SR9009联合吲哚丙酸通过核因子κB信号通路减轻C2C12成肌细胞的炎症反应

背景:钟基因Rev-erbα参与调节炎症,但激活Rev-erbα会增加心脑血管疾病风险。为降低相关风险,探索Rev-erbα激动剂SR9009联合其他药物来减轻骨骼肌成肌细胞炎症,奠定治疗炎症相关性骨骼肌萎缩的理论基础。目的:探讨脂多糖刺激C2C12成肌细胞时吲哚丙酸、SR9009与核因子κB信号通路的关系。方法:①1μg/mL脂多糖刺激C2C12成肌细胞,RNA转录组测序结合KEGG通路富集分析信号通路。②CCK-8法检测C2C12成肌细胞活性,筛选吲哚丙酸的最佳给药浓度;然后将细胞分为空白对照组、脂多糖(1μg/mL)组、SR9009(10μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸(80μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸+SR9009+脂多糖组,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素6水平,RT-qPCR检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。③siRNA敲减Rev-erbα,RT-qPCR评估敲减效率,检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达。结果与结论:①与空白对照组比较,脂多糖时间依赖性抑制成肌细胞融合形成肌管,白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达水平升高,细胞上清液中白细胞介素6水平显著升高;KEGG通路分析支持脂多糖刺激激活核因子κB信号通路。②吲哚丙酸浓度>80μmol/L时抑制C2C12成肌细胞活性;吲哚丙酸和SR9009通过抑制核因子κB信号通路发挥抗炎作用,降低白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值低于脂多糖组。SR9009联合吲哚丙酸显著降低脂多糖诱导的炎症,Toll样受体4、CD14、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达水平进一步下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值显著低于吲哚丙酸+脂多糖组和SR9009+脂多糖组。③Rev-erbα随脂多糖刺激时间依赖性升高;siRNA敲减Rev-erbα效率达58%以上,成功敲减Rev-erbα后添加脂多糖,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达较脂多糖组显著上调。④结果说明,Rev-erbα可以作为调节炎症反应的靶点,SR9009靶向激活Rev-erbα联合吲哚丙酸能抑制核因子κB信号通路显著减轻C2C12成肌细胞的炎症反应,联合抗炎效果优于单独干预。

R59949对完全弗氏佐剂诱导的大鼠炎性痛行为的影响

目的:探究甘油二酯激酶(DGK)参与大鼠持续性炎性痛调节的作用和机制。方法:左侧足底注射完全弗氏佐剂(CFA)建立大鼠炎性痛模型,并给予DGK抑制剂R59949进行干预。通过热缩足潜伏期(PWTL)和机械缩足阈值(PWMT)行为学实验观察各组大鼠的痛行为变化,RT-qPCR检测大鼠脊髓背角DGKα、DGKβ和DGKγmRNA的表达,Western Blot法检测TNF-α和IL-6的表达,免疫荧光染色观察DGKα的表达与细胞定位。结果:与对照组相比,炎性痛大鼠PWTL和PWMT显著降低(均P<0.001),并且脊髓中DGKαmRNA(P<0.001)和蛋白表达显著增高(P<0.05),TNF-α和IL-6的蛋白表达显著增高(P<0.001)。炎性痛大鼠给予R59949处理后,PWTL和PWMT明显降低(均P<0.01),TNF-α和IL-6在脊髓的表达显著增多(P<0.05,P<0.001)。免疫荧光染色结果显示,DGKα在炎性痛大鼠脊髓神经元出现表达。结论:DGK抑制剂R59949增强大鼠的炎症性痛并促进TNF-α和IL-6的表达,DGKα参与炎症性痛的调控。

基于增强CT图像和Swin Transformer网络的食管癌T分期智能诊断模型的构建与评估

目的基于增强CT图像和Swin Transformer网络,拟构建食管癌T分期智能诊断模型。方法收集2018年1月至2022年4月在陆军军医大学第一附属医院和山西省肿瘤医院胸外科经病理证实为食管癌的150例患者的45000张术前增强CT图像。经过UperNet Swin网络自动分割和肿瘤体积的计算,使用ResNet50、Swin Transformer和VIT 3个网络进行食管癌T分期智能诊断模型的构建。使用精准率、召回率、F1-score、特异度以及阴性预测值(negative predictive value,NPV)等指标在150例内部数据集上评价模型性能,描绘混淆矩阵和ROC曲线。结果在3个食管癌T分期诊断的模型中,Swin Transformer模型结合肿瘤体积、病理信息等特征的分期诊断效果最好,T1~T4期的精准率分别为1.00、0.67、0.83、1.00,AUC为0.861,优于ResNet50和VIT分期诊断模型,它们的精准率分别为0.13、0.27、0.59、0.81和0.03、0.14、0.56、0.75,AUC分别是0.611和0.542。结论与ResNet50和VIT网络比较,Swin Transformer网络能够更精准进行食管癌智能T分期诊断。

基于Vgg16-Unet模型的MRI图像下前列腺分区智能分割研究

目的基于前列腺核磁共振图像(MRI),构建深度学习智能分割模型,展开MRI图像下前列腺分区的智能分割研究。方法收集山西省肿瘤医院2018年1月至2020年10月33例经MRI扫描的前列腺癌患者T2WI本地数据,包括T1期6例,T2期15例,T3期9例,T4期3例。选取荷兰奈梅亨拉德堡德大学医学中心提供的前列腺MRI公开数据集中前列腺癌患者的T2WI序列数据,共379例数据,所有数据按照7∶1∶2的比例随机划分为训练集265例、验证集38例和测试集76例。在Unet模型基础上以Vgg16模型为编码器,使用多层卷积层的同时利用迁移学习策略,构建Vgg16-Unet模型,以医师手工勾画和标注的前列腺分区(前纤维基质带、中央带、外周带、移形带)为金标准,在测试集上,采用Dice相似系数(Dice similarity coefficient,DSC)、95%豪斯多夫距离(95%Hausdorff surface Distance,HD95)评估模型对前列腺分区的分割精度。结果模型在测试集上对前纤维基质带、中央带、外周带、移形带实现了较为准确的分割,其平均DSC分别为56.95%、47.28%、80.78%、90.63%,平均HD95分别为20.84、20.02、15.39、11.20 mm。模型智能分割与手工标注测量的体积一致性较好,其差值均位于95%一致性区间内。结论构建的Vgg16-Unet模型分割精度优于Unet、Unet++、ResUnet++3个Unet经典变种网络,能够显著提高前列腺癌MRI图像分割效率,减轻医师工作量。

基于深度学习的MRI图像下前列腺癌T分期诊断研究

目的通过与Dense-Net、Res-Net和Vision-Transformer(ViT)网络比较,探讨Swin-Transformer(SwinT)网络在前列腺癌MRI图像T分期诊断中的优势。方法收集2018年4月至2022年1月期间山西省肿瘤医院和陆军军医大学第二附属医院共152例经病理活检证实的前列腺癌患者的MRI图像,包括T2WI和fT2WI两种序列共计3017幅。依据临床T分期报告,将患者图像分为2类:低中危组(T≤T2c)和高危组(T≥T3a),并将所有患者按照7∶1∶2的比例简单随机划分为训练集(n=107)、验证集(n=15)和测试集(n=30)用于训练智能T分期诊断模型。采用准确度、精确度、混淆矩阵、受试者工作特征曲线(ROC)以及ROC曲线下面积(AUC)等参数评估各网络的诊断效能。结果在低中危组和高危组的二分类中,Dense-Net、Res-Net、ViT以及SwinT网络模型训练集中精确率分别为0.587、0.410、0.600、0.680,以及AUC分别为0.630、0.477、0.648、0.708。SwinT网络模型热力图的注意力主要集中在前列腺区域,特征提取效果最好。结论相比Dense-Net、Res-Net及ViT网络,SwinT网络在前列腺癌MRI图像分类任务中取得了最优的预测性能,可用于前列腺癌T分期的智能诊断,提高诊疗效率。

溶血磷脂酸对离体培养的大鼠胚胎神经干细胞向神经胶质细胞分化的影响(英文)

本研究用免疫细胞化学荧光双标技术观察了溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对大鼠胚胎神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化为少突胶质细胞(galactocerebroside-positive,Gal-C阳性)和星形胶质细胞(glial fibrillary acidic protein-positive,GFAP阳性)的影响,并且用RT-PCR技术对NSCs可能表达的LPA受体进行分析。结果显示:(1)加入不同浓度(0.01～3.0μmol/ L)LPA,第7天进行检测时,少突胶质细胞数量呈明显的剂量依赖性增加,峰值出现在1.0μmol/L LPA组,少突胶质细胞所占百分比从对照组的8.5%增加到32.6%;(2)星形胶质细胞的分化几乎不受LPA的影响,第7天时各LPA处理级星形胶质细胞百分比与对照组相比均无显著性差异;(3)RT-PCR结果显示,大鼠胚胎NSCs的LPA_1和LPA_3受体表达明显,而LPA_2受体表达很弱。以上结果表明,较低浓度的LPA可能作为细胞外信号,通过LPA_1和LPA_3受体促进大鼠胚胎NSCs向少突胶质细胞分化和生成,但对星形胶质细胞的分化过程无明显影响。

溶血磷脂酸促进离体大鼠胚胎神经干细胞的增殖及其向胆碱能神经元分化(英文)

溶血磷脂酸（1ysophosphatidic acid，LPA）是一种细胞外磷脂信号。本研究用[^3H]-胸腺嘧啶掺入法、免疫细胞化学和Western blot等技术，观察了LPA对体外培养的大鼠胚胎神经干细胞（neural stem cells，NSCs）的增殖以及向MAF2标记的一般神经元和ChAT标记的胆碱能神经元的分化的影响。结果显示：（1）在特殊的无血清培养基中加入低浓度的LPA（0．01-1．0μmol/L）后，NSCs对【^3H】-胸腺嘧啶的摄入呈剂量依赖性增加，表明LPA对NSCs有显著的促增殖作用；（2）在培养基中加入胎牛血清以诱导NSCs的分化，发现低浓度的LPA增加MAF2阳性和ChAT阳性神经元的比例，0．1μmol／L LPA引起的增加达到峰值；（3）Western blot分析显示LPA促进了MAP2和ChAT的表达；（4）在诱导NSCs出现分化早期，用倒置显微镜观察到低浓度的LPA明显促进细胞突起的生长和细胞的迁移。以上结果表明，低浓度LPA在一定范围内可以促进NSCs的增殖、并分化为一般的MAP2阳性神经元和特殊的胆碱能神经元，而且LPA可以促进在分化早期出现的神经元或神经胶质细胞前体细胞的迁移和突起生长。

人胎儿呼吸道肥大细胞的超微结构

目的:探讨人胎儿呼吸道发育中肥大细胞的分型、超微结构特点及其功能状态。材料和方法:对12例6月～9月胎龄人胎儿鼻粘膜和气管组织进行透射电镜标本制作和观察。结果:胎儿期呼吸道肥大细胞的颗粒多为粗粒状或细粒状,有的有致密核芯,少量颗粒内有晶格状结构;并且肥大细胞有活跃的脱颗粒现象。结论:人胎儿呼吸道肥大细胞为不成熟的MCTC型,肥大细胞通过脱颗粒积极参与呼吸道的发育。

组织学与胚胎学考试有效性分析

应用经典测验理论对一套实际使用的教师自编试卷进行定量分析,结果显示:该试卷总体上难度为0.73,区分度为0.34,信度α系数为0.67,综合判定为A级;项目分析表明各题型综合判定均为A级,仅有少数几个选择题需要修改。这表明本试卷难度适中,区分度良好,能有效地将不同水平的学生区分开来。

人胎儿呼吸道肥大细胞的定量研究

目的 研究不同胎龄人胎儿呼吸道肥大细胞的分布、形态和数量变化。方法 5 2例 2月～ 9月龄的人胎儿 ,分别取鼻黏膜和气管组织 ,HE染色示一般组织结构 ,甲苯胺蓝 (TB)染色示肥大细胞。结果 肥大细胞在 3月龄的鼻黏膜和气管少量呈现 ,随着胎龄的增加 ,数量渐增多 ,在鼻黏膜于 4月、6月和 7月 (P <0 .0 0 1) ,在气管于 4月、6月 (P <0 .0 0 1)和 8月 (P <0 .0 1)有显著性增多 ,且同胎龄鼻黏膜的肥大细胞量多于气管的。结论 肥大细胞的量的变化与胎龄密切相关 。

人胎儿呼吸道肥大细胞的组化特征及其与其它细胞的关系

用组织化学技术方法 ,我们对 5 0例不同胎龄人胎儿的鼻粘膜和气管的组织内的肥大细胞组织化学特征以及其与周围其它细胞的关系进行了研究。结果发现 :随着胎龄的增加 ,肥大细胞的颗粒甲苯胺蓝 (TB)染色时从浅紫色加深至深紫色 ,Alcian蓝·藏红 (AB· S)染色呈从蓝色到出现红色、红蓝混合染色的变化 ,临界电解质浓度 (CEC)值和硫酸小蘖碱荧光染色强度逐渐增高 ;多见肥大细胞与成纤维细胞、淋巴细胞和毛细血管内皮等密切接触 ,且出现在神经内、外膜之中。这提示 :1肥大细胞的发育成熟与胎儿呼吸道器官的发育是相关的。 2肥大细胞可能参与细胞、组织的分化成熟。

数码显微摄影中应注意的几个方面

结合实践介绍了数码显微摄影系统应用和显微镜调节中应注意的几个方面，指出要获得一幅满意的图像需要制作出优质的标本、恰当调节显微镜和合理使用成像软件三者的有机结合。

PTX阻断溶血磷脂酸对大鼠胚胎神经干细胞的促增殖作用(英文)

目的观察溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对大鼠胚胎神经干细胞(neural stemcells,NSCs)的增殖的影响以及百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)对LPA作用的影响。方法体外培养神经干细胞,对生成的神经干细胞球进行计数显示增殖情况。结果在特殊的无血清培养液中加入低浓度LPA(0.01-1.0μmol/L)后,神经干细胞球数量呈剂量依赖性增加,表明LPA对NSCs有显著的促增殖作用;②培养液中同时加入LPA和PTX后,神经干细胞球计数显示LPA引起的NSCs的增殖被抑制了98%。结论PTX阻断了LPA对大鼠胚胎神经干细胞的促增殖作用,从而推测LPA的促增殖作用可能主要通过PTX敏感的Gi-Ras-Raf-MAPK信号转导途径实现。

甘油二酯激酶在大鼠小脑的免疫组织化学定位

目的：观察甘油二酯激酶（DGK）同工酶和蛋白激酶C（PKC）在小脑的表达.方法：用抗DGK各同工酶和PKCα、-γ抗体,对成年大鼠小脑冷冻切片进行免疫组织化学显色.结果：DGKα在小脑白质的神经纤维表达较强;DGKβ仅在白质弱表达;DGKγ、-ζ、-ι在皮质细胞胞体均呈阳性,在白质不表达,DGKγ、-ζ在浦肯野细胞的树突有表达,DGKι则在所有的突起都不表达;DGKε在浦肯野细胞的胞质和树突表达较强,在白质部分神经纤维弱表达;PKCα在皮质和白质的纤维表达较强,在浦肯野细胞的胞质表达;PKCγ与DGKε的表达模式相似,但PKCγ只表达在浦肯野细胞树突起始部.结论：DGK各同工酶和PKCα、-γ在大鼠小脑有不完全相同的分布,提示DGK同工酶和DGK/PKC系统多方面参与了小脑的功能活动.

小鼠胚胎心流出道的形态发生与呼吸内胚层发育耦联

目的探讨小鼠胚胎心发育过程中前肠呼吸内胚层与第一生心区和第二生心区及胚胎心流出道的形态发生关系。方法胚龄7.5～13d小鼠胚胎心各3个,连续石蜡切片,用抗胰岛素增强子结合蛋白1(ISL-1)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗Nkx2.5和抗增殖细胞核抗原(PCNA)抗体进行免疫组织化学或免疫荧光染色。结果胚胎发育7.5d,ISL-1在生心板心肌前体细胞表达并与发育中的第二生心区ISL-1阳性细胞连续。胚胎发育第10～13天,可见ISL-1强阳性的前肠腹侧呼吸内胚层细胞增生,排列不规则,失去极性,细胞间间隙明显,变为间充质样细胞,与周围ISL-1阳性间充质细胞无明确界限。紧邻动脉囊背侧壁,局部增生的内胚层向动脉囊方向生长,形成实心细胞索,ISL-1阳性间充质细胞围绕前肠腹侧呼吸内胚层及细胞索形成特征性锥体样结构。结论第一和第二生心区是连续结构,ISL-1同时是两个生心区心肌前体细胞的标记蛋白。呼吸内胚层和内胚层细胞索可能诱导第二生心区的扩展,并通过上皮-间充质转化,保持第二生心区细胞数量稳定。

小鼠胚胎心脏流出道嵴的发育

目的探讨小鼠胚胎心脏流出道嵴内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性细胞的来源及流出道嵴融合时间充质细胞超微结构的变化。方法用抗α-SMA、抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)单克隆抗体、PlexinA2探针,对胚龄10～14d小鼠胚胎心脏切片进行免疫组织化学和原位杂交染色;透射电镜观察胚龄12.5d时小鼠心流出道嵴的融合过程。结果胚龄10～11d,小鼠神经管及其周围、动脉囊和弓动脉壁可见PlexinA2阳性细胞,并沿动脉囊壁迁入流出道嵴内,部分细胞同时表达α-SMA。胚龄12d,PlexinA2阳性细胞分布在脊神经节、咽前间充质、主肺动脉隔以及主、肺动脉壁。主肺动脉隔显α-SMA强阳性,但动脉壁仅见少量α-SMA阳性细胞。胚龄12.5d,流出道嵴内致密间充质细胞团形成并开始融合,PlexinA2表达较弱,α-SMA表达呈强阳性。在流出道嵴融合开始后,嵴表面的内皮细胞带形成继而断裂消失,由含微丝少、排列稀疏的间充质细胞取代。两侧致密细胞团逐渐靠拢、融合。有的间充质细胞内含较多线粒体和微丝,细胞之间形成细胞连接点;有的间充质细胞含微丝少,细胞膜间断融合。结论流出道心内膜垫内α-SMA阳性间充质细胞来自神经嵴;内皮细胞-间充质细胞转化可能参与了流出道嵴融合;致密细胞团内间充质细胞富含微丝束和细胞连接点或发生细胞膜融合有助于流出道嵴的融合。

原癌基因pokemon mRNA及其蛋白在非小细胞肺癌中的表达和意义

目的探讨原癌基因PokemonmRNA及其编码蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC发生的关系。方法应用RT-PCR和原位杂交技术检测pokemon mRNA在NSCLC组织和癌旁正常组织中的相对表达量及细胞定位;利用免疫组织化学染色分析NSCLC组织和癌旁正常组织标本中Pokemon蛋白的表达。结果半定量RT-PCR显示,pokemon mRNA在NSCLC组织中高表达(0.916±0.424),在对应的癌旁正常组织中低表达(0.408±0.307),两组之间具有显著的统计学差异(P<0.05);原位杂交结果显示,pokemon转录本在NSCLC细胞胞质中呈阳性表达,而癌旁正常组织不表达或低表达;免疫组织化学染色分析结果显示,NSCLC组织和对应的癌旁正常组织中Pokemon蛋白阳性表达率分别为87.5%(35/40)和15%(6/40),两组之间具有显著的统计学差异(X2=42.076,P<0.005)。Pokemon蛋白主要定位在癌细胞胞质内,少量定位在胞核中,呈颗粒状分布。结论原癌基因poke-mon mRNA及其编码蛋白在NSCLC中的高表达很可能与NSCLC的发生密切相关。

小鼠胚胎心流出道近段心室化形成右心室小梁部

目的：探讨小鼠胚胎心流出道快速缩短及右心室形成机制。方法用抗α-横纹肌肌动蛋白（ SCA）、抗肌球蛋白重链（ MHC）抗体标记心肌，抗GATA-4抗体标记心肌及其前体细胞，抗α-平滑肌肌动蛋白（ SMA）抗体标记早期心肌细胞，抗增殖细胞核抗原（PCNA）抗体显示增殖细胞，抗人／鼠活性Caspase-3（CAS-3）抗体检测凋亡早期细胞，对胚龄9d（ E9）～E12（不同胚龄胚胎各取3～5只）小鼠胚胎心连续切片行免疫组织化学染色。结果E11时动脉囊及流出道远端心肌界退却至心包腔内，GATA-4、SCA、SMA染色示第二生心区前体细胞不断分化为心肌细胞添加在心动脉端使流出道延长。小鼠胚胎心流出道于E12缩短，缩短前及缩短过程中全长未检测到CAS-3阳性细胞。 E10～12时右心室及流出道近段心肌不断增生形成小梁并侵入邻近的流出道嵴内，流出道近端嵴逐渐小梁状心肌化改建为右心室壁；E12时近段间充质性流出道嵴内出现散在的SCA、SMA阳性心肌细胞及与流出道心肌相延续的SCA、SMA弱阳性心肌细胞流，这些结果表明近段流出道心肌小梁化、流出道嵴小梁状肌化形成了右心室小梁部。结论小鼠胚胎流出道近段心室化致右心室小梁部形成及流出道快速缩短，心肌细胞凋亡及转分化对流出道快速缩短的作用甚微。

医学形态学实验互动教学改革实践

形态学实验课教学是医学生较早接触的主要基础实验课程,但受传统实验室功能的限制,师生交流效率不高。随着多媒体技术、网络技术的日渐成熟,Motic数码显微互动实验室的建立,创造了一个图文并茂、有声有色、生动逼真的实验教学环境,使医学形态学实验课教学方式发生了巨大的转变。

SCP_3在小鼠精母细胞核内的表达及定位

目的探讨SCP3蛋白在雄性小鼠减数分裂各阶段精母细胞核内的表达及定位。方法采用免疫组织化学染色法初步检测SCP3蛋白在曲细精管中的细胞定位,进一步利用免疫荧光FITC/DAPI共染技术显示该蛋白在减数分裂各阶段精母细胞核内的表达。结果免疫组织化学染色结果显示,在完整的曲细精管内只有精母细胞呈阳性染色。免疫荧光分析证实在减数分裂Ⅰ前期的细线期、偶线期、粗线期及双线期精母细胞核内均有明显的SCP3绿色荧光信号,并且在不同分裂阶段的细胞核内阳性着色条带的数目、状态不同。在处于终变期及中期I的精母细胞核内,只有散在的片状或点状荧光信号,直至后期I阶段完全消失。结论SCP3蛋白在雄性小鼠减数分裂各阶段精母细胞核内的表达与SC的形成、成熟、解体同步,参与了同源染色体之间的联会和重组。