一株奶牛粪便中甲烷氧化菌的分离与鉴定

甲烷氧化菌是一类能以甲烷和甲醇作为唯一碳源和能源进行生长的微生物。利用甲烷氧化菌选择性培养基从健康奶牛粪便样本中分离、筛选多株甲烷氧化菌,选择其中一株对甲烷代谢率较高的菌株命名为M17,并对其进行形态学观察、16S rDNA同源性比对以及理化性质分析的研究。结果表明,该菌株属于甲烷氧化菌Methylobacterium属,能够利用多种碳源进行生长,但以甲醇为碳源生长最为良好,最适生长温度为35℃,最适pH为6.8左右。

MCT1在犊牛消化道的分布以及SCFA对MCT1表达的影响

短链脂肪酸(SCFAs)是由纤维素性饮食在瘤胃内发酵产生的乙酸、丙酸、丁酸以及戊酸等组成的混合物。SCFA对维持反刍动物的能量平衡至关重要,目前对SCFA的吸收机制和影响因素至今尚不清楚,本试验主要研究一元羧酸转运蛋白(monocarboxylate/proton cotransporter isoform 1,MCT1)在犊牛消化道内的分布及SCFA对MCT1表达的影响。运用免疫印迹Western blot和实时荧光定量PCR检测MCT1在犊牛消化道内的分布和表达;在体外试验中,体外添加一定比例的SCFA(乙酸、丙酸和丁酸的混合物)处理犊牛原代瘤胃上皮细胞,检测SCFA对MCT1表达水平的影响。结果显示:MCT1在整个消化道内均有分布,并且在瘤胃内的表达水平显著高于其他部位(P<0.01);体外处理的瘤胃上皮细胞,正常组MCT1的表达水平显著高于(P<0.05)SARA组。结果表明:正常水平的SCFA能够促进MCT1的表达和转运能力,而过量的SCFA抑制MCT1的表达和转运能力。

脂联素对酮病奶牛中性粒细胞自噬相关基因mRNA表达的影响

通过模拟向高BHBA的中性粒细胞培养液中添加不同质量浓度的脂联素(ADPN),运用荧光定量PCR技术,分别检测中性粒细胞自噬相关基因mRNA的表达水平。结果显示:添加高BHBA(4.8mol/L)的中性粒细胞培养6h后,与对照组相比,自噬相关基因LC3B、Beclin、ULK1的mRNA表达水平显著升高(P<0.01),SQSTM1(p62)、mTOR的mRNA表达水平显著下降(P<0.01);添加不同质量浓度的ADPN(25,50,100μg/L)后,相对于高BHBA组,中性粒细胞自噬相关基因LC3B、Beclin、ULK1的mRNA表达水平显著下调,且在ADPN 50μg/L时,具有极显著差异性(P<0.01);此外SQSTM1、mTOR的mRNA表达水平显著升高。结果表明:BHBA可增加中性粒细胞自噬相关基因的表达,ADPN可抑制高BHBA引起的中性粒细胞细胞程序性死亡,进一步说明ADPN对调控酮病奶牛中性粒细胞免疫抑制具有重要的价值意义。

高乙酰乙酸诱导中性粒细胞胞外诱捕网的形成

中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是几年前才发现的一种重要的先天免疫防御机制，目前NETs的发生机制尚不清楚，但是当缺乏有效抗衡调节时，它又能损伤组织、引发自身免疫等疾病。本试验为了研究作为酮病奶牛高酮血症的主要成分之一的乙酰乙酸（AcAc）对NETs表达量的影响，体外添加不同浓度AcAC处理中性粒细胞，运用免疫荧光技术和激光共聚焦显微成像定性评价NETs的生成；采用PicoGreen^（R）dsDNA染料定量检测细胞上清游离DNA和Westernblot反映NETs生成量。结果显示，高ACAC组产生NETs的量显著高于对照纽组（P〈0．05），表明高ACAC可以体外成功诱导中性粒细胞产生NETs。

催乳素调控肝脏细胞脂代谢的信号机制

催乳素（prolactin,PRL）是启动和维持泌乳所必须的激素,在泌乳期间能够优先将机体营养物质和能量流向乳腺,用于乳脂和乳蛋白的合成。本试验采用体外分离培养奶牛肝脏细胞,分别添加PRL和磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）抑制剂LY294002、PRL和酪氨酸蛋白激酶2（janus kinase 2,JAK2）抑制剂AG490,通过甘油三脂（triglyceride,TG）测定试剂盒测定细胞内TG含量,以确定PRL的脂质合成通路,进而探讨其对脂合成相关基因的作用。结果显示,PRL通过PI3K-Akt信号通路促进奶牛肝脏细胞TG的合成,此时关键转录因子固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）的表达活性和转录活性及下游控制脂合成的脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）基因表达均显著升高。而与之相反,添加LY294002之后,SREBP-1c基因的表达活性和转录活性及下游基因FAS、ACC1的表达则显著降低。结果表明,PRL通过PI3K-Akt通路调节SREBP-1c、FAS和ACC1的表达来调控肝脏细胞的TG合成。