脊髓损伤亚急性期移植神经干细胞:损伤脊髓5-羟色胺的表达

背景:5-羟色胺能纤维可以作为评价脊髓损伤后再生的指标之一。目的:观察神经干细胞在脊髓损伤的亚急性期(第7天)脊髓内移植对大鼠受损伤脊髓再生修复的影响。方法:将正常成年SD雌性大鼠分为3组,单纯脊髓全横断组、假手术组(仅仅打开椎板,但不横断脊髓)、神经干细胞移植组。神经干细胞移植组在脊髓全横断后第7天时进行神经干细胞移植,其他两组不移植神经干细胞。结果与结论:神经干细胞移植组瘢痕上1至2节段5-羟色胺的阳性纤维数量多于单纯脊髓全横断组。提示神经干细胞亚急性期移植能部分促进脊髓损伤后脊髓神经的再生。

内源性BDNF促进受损神经系统再生的实验研究

目的研究内源性脑源性神经营养因子(BDNF)对受损神经系统再生的影响。方法单侧坐骨神经切断实验:将大鼠左侧坐骨神经切断,并于术毕分为两组,每组8只,一组使用BDNF抗体,另一组则为使用正常羊血清(NSS)的对照组,第8d时都行脊髓背柱横断术。将每只大鼠两侧L5的脊髓脊根节(DRG)作纵向切片,进行免疫荧光染色,计数大鼠L5DRG内的生长相关蛋白-43(GAP-43)阳性细胞。双侧坐骨神经切断实验:将大鼠双侧坐骨神经切断,然后在第8d行脊髓全横断手术(tSCI),术后分作两组,使用NSS的对照组和使用BDNF抗体组,应用辣根过氧化物酶(HRP)追踪技术和免疫组织化学ABC法来评价内源性BDNF对脊髓损伤后的修复作用。结果单侧坐骨神经切断实验的BDNF抗体组左侧L5DRG内的GAP-43阳性细胞数少于对照组左侧(P<0.01)。双侧坐骨神经切断实验的BDNF抗体组在tSCI处的HRP阳性神经纤维数较对照组减少(P<0.01)。结论内源性BDNF对受损神经系统的再生具有积极促进作用。

慢性脑缺血大鼠大脑皮质中的神经生长因子表达

目的:研究慢性脑缺血时大鼠大脑皮质中神经生长因子(NGF)的表达变化,探讨缺血性脑损伤及修复机制。方法:永久性结扎Wistar大鼠双侧颈总动脉,取慢性脑缺血30、120 d组。行为学测试,免疫组化ABC法染色,计数大鼠大脑皮质中的NGF 阳性神经元数及测量平均灰度值。结果:大鼠慢性脑缺血时,大脑皮质中NGF的表达,第120 d比第30 d及对照组显著增强,而 30 d与对照组无显著性差异,同时伴有学习和记忆力下降。结论:慢性脑缺血时,NGF在大脑皮质中的表达将随时间逐渐增强, 对坏死神经元起保护作用。

慢性脑缺血大鼠海马CA_1区中的BDNF表达

为了观察慢性脑缺血时海马CA1区中BDNF的表达变化,探讨缺血性脑损伤及修复机制。我们将Wistar大鼠双侧颈总动脉结扎制成慢性脑缺血动物模型。分为三组:正常对照组、慢性脑缺血30d和120d组。分别于术后30d和120d处死动物,行BDNF免疫组化染色,计数各组大鼠海马CA1区中的阳性神经元数。结果显示:(1)在对照组的海马CA1区可见BDNF较强的表达;(2)在慢性脑缺血30d时,海马CA1区BDNF的表达高于缺血120d组及对照组(P<0.05)。而120d时,海马CA1区BDNF的表达与对照组无显著性差异(P>0.05)。结果提示:(1)在正常大鼠海马CA1区有BDNF表达,能维持神经元的存活;(2)慢性脑缺血时,BDNF在海马CA1区的表达先升后降。

NGF、BDNF和NT-3在正常成年大鼠主要脑区表达的免疫组织化学研究

目的研究神经生长因子(NGF)﹑脑源性神经营养因子(BDNF)﹑神经营养素-3(NT-3)在正常成年大鼠主要脑区的表达。方法将正常成年大鼠用4%多聚甲醛灌注固定后取脑制成20μm厚的冰冻切片,应用上述3种因子的抗体进行免疫组织化学染色。结果3种因子的表达既有共同点也有不同点:共同点是在主要脑区都能表达,不同点是在单个细胞中,BDNF主要表达于胞浆边缘;NGF在大部分神经元的整个细胞都表达,但少量神经元则在胞核无表达;NT-3则与BDNF相似。结论3种因子在正常成年大鼠主要脑区都能表达。

生物素多聚葡聚糖胺追踪显示皮质脊髓束的走行和分布

背景:生物素多聚葡聚糖胺的作用机制及代谢过程目前还不十分清楚,可能和与生物素连接的其他复合物相似。目的:选择最佳的生物素多聚葡聚糖胺追踪(示踪)实验方法,使生物素多聚葡聚糖胺能充分显示皮质脊髓束的走行和分布。方法:将15只SD雌性大鼠用于生物素多聚葡聚糖胺条件实验,分为双侧大脑皮质注射10%生物素多聚葡聚糖胺0.5μL/位点存活2周组、单侧(右侧)大脑皮质注射10%生物素多聚葡聚糖胺1μL/位点存活3周组及双侧大脑皮质注射10%生物素多聚葡聚糖胺0.5μL/位点存活3周组,每组5只。结果与结论:在3组进行生物素多聚葡聚糖胺追踪实验的大鼠中,双侧大脑皮质注射10%生物素多聚葡聚糖胺0.5μL/位点存活3周组的追踪效果最好。提示在双侧大脑皮质上选择多点注射,以每个位点注射0.5μL的10%生物素多聚葡聚糖胺,注射后大鼠存活3周为最佳的生物素多聚葡聚糖胺追踪实验方案。

局部解剖学解剖操作课的教学实践

局部解剖学是综合阐述人体各个局部结构、器官特点及其毗邻关系的学科。医学具有的实践性特征，决定了实践性教学内容将在其中占有较重比例，加强实验教学，对提高学生的综合素质，培养学生的创新精神与实践能力具有重要作用，学习局部解剖学在条件许可的情况下必须进行实地解剖操作，这是提高教学质量的关键。在昆医解剖学教研室，很早以前就开设了局部解剖学的解剖操作课。

大鼠脊髓损伤亚急性期NSCs脊髓内移植对脊髓神经电生理的影响

目的研究神经脊髓损伤的亚急性期(第7天)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)脊髓内移植对大鼠受损伤脊髓神经电生理的影响.方法正常成年SD雌性大鼠15只,分为3组:单纯全横断组、假手术组和神经干细胞移植组.测定3组大鼠的皮层体感诱发电位(cortical somatosensoryevoked potential,CSEP)、运动诱发电位(motion evoked potential,MEP)和电针刺激大脑皮质运动区.结果神经干细胞移植组的诱发电位CSEP、MEP的潜伏期短于单纯脊髓全横断组大鼠,电针刺激大脑皮质运动区发现NSC移植组大鼠双后肢出现明显收缩,且以对侧更为明显.结论神经干细胞脊髓内移植后能部分促进损伤脊髓的感觉和运动传导功能的恢复.

数字散斑法测量加载100N与400N股骨干骨折钢板固定下的位移

背景:钢板内固定是治疗长骨骨折常用的固定物之一,易发生螺钉断裂致骨畸形。将光学测量技术应用到生物医学领域中,能更精确的分析螺钉断裂的特点。目的:以数字散斑法测量股骨钢板螺钉的位移。方法:取6根股骨,于股骨干中点横行锯断,制造股骨中段骨折模型。将骨折标本进行复位,用10孔钢板固定,骨折线两端各使用5枚螺钉固定。将实验模型设计成骨折前后2种状态,进行对比测量锁钉位移。分别在100,400N拉力下,通过相关软件计算位移。结果与结论:在100N及400N状态下,螺钉1～10所承受的应力均存在显著差异(F=108.326,P<0.01;F=151.258,P<0.01)。进一步行两两比较,成对称分布的螺钉所承受的应力差异无显著性意义(P>0.05),其余两两比较所承受的应力差异均有显著性意义(P<0.05)。提示骨折线两端的2枚螺钉是承受较多应力的部位,易发生断裂,所有螺钉的固定应尽量在一条直线上,使负荷平衡。

GAP-43治疗大鼠脊髓横断后神经中丝NF200表达的变化

通过制备成年SD大鼠完全性脊髓损伤模型,研究生长相关蛋白(GAP-43)治疗大鼠脊髓损伤后神经中丝(NF200)表达的变化,探讨GAP-43在再生修复中的作用,为临床治疗提供实验依据。实验采用雌性8周龄SD大鼠75只,制成脊髓损伤模型后随机分为三组:GAP-43抗体组、GAP-43抗原组和对照组,每组25只。使用直接注射法将GAP-43抗原和GAP-43多克隆抗体分别注入抗原组和抗体组的大鼠脊髓的断端,对照组仅切断脊髓而不给药,最后观察各组大鼠肢体功能的恢复情况。用BBB评分法对不同时段大鼠的行为学表现进行评分,用HE染色及免疫组化染色观察NF200的表达,并对其进行相关性分析。结果发现对照组在不同的时间段行为学评分最低和抗原组评分最高,脊髓损伤区病理改变明显好转,NF200的表达呈进行性增高,且前角神经元NF200的表达早于后角神经元。抗体组早期恢复出现明显的停滞状态,但停药后能很快恢复。说明GAP-43能促进损伤脊髓的恢复,而抗体对损伤脊髓恢复的影响是可逆的,这对于脊髓再生的研究是一种值得探讨的新方法,对进一步探索脊髓损伤的治疗具有重要的意义。

脊髓全横断大鼠模型的构建

背景:脊髓全横断模型在造模时常难以保证神经纤维的完全离断。目的:构建大鼠脊髓全横断损伤模型。方法:将大鼠随机分为模型组和假手术组。模型组构建脊髓T10节段全横断模型;假手术组动物仅打开椎管与硬脊膜而后缝合,但不损伤脊髓。建模后1,3,5,7d分别进行BBB评分以评估后肢运动功能,检测其体感诱发电位和运动诱发电位来评估神经传导通路的完整性,并行形态学观察来评估脊髓肉眼观病理形态。结果与结论:与假手术组相比,模型组大鼠在建模后1,3,5,7d时,其BBB评分降低(P<0.01),未检测出体感和运动诱发电位。形态学观察结果显示模型组大鼠脊髓完全横断,而假手术组脊髓形态完整。结果提示实验成功构建了大鼠脊髓全横断模型。

嗅鞘细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子表达的影响

背景:多项研究已证实嗅鞘细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚。目的:观察嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠大脑运动皮质神经营养因子胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成。材料:清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只。另取新生一两天的GFP转基因小鼠5只用于分离培养嗅鞘细胞。方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T9脊髓全横断损伤模型,假手术组仅行T8椎板切除。造模后,细胞移植组吸取嗅鞘细胞悬液15μL(约3×105个细胞)滴加到约2mm3的明胶海绵上,将含有嗅鞘细胞的明胶海绵植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处。分别于移植后3,7,14,21,28d取大脑运动皮质行RT-PCR检测。主要观察指标:采用免疫细胞化学法对培养的嗅鞘细胞进行鉴定,RT-PCR法检测大脑运动皮质胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA的表达变化。结果:培养的嗅鞘细胞p75-NGFR阳性率>90%,主要为双极细胞,突起较长。与假手术组比较,模型组术后3d睫状神经营养因子表达明显升高,7,14,21d降至无明显差异,至28d明显降低(P<0.05);术后各时间模型组胰岛素样生长因子1的表达无明显差异(P>0.05)。与模型组比较,移植后14d细胞移植组胰岛素样生长因子1表达明显增多(P<0.05);移植后3d睫状神经营养因子的表达明显减少(P<0.05),但移植后7,14,21d表达逐渐回升,至28d明显高于模型组水平(P<0.05)。结论:嗅鞘细胞移植能够促进脊髓损伤修复,其机制可能与促进大脑运动皮质胰岛素样生长因子1mRNA的表达上调,并在初期抑制睫状神经营养因子mRNA的表达有关。

经骶管裂孔进行骶管囊肿穿刺的应用解剖学

目的探索通过骶部骨性标志快速定位识别骶管裂孔,并阐明其与骶神经节和硬脊膜的位置关系,为从骶管裂孔进行骶管囊肿穿刺治疗的进针位置、角度和深度提供解剖学指导。方法取成人尸体标本15例。测量骶管裂孔到硬脊膜下界及骶神经节的距离,对骶角、骶管裂孔以及左右髂后上棘与骶角中点的位置关系进行了研究,对矢状切面进行了多种解剖学测量,记录穿刺针插入的角度和深度。结果两侧骶角中点到尾骨末端的平均距离为(5.73±0.81)cm,两侧髂后上棘与骶角中点构成等腰三角形,3条边的尺寸在女性偏小,从骶管裂孔进针的平均俯角是60.4°,两侧骶角中点到达硬脊膜下界的距离大于到达第3骶神经节中点的距离,小于到达第1、2骶神经节中点的距离。结论总结出骶管裂孔的体表定位方法,阐明了骶管裂孔在体表的准确位置、深度及其与骶神经节和硬脊膜的位置关系,骶管裂孔进针的最佳角度,这些测量研究结果可帮助临床医师对骶管囊肿进行更安全的诊断和治疗,也可为骶管麻醉、骶前后区射频神经切断术,以及超声检查提供有用的参考。

关于我院双语教学的几点思考

通过对我院双语教学现状的分析,阐明了双语教学的必要性和急迫性,提出了双语教学的激励机制和师资培训的几点建议,并对初期双语教学模式进行探讨。

生长相关蛋白-43对脊髓损伤后大鼠骨代谢和骨密度变化的影响

目的:探讨生长相关蛋白(GAP-43)对脊髓全横断损伤后骨质疏松的修复作用,为临床治疗提供实验依据。方法:实验采用SD大鼠,制成脊髓损伤模型后随机分为GAP-43抗体组、GAP-43抗原组和对照组。观察各组大鼠肢体功能的恢复情况,用BBB评分法进行不同时段的行为学评分;H-E染色;检测不同时期大鼠血清钙、碱性磷酸酶和骨密度的变化。结果:对照组在不同的时间段行为学评分最低,抗原组评分最高,脊髓损伤区出现明显的病理改变,术后对照组的血清钙、碱性磷酸酶水平呈下降趋势;抗原组的血清钙水平呈上升趋势、碱性磷酸酶水平先上升后下降;抗体组的血清钙水平呈上升趋势、碱性磷酸酶水平呈下降趋势。术后3组的骨密度水平先上升后下降,总体呈下降趋势,对照组的下降最快、抗原组最慢。结论:GAP-43能通过促进损伤脊髓神经元功能的恢复和再生而抑制骨量丢失,对进一步探索脊髓损伤并发骨质疏松症的机制以及寻找防治骨质疏松的方法具有重要的意义。

解剖学教学中开展双语教学的必要性和可行性

英语作为一门国际语言，其重要性早就不言而喻．随着我国加入WTO，经济全球化，我国同世界其它国家的联系越发紧密．为了与世界接轨，加强彼此的科技交流，培养出适应激烈竞争的现代化医务人才，推动双语教学，提高学生的英语（包括专业英语）水平，已成为我国高等教育改革的重要目标之一．结合实际分析解剖学双语教学的必要性和可行性，认真规划，大胆尝试，有针对性地进行改进，是提高双语教学的重要途径．

数字散斑法测量加载200N与500N股骨干骨折钢板固定下的位移

目的数字散斑法测试钢板螺钉的位移,为临床上分析螺钉断裂之原因提供理论依据。材料与方法取6根成人防腐股骨标本,于股骨干中点横行锯断,制造股骨干中段骨折模型。将骨折标本进行复位并使用10孔钢板加压固定,骨折线两端各使用5枚螺丝钉固定。设计成10种状态进行对比测量锁钉位移,分别是:a.模拟骨折愈合后的受力状态(钢板固定后,未锯断);b.骨折后加压钢板坚强内固定组;c.在b组基础上近端去一枚螺丝钉;d.在c组基础上远端去一枚螺丝钉;e.在d组基础上近端去一枚螺丝钉;f.在e组基础上远端去一枚螺丝钉;g.在f组基础上近端去一枚螺丝钉;h.在g组基础上远端去一枚螺丝钉;i.在h组的基础上近端去一枚螺丝钉;j.在i组基础上远端去一枚螺丝钉。在200 N、500N(牛顿)拉力下,电子万能试验机加载测量,相关软件计算位移。结果(1)螺丝钉1与10、2与9、3与8、4与7、5与6的比较差异无统计学意义(P>0.05),其余两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论应选择6孔以上的钢板,以减少由于钢板的强度损失所引发的螺钉断裂。

坐骨神经切断对猫脊髓前角蛋白组表达的影响

用蛋白组学方法探讨猫双侧坐骨神经切断后脊髓前角蛋白组表达变化,找出差异蛋白。用二维凝胶电泳法获得脊髓前角蛋白组的考马斯亮蓝染色图谱,PDQuest软件对蛋白点进行定量分析。结果显示:在凝胶图谱中平均检测到382个蛋白点。损伤组与正常组比较后检测到11个明显差异蛋白。经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和串联质谱技术鉴定差异蛋白。其名称分别为:蛋白二硫键异构酶、磷酸苷油酸变位酶1、热休克蛋白70、ATP合成酶α链、丙酮酸脱氢酶β亚基、载脂蛋白A前体、肌球蛋白调节轻链异构体b/2、三磷酸苷油醛脱氢酶等。本实验鉴定了外周神经损伤后与脊髓前角变化相关的蛋白分子,为了解运动神经元轴突损伤所致的胞体蛋白组变化奠定了基础。

神经干细胞移植影响脊髓全横断大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因的表达

背景:多项研究已证实神经干细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚。目的:观察神经干细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因Bax,Bcl-2和Caspase-3mRNA表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成。材料:孕14～15d绿色荧光蛋白转基因鼠5只,取其胚胎用于神经干细胞培养。清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只。方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T9脊髓全横断脊髓损伤模型,假手术组只行T8椎板切除。用DMEM/F12调整胎鼠神经干细胞密度为2×1010L-1,吸取细胞悬液15μL滴加到约2mm3大小的明胶薄片上,细胞移植组将此明胶薄片植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处。分别于细胞移植后3,7,14,21,28d取材进行指标检测。主要观察指标:RT-PCR法检测大脑运动皮质Bax,Bcl-2和Caspase-3mRNA表达的变化。结果:与假手术组比较,模型组各时间点Bax的表达均无明显差异(P>0.05),术后14,28dBcl-2的表达明显减少(P<0.05),术后3dCaspase-3的表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,细胞移植组在神经干细胞移植后3dBax的表达明显减少(P<0.05),移植后14,21dBcl-2的表达明显增高(P<0.05),移植后3,7dCaspase-3的表达明显减少(P<0.05)。结论:神经干细胞移植后,可能通过调控大脑运动皮质相关凋亡基因Bax,Bcl-2和Caspase-3mRNA的表达促进大鼠全横断脊髓损伤修复。