毒素基因的菌株都携带至少1种传统肠毒素,其中sea携带率最高,其次为sec,而see未检出。

腊样芽孢杆菌发酵培养基的优化

现阶段的工业化生产中,腊样芽孢杆菌发酵培养常存在着发酵周期长、芽孢形成率低、成本高等问题,因此作者对发酵培养基进行了优化试验,以提高生产产量、降低生产成本。

地衣芽孢杆菌发酵过程的优化

通过对培养基配方的调整和发酵培养过程中对发酵工艺的调整,从而节约生产中成本,提高了产量,通过实验所得的工艺条件不但大大降低了成本而且使产量在原有的基础上有了大幅度的提高,极大的提高了产品的市场竞争力。

榆耳发酵培养基及发酵条件的优化

系统考察了培养基成分及发酵条件对榆耳JX2010菌株液体发酵生物量和发酵液抑菌活性的影响。培养基单因素筛选试验结果表明,玉米淀粉和黄豆粉为最适碳源和氮源;采用均匀设计法对培养基组成优化结果表明,最佳的培养基配方为4.6%玉米淀粉、1.6%黄豆粉、0.03%硫酸镁、0.03%磷酸二氢钾、0.01%磷酸氢二钾、0.001%硫酸锌、0.001%硫酸锰及0.1g/L维生素B1;以此优化的培养基对培养条件研究的结果表明,在10%接种量、20%摇瓶装液量、培养基初始pH5.5的条件下发酵培养时间7d时,发酵效果最好,发酵生物量达到(14.98±0.74)g/L,抑菌直径达到(16.7±0.5)mm。

葡萄球菌肠毒素C基因的克隆表达及其生物学活性鉴定

为表达和纯化金黄色葡萄球菌(金葡菌)超抗原毒素,本研究从金葡菌中克隆葡萄球菌肠毒素C2(sec2)基因,构建了表达葡萄球菌肠毒素C与谷胱甘肽硫转移酶(GST-SEC)融合蛋白的重组质粒(pGEMSEC),通过大肠杆菌表达、亲和纯化、酶切、再亲和纯化,建立了便于大量制备高纯度的重组SEC(rSEC)的简便方法。此外,通过酶联免疫试验及双向琼脂扩散试验检测了rSEC免疫反应性,并通过测定rSEC刺激鼠脾细胞产炎性因子来检测了rSEC的超抗原活性。结果表明,rSEC与野生型SEC具有相同的免疫反应性和超抗原活性,为在今后对该超抗原进行进一步应用性开发和构建定点减毒诱变奠定了工作基础。

大连地区奶牛隐性乳房炎主要病原菌的分离鉴定及药敏试验

为了明确引起大连地区奶牛隐性乳房炎的主要病原菌及其发病情况,对大连市不同地区的256头黑白花泌乳奶牛进行调查研究,对奶牛隐性乳房炎奶样进行病原菌的分离鉴定及药敏试验。结果表明,检出奶牛隐性乳房炎阳性率为65.63%、乳区阳性率为51.95%;病原菌以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、链球菌(Streptococcus)和大肠杆菌(Escherichia coli)为主,占检出细菌总数的83.33%;体外药敏试验筛选出了对主要病原菌高度敏感的药物,能有效地治疗奶牛隐性乳房炎。

真菌多糖免疫调节作用研究进展

真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体或发酵液中分离出的一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的高分子聚合物,具有免疫调节、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、保肝、降血糖、降血脂等广泛的生物学活性和药理作用,其中以调节机体免疫作用最为重要,可作为免疫调节剂。对真菌多糖的结构、活性成分、构效关系及其对机体的免疫调节作用的研究将逐渐成为各国学者的研究热点。文章就真菌多糖在免疫器官、非特异性免疫和特异性免疫等方面对机体发挥免疫调节作用的研究进展进行了概述,并展望了真菌多糖的应用前景。

理化因素对葡萄球菌无毒诱变超抗原GST-mTSST-1免疫活性的影响

应用免疫琼脂扩散法检测温度、pH、反复冻融、保护剂等理化因素对GST-mTSST-1融合蛋白免疫活性的影响,结果表明,在4℃30 d、20℃72 h、37℃72 h条件下,GST-mTSST-1融合蛋白的免疫活性不受影响,但该蛋白不耐高温,60℃5 min完全失活,耐碱不耐酸,对反复冻融有较好的稳定性,50 mg/mL蔗糖保护剂有利于提高该蛋白的免疫稳定性,为GST-mTSST-1融合蛋白规模化生产工艺的设计奠定了基础.

牛乳金黄色葡萄球菌分离株超抗原肠毒素基因分型研究

为研究牛乳金黄色葡萄球菌SP-3分离株携带超抗原肠毒素的基因型,设计合成了金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素基因SEA-SEE及TSST-1特异性引物,并以其固有基因femA和femB为阳性对照,以分离菌株DNA为模板,经PCR扩增菌株携带的毒素基因。结果表明,SP-3分离株和阳性对照菌株均含有femA和femB基因,且牛乳分离株携带sea、sec、sed和tst-1 4种超抗原肠毒素基因,为开展动物源超抗原毒素基因系统分型及有效防控金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎奠定基础。

葡萄球菌GST-mTSST-1融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的金黄色葡萄球菌无毒诱变超抗原GST-mTSST-1融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,初步建立了检测血清特异性GST-mTSST-1抗体的间接ELISA方法,监测了小鼠血清中特异性GST-mTSST-1抗体水平的动态变化规律。方阵试验确定的GST-mTSST-1抗原的最适包被浓度为5.0μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶100,ELISA阳性反应的临界值为D490 nm≥0.219,批内和批间重复试验的变异系数均小于10%。应用该方法对试验小鼠血清进行检测,结果表明,建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性、特异性和较好的重复性,适用于检测特异性GST-mTSST-1血清抗体。

注重内容的整合与更新 加强专业课程建设与改革——动物细胞培养技术课程建设与教学改革初探

教学的基本单元是一门课程的教与学，是培养学生知识、能力、素质的重要载体。因此，教师如何能够充分运用这一载体非常重要。我们对一门课程的建设与教学改革首先应从精选教学内容和优化课程结构方面着手。

金黄色葡萄球菌乳腺感染模型的建立与评价

本研究通过将临床分离的金黄色葡萄球菌(金葡菌)834菌株以不同的感染剂量经乳腺基部直接注射和剪断乳头尖端后经乳导管注射2种途径感染泌乳母鼠,建立了乳腺炎病理模型,并对感染后母鼠乳腺眼观病理变化、乳腺组织的病理学变化和乳腺中金葡菌数进行了比较研究。结果表明,与乳腺基部直接注射相比,剪断乳头尖端后经乳导管注射法可诱发更为典型的乳腺感染,不仅乳腺中感染菌数多、病理变化明显,而且试验结果的重复再现性好,是一种良好的小动物金葡菌乳腺感染模型。该模型的建立,将为进一步研究金葡菌乳腺炎的病原特性、发病机理、治疗方法和疫苗开发,提供可靠的小动物模型。

脂多糖诱导哺乳期SD大鼠乳腺炎模型的建立

本试验旨在建立脂多糖(LPS)诱导哺乳期SD大鼠乳腺炎病理模型,为后续治疗乳腺炎的深入研究奠定基础。SD大鼠30只,于产后72h随机分为对照组(5只)和试验组(25只),试验组随机分为5组,各试验组大鼠经第4对乳头灌注LPS,剂量分别为10、20、30、40、50μg/侧,对照组灌注等量PBS。灌注后24h观察记录各大鼠临床症状、乳腺组织病理学变化。结果发现,在各试验组大鼠第4对乳腺均可观察到不同程度的炎症反应,且与LPS剂量呈正比例关系。结果表明,成功建立了LPS诱导哺乳期SD大鼠乳腺炎模型。

无毒突变肠毒素免疫对金黄色葡萄球菌乳腺感染的免疫效果研究

本研究表达并提纯了无毒诱变葡萄球菌肠毒素C与谷胱甘肽硫转移酶重组融合蛋白(GST-mSEC)。用GST-mSEC作免疫抗原对小鼠进行免疫,研究其对金黄色葡萄球菌(金葡菌)经乳导管注射感染的免疫效果。试验结果表明,在小鼠乳腺感染金葡菌3d后,免疫小鼠乳腺的眼观病理变化显著轻于未免疫的对照组,乳腺组织中的菌数也明显低于未免疫的对照组。GST-mSEC免疫小鼠可引起大量的特异性抗体产生,并对葡萄球菌超抗原刺激的炎症性细胞因子的产生具有显著的中和抑制作用。结果表明GST-mSEC融合蛋白及其诱导的特异性抗体对金葡菌引起的乳腺感染具有良好的抗感染作用。

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究——鸡传染性支气管炎冻干活疫苗耐热保护剂试验

本试验以水解乳蛋白、乳糖、硫脲、多聚蛋白胨、聚乙烯吡咯烷酮 (PVP K90 )等为主要材料 ,配 A组保护剂 ,并加 B组保护剂 (国内常规的蔗糖脱脂乳 )和 C组保护剂 (国外疫苗保护剂 )分别与鸡传染性支气管炎病毒 (IBV H1 2 0、H52、HK肾型 )弱毒原液 ,按一定比例配苗 ,采取特定的冻干曲线制备的试验疫苗 ,在不同温度下保存后测定效价变化情况。试验证实 ,A组保护剂耐热保护性能最好 ,在 2～ 8℃条件下有效保存期达 2年以上 ,达到国外同类产品水平。

禽传染性脑脊髓炎病毒的分离鉴定

通过ＳＰＦ鸡胚连续传代，从自然发病肉鸡脑组织中分离出一株禽脑脊髓炎病毒，命名为ＡＥＶ－Ｌ２Ｚ株。该病毒抗原与标准阳性血清之间出现清晰的沉淀线，在接种的发病鸡胚和病鸡的胰岛细胞和大脑神经细胞的胞浆中可见呈六边形颗粒状的病毒粒子聚集或散在，直径２５～３０ｎｍ。该病毒对ｐＨ３、氯仿、乙醚、胰蛋白酶、去氧胆酸钠具有抵抗力，在Ｍｇ２＋保护下可抵抗热效应（５０℃），对ｐＨ１２无抵抗力，２５℃和－８０℃反复冻融３、７次或１３次引起毒价下降。病毒滴度１０５．６９ＥＩＤ５０／０．２ｍｌ，其兔抗该分离株的血清中和指数为１２３。