一株人胰腺癌细胞系的建立及其特性

人胰腺癌是很难建系的癌细胞之一,特别是从原发瘤建立的细胞系。我们成功地从一个胰腺癌组织建立了一株人胰腺癌细胞系,命名为PC-3。PC-3细胞呈上皮样,贴壁生长,经过四年连续培养,细胞系稳定。通过免疫组化、电镜观察、染色体及DNA含量分析,细胞集落形成及裸鼠移植,生长因子对瘤细胞生长的影响和癌基因的表达证实PC-3细胞系为人胰腺癌细胞系。PC-3细胞系的建立进一步丰富了人胰腺癌细胞库,对深入了解人胰腺癌细胞生物学及分子生物学特性提供了有力的物质基础。

胰腺肿瘤和正常胰腺组织中c-Ki-ras第12密码子点突变

对2例正常人胰腺组织、7例人胰腺内分泌肿瘤、5例胰腺癌手术标本、3例胰腺癌细胞系、7例胰腺癌裸鼠移植瘤标本的DNA进行PCR扩增后，分别用斑点杂交和单链构象多态性技术对c－Ki-ras第12密码子．点突变进行检测。结果发现，仅胰腺癌标本存在高频率的c－Ki-ras第12密码子的突变（斑点杂交阳性率11／15，单链构象多态性为12／15）。单链构象多态性技术与斑点杂交技术相比具有方便快速的特点。

乳腺癌cyclinD1的扩增和表达与预后的关系

目的 :检检测 5 7例乳腺浸润导管癌组织中cyclinD1基因的扩增和表达 ,并结合肿瘤大小、组织学分级、腋窝淋巴结转移和ER的表达进行临床病理预后分析。方法 :应用SP免疫组织化学及Southern杂交方法检测乳腺癌cyclinD1/CCND1基因的表达及扩增。结果 :显示 5 7例乳腺癌中 42例在瘤细胞核内有cyclinD1的表达。阳性率 73 6 % ,其中强阳性 11例 ,中阳性 14例 ,弱阳性 17例 ,阴性 15例。 16例乳腺癌中 2例有cyclinD1/CCDN1基因扩增。ER阳性率为 6 7%。结论 :cyclinD1的过度表达和扩增与肿瘤的大小和淋巴结转移及组织分级无关。ER和cyclinD1没有表达的病人可能预后差。乳腺癌的发生除与cyclinD1有关外可能还与其它癌基因及抑制癌基因如Rb、Bcl 2和ER等的协同作用有关。

人胰腺癌裸鼠移植瘤浸润和转移方式的研究

为了探讨胰头癌浸润及转移规律，我们用自建的三株人胰头癌裸鼠移植瘤，接种在裸鼠背部、腹腔及爪垫皮下。结果表明：三株移植瘤背部接种均以局部浸润为主，可经淋巴道转移至局部淋巴结（ＰＣＴ－３转移率为３３％；ＰＣＴ－４为４０％；ＰＣＴ－５为３３％），无远处淋巴结和（或）脏器转移；腹腔接种及爪垫接种与背部皮下接种结果相似。肿瘤的生长速度和浸润及转移的能力与肿瘤分化程度有一定关系。

人肺癌、胃癌及肝癌c－Ki－ras第12密码子点突变的研究

以３０例肺癌、４０例胃癌及２２例肝癌石蜡包埋组织提取的ＤＮＡ为模板，经两轮ＰＣＲ扩增一限制性内切酶酶切，用限制性酶切片段长度多态性方法（ＲＦＬＰ）检测ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１２密码子点突变。结果发现，肺癌组织中２０％（６／３０）有突变，其中４０％（４／１０）鳞癌和２０％（２／１０）腺癌有突变，小细胞肺癌（０／１０）无突变；４０例胃癌中仅１例（２．５％）有突变，２２例肝癌无１例突变。ＰＣＲ－ＲＦＬＰ是一种很敏感及快速检测基因突变的方法。

中孕期胎盘植入的诊断和治疗

目的总结中孕期胎盘植入的诊治经验。方法回顾性分析了2002年1月至2010年1月在北京协和医院就诊的31例中孕期胎盘植入患者的临床资料,总结患者的诊断经过及治疗选择和方法。结果 31例患者中,1例(3.2%)在分娩前经B超提示可疑胎盘植入,30例(96.8%)分娩前B超未发现异常;12例(38.7%)于分娩后随诊期间发现。14例患者分娩后再次行刮宫术,其中6例(42.9%)有效,8例无效后转行子宫动脉栓塞术(UAE)。13例患者直接行UAE,共21例患者行UAE,其中19例(90.5%)治疗有效,1例栓塞后β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)5个月未正常行开腹病灶切除术,1例β-HCG轻微上升后失访。3例患者行宫腔镜检查,2例在宫腔镜下行病灶清除术,1例直接行宫腔镜检查确诊后行病灶切除术,均治疗有效。1例患者阴道分娩过程中出现出血性休克,急诊行开腹小剖宫术。31例患者中,13例分娩过程中发生大出血,其中2例发生失血性休克;3例次发生产后出血,行UAE后可确切止血。无1例切除子宫。结论中孕期胎盘植入通常在胎儿娩出后诊断,存在滞后性,应重视引产后的随诊以及时发现胎盘植入的可能。中孕期胎盘植入的治疗应以保守性治疗为主,UAE是一种有效的止血及治疗方法。

宫颈妊娠的诊断和治疗

目的总结宫颈妊娠的诊断和治疗经验。方法回顾性分析1990年1月至2009年11月在北京协和医院就诊的27例宫颈妊娠患者的临床资料,比较3种保留生育功能治疗方法的疗效。结果 27例患者中,1例行全子宫切除;26例选择保留生育功能治疗,其中14例行子宫动脉栓塞(UAE)后刮宫术,8例直接行刮宫术,4例行甲氨蝶呤(MTX)保守治疗后刮宫。UAE+刮宫术组、直接刮宫术组和MTX+刮宫术组的治疗成功率分别为100%、75.0%和50.0%,UAE+刮宫术组明显高于MTX+刮宫术组(P=0.005)。MTX+刮宫术组的住院时间为(17.0±3.2)d,明显长于UAE+刮宫术组的(6.1±2.9)d(P=0.004)和直接刮宫术组的(4.9±3.4)d(P=0.001)。3组的平均住院费用差异无统计学意义(P=0.104)。结论对于明确诊断或高度可疑宫颈妊娠的患者,选择UAE后刮宫是一种安全有效的治疗方法。

甲状腺实性结节超声造影与免疫组织化学分析

目的探讨甲状腺良恶性实性结节CEUS增强模式与CD34、VEGF、CK19和Ki-67免疫组织化学表达的相关性。方法采用低机械指数实时灰阶谐波CEUS技术,对80例甲状腺患者的82个实性结节进行CEUS,包括甲状腺乳头状癌结节38个、髓样癌3个,结节性甲状腺肿31个、腺瘤7个、桥本病结节3个。术后行CD34、VEGF、CK19和Ki-67免疫组织化学染色。比较良恶性结节CEUS增强模式和免疫组织化学表达水平差异,分析其相关性。结果甲状腺良恶性结节的增强模式存在差别(P<0.01),良性结节78.05%(32/41)表现为环状增强,恶性结节92.68%(38/41)表现为不均匀增强。恶性结节的CD34、VEGF、CK19和Ki-67表达显著高于良性结节(P<0.01)。非均匀增强与CD34、VEGF、CK19呈正相关(r=0.39,P<0.001;r=0.26,P=0.04;r=0.54,P<0.001);环状增强与CD34、CK19、Ki-67呈负相关(r=-0.38,P<0.001;r=-0.59,P<0.001;r=-0.25,P=0.03)。结论 CEUS和CD34、VEGF、CK19和Ki-67免疫组织化学染色有助于鉴别甲状腺良恶性结节。

甲状腺乳头状癌RET、CK19、TG、Ki-67的表达

目的研究甲状腺乳头状癌RET、CK19、TG、Ki-67蛋白表达特点及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测RET、CK19、TG、Ki-67蛋白在30例甲状腺乳头状癌、10例结节性甲状腺肿和18例癌旁正常甲状腺中的表达。结果RET、CK19在乳头状癌的阳性率(66·7%、83·3%)明显高于结节性甲状腺肿和正常甲状腺阳性率(7·1%、25·0%),两者差异有显著性(P<0·01)。乳头状癌组及良性病例组TG表达阳性率差异无显著性(P>0·05)。96·7%的乳头状癌Ki-67阳性细胞数小于10%。结论RET及CK19在甲状腺乳头状癌表达增加,具有一定的病理诊断价值。

头颈部鳞癌人乳头状瘤病毒16/18感染状态与Ki-67、P53表达的关系

目的通过测定人头颈部鳞状细胞癌组织中人乳头状瘤病毒(HPV)16/18感染和Ki-67、P53蛋白的表达,探讨HPV16/18感染和Ki-67、P53蛋白表达的相关性及意义。方法采用荧光定量PCR方法测定头颈部鳞癌患者肿瘤组织中HPV16/18DNA的含量,同时以免疫组织化学方法测定Ki-67、P53蛋白的表达状态。结果 62.8%的患者在头颈部鳞癌组织中检测到HPV16/18DNA,46.15%的患者肿瘤组织表达P53蛋白为阳性。患者肿瘤组织Ki-67的表达在2%～70%。HPV16/18DNA含量与患者的性别、吸烟、饮酒和临床分期无相关性(P>0.05),与病理学分级呈正相关(r=0.350,P=0.001),与Ki-67表达无相关性(P=0.179),与P53表达呈负相关(r=-0.197,P=0.04)。结论头颈部鳞癌的发生可能和HPV16/18感染有关,致病机制涉及P53蛋白的降低表达。

肺黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的临床与影像表现

目的研究肺黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的临床及影像表现。方法对13例经病理证实的肺MALT淋巴瘤的临床及CT影像表现进行回顾性分析。结果 13例患者中,7例无明显症状,6例表现为呼吸道症状,包括咳嗽、咳痰及喘憋等,1例伴有发热。CT表现为单发结节2例,多发结节3例;单发实变3例,多发实变5例。所有患者的CT影像均可见支气管充气征,伴发支气管扩张4例;伴发磨玻璃影5例;伴发肺间质病变5例。伴发淋巴结肿大1例,胸腔积液2例。病理均提示大量淋巴细胞浸润,并可见核异型细胞,为B细胞来源。结论肺MALT淋巴瘤主要表现为肺部实变、结节或肿块影伴支气管充气征,淋巴结肿大少见,惰性临床病程,可伴有自身免疫性疾病,如有上述表现应考虑肺MALT淋巴瘤的可能,其诊断依赖病理并结合免疫组织化学检查。

雌激素制备大鼠子宫肌瘤动物模型

目的建立子宫肌瘤动物模型,明确相关机制。方法性成熟雌性大鼠肌注200μg和300μg雌激素(E2),每周2次,持续8周和10周后处死,观测血清中E2和孕激素(P)水平,及肌瘤中雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)表达水平,计算肌瘤形成率和动物死亡率。HE染色对大鼠子宫肌瘤与人子宫肌瘤进行病理组织学比较,确定E2诱导大鼠子宫肌瘤形成的最佳剂量和给药周期。结果肌注E2 200μg 8周后,大鼠血清E2水平显著升高(P<0.01),肉眼可见肌瘤形成。病理组织学检查显示与人子宫肌瘤相似,肌瘤组织中ER、PR表达明显增强。结论大鼠肌注E2 200μg/只,2次/周,连续8周可建立与人相似的子宫肌瘤动物模型。动物子宫局部组织高浓度ER、PR与子宫肌瘤发生有关。

胰腺实性假乳头状瘤临床病理特征及免疫组化表型观察

目的探讨胰腺实性假乳头状瘤(SPTP)的临床病理特征及免疫组化表型.方法对12例SPTP进行临床病理、免疫组化观察并随访2～44个月.结果12例SPTP占同期胰腺肿瘤4.7%;男女之比为1:11;平均年龄29岁;仅6例有临床症状;其中6例大体呈囊实性,6例呈实性;7例有肉眼可见的完整包膜.镜下11例肿瘤见纤维性包膜;肿瘤由形态相对一致的中等大小细胞构成;部分细胞可见核沟;肿瘤细胞排列成实性巢片状、假乳头状,伴发囊性变,并可见灶性及成片的出血坏死,另见多种其他结构,包括嗜酸性小球、瘤细胞黄瘤样变、间质黏液样变、伴有异物巨细胞反应的胆固醇性针样结晶,部分有浸润周围胰腺的现象.瘤细胞vimentin、AAT弥漫(+),部分病例Syn、CD56、CD10、AE1/AE3、PR局部(+),CgA均(-);嗜酸性小球PAS(+),且可抗淀粉酶消化;12例术后随访2～44个月,所有患者均术后无瘤生存,未发现复发及转移.结论胰腺实性假乳头状瘤多发于年轻女性,具有多种组织学结构、细胞形态及多向分化的免疫组化表型.该肿瘤发展缓慢,生存时间长,但少数可复发、转移,为低度恶性肿瘤.

上皮生长因子及其抗体对人癌细胞系生长的影响

本研究观察了上皮生长因子(EGF)抗EGF抗体和抗EGF受体抗体对3个目建的人胰腺癌细胞系(PC-1,PC-2,PC-3)和3个其它人癌细胞系(肺腺癌LETP,乳腺癌BCP37和胃腺癌SGL7901)生长的影响。结果表明:EGF仅对PC-1和LETP2个细胞系有轻度刺激生长的作用,对其它4个细胞系无明显作用。在有EGF存在的条件下,抗EGF抗体和抗EGF受体抗体对PC-1,LETP和SGL7901 3个细胞系有生长抑制作用。 用Northern核酸杂交技术研究表明这6个人癌细胞系中均有EGF受体mRNA的表达。结果表明:虽然这些细胞系中均有EGF受体的基因表达,但不一定对外源性EGF处理有反应。

超声监测在早孕电吸人工流产手术中的应用价值

目的评估超声监测在早孕电吸人工流产手术中的应用价值。方法以110例早孕需要行电吸人工流产手术的患者为研究对象,所有人工流产手术均按常规进行,当临床医师认为按常规可以结束时进行超声检查,如超声提示宫腔内有残留组织,再次刮宫至超声示内膜线清晰,所有再刮出的组织送病理,纳入研究组;如超声提示宫腔吸净,则手术结束,纳入对照组。结果 110例患者中,28例(25.5%)纳入研究组,其中11例(39.3%)刮出组织中有滋养细胞或绒毛,内有3例为平滑肌组织中存在滋养细胞或绒毛;6例为蜕膜样组织;11例为分泌期子宫内膜。82例(74.5%)纳入对照组,其中1例出现人工流产不全。人工流产不全发生率为0.9%。研究组患者的平均手术时间、术前探宫腔深度和术中进出宫腔次数分别为(20.6±2.1)min、(10.6±1.3)cm和(5.6±2.0)次,明显高于对照组的(11.5±3.5)min、(9.7±1.1)cm和(3.8±1.2)次(P均<0.01);在术后3周血清人绒毛膜促性腺激素(P=0.51)、孕酮(P=0.61)和子宫内膜厚度(P=0.57),及月经恢复时间(P=0.08)和经量(P=0.44)等方面差异无统计学意义。结论术中超声监测有助于降低常规早孕电吸人工流产手术中不全流产发生率,不会导致子宫内膜的过度伤害。孕周(宫腔深度)大的患者更需要术中进行超声监测。

原发性甲状腺淋巴瘤研究进展

原发性甲状腺淋巴瘤(PTLs)与甲状腺自身免疫反应密切相关,其分子发生机制目前尚不十分清楚。提高PTLs良恶性的分辨能力仍是亟待解决的问题,现已有部分分子生物学手段应用于临床诊断。PTLs的治疗和预后与其组织学特征、病理分类及临床分期密切相关,随着淋巴瘤分类、分期、分级以及国际预后索引标准的不断明确和细化,甲状腺淋巴瘤个性化治疗已成为可能。

MMP2、MMP9、Galectin-3、CK19、及Ret在甲状腺滤泡型肿瘤中的表达

目的 探讨MMP2、MMP9、Galectin 3、CK19和Ret在甲状腺良、恶性滤泡型肿瘤中的表达情况 ,以及其在病理诊断中的价值。方法 运用免疫组化方法检测 35例甲状腺滤泡癌、36例甲状腺腺瘤MMP2、MMP9、Galectin 3、CK19和Ret的表达情况。结果 MMP2和MMP9在甲状腺滤泡癌表达阳性率为 10 0 % ,而在甲状腺腺瘤中表达分别为 2 7.8%及 4 7.2 % ,二者在良、恶性肿瘤的表达差异极显著 (P <0 .0 1)。Galectin 3表达阳性率分别为 4 8.6 %及13.9% (P <0.0 5 )。CK19在甲状腺滤泡癌中阳性有所增高 ,但与腺瘤比较表达无差异。Ret几乎不在甲状腺滤泡型肿瘤中表达。同时观察 15例甲状腺滤泡癌癌旁组织 ,5种蛋白均不表达或表达甚少。结论 MMP2、MMP9及Galectin-3在恶性甲状腺滤泡型肿瘤中的表达高于良性 ,可能三者与促进甲状腺滤泡型肿瘤的浸润机制有关 ,其免疫组化染色虽无绝对特异性 。

脾硬化性血管瘤样结节性转化临床病理观察

目的报道2例少见的脾硬化性血管瘤样结节性转化(SANT),以提高对该病变的认识。方法对2例SANT的临床、病理特征及免疫组化表达进行详细的形态学观察并复习相关文献。结果脾SANT具有众多由环靶状纤维组织围绕的肉芽肿样结节,伴有结节间不同程度硬化的间质;肉芽肿样结节内细胞呈卵圆形、短梭形,胞质相对丰富,部分细胞胞质内可形成含红细胞的腔隙,细胞间还穿插有衬覆肥胖内皮细胞的枝芽状毛细血管及相对扩张的窦隙样血管腔隙。免疫组化显示结节内不同血管样结构有3种不同的免疫组化表达;此外,结节内梭形、卵圆形细胞CD31、CD68和SMA呈不同程度(+),而CD21、S-100、CD1和EMA均(-);仅结节周边细胞F8(+),SMA结节间及结节周边纤维SMA均(+)。结论SANT是脾具有特征性改变的一种良性病变。过去常被归入脾炎性假瘤、错构瘤或血管瘤等。

原发性子宫和阴道非霍奇金淋巴瘤

目的 探讨原发性子宫和阴道非霍奇金淋巴瘤临床病理特点及治疗。方法 回顾性分析 1996年 8月～ 2 0 0 3年 9月北京协和医院和江西省妇幼保健院收治的 10例原发性子宫和阴道非霍奇金淋巴瘤患者的临床表现、病理特征和治疗结果。结果 10例原发性子宫和阴道非霍奇金淋巴瘤患者平均发病年龄为 4 3 5岁 ,分期均为IEa,发生部位 :子宫颈 8例、子宫底部和阴道壁各 1例。临床表现为阴道分泌物增多和血性分泌物 ,4例患者有明确占位病变。组织病理均为B细胞淋巴瘤 (CD2 0 + )。 4例为粘膜相关淋巴瘤 (MALT) ,4例弥漫大B细胞淋巴瘤 (DLBCL)。手术治疗 6例 ,手术方式为全子宫、双附件切除及盆腔淋巴结清扫术 ,其中手术 +化疗 5例 ,手术 +化疗 +放疗 1例 ,单纯化疗 3例 ,化疗 +放疗 1例。化疗多为CHOP方案。死亡 1例 ,存活 9例 ,最长生存期已 84个月。结论 原发性子宫和阴道非霍奇金淋巴瘤极为少见 ,临床表现无特异 ,组织病理B细胞淋巴瘤为主 ,根治性手术切除和联合化疗是有效的治疗方法 。